Luận văn tốt nghiệp: Định lượng mangiferin trong cây tri mẫu bằng phương pháp HPLC

• Tác giả: Trần Hoàng Minh Đức
• Người hướng dẫn: TS. Hoàng Lê Sơn
• Trường học: Đại học Quốc gia Hà Nội
• Chuyên ngành: Dược học
• Đề tài: Nghiên Cứu Quy Trình Định Lượng Mangiferin Trong Cây Tri Mẫu Bằng HPLC
• Loại tài liệu: khóa luận tốt nghiệp
• Năm xuất bản: 2022
• Địa điểm: Hà Nội

• LỜI CẢM ƠN
• MỞ ĐẦU
• 1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN
• 1.1. Tổng quan về cây Tri mẫu
• 1.2. Đặc điểm thực vật, bộ phận sử dụng và công dụng
• 1.3. Thành phần hóa học
• 1.4. Tác dụng sinh học
• 1.5. Tổng quan về biến chứng trên thần kinh trung ương gây ra do đái tháo đường
• 1.6. Khái quát về biến chứng trên thần kinh trung ương do đái tháo đường
• 1.7. Dịch tễ học và hậu quả
• 1.8. Sinh lý bệnh biến chứng trên thần kinh trung ương do đái tháo đường
• 1.9. Đặc điểm và các thể lâm sàng của biến chứng trên thần kinh trung ương do đái tháo đường
• 1.10. Các thuốc điều trị biến chứng trên thần kinh trung ương do đái tháo đường
• 1.11. Tổng quan một số phương pháp định lượng hoạt chất trong dược liệu Tri mẫu
• 1.12. Định lượng Mangiferin bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao theo dược điển Trung Quốc (2020)
• 1.13. Định lượng hoạt chất trong Tri mẫu bằng phương pháp sắc ký lỏng theo dược điển Anh (2018)
• 1.14. Định lượng hoạt chất trong Tri mẫu bằng phương pháp sắc ký lỏng theo dược điển Hong Kong (2005)
• 1.15. Khái quát một số khái niệm được sử dụng. Phương pháp network pharmacology
• 1.16. Phương pháp Docking
• 1.17. Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)
• 1.18. Thẩm định quy trình phân tích
• 2. CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.1. Đối tượng nghiên cứu. Trang thiết bị, dung môi, hóa chất, phần mềm
• 2.2. Trang thiết bị nghiên cứu
• 2.3. Dung môi, hoá chất
• 2.4. Phương pháp nghiên cứu. Dự đoán cơ chế và hoạt chất quan trọng của Tri mẫu trong điều trị DN
• 2.5. Định lượng hợp chất Mangiferin trong Tri mẫu bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)
• 3. CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ
• 3.1. Dự đoán cơ chế và hoạt chất quan trọng của Tri mẫu trong điều trị DN
• 3.2. Sàng lọc các thành phần hoạt chất của cây Tri mẫu và các protein đích liên quan đến biến chứng trên thần kinh trung ương do đái tháo đường
• 3.3. Sử dụng phương pháp docking trong xác định các protein tiềm năng có liên quan đến DN
• 3.4. Xây dựng và phân tích mạng tương tác protein-protein (PPI, Protein-protein interaction network)
• 3.5. Phân tích chức năng GO và con đường sinh hóa KEGG của các đích tiềm năng
• 3.6. Xây dựng và phân tích mạng Hoạt chất – Đích – Con đường sinh hóa (HĐC)
• 3.7. Định lượng hợp chất Mangiferin trong Tri mẫu bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC
• 3.8. Xây dựng phương pháp định lượng
• 3.9. Thẩm định phương pháp định lượng
• 4. CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN
• 4.1. Về phương pháp network pharmacology
• 4.2. Về quy trình định lượng Mangiferin bằng HPLC
• KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT
• TÀI LIỆU THAM KHẢO
• PHỤ LỤC

I. Giới thiệu về mangiferin và cây tri mẫu

Mangiferin là một hợp chất tự nhiên có nhiều tác dụng sinh học, đặc biệt trong việc điều trị các bệnh liên quan đến thần kinh và tiểu đường. Cây tri mẫu (Anemarrhena asphodeloides Bunge) là nguồn cung cấp chính của mangiferin. Cây này được sử dụng trong y học cổ truyền với nhiều công dụng như thanh nhiệt, chống viêm và hỗ trợ điều trị đái tháo đường. Nghiên cứu này nhằm xác định quy trình định lượng mangiferin trong cây tri mẫu bằng phương pháp HPLC, một công nghệ sắc ký lỏng hiệu năng cao, giúp phân tích chính xác hàm lượng hoạt chất trong dược liệu.

1.1. Đặc điểm của mangiferin

Mangiferin là một xanthone, có cấu trúc hóa học đặc trưng và được biết đến với nhiều tác dụng sinh học như chống oxy hóa, kháng viêm và bảo vệ thần kinh. Nghiên cứu cho thấy mangiferin có khả năng cải thiện tình trạng bệnh lý liên quan đến thần kinh, đặc biệt là trong điều trị biến chứng trên thần kinh trung ương do đái tháo đường. Việc định lượng chính xác mangiferin trong cây tri mẫu là cần thiết để đánh giá hiệu quả điều trị của nó.

1.2. Vai trò của cây tri mẫu trong y học

Cây tri mẫu không chỉ chứa mangiferin mà còn nhiều hợp chất khác như saponin, flavonoid và alkaloid, góp phần vào tác dụng dược lý của nó. Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng tri mẫu có tác dụng bảo vệ thần kinh, giảm đau và cải thiện tình trạng bệnh nhân mắc đái tháo đường. Việc nghiên cứu quy trình định lượng mangiferin sẽ giúp tối ưu hóa việc sử dụng cây tri mẫu trong điều trị.

II. Phương pháp HPLC trong định lượng mangiferin

Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) là một kỹ thuật phân tích hiện đại, cho phép tách biệt và định lượng các hợp chất trong mẫu một cách chính xác. HPLC được sử dụng rộng rãi trong ngành dược phẩm để phân tích các hoạt chất trong dược liệu. Quy trình định lượng mangiferin trong cây tri mẫu bằng HPLC bao gồm các bước chuẩn bị mẫu, thiết lập điều kiện sắc ký và phân tích dữ liệu. Việc tối ưu hóa các thông số như áp suất, lưu lượng và nhiệt độ là rất quan trọng để đạt được kết quả chính xác.

2.1. Quy trình chuẩn bị mẫu

Quy trình chuẩn bị mẫu bao gồm việc thu hái, làm sạch và chiết xuất mangiferin từ cây tri mẫu. Các phương pháp chiết xuất như chiết bằng dung môi hữu cơ hoặc nước nóng được áp dụng để thu được dịch chiết chứa mangiferin. Sau đó, dịch chiết này sẽ được lọc và cô đặc trước khi đưa vào phân tích bằng HPLC. Việc chuẩn bị mẫu đúng cách sẽ ảnh hưởng lớn đến độ chính xác của kết quả phân tích.

2.2. Thiết lập điều kiện sắc ký

Thiết lập điều kiện sắc ký là bước quan trọng trong quy trình HPLC. Các thông số như loại cột, dung môi, tốc độ dòng và bước sóng phát hiện cần được tối ưu hóa để đạt được độ phân giải cao nhất cho mangiferin. Việc sử dụng cột sắc ký phù hợp và dung môi thích hợp sẽ giúp tách biệt mangiferin khỏi các hợp chất khác trong mẫu, từ đó cho phép định lượng chính xác hàm lượng mangiferin có trong cây tri mẫu.

III. Kết quả và thảo luận

Kết quả nghiên cứu cho thấy quy trình định lượng mangiferin bằng HPLC đạt được độ chính xác và độ lặp lại cao. Các thông số như giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) được xác định rõ ràng, cho thấy khả năng phát hiện mangiferin trong mẫu cây tri mẫu. Thảo luận về các yếu tố ảnh hưởng đến kết quả phân tích cũng được thực hiện, từ đó đưa ra các khuyến nghị cho các nghiên cứu tiếp theo.

3.1. Đánh giá độ chính xác của phương pháp

Độ chính xác của phương pháp HPLC được đánh giá thông qua các thử nghiệm lặp lại và so sánh với các phương pháp định lượng khác. Kết quả cho thấy phương pháp HPLC có độ chính xác cao, cho phép định lượng mangiferin một cách hiệu quả. Việc sử dụng các tiêu chuẩn hóa học và quy trình thẩm định nghiêm ngặt đã giúp đảm bảo tính chính xác của kết quả.

3.2. Ứng dụng thực tiễn của nghiên cứu

Nghiên cứu quy trình định lượng mangiferin trong cây tri mẫu không chỉ có giá trị trong việc phát triển các sản phẩm dược phẩm mà còn góp phần vào việc bảo tồn và phát triển nguồn dược liệu quý giá này. Kết quả nghiên cứu có thể được áp dụng trong các nghiên cứu lâm sàng và phát triển sản phẩm mới, từ đó nâng cao hiệu quả điều trị cho bệnh nhân mắc đái tháo đường và các bệnh lý liên quan đến thần kinh.