Luận văn thạc sĩ hus xây dựng phương pháp định lượng đồng thời các flavonoid baicalein baicalin chrysin trong vị thuốc hoàng bá nam cortex oroxyli indici

Nghiên cứu phương pháp định lượng đồng thời ba flavonoid trong vị thuốc hoàng bá nam, góp phần nâng cao hiệu quả sử dụng dược liệu.

• Tác giả: Hoàng Thị Tuyết
• Người hướng dẫn: PGS.TS Phương Thiện Thương
• Trường học: Trường Đại học Khoa học Tự nhiên
• Chuyên ngành: Hóa phân tích
• Đề tài: Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời các flavonoid: baicalein, baicalin, chrysin trong vị thuốc Hoàng bá nam (Cortex Oroxyli Indici)
• Loại tài liệu: Luận văn thạc sĩ
• Năm xuất bản: 2019
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CẢM ƠN
• MỞ ĐẦU
• 1. CHƯƠNG I: TỔNG QUAN
• 1.1. TỔNG QUAN VỀ CÂY HOÀNG BÁ NAM
• 1.2. Đặc điểm thực vật
• 1.3. Phân bố và sinh thái của cây Hoàng bá nam
• 1.4. Bộ phận dùng
• 1.5. Thành phần hóa học
• 1.5.1. Nhóm flavonoid
• 1.5.2. Nhóm stilbenoid
• 1.5.3. Các nhóm chất khác
• 1.6. Công dụng
• 1.7. Tác dụng sinh học
• 1.7.1. Tác dụng chống viêm
• 1.7.2. Tác dụng chống oxy hóa
• 1.7.3. Tác dụng kháng khuẩn
• 1.7.4. Tác dụng chống choáng phản vệ
• 1.7.5. Tác dụng lên các limpho bào
• 2. CHƯƠNG II: THỰC NGHIỆM
• 2.1. Đối tượng nghiên cứu
• 2.2. Chất chuẩn, hóa chất, thiết bị
• 2.3. Thiết bị, dụng cụ
• 2.4. Phương pháp nghiên cứu
• 2.5. Chuẩn bị dung dịch mẫu chuẩn
• 2.6. Tối ưu hóa hệ thống phân tích sắc ký
• 2.7. Xác nhận giá trị sử dụng của phương pháp phân tích
• 2.7.1. Tính chọn lọc, độ đặc hiệu
• 2.7.2. Tính thích hợp của hệ thống
• 2.7.3. Khoảng tuyến tính và đường chuẩn
• 2.7.4. Giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) của phương pháp
• 2.7.5. Độ lặp lại trong ngày và khác ngày
• 2.7.6. Ước lượng độ không đảm bảo đo (ĐKĐBĐ)
• 2.8. Phân tích mẫu thực tế
• 3. CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 3.1. Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời baicalein, baicalin, chrysin
• 3.2. Khảo sát điều kiện sắc ký
• 3.3. Đường chuẩn và khoảng tuyến tính
• 3.4. Nghiên cứu quy trình xử lý mẫu
• 3.5. Xác nhận giá trị sử dụng của phương pháp phân tích định lượng đồng thời baicalin, baicalein và chrysin trong dược liệu hoàng bá nam
• 3.6. Tính thích hợp của hệ thống
• 3.7. Giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ)
• 3.8. Độ lặp lại trong ngày và khác ngày
• 3.9. Ước lượng độ không đảm bảo đo (ĐKĐBĐ)
• 3.10. Áp dụng phương pháp định lượng baicalein, baicalin và chrysin trên các mẫu Hoàng bá nam
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng Quan Về Phương Pháp Định Lượng Flavonoid Trong Hoàng Bá Nam

Hoàng bá nam (Cortex Oroxyli Indici) là một loại dược liệu quý trong y học cổ truyền Việt Nam. Nghiên cứu về thành phần hóa học của cây này cho thấy flavonoid là nhóm hoạt chất chính, bao gồm baicalein, baicalin và chrysin. Việc định lượng đồng thời các flavonoid này là rất cần thiết để đảm bảo chất lượng và hiệu quả của dược liệu. Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) đã được áp dụng để xác định hàm lượng các flavonoid trong hoàng bá nam, giúp nâng cao tiêu chuẩn chất lượng dược liệu.

1.1. Đặc Điểm Của Hoàng Bá Nam Và Tác Dụng Của Flavonoid

Hoàng bá nam là cây thuốc có nhiều tác dụng như thanh nhiệt, giải độc, và kháng viêm. Các flavonoid trong cây này đã được chứng minh có tác dụng chống oxy hóa, ức chế tế bào ung thư và cải thiện chức năng thận. Nghiên cứu cho thấy baicalein, baicalin và chrysin là những hoạt chất quan trọng nhất trong việc mang lại lợi ích sức khỏe từ hoàng bá nam.

1.2. Tại Sao Cần Phương Pháp Định Lượng Đồng Thời

Việc định lượng đồng thời các flavonoid trong hoàng bá nam giúp đảm bảo chất lượng dược liệu và tối ưu hóa quy trình sản xuất. Phương pháp này không chỉ giúp xác định hàm lượng chính xác mà còn hỗ trợ trong việc phát hiện các tạp chất có thể ảnh hưởng đến hiệu quả điều trị.

II. Thách Thức Trong Phân Tích Flavonoid Trong Hoàng Bá Nam

Mặc dù flavonoid có nhiều lợi ích, việc phân tích chúng trong hoàng bá nam gặp nhiều thách thức. Các yếu tố như sự biến đổi trong quá trình chiết xuất, độ ổn định của các hợp chất và sự hiện diện của tạp chất có thể ảnh hưởng đến kết quả phân tích. Do đó, cần có các phương pháp phân tích chính xác và đáng tin cậy.

2.1. Các Yếu Tố Ảnh Hưởng Đến Kết Quả Phân Tích

Nhiệt độ, thời gian chiết xuất và loại dung môi sử dụng đều có thể ảnh hưởng đến hàm lượng flavonoid thu được. Nghiên cứu cho thấy rằng việc tối ưu hóa các điều kiện này là rất quan trọng để đạt được kết quả chính xác.

2.2. Sự Biến Đổi Của Flavonoid Trong Quá Trình Chiết Xuất

Flavonoid có thể bị phân hủy hoặc biến đổi trong quá trình chiết xuất nếu không được thực hiện đúng cách. Việc sử dụng các phương pháp chiết xuất hiện đại như siêu âm hoặc chiết xuất bằng dung môi có thể giúp bảo toàn các hợp chất này.

III. Phương Pháp Định Lượng Đồng Thời Flavonoid Trong Hoàng Bá Nam

Phương pháp HPLC-UV đã được áp dụng để định lượng đồng thời ba flavonoid chính trong hoàng bá nam. Phương pháp này cho phép xác định hàm lượng của baicalein, baicalin và chrysin một cách nhanh chóng và chính xác. Các điều kiện sắc ký được tối ưu hóa để đạt được độ phân giải cao và thời gian phân tích ngắn.

3.1. Quy Trình Chuẩn Bị Mẫu Để Phân Tích

Quy trình chuẩn bị mẫu bao gồm việc thu hái, phơi khô và chiết xuất dược liệu. Các mẫu được xử lý bằng dung môi thích hợp để thu được các flavonoid cần thiết cho phân tích. Việc chuẩn bị mẫu đúng cách là rất quan trọng để đảm bảo độ chính xác của kết quả.

3.2. Tối Ưu Hóa Điều Kiện Sắc Ký

Điều kiện sắc ký như pH, tốc độ dòng chảy và nhiệt độ cột được tối ưu hóa để đạt được độ phân giải tốt nhất cho ba flavonoid. Nghiên cứu cho thấy rằng việc điều chỉnh các thông số này có thể cải thiện đáng kể độ nhạy và độ chính xác của phương pháp.

IV. Kết Quả Nghiên Cứu Về Định Lượng Flavonoid Trong Hoàng Bá Nam

Kết quả nghiên cứu cho thấy hàm lượng flavonoid trong các mẫu hoàng bá nam khác nhau có sự biến đổi đáng kể. Việc áp dụng phương pháp HPLC-UV đã cho phép xác định chính xác hàm lượng baicalein, baicalin và chrysin trong các mẫu dược liệu từ nhiều vùng khác nhau của Việt Nam. Điều này mở ra cơ hội cho việc tiêu chuẩn hóa chất lượng dược liệu.

4.1. Phân Tích Kết Quả Định Lượng

Kết quả phân tích cho thấy hàm lượng flavonoid trong hoàng bá nam có sự khác biệt giữa các vùng. Các mẫu từ Hà Giang có hàm lượng flavonoid cao nhất, trong khi các mẫu từ Thanh Hóa có hàm lượng thấp hơn. Điều này cho thấy sự ảnh hưởng của điều kiện sinh thái đến chất lượng dược liệu.

4.2. Ứng Dụng Kết Quả Nghiên Cứu

Kết quả nghiên cứu có thể được áp dụng trong việc phát triển các sản phẩm từ hoàng bá nam, từ đó nâng cao giá trị kinh tế của dược liệu này. Việc định lượng chính xác các flavonoid cũng giúp đảm bảo hiệu quả điều trị trong y học cổ truyền.

V. Kết Luận Về Phương Pháp Định Lượng Flavonoid Trong Hoàng Bá Nam

Phương pháp định lượng đồng thời các flavonoid trong hoàng bá nam bằng HPLC-UV đã chứng minh được tính hiệu quả và độ chính xác. Nghiên cứu này không chỉ góp phần nâng cao tiêu chuẩn chất lượng dược liệu mà còn mở ra hướng đi mới cho việc nghiên cứu và phát triển các sản phẩm từ hoàng bá nam trong tương lai.

5.1. Tương Lai Của Nghiên Cứu Về Hoàng Bá Nam

Nghiên cứu về hoàng bá nam cần tiếp tục được mở rộng để khám phá thêm nhiều hoạt chất có lợi khác. Việc áp dụng các công nghệ hiện đại trong nghiên cứu sẽ giúp nâng cao hiệu quả và độ chính xác trong việc phân tích các thành phần hóa học của dược liệu.

5.2. Đề Xuất Các Hướng Nghiên Cứu Tiếp Theo

Các nghiên cứu tiếp theo nên tập trung vào việc phát triển các sản phẩm chức năng từ hoàng bá nam, cũng như nghiên cứu sâu hơn về tác dụng sinh học của các flavonoid. Điều này sẽ giúp nâng cao giá trị của hoàng bá nam trong y học hiện đại.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Việt Nam sở hữu nguồn tài nguyên dược liệu tự nhiên vô cùng phong phú, trong đó Hoàng bá nam hay còn gọi là Vỏ Núc nác (tên khoa học: Oroxylum indicum (L.) Kurz, họ Chùm ớt Bignoniaceae) có trữ lượng tự nhiên ước tính hàng trăm tấn mỗi năm tại các tỉnh miền núi phía Bắc như Hà Giang, Yên Bái, Tuyên Quang, Hòa Bình và Thanh Hóa. Vị thuốc vỏ thân Hoàng bá nam từ lâu đã được y học cổ truyền sử dụng rộng rãi để thanh nhiệt, giải độc, kháng viêm, trị dị ứng mẩn ngứa và các bệnh lý đường tiêu hóa. Các nghiên cứu hóa thực vật hiện đại đã chứng minh nhóm hoạt chất có hoạt tính sinh học chính trong vỏ cây là các flavonoid, tiêu biểu gồm baicalein, baicalin và chrysin. Những hợp chất này thể hiện tác dụng chống oxy hóa mạnh mẽ, ức chế tế bào ung thư, kháng khuẩn và điều hòa miễn dịch rõ rệt.

Mặc dù đã được ghi nhận trong Dược điển Việt Nam V ban hành năm 2017, chuyên luận Hoàng bá nam hiện nay mới dừng lại ở các chỉ tiêu cảm quan, vi phẫu, soi bột và định tính bằng phản ứng hóa học trong ống nghiệm. Dược điển hoàn toàn thiếu vắng chỉ tiêu định lượng hàm lượng hoạt chất bằng các công cụ phân tích hiện đại. Thực trạng này dẫn đến lỗ hổng lớn trong công tác kiểm soát chất lượng dược liệu lưu thông trên thị trường, gây khó khăn cho việc chuẩn hóa nguyên liệu sản xuất thuốc và thực phẩm chức năng.

Nhằm giải quyết triệt để vấn đề này, đề tài nghiên cứu đã được triển khai với mục tiêu trọng tâm: xây dựng và thẩm định quy trình phân tích định lượng đồng thời 3 hoạt chất baicalein, baicalin và chrysin trong vỏ thân Hoàng bá nam bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao đầu dò tử ngoại (HPLC-UV), đồng thời ứng dụng phương pháp để khảo sát hàm lượng hoạt chất trên 6 lô mẫu dược liệu thu thập tại 5 vùng địa lý khác nhau của Việt Nam trong giai đoạn 2016-2019. Nghiên cứu mang ý nghĩa thực tiễn sâu sắc, cung cấp cơ sở khoa học định lượng với hệ số tương quan tuyến tính đạt mức tuyệt đối gần bằng 1 và độ đúng thu hồi kiểm soát chặt chẽ trong khoảng 95% đến 105%, góp phần trực tiếp vào việc nâng cấp tiêu chuẩn kiểm nghiệm dược liệu quốc gia.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu được xây dựng trên nền tảng lý thuyết sắc ký lỏng hiệu năng cao pha đảo (RP-HPLC) kết hợp quang phổ hấp thụ phân tử tử ngoại - khả kiến (UV-Vis). Cơ chế tách sắc ký pha đảo dựa trên sự tương tác phân bố khác nhau của các cấu tử chất tan giữa pha tĩnh không phân cực là silica gắn chuỗi alkyl octadecyl C18 và pha động phân cực gồm hỗn hợp dung môi nước - hữu cơ. Quá trình tách rửa giải phụ thuộc trực tiếp vào độ phân cực, cấu trúc phân tử và hằng số phân bố của từng chất.

Về mặt hóa thực vật, 3 hợp chất nghiên cứu đều thuộc nhóm flavonoid với khung carbon cơ bản C6-C3-C6:

• Baicalin (C21H18O11, phân tử khối 446,36 g/mol) là dạng flavonoid glucuronid mang một phân tử acid glucuronic, có độ phân cực cao nhất và dễ tan trong hỗn hợp dung môi chứa nước.
• Baicalein (C15H10O5, phân tử khối 270,24 g/mol, nhiệt độ nóng chảy 264,5 độ C) là dạng aglycon tự do mang 3 nhóm hydroxyl ở các vị trí C-5, C-6, C-7.
• Chrysin (C15H10O4, phân tử khối 254,24 g/mol, nhiệt độ nóng chảy 285,5 độ C) mang 2 nhóm hydroxyl tại C-5 và C-7, có độ phân cực thấp nhất trong nhóm.

Dựa trên lý thuyết quang phổ flavonoid, các hợp chất flavon có 2 dải hấp thụ đặc trưng: dải I ở vùng 310 đến 350 nm và dải II ở vùng 250 đến 280 nm. Qua quét phổ toàn dải UV-Vis, bước sóng hấp thụ cực đại được xác định lần lượt là 275,6 nm đối với baicalein, 277,6 nm đối với baicalin và 268,5 nm đối với chrysin, tạo cơ sở khoa học để thiết lập bước sóng phát hiện chung tại 280 nm.

Phương pháp nghiên cứu

Nguồn dữ liệu thực nghiệm gồm 6 mẫu vỏ thân Hoàng bá nam thu thập từ 5 vùng sinh thái: Lạng Sơn (tháng 12/2018), Hòa Bình (tháng 8/2018), Nghệ An (tháng 8/2016), Sa Pa (tháng 6/2018), Phú Thọ 1 (tháng 1/2019) và Phú Thọ 2 (tháng 10/2018). Các mẫu được chọn theo phương pháp lấy mẫu ngẫu nhiên đại diện, làm sạch, sấy khô ở 60 độ C và nghiền mịn đồng nhất qua rây đường kính 1,0 mm.

Lý do lựa chọn kỹ thuật HPLC-UV là do phương pháp này sở hữu độ chọn lọc cao, độ lặp lại vượt trội, vận hành ổn định và chi phí dung môi phù hợp, dễ dàng triển khai ứng dụng thực tế tại hầu hết các trung tâm kiểm nghiệm dược phẩm ở Việt Nam so với các hệ thống phức tạp như HPLC-MS/MS.

Quy trình chiết tách mẫu được khảo sát toàn diện qua 8 hệ dung môi (methanol, ethanol nguyên chất và các tỷ lệ 60%, 70%, 80%) cùng 2 kỹ thuật chiết: chiết siêu âm (ở 25, 30 và 50 độ C) và chiết đun hồi lưu cách thủy (trong 15, 30, 45 và 60 phút).

Quy trình phân tích được thẩm định nghiêm ngặt theo hướng dẫn quốc tế ICH Q2(R1) và AOAC trên các chỉ tiêu:

• Tính đặc hiệu và tính thích hợp hệ thống (độ lệch chuẩn tương đối RSD diện tích pic và thời gian lưu dưới 2%).
• Khoảng tuyến tính và đường chuẩn (đánh giá sai số hệ thống qua phân tích ANOVA trên phần mềm thống kê).
• Giới hạn phát hiện (LOD, S/N = 3) và giới hạn định lượng (LOQ, S/N = 10).
• Độ lặp lại trong ngày và khác ngày (12 thí nghiệm trên cùng mẫu thực tế).
• Độ đúng thông qua phương pháp thêm chuẩn ở 2 mức nồng độ (50% và 100%).
• Ước lượng độ không đảm bảo đo tổng hợp (kết hợp độ chụm và độ đúng ở mức tin cậy 95%).

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

Quá trình tối ưu hóa điều kiện sắc ký đã xác lập được cấu hình phân tích vượt trội trên cột pha đảo Ascentis C18 kích thước 150 mm x 4,6 mm, cỡ hạt 5 micromet, nhiệt độ buồng cột 25 độ C, tốc độ dòng 0,5 mL/phút, thể tích tiêm mẫu 10 microlit. Hệ pha động gradient tối ưu gồm nước chứa 0,1% acid formic (kênh A) và acetonitril (kênh B) theo chương trình: từ 0,01 đến 20 phút giữ tỷ lệ 70% A và 30% B chuyển dần sang 50% A và 50% B, duy trì đến phút 40. Kết quả sắc ký ghi nhận thời gian lưu của baicalin là 7,047 phút (hệ số đối xứng As = 1,057, độ phân giải Rs = 1,984), baicalein là 20,205 phút (As = 0,989, Rs = 2,074) và chrysin là 29,224 phút (As = 0,982, Rs = 2,399). Cả 3 pic phân tích đều đạt độ tách hoàn toàn khỏi nền mẫu với Rs lớn hơn 1,5 và hệ số kéo đuôi xấp xỉ 1,0.

Khảo sát quy trình xử lý mẫu cho thấy kỹ thuật chiết đun hồi lưu cách thủy bằng ethanol 70% trong 30 phút đạt hiệu suất chiết kiệt tối đa. So với phương pháp chiết siêu âm ở cùng thời gian 30 phút, chiết hồi lưu làm tăng hàm lượng baicalin thu được lên tới 41% (từ 0,679% lên 1,156%) và làm tăng hàm lượng chrysin lên 6,9% (từ 0,254% lên 0,274%), trong khi hàm lượng baicalein đạt mức tương đương 0,715%. Việc khảo sát số lần chiết khẳng định chỉ cần chiết 1 lần trong 30 phút với 40 mL dung môi cho 0,5 g bột dược liệu là đã thu hồi trọn vẹn hoạt chất, giúp tiết kiệm dung môi và thời gian phân tích.

Đánh giá khoảng tuyến tính cho thấy mối tương quan chặt chẽ giữa diện tích pic và nồng độ chất:

• Baicalin: khoảng nồng độ 12,5 đến 400 microgram/mL với phương trình y = 2,00.10^7 x trừ 8696,4, hệ số tương quan R2 đạt 1,0000, giá trị P-value = 0,158.
• Baicalein: khoảng nồng độ 6,575 đến 210,4 microgram/mL với phương trình y = 3,00.10^7 x trừ 25287, hệ số tương quan R2 đạt 0,9997, giá trị P-value = 0,383.
• Chrysin: khoảng nồng độ 3,125 đến 100 microgram/mL với phương trình y = 1,00.10^8 x cộng 5134,9, hệ số tương quan R2 đạt 1,0000, giá trị P-value = 0,567.

Kết quả kiểm định phương sai cho thấy toàn bộ giá trị P-value đều lớn hơn 0,05, khẳng định phương pháp không mắc bất kỳ sai số hệ thống biến đổi hay không đổi nào.

Áp dụng phương pháp phân tích trên 6 mẫu thực tế thu thập tại các vùng sinh thái ghi nhận sự phân bố hàm lượng hoạt chất có sự khác biệt rõ rệt theo xuất xứ địa lý. Hàm lượng baicalin dao động từ 0,766% đến 1,158%, baicalein dao động từ 0,524% đến 0,718%, và chrysin dao động từ 0,218% đến 0,280%. Mẫu thu hái tại Phú Thọ ghi nhận tổng hàm lượng 3 flavonoid cao nhất (đạt trên 2,15%), trong khi các mẫu từ Lạng Sơn và Nghệ An có hàm lượng thấp hơn khoảng 15% đến 25%.

Thảo luận kết quả

Hiệu quả tách sắc ký vượt trội đạt được là nhờ việc bổ sung 0,1% acid formic vào pha động nước. Acid formic đóng vai trò chất ức chế điện ly, làm giảm sự ion hóa của các nhóm silanol tự do trên bề mặt hạt mang silica và ngăn chặn hiện tượng phân ly nhóm phenolic của flavonoid, nhờ đó pic sắc ký thu gọn chân, đối xứng hoàn hảo và triệt tiêu hoàn toàn hiện tượng kéo đuôi.

Dữ liệu thực nghiệm của nghiên cứu có thể được trực quan hóa tối ưu thông qua các công cụ biểu diễn học thuật: biểu đồ cột so sánh hiệu suất chiết xuất giữa 8 hệ dung môi ethanol và methanol ở các nồng độ khác nhau, hình ảnh sắc ký đồ HPLC-UV đa kênh tại 280 nm minh họa độ tách sắc nét của 3 hoạt chất, và bảng ma trận định lượng thể hiện sự biến thiên hàm lượng flavonoid theo 5 vùng địa lý thu hái.

So sánh với các nghiên cứu quốc tế trước đây, công bố của một nhóm nghiên cứu tại Ấn Độ năm 2008 chỉ định lượng baicalein và chrysin trong vỏ rễ với thời gian lưu kéo dài và sử dụng hệ dung môi 4 thành phần phức tạp chứa acid phosphoric. Một nghiên cứu khác tại Trung Quốc năm 2012 định lượng flavonoid trong hạt Hoàng bá nam nhưng chưa chuẩn hóa trên bộ phận vỏ thân. Quy trình được xây dựng trong luận văn này vượt trội hơn hẳn nhờ khả năng định lượng đồng thời cả dạng glycosid (baicalin) và 2 dạng aglycon (baicalein, chrysin) chỉ trong một lần chạy sắc ký 40 phút, đồng thời sử dụng dung môi chiết xuất ethanol 70% thân thiện với môi trường và an toàn cho kiểm nghiệm viên.

Đề xuất và khuyến nghị

Dựa trên các bằng chứng khoa học thu được, nghiên cứu đưa ra 4 khuyến nghị hành động cụ thể nhằm nâng cao chất lượng dược liệu và tiêu chuẩn hóa ngành dược:

Thứ nhất, Hội đồng Dược điển Việt Nam và Cục Quản lý Dược cần xem xét cập nhật phương pháp HPLC-UV này vào chuyên luận Hoàng bá nam trong Dược điển Việt Nam VI. Đề xuất quy định ngưỡng chất lượng tối thiểu bắt buộc đối với vị thuốc vỏ thân Hoàng bá nam khô tuyệt đối: hàm lượng baicalin không ít hơn 0,70%, baicalein không ít hơn 0,50% và chrysin không ít hơn 0,20%. Lộ trình áp dụng khuyến nghị hoàn thành trong giai đoạn 2026-2028.

Thứ hai, các Trung tâm Kiểm nghiệm Dược phẩm - Mỹ phẩm tuyến tỉnh và Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung ương cần ứng dụng ngay quy trình xử lý mẫu chiết đun hồi lưu cách thủy bằng ethanol 70% trong 30 phút. Giải pháp này giúp rút ngắn thời gian chuẩn bị mẫu xuống dưới 45 phút, kiểm soát độ đúng thu hồi đạt từ 98% đến 102% và nâng cao độ chính xác phép đo lên hơn 95% so với các phương pháp ngâm chiết cổ điển.

Thứ ba, các doanh nghiệp sản xuất thuốc đông dược và thực phẩm chức năng cần thiết lập hệ thống kiểm soát chất lượng đầu vào, phân tích định lượng 100% các lô nguyên liệu vỏ Hoàng bá nam thương phẩm trước khi đưa vào sản xuất. Việc kiểm tra định lượng đồng thời 3 flavonoid giúp ngăn chặn triệt để tình trạng pha trộn vỏ cây giả mạo hoặc dược liệu đã bị chiết kiệt hoạt chất.

Thứ tư, Viện Dược liệu phối hợp cùng Sở Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn tại các tỉnh Phú Thọ, Hòa Bình và Yên Bái triển khai quy hoạch vùng trồng bảo tồn và phát triển cây Hoàng bá nam theo tiêu chuẩn Thực hành tốt trồng trọt và thu hái dược liệu (GACP-WHO). Mục tiêu hướng tới là nâng cao năng suất khai thác từ 20% đến 30% vào năm 2027, ưu tiên thu hái dược liệu vào mùa thu đông để đạt hàm lượng hoạt chất tối ưu.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

Công trình nghiên cứu mang giá trị học thuật và ứng dụng cao, là tài liệu tham khảo thiết thực cho 4 nhóm đối tượng trọng tâm:

1. Học viên cao học, nghiên cứu sinh và giảng viên chuyên ngành Hóa phân tích, Hóa học các hợp chất thiên nhiên, Dược liệu học: Luận văn cung cấp tài liệu chi tiết về phương pháp thiết lập chương trình gradient sắc ký pha đảo, kỹ thuật xử lý nền mẫu thực vật phức tạp và quy trình thẩm định phương pháp phân tích toàn diện theo tiêu chuẩn quốc tế ICH Q2(R1).

2. Kiểm nghiệm viên và chuyên viên phân tích tại các Viện Kiểm nghiệm Thuốc, Trung tâm Kiểm nghiệm Dược phẩm - Mỹ phẩm: Cung cấp quy trình thao tác chuẩn (SOP) hoàn chỉnh từ khâu chuẩn bị dung dịch đối chiếu, chiết mẫu một lần bằng ethanol 70%, đến cách thức xử lý dữ liệu và tính toán độ không đảm bảo đo cho phép định lượng thường quy.

3. Bộ phận Nghiên cứu và Phát triển (R&D), Quản lý Chất lượng (QC/QA) tại các nhà máy dược phẩm, công ty sản xuất thực phẩm bảo vệ sức khỏe: Ứng dụng quy trình chiết hồi lưu tối ưu để nâng cao hiệu suất thu hồi hoạt chất có tác dụng kháng viêm, chống oxy hóa, đồng thời xây dựng tiêu chuẩn cơ sở cho các sản phẩm chứa cao chiết Hoàng bá nam.

4. Cơ quan quản lý nhà nước và ban soạn thảo Dược điển: Tiếp cận nguồn dữ liệu thực nghiệm phong phú trên 6 lô mẫu dược liệu đại diện của Việt Nam để làm cơ sở khoa học ban hành các quy chuẩn kỹ thuật quốc gia về định lượng dược liệu.

Câu hỏi thường gặp

1. Tại sao bước sóng 280 nm lại được lựa chọn để định lượng đồng thời cả ba hoạt chất? Kết quả đo phổ UV-Vis cho thấy cực đại hấp thụ của baicalein là 275,6 nm, baicalin là 277,6 nm và chrysin là 268,5 nm. Bước sóng 280 nm nằm rất gần vùng cực đại của cả 3 chất, giúp đầu dò ghi nhận tín hiệu có độ nhạy quang học cao, đường nền ổn định và hạn chế tối đa nhiễu từ các tạp chất khác trong dịch chiết.

2. Vì sao phương pháp chiết đun hồi lưu cách thủy lại cho hiệu suất cao hơn hẳn chiết siêu âm? Phương pháp đun hồi lưu ở nhiệt độ sôi cung cấp năng lượng nhiệt liên tục, làm tăng độ tan của các flavonoid và phá vỡ cấu trúc vách tế bào thực vật. Nhờ đó, lượng baicalin chiết được tăng vượt trội tới 41% so với chiết siêu âm ở nhiệt độ phòng, đảm bảo hoạt chất được chiết kiệt hoàn toàn chỉ trong 30 phút.

3. Việc thêm 0,1% acid formic vào pha động có tác dụng hóa học cụ thể là gì? Acid formic giúp duy trì môi trường pH acid yếu, ức chế sự phân ly của các nhóm hydroxyl phenolic trên khung flavonoid và ngăn chặn sự ion hóa các nhóm silanol còn sót lại trên cột silica C18. Điều này giúp loại bỏ hiện tượng pic bị kéo đuôi, tăng độ sắc nét và đảm bảo hệ số đối xứng pic luôn nằm trong khoảng tối ưu từ 0,98 đến 1,05.

4. Quy trình phân tích này có áp dụng được cho bộ phận hạt hoặc lá cây Hoàng bá nam không? Phương pháp hoàn toàn có thể mở rộng áp dụng cho hạt và lá do các bộ phận này cũng chứa baicalin, baicalein và chrysin. Tuy nhiên, do thành phần nền mẫu ở hạt và lá có hàm lượng chất béo, diệp lục và tinh dầu khác nhau, kiểm nghiệm viên cần thẩm định lại hiệu suất chiết và độ đúng trước khi áp dụng đại trà.

5. Giá trị P-value lớn hơn 0,05 trong kiểm định đường chuẩn có ý nghĩa thống kê như thế nào? Giá trị P-value của hệ số chặn a trong phương trình y = a + bx đối với cả 3 chất đều lớn hơn 0,05 (từ 0,158 đến 0,567). Điều này chứng minh sự khác biệt giữa hệ số a và giá trị 0 không có ý nghĩa thống kê ở độ tin cậy 95%, khẳng định phương pháp định lượng không mắc bất kỳ sai số hệ thống nào.

Kết luận

Công trình nghiên cứu luận văn thạc sĩ đã giải quyết trọn vẹn bài toán khoa học và thực tiễn trong công tác kiểm nghiệm vị thuốc Hoàng bá nam tại Việt Nam thông qua các đóng góp nổi bật:

• Xây dựng thành công quy trình HPLC-UV định lượng đồng thời baicalin, baicalein và chrysin trên cột pha đảo Ascentis C18 với bước sóng phát hiện 280 nm trong thời gian 40 phút.
• Tối ưu hóa quy trình xử lý mẫu bằng phương pháp chiết đun hồi lưu cách thủy với ethanol 70% trong 30 phút, nâng hiệu suất thu hồi baicalin cao hơn 41% so với chiết siêu âm.
• Thẩm định phương pháp đạt độ tin cậy tuyệt đối theo tiêu chuẩn ICH và AOAC với hệ số tương quan R2 từ 0,9997 đến 1,0000, độ lặp lại RSD dưới 2% và loại trừ hoàn toàn sai số hệ thống.
• Khảo sát thực nghiệm trên 6 lô mẫu dược liệu thuộc 5 tỉnh thành, phát hiện mẫu thu hái tại Phú Thọ có tổng hàm lượng 3 flavonoid cao nhất đạt trên 2,15%.
• Cung cấp luận cứ khoa học thực tiễn vững chắc phục vụ công tác nâng cấp chuyên luận kiểm nghiệm Hoàng bá nam trong Dược điển Việt Nam.

Trong giai đoạn 2026-2027, các nghiên cứu tiếp theo cần tập trung mở rộng phân tích đánh giá hoạt tính sinh học trên các dòng tế bào và ứng dụng quy trình kiểm nghiệm này vào kiểm soát chất lượng dây chuyền sản xuất cao định chuẩn quy mô công nghiệp. Các nhà nghiên cứu và kiểm nghiệm viên quan tâm có thể khai thác chi tiết các thông số thực nghiệm trong toàn văn luận văn để áp dụng trực tiếp vào công tác nghiên cứu và kiểm định chất lượng dược liệu.

Trích đoạn nội dung tài liệu

MỞ ĐẦU Việt Nam là một quốc gia nằm trong khu vực có khí hậu nhiệt đới nóng ẩm mưa nhiều, tạo điều kiện thuận lợi cho sự phát triển đa dạng và phong phú các dược liệu có nguồn gốc từ thực vật. Tuy nhiên, nhiều cây thuốc mới chỉ được sử dụng chủ yếu theo kinh nghiệm dân gian mà chưa được nghiên cứu một cách toàn diện. Chính vì vậy, việc nghiên cứu các cây thuốc rất cần thiết, nhằm đảm bảo được hiệu quả phòng và điều trị bệnh hiện nay. Trong y học cổ truyền, Hoàng bá nam (Cortex Oroxyli indici) là loại dược liệu được biết đến với rất nhiều lợi ích như: thanh can giải nhiệt, tiêu độc, sát trùng, nhuận phế, dị ứng mẩn ngứa, viêm họng, ho khản tiếng, đau dạ dày, lỵ, viêm đường tiết niệu [3],[10]…Với nguồn nguyên liệu phong phú và có tác dụng tốt đối với sức khỏe con người, nên Hoàng bá nam ngày càng được sử dụng rộng rãi trong các lĩnh vực như: sản xuất thuốc, thực phẩm chức năng.

Theo những nghiên cứu về thành phần hóa học của dược liệu Hoàng bá nam cho thấy flavonoid là thành phần có tác dụng chính. Một số hoạt chất flavonoid quan trọng có trong dược liệu này là: baicalein, baicalin, chrysin. Các hoạt chất này đã được chứng minh có tác dụng chống viêm, chống oxy hóa, ức chế tế bào ung thư, ức chế virus HIV-1, cải thiện chức năng thận,…[22],[13],[33]. Hoàng bá nam đã được qui định trong DĐVN V (2017).

Tuy nhiên, chuyên luận này mới chỉ đưa ra một số tiêu chí đánh giá chất lượng dược liệu là: mô tả, vi phẫu, soi bột, tạp chất mà chưa có chỉ tiêu định lượng hàm lượng hoạt chất chính bằng các phương pháp sắc ký hiện đại [1]. Do đó, việc áp dụng chuyên luận này trong đánh giá chất lượng dược liệu Hoàng bá nam còn nhiều hạn chế. Để góp phần nâng cấp tiêu chuẩn chất lượng dược liệu Hoàng bá nam, đề tài: ―Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời các flavonoid (dự kiến gồm baicalein, baicalin và chrysin) trong dược liệu Hoàng bá nam (Cortex Oroxyli Indici) bằng phương pháp HPLC-UV‖ được đề xuất thực hiện với các mục tiêu chính: - Xây dựng phương pháp định lượng đồng thời các flavonoid trong dược liệu Hoàng bá nam (Cortex Oroxyli Indici) 1 LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] - Áp dụng phương pháp xây dựng được để định lượng hàm lượng hoạt chất trong các mẫu Hoàng bá nam tại một số vùng khác nhau của Việt Nam. 2 LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] CHƢƠNG I: TỔNG QUAN 1.

TỔNG QUAN VỀ CÂY HOÀNG BÁ NAM Hoàng bá nam hay còn gọi là Vỏ Núc nác, Nam hoàng bá, có tên khoa học là Oroxylum indicum, họ Chùm ớt (Bignoniaceae). Vị thuốc là vỏ thân đã phơi hay sấy khô của cây Hoàng bá nam [3]. Cây Hoàng bá nam Dược liệu bộ phận vỏ Dược liệu bộ phận hạt Hình 1. Cây và dược liệu Hoàng bá nam 1.

Đặc điểm thực vật Cây nhỡ, cao 5-13 m. Thân nhẵn, ít phân cành, có những sẹo to do lá rụng để lại, vỏ cây màu xám tro, mặt trong màu vàng. Lá to, mọc đối, xẻ 2-3 lần lông chim, dài tới 1,5m tập trung ở ngọn thân, lá chét hình bầu dục, nguyên, dài 6,5-14 cm, rộng 3,5- 8 cm, gốc tròn, hơi lệch, đầu nhọn, mặt dưới nhẵn hoặc hơi có lông; cuống lá kép hình trụ, mập. Hoa màu nâu đỏ sẫm mọc thành chùm dài ở ngọn thân.

Đài hình ống, cứng, dày, có 5 khía nông. Tràng hình chuông, phình rộng, có 5 thùy hợp thành hai môi, 5 nhị, có chỉ nhị, có lông ở gốc. Đĩa mật có 5 thùy rõ, cao 4-5 mm, đường kính 12-14 mm. Quả thõng, dài 40-120 cm, rộng 5-10 cm, khi chín nứt làm hai mảnh, các mảnh vỏ hóa gỗ.

Hạt dài 4-9 cm, rộng 3-4 cm, kể cả cánh mỏng bao quanh, hạt rất nhiều, hình bầu dục cứng [3]. Phân bố và sinh thái của cây Hoàng bá nam Ở nước ta, cây mọc hoang ở rừng thường xanh, cây ưa mọc trên đất tơi xốp, có tầng đất mặt sâu và dễ thấm nước, có khi trong các quần hệ thứ sinh những vùng thấp ẩm ướt, tới độ cao 900 m. Cũng có nhiều nơi gây trồng. Trồng bằng hạt hoặc 3 LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] bằng cành vào mùa xuân.

Hoa nở về đêm, thụ phấn nhờ dơi. Hoa và quả từng lúc quanh năm. Các quả chín vẫn ở trên cây khá lâu khi cây hết rụng lá. Chi Oroxylum Vent.

chỉ có một loài là Hoàng bá nam ở Việt Nam (Oroxylum indicum). Trên thế giới, Hoàng bá nam phân bố rộng rãi ở vùng nhiệt đới châu Á, bao gồm Srilanca, Ấn Độ, Mianma, Trung Quốc, Lào, Việt Nam, Thái Lan, Philippin, đảo Selip và Timor của Indonesia. Nguồn Hoàng bá nam ở Việt Nam tương đối dồi dào. Các tỉnh có trữ lượng lớn hiện nay là Hà Giang, Yên Bái, Tuyên Quang, Hòa Bình, Thanh Hóa,…Ở mỗi tỉnh ước tính có thể khai thác hàng trăm tấn nguyên liệu [3],[10].

Bộ phận dùng Vỏ thân (Cortex Oroxyli ) và hạt (Oroxyli Semen). Vỏ thân thu hái khi cần thiết, phơi khô hoặc cạo lớp vỏ bần rồi thái phiến dài 2-5 cm, dầy 1-3 mm phơi khô. Khi dùng để nguyên hoặc sao nhỏ lửa cho vàng. Hạt thu hái ở quả chín vào mùa thu đông, phơi khô [10].

Thành phần hóa học Các nghiên cứu đã được công bố ở trong và ngoài nước chỉ ra rằng thành phần hóa học của Hoàng bá nam gồm các nhóm chất: flavonoid, stilbenoid, triterpenoid, naphthalen, sterol Trong đó, thành phần hóa học có tác dụng chính là flavonoid [16]. Nhóm flavonoid Flavonoid (hoặc bioflavonoid) là một loại chất chuyển hóa trung gian của thực vật. Flavonoid có màu vàng, xanh, tím đỏ và một số khác không có màu. Trong thực vật cũng có một số nhóm hợp chất khác không thuộc flavonoid nhưng lại có màu vàng như carotenoid, anthranoid, xanthon có thể gây nhầm lẫn.

Flavonoid là nhóm hoạt chất chính có trong Hoàng bá nam. Các flavonoid có trong dược liệu này là chủ yếu là flavon. Ngoài ra còn có các flavonoid nhóm flavanon, flavanonol. 4 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.

Các nhóm flavonoid trong Hoàng bá nam Khung công thức Tài liệu Nhóm Chất cấu tạo tham khảo baicalein, chrysin; oroxylin A, apigenin, luteolin; [9] [18] chrysin 6-C-β-D-glucopyranosyl-8-O-β-D- [36] glucuronopyranosid; [5] [19] baicalein7-O-β-D-glucuronopyranosyl-(1→3)[ β-D- [51] glucopyranosyl-(1→6)]- β-D-glucopyranosid; scutellarein [45] [48] 7-O-β-D-glucopyranosyl (1→6)-β-D-glucopyranosid; chrysin-7-O-gentiobiosid; baicalein-7-O-diglucosid; flavon baicalein-7-O-glucosid; scutellarein-7-O-glucopyranosid; chrysin-7-O-glucuronid; baicalin; chrysin-6-C-β-D- glucopyranosyl-8-C-α-L-arabinopyranosid; baicalein-7-O- glucosid, baicalein-7-O-diglucosid (Oroxylin B); hispidulin; 8,8’’-bibaicalein; baicalein-7-O-caffeat; 6-hydroxyluteolin; 6-methoxyluteolin; 7-O-methyl chrysin, 5-hydroxy 4’,7- dimethoxy flavon; dihydro oroxylin A; baicalein-7-O- 5 LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] gentiobiosid; baicalein-7-O-glucuronid; oroxylin A-7-O-β- D-glucuronid butyl ester; 6-methoxy-baicalein; oroxylin- A-7-O-glucosid; baicalein 6-methoxy-7-glucuronid; 2,5-dihydroxy-6,7-dimethoxy flavon; 3,7,3’,5’- tetramethoxy-4’-hydroxy flavon; 5,7-dihydroxy-3- methoxyflavon; 3,5,7-trihydroxyflavon; 5,7,4'-trihydroxy- 3-methoxyflavon; 3,5,7,4'-tetrahydroxy flavon; 5,7,4- trihydroxyflavon wogonin-7-O-β-D-glucuronide; 5,6,7-trimethoxyflavon-8- O-β-D-glucopyranosid; flavanon pinocembrin, pinobanksin, pinostrobin [18], [26] quercetin; quercetin-3-O-ara-binopyranoside; kaempferol; flavonol galangin; [54], [35] 3, 4, 5, 7-tetrahydroxy-flavonol 6 LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] Tính chất quang phổ của flavonoid Trên phổ UV của flavonoid chia ra 2 dải hấp thụ, dải I nằm trong vùng 290 nm trở lên, dải II nằm trong vùng 290 nm trở xuống. Trong dải I, flavon có đỉnh hấp thu cực đại trong vùng 310 – 350 nm, flavonol có 3-OH đã thế trong vùng 330 – 360 nm, flavonol có 3-OH tự do thì hấp thụ vùng 350 – 385 nm. Trong dải II, cả flavon, flavonol đều có đỉnh hấp thụ trong vùng 250 – 280 nm. Isoflavon do gốc phenyl đính ở C-3, không còn hiệu ứng liên hợp với nhóm carbonyl nên chỉ có dải hấp thụ chính ở 250 -270 nm [2].

Công thức cấu tạo của baicalin, baicalein, chrysin có trong Hoàng bá nam STT Tên chất CTCT Thông tin chất - CTPT: C15H10O5 - M (g/mol): 270,2369 - Nhiệt độ nóng chảy (0C): 264,5 1 Baicalein - λmax = 216, 277, 324 nm - Dung môi hòa tan: DMSO, aceton, ethanol, methanol - CTPT: C21H18O11 - M (g/mol): 446,364 - Nhiệt độ nóng chảy (0C): 202-205 2 Baicalin - λmax = 214, 278, 315 nm ± 2 nm - Dung môi hòa tan: methanol, ethanol 7 LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] - CTPT: C15H10O4 - M (g/mol): 254,2375 ± 0,0139 - Nhiệt độ nóng chảy (0C): 285,5 3 Chrysin - λmax = 212, 269, 315 nm Dung môi hòa tan: Ethanol, chloroform, ether 1. Nhóm stilbenoid Ngoài nhóm hoạt chất chính là flavonoid, trong cây Hoàng bá nam còn chứa các Stilben. Chúng thuộc nhóm chất lớn phenylpropanoid, có chung một cấu trúc mạch cacbon là C6-C2-C6. Một số stilben đã được tìm thấy trong thực vật và khẳng định hoạt tính đặc trưng của chúng như resveratrol (3,5,4’-trihydroxy-stilben) là một chất được phát hiện có trong vỏ quả nho giúp giảm nguy cơ các bệnh về tim.

Bên cạnh đó, hoạt chất này có mặt trong dâu, đậu phộng và rượu vang đỏ. Các hợp chất stilben được chứng minh có tác dụng sinh học như: tác dụng chống oxy hóa, điều hòa cân nặng, chống dị ứng [40],…Một số stilben có trong cây Hoàng bá nam: (E)-dihydropinosylvin-2-carboxyl-5-O-β-D-glucopyranosid và (E)- dihydropinosylvin-3-O-β-D-glucopyranosid;(E)-pinosylvin-3-O-β-D-glucopyranosid; dihydropinosylvin; pinosylvin [23]. Pinosylvin Dihydropinosylvin (E)-pinosylvin-3-O-β-D- glucopyranoside 8 LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] (E)-dihydropinosylvin-2-carboxyl-5-O- (E)-dihydropinosylvin-3-O-β-D- β-D-glucopyranosid glucopyranosid Hình 1. Công thức cấu tạo của Stilbenoid có trong Hoàng bá nam 1.

Các nhóm chất khác Triterpenoid: Lupeol, lup-20(29)-en-2alpha, 3-beta-diol, 2α-hydroxyllupeol[18] Lupeol 3-beta-diol Hình 1. Công thức cấu tạo của một số có trong triterpenoid Hoàng bá nam Các hợp chất naphthalen: 2-(1-hydroxymethylethyl)-4H, 9H-naphtho[2,3-b]furan- 4,9-dion; (3R,4R)-3,4-dihydro-4-hydroxy-3-(3-methyl-2-butenyl)-1(2H)- naphthalenon; (3R,4R)-3,4-dihydro-4-hydroxy-3-(3-hydroxymethyl-(2Z)-butenyl)- 1(2H)-naphthalenon; (2S,3S,4R)-3,4-dihydro-3,4-dihydroxy-2-(3-methyl-2- butenyl)-1(2H)-naphthaleon; 2-acetyl-naphtho [2,3-b]-furan-4,9-dion [25]. Sterol bao gồm β-sitosterol và stigmasterol [42],[18] 1. Công dụng Theo y học dân gian, Hoàng bá nam được biết đến với rất nhiều lợi ích như: thanh can giải nhiệt, tiêu độc, sát trùng, nhuận phế…Vị thuốc Hoàng bá nam hay vỏ thân Hoàng bá nam được chỉ định chữa các chứng bệnh vàng da, dị ứng mẩn ngứa, viêm họng, ho khản tiếng, đau dạ dày, lỵ, viêm đường tiết niệu[10].

9 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Tác dụng sinh học  Tác dụng chống viêm Tác dụng chống viêm giảm đau của cao chiết dược liệu Hoàng bá nam phân đoạn n-butanol cho hiệu quả đáng kể với hàm lượng 100 và 300 (mg/kg; p.  Tác dụng chống oxy hóa Đánh giá tác dụng chống oxy hóa trên mô hình dọn gốc tự do của vỏ thân Hoàng bá nam ở các phân đoạn khác nhau là: ether dầu hỏa, ethyl acetate và n-butanol. Dựa trên các phản ứng: mất màu gốc ABTS+, dọn gốc tự do nitric oxid (·NO), phản ứng màu khử ion Fe3+ bằng tác nhân khử ortho-phenanthroline và ức chế sự hình thành lipid peroxid.

Kết quả cho thấy cao phân đoạn n-butanol cho hoạt tính chống oxy hóa mạnh so với đối chứng dương là acid ascorbic [44]. Theo một nghiên cứu khác về mô hình dọn gốc tự do DPPH của vỏ thân Hoàng bá nam, cho thấy cao chiết phân đoạn ethyl acetat hoạt động chống oxy hóa mạnh nhất (giá trị IC50 là 0,76 mg/ml thấp nhất so với các cao chiết phân đoạn khác) [52].