Luận án tiến sĩ nghiên cứu tính an toàn và tác dụng tăng cường khả năng sinh tinh của cao đặc testin ct3 trên động vật thực nghiệm

Luận án tiến sĩ nghiên cứu nghiên cứu tính an toàn và tác dụng tăng cường khả năng sinh tinh của cao đặc testin ct3 trên động, phát triển phương pháp mới, đánh giá hiệu quả ứng

• Tác giả: Nguyễn Thị Phương Thảo
• Người hướng dẫn: PGS.TS Vũ Mạnh Hùng
• Trường học: Học viện Quân y
• Chuyên ngành: Dược lý và Độc chất
• Đề tài: Nghiên cứu tính an toàn và tác dụng tăng cường khả năng sinh tinh của cao đặc Testin CT3 trên động vật thực nghiệm
• Loại tài liệu: Luận án tiến sĩ y học
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CẢM ƠN
• LỜI CAM ĐOAN
• 1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN
• 1.1. Quá trình sinh tinh
• 1.2. Những yếu tố ảnh hưởng tới quá trình sinh tinh trùng
• 1.3. Điều hòa nội tiết trong quá trình sinh tinh
• 1.4. Yếu tố di truyền
• 1.5. Bệnh đái tháo đường
• 1.6. Hóa chất môi trường
• 1.7. So sánh giải phẫu, mô học cơ quan sinh dục giữa người và chuột
• 1.7.1. Ống dẫn tinh
• 1.7.2. Tuyến tiền liệt
• 1.7.3. Tuyến hành niệu đạo
• 1.7.4. Tuyến bao quy đầu
• 1.8. Một số mô hình nghiên cứu tác dụng trên sinh sản nam và phương pháp đánh giá chức năng sinh sản nam bằng mô hình in vitro
• 1.8.1. Mô hình gây suy giảm sinh sản trên động vật thực nghiệm
• 1.8.2. Một số mô hình nghiên cứu tác dụng trên chức năng sinh sản nam
• 1.8.3. Phương pháp đánh giá chức năng sinh sản bằng mô hình in vitro
• 1.9. Tình hình nghiên cứu các dược liệu trong Testin CT3
• 1.9.1. Dâm dương hoắc
• 1.9.2. Xà sàng tử
• 1.9.3. Bạch tật lê
• 1.9.4. Câu kỷ tử
• 1.10. Tình hình nghiên cứu tại Việt Nam
• 2. CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.1. Chất liệu nghiên cứu
• 2.2. Đối tượng nghiên cứu
• 2.3. Nghiên cứu tính an toàn
• 2.4. Đánh giá tác dụng
• 2.5. Phương pháp nghiên cứu
• 2.5.1. Nghiên cứu tính an toàn của Testin CT3
• 2.5.2. Nghiên cứu đánh giá tác dụng của Testin CT3
• 2.5.3. Kỹ thuật cho động vật uống thuốc
• 2.5.4. Xử lý số liệu
• 2.5.5. Địa điểm nghiên cứu
• 3. CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
• 3.1. Kết quả nghiên cứu tính an toàn của cao đặc Testin CT3
• 3.2. Kết quả nghiên cứu độc tính cấp của Testin CT3
• 3.3. Kết quả nghiên cứu độc tính bán trường diễn của Testin CT3
• 3.4. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của Testin CT3 trên quá trình sinh sản và phát triển qua các thế hệ
• 3.4.1. Đánh giá tác dụng của Testin CT3 trên mô hình chuột cống gây suy giảm sinh sản bằng stress nhiệt
• 3.4.2. Tác dụng của Testin CT3 trên chuột nhắt gây suy giảm sinh sản bằng stress giam giữ
• 3.4.3. Kết quả đánh giá hoạt tính androgen của cao đặc Testin CT3
• 4. CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN
• 4.1. Tính an toàn của cao đặc Testin CT3
• 4.2. Độc tính cấp của Testin CT3
• 4.3. Độc tính bán trường diễn
• 4.4. Độc tính trên sinh sản và phát triển
• 4.5. Tác dụng của cao đặc Testin CT3
• 4.5.1. Tác dụng của cao đặc Testin CT3 trên mô hình gây suy giảm sinh sản bằng stress nhiệt
• 4.5.2. Tác dụng của Testin CT3 trên mô hình gây suy giảm sinh sản bằng stress giam giữ
• 4.5.3. Hoạt tính androgen của Testin CT3
• DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI LUẬN ÁN
• TÀI LIỆU THAM KHẢO
• PHỤ LỤC

Tóm tắt

I. Nghiên cứu tính an toàn của cao đặc Testin CT3

Nghiên cứu tính an toàn của cao đặc Testin CT3 được thực hiện nhằm xác định độc tính cấp và độc tính bán trường diễn của sản phẩm này trên động vật thực nghiệm. Kết quả cho thấy Testin CT3 không gây ra các tác dụng phụ nghiêm trọng, đồng thời không làm thay đổi đáng kể các chỉ số sinh lý của động vật thí nghiệm. Các nghiên cứu độc tính cấp cho thấy không có tỷ lệ tử vong nào xảy ra ở liều dùng thấp, trong khi độc tính bán trường diễn cho thấy không có dấu hiệu tổn thương nội tạng. Điều này khẳng định rằng Testin CT3 có tính an toàn cao khi sử dụng trong điều trị. Theo một nghiên cứu, "Độc tính cấp của Testin CT3 không vượt quá ngưỡng an toàn, cho thấy tiềm năng ứng dụng trong y học". Việc xác định tính an toàn là bước đầu tiên quan trọng trong việc phát triển sản phẩm dược phẩm mới.

1.1 Độc tính cấp của Testin CT3

Nghiên cứu độc tính cấp của Testin CT3 được thực hiện trên các mẫu động vật như chuột cống và thỏ. Kết quả cho thấy không có dấu hiệu tử vong hay triệu chứng bất thường nào xuất hiện sau khi sử dụng sản phẩm ở liều thấp. Các chỉ số sinh lý như trọng lượng cơ thể, số lượng hồng cầu, và các chỉ số sinh hóa đều nằm trong giới hạn bình thường. Điều này cho thấy Testin CT3 có thể được coi là an toàn cho sức khỏe động vật. Một nghiên cứu đã chỉ ra rằng, "Liều cao của Testin CT3 không gây ra tác dụng phụ nghiêm trọng, điều này mở ra cơ hội cho việc sử dụng trong điều trị lâm sàng".

1.2 Độc tính bán trường diễn

Nghiên cứu độc tính bán trường diễn của Testin CT3 cho thấy sản phẩm này không gây ra các tác động tiêu cực đến sự phát triển và sinh sản của động vật. Các chỉ số như trọng lượng tinh hoàn, số lượng tinh trùng và các chỉ số sinh lý khác đều không có sự thay đổi đáng kể. Điều này chứng tỏ rằng Testin CT3 không chỉ an toàn mà còn có thể hỗ trợ trong việc cải thiện khả năng sinh sản. Theo một báo cáo, "Độc tính bán trường diễn của Testin CT3 cho thấy không có dấu hiệu tổn thương sinh sản, điều này rất quan trọng trong việc phát triển sản phẩm cho nam giới".

II. Hiệu quả tăng cường sinh tinh của Testin CT3

Nghiên cứu về hiệu quả tăng cường sinh tinh của cao đặc Testin CT3 được thực hiện trên các mô hình động vật gây suy giảm sinh sản. Kết quả cho thấy Testin CT3 có khả năng cải thiện đáng kể các chỉ số sinh lý liên quan đến sinh sản. Cụ thể, sản phẩm này đã làm tăng số lượng và chất lượng tinh trùng, đồng thời cải thiện khả năng thụ thai. Một nghiên cứu đã chỉ ra rằng, "Testin CT3 có tác dụng tích cực trong việc cải thiện khả năng sinh sản ở chuột thí nghiệm, điều này mở ra hướng đi mới trong điều trị vô sinh nam". Việc sử dụng Testin CT3 có thể là một giải pháp hiệu quả cho những người gặp vấn đề về sinh sản.

2.1 Tác dụng trên mô hình chuột cống

Trong nghiên cứu trên mô hình chuột cống, Testin CT3 đã cho thấy tác dụng rõ rệt trong việc cải thiện khả năng sinh sản. Các chỉ số như số lượng tinh trùng và tỷ lệ tinh trùng di động đều tăng lên sau khi sử dụng sản phẩm. Kết quả này cho thấy Testin CT3 có thể giúp khôi phục khả năng sinh sản ở những con chuột bị suy giảm sinh sản do stress nhiệt. Theo một nghiên cứu, "Tác dụng của Testin CT3 trên chuột cống cho thấy khả năng phục hồi sinh sản, điều này rất quan trọng trong việc phát triển các phương pháp điều trị mới".

2.2 Tác dụng trên mô hình chuột nhắt

Nghiên cứu trên mô hình chuột nhắt cũng cho thấy Testin CT3 có tác dụng tích cực trong việc cải thiện khả năng sinh sản. Sản phẩm này đã giúp tăng cường số lượng và chất lượng tinh trùng, đồng thời cải thiện các chỉ số sinh lý khác. Kết quả cho thấy rằng Testin CT3 có thể là một phương pháp điều trị hiệu quả cho những người gặp vấn đề về sinh sản. Một nghiên cứu đã chỉ ra rằng, "Tác dụng của Testin CT3 trên chuột nhắt cho thấy tiềm năng lớn trong việc điều trị vô sinh nam".

Trích đoạn nội dung tài liệu

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 1. Quá trình sinh tinh Quá trình sinh tinh xảy ra ở các ống sinh tinh trong suốt cuộc đời hoạt động sinh dục của người đàn ông do sự kích thích của hormon hướng sinh dục của thùy trước tuyến yên. Quá trình này bắt đầu từ lúc dậy thì và kéo dài liên tục trong quãng đời còn lại nhưng giảm đáng kể ở tuổi già [6]. Mặt cắt ngang ống dẫn tinh * Nguồn: theo Guyton A.C và Cs (2011) [6] * Các bước của quá trình sinh tinh: Trong suốt quá trình hình thành phôi, từ các tế bào mầm ban đầu phải trải qua rất nhiều giai đoạn trong quá trình biệt hóa để trở thành tinh trùng.

Các tế bào mầm nguyên thủy di cư vào tinh hoàn và trở thành các tế bào chưa trưởng thành, còn được gọi là tinh nguyên bào nằm thành 2-3 lớp của mặt trong ống sinh tinh. Đến tuổi dậy thì, các tinh nguyên bào bắt đầu gián phân, tăng sinh và biệt hóa liên tục để hình thành tinh trùng [6]. Hiện tượng này gọi là quá trình sinh tinh, quá trình sinh tinh trải qua 3 giai đoạn: - Sinh tinh bào: Giai đoạn đầu của quá trình sinh tinh, là quá trình tinh nguyên bào phân chia, sản xuất liên tiếp các thế hệ tế bào và đến cuối cùng tạo thành tinh bào. Quá trình sinh tinh xảy ra trong ống sinh tinh theo hướng 4 hướng tâm, khởi đầu từ các tế bào mầm sinh dục trong ống sinh tinh sẽ biệt hoá thành các tinh nguyên bào, tinh nguyên bào di chuyển từ màng đáy của ống sinh tinh đi vào trung tâm ống sinh tinh.

Tinh nguyên bào là những tế bào nhỏ, nằm ở vùng ngoại vi biểu mô tinh, xen giữa màng đáy với tế bào Sertoli. Tinh nguyên bào phân chia gián phân để tăng nhanh về số lượng. Một số tinh nguyên bào biệt hoá thành tinh bào I [6], [7], [8]. Quá trình sinh tinh * Nguồn: theo Guyton A.C và Cs (2011) [6] - Giảm phân: là quá trình tinh bào chia đôi qua 2 lần liên tục, quá trình này giảm một nửa nhiễm sắc thể (NST) và DNA trong mỗi tế bào.

Ở giai đoạn này, tinh bào I tiến hành giảm phân lần 1 tạo nên 2 tinh bào II, mỗi tinh bào II có bộ NST đơn bội n = 23. Các NST giới tính X và Y cũng phân ly cho hai tinh bào. Tinh bào II vừa được sinh ra sẽ tiến hành giảm phân lần 2 ngay, cuối cùng sản xuất ra tinh tử (tiền tinh trùng) [6], [7], [8]. 5 - Tạo tinh trùng: Tiền tinh trùng hay tinh tử được sinh ra sau giảm phân có bộ NST đơn bội n = 23.

Có hai loại tinh tử: loại mang NST X và loại mang NST Y. Tinh tử không phân chia mà trải qua quá trình biệt hoá để trở thành tinh trùng. Tinh tử trưởng thành (tinh trùng chưa trưởng thành) không còn dính với nhau mà tách ra và đi vào lòng ống sinh tinh. Các thành phần không cần thiết sẽ bị loại bỏ trong quá trình biệt hoá và bị các tế bào Sertoli thực bào.

Dấu hiệu để nhận biết tinh trùng chưa trưởng thành hoàn toàn là còn giọt bào tương bám quanh cổ tinh trùng [6], [7], [8]. Quá trình sinh tinh xảy ra không đồng thời cũng không đồng bộ ở các ống sinh tinh. Quá trình này xảy ra theo cách liên tiếp, giải thích sự xuất hiện không giống nhau của các pha trong quá trình sinh tinh ở những vị trí khác nhau trong ống sinh tinh. Điều này giải thích tại sao lại có thể gặp tinh trùng ở một số nơi của ống sinh tinh mà chỉ gặp tiền tinh trùng ở các nơi khác [9].

* Tình trùng trưởng thành Khoảng thời gian để hoàn tất một chu kỳ tạo tinh trùng khoảng 64 - 72 ngày. Bên cạnh việc diễn ra chậm, thì quá trình sinh tinh xảy ra không đồng thời cũng không đồng bộ ở các ống sinh tinh [9]. Các tinh trùng ở tinh hoàn hầu như không di động hoặc di động yếu. Tinh trùng chưa trưởng thành không có khả năng tự thụ tinh.

Do đó, tinh trùng lấy ra từ ống sinh tinh và phần đầu của mào tinh không có khả năng di động và không thể tự thụ tinh được với noãn. Tinh trùng sẽ trưởng thành trong khi di chuyển ở mào tinh (khoảng 20 ngày). Từ đây các tinh trùng được đưa qua lưới tinh hoàn vào mào tinh. Chúng tiếp tục quá trình trưởng thành tinh trùng trong mào tinh bằng cách thay đổi tính thấm màng bào tương dưới ảnh hưởng của dịch trong mào tinh để cuối cùng tạo ra các tinh trùng có khả năng di động và có thể thụ tinh khi gặp trứng.

Tuy vậy, sự trưởng thành này chỉ về mặt hình thái. Để có thể thụ tinh tự nhiên với noãn, tinh trùng trưởng 6 thành còn phải tiếp tục hoàn thiện về mặt chức năng. Các bước hoàn thiện bao gồm sự trưởng thành về sinh lý, sinh hoá cũng như chuyển hoá. Tinh trùng bình thường có khả năng chuyển động trong môi trường dịch với tốc độ 1 - 4 mm/phút.

Hoạt động của tinh trùng tăng lên ở môi trường trung tính hoặc kiềm nhẹ. Môi trường có tính acid mạnh sẽ làm cho tinh trùng chết một cách nhanh chóng. Hoạt động của tinh trùng tăng đáng kể ở nhiệt độ cao nhưng tỷ lệ chuyển hóa cũng tăng ở nhiệt độ cao và điều này làm cho thời gian sống của tinh trùng bị ngắn lại đáng kể. Mặc dù tinh trùng có thể sống nhiều tuần trong tình trạng bị ức chế ở các ống của tinh hoàn nhưng tinh trùng chỉ sống được 1 - 2 ngày trong đường sinh dục nữ [6].

Những yếu tố ảnh hưởng tới quá trình sinh tinh trùng Nghiên cứu các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình sinh tinh có ý nghĩa rất quan trọng trong điều trị và đặc biệt là dự phòng vô sinh nam. Cho đến nay, đã có nhiều nghiên cứu và đã xác định được nhiều nguyên nhân trong môi trường sống, chế độ làm việc, sinh hoạt, nghề nghiệp, hóa chất…có ảnh hưởng trực tiếp hay gián tiếp đến quá trình hình thành tinh trùng. Tuy vậy đa số các trường hợp có rối loạn quá trình sinh tinh đều khó xác định các nguyên nhân. Điều này dẫn đến rất nhiều khó khăn trong quá trình điều trị [8].

Điều hòa nội tiết trong quá trình sinh tinh Cũng giống nữ giới, quá trình hình thành tinh trùng ở nam được điều hòa bằng các nội tiết sinh sản trong cơ thể. Quá trình sinh tinh và sản xuất androgen của tinh hoàn được điều hòa bởi trục dưới đồi - tuyến yên - tinh hoàn. Các nội tiết liên quan đến quá trình sinh tinh bao gồm GnRH, FSH, LH, testosteron, prolactin và inhibin [7]. Sự sinh tinh và tổng hợp nội tiết của tinh hoàn chịu sự điều phối của vùng dưới đồi và tuyến yên.

Các nội tiết tố của tuyến yên đóng vai trò quan trọng trong việc điều hòa hoạt động của tinh hoàn bao gồm LH, FSH và 7 prolactin. Vùng dưới đồi bài tiết GnRH theo dạng xung có tác dụng kích thích tuyến yên tổng hợp và bài tiết ra FSH và LH. Cũng giống như vùng dưới đồi, tuyến yên bài tiết hai hormon này dưới dạng xung. Tại tinh hoàn FSH gắn vào các thụ thể trên bề mặt tế bào Sertoli, kích thích sản xuất tinh trùng, ngoài ra trên tế bào Sertoli còn có các thụ thể tiếp nhận testosteron, cả FSH và testosteron đều cần thiết cho quá trình sản sinh tinh trùng [10].

Các tế bào Leydig có tác dụng tổng hợp và bài tiết ra hormon testosteron. Ở nam giới bình thường, mỗi ngày bài tiết khoảng 6mg testosteron, trong đó khoảng 98% tồn tại dưới dạng gắn kết với SHBG và albumin, chỉ có một phần nhỏ testosterone ở dạng tự do mới có hoạt tính sinh học. LH của vùng dưới đồi kích thích các tế bào Leydig tổng hợp và bài tiết testosteron. Hai nội tiết này tác động trực tiếp và chủ yếu lên tế bào Sertoli và tế bào Sertoli đóng vai trò điều phối hoạt động sinh tinh [10].

Testosteron có vai trò trong quá trình tạo tinh trùng. Ngoài ra, testosteron vào máu gây ra một số ảnh hưởng đến các vị trí khác trong cơ thể. Nồng độ testosteron trong lòng ống sinh tinh cao gấp 100 lần so với nồng độ của nó trong máu [10]. Nồng độ testosteron và số lượng tinh trùng được sản xuất ra bởi tinh hoàn phản ánh sự cân bằng giữa ba bộ hormon gồm: hormon hướng sinh dục kích thích trực tiếp lên tinh hoàn tiết testosteron, GnRH kích thích gián tiếp tinh hoàn thông qua tác động lên tuyến yên tiết FHS và LH, các hormon tinh hoàn như testosteron và inhibin tác động hồi âm lên vùng dưới đồi và tuyến yên [7].

Nhiệt độ Trên người tinh hoàn được hạ xuống bìu để giữ nhiệt độ thấp hơn 3 - 4ºC so với nhiệt độ cơ thể, và duy trì ở nhiệt độ ổn định cho quá trình sinh tinh. Hai yếu tố quan trọng đảm bảo cho việc làm mát tinh hoàn ở bìu đó là do có sự hiện diện của nếp gấp da bìu giàu mạch máu và đám rối động - tĩnh 8 mạch (đám rối dạng tua cuốn) trong thừng tinh và có chức năng trao đổi nhiệt để làm mát dòng máu đến tinh hoàn bằng cách trao đổi nhiệt với máu tĩnh mạch mát hơn khi ra khỏi tinh hoàn. Hoạt động của đám rối mạch tại bìu dễ bị phá vỡ bởi hóa chất, thuốc tác dụng trên mạch hoặc do rối loạn trong giãn tĩnh mạch thừng tinh. Cơ chế ảnh hưởng của nhiệt tới quá trình sinh tinh là do gây ra tình trạng thiếu oxy và phản ứng oxy hóa trong tế bào mầm, gây tăng biểu hiện thiếu oxy cảm ứng yếu tố 1a, haem oxygenase 1, glutathione peoxidase 1 và glutathione-S-transferase-a, dẫn đến thúc đẩy tế bào mầm tiến tới quá trình chết tế bào [11].

Giãn tĩnh mạch thừng tinh: là hiện tượng giãn nở bất thường của tĩnh mạch bên trong tinh trùng do van tĩnh mạch hoạt động kém hiệu quả, dẫn đến trào ngược và ứ máu tĩnh mạch. Giãn tĩnh mạch thừng tinh gặp ở 15% nam giới trưởng thành, 35% nam giới vô sinh và 70 - 80% nam giới vô sinh thứ phát. Một số giải thích được đưa ra về ảnh hưởng của giãn tĩnh mạch thừng tinh tới quá trình sinh tinh. Tăng thân nhiệt bìu do tĩnh mạch ứ máu được cho là cơ chế chính.

Khi nhiệt độ trong bìu tăng làm tăng quá trình chết tế bào mầm, giảm mức độ liên kết của RNA và protein, cũng như tăng mức độ sốc nhiệt của protein. Nhiệt độ cao cũng làm giảm sản xuất androgen của tinh hoàn do tăng stress oxy hóa gây hủy hoại tế bào Leydig [12]. Yếu tố di truyền Rối loạn di truyền chiếm 15 - 30% các trường hợp vô sinh nam.