Nghiên cứu và phát triển bộ kit chẩn đoán đồng thời các genotype HPV nguy cơ cao và thấp bằng kỹ thuật realtime PCR

• Tác giả: Ngô Thị Hồng
• Người hướng dẫn: PGS. Nguyễn Thị Vân Anh
• Trường học: Trường Đại Học Khoa Học Tự Nhiên
• Chuyên ngành: Vi sinh vật học
• Đề tài: Nghiên cứu phát triển bộ kit phát hiện đồng thời các kiểu gen HPV nguy cơ gây ung thư bằng kỹ thuật multiplex real time PCR
• Loại tài liệu: Luận văn thạc sĩ
• Năm xuất bản: 2018
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CẢM ƠN
• BẢNG KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT
• 1. CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU VỀ HPV
• 1.1. Tình hình nhiễm HPV trên thế giới và ở Việt Nam
• 1.2. Đặc điểm về hình thái HPV
• 1.3. Đặc điểm về hệ gen HPV
• 1.4. Chức năng của protein HPV
• 1.4.1. Chức năng protein E1
• 1.4.2. Chức năng protein E2
• 1.4.3. Chức năng protein E4
• 1.4.4. Chức năng protein E5
• 3. CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 3.1. Nghiên cứu và phát triển phương pháp phát hiện đồng thời các type HPV nhóm nguy cơ cao phổ biến và 2 nhóm nguy cơ thấp bằng kỹ thuật multiplex real time PCR
• 3.2. Phản ứng PCR khuếch đại các trình tự đích
• 3.3. Nhân dòng trình tự đích tạo chứng dương
• 3.4. Xác định tính đặc hiệu của mồi và đầu dò trong phản ứng real time PCR
• 3.5. Xác định ngưỡng phát hiện của phản ứng và tối ưu nồng độ của chuẩn dương
• 3.6. Xác định độ đặc hiệu của phản ứng
• 3.7. Bộ kit hoàn chỉnh
• 3.8. Thử nghiệm khả năng ứng dụng của kit phát hiện kiểu gen HPV trên mẫu bệnh nhân
• PHỤ LỤC 1: PHIẾU ĐỒNG Ý THAM GIA NGHIÊN CỨU
• PHỤ LỤC 2: DANH MỤC TRÌNH TỰ THAM CHIẾU GENOME HPV TRONG TẠO CƠ SỞ DỮ LIỆU TRÌNH TỰ HPV
• PHỤ LỤC 3: KẾT QUẢ GIẢI TRÌNH TỰ GEN MỘT SỐ TYPE HPV ĐẠI DIỆN ĐƯỢC SỬ DỤNG LÀM ĐỐI CHỨNG DƯƠNG CỦA KIT
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng quan về nghiên cứu phát triển kit chẩn đoán HPV

Nghiên cứu phát triển bộ kit chẩn đoán HPV nguy cơ cao và thấp bằng kỹ thuật realtime PCR đang trở thành một trong những lĩnh vực quan trọng trong y học hiện đại. HPV, hay Human Papillomavirus, là một trong những nguyên nhân chính gây ra ung thư cổ tử cung và nhiều bệnh lý khác. Việc phát triển bộ kit này không chỉ giúp phát hiện sớm các kiểu gen HPV mà còn hỗ trợ trong việc điều trị và theo dõi bệnh nhân.

1.1. Giới thiệu về HPV và tầm quan trọng của việc chẩn đoán

HPV là một loại virus lây truyền qua đường tình dục, có hơn 200 kiểu gen khác nhau. Trong đó, một số kiểu gen được xác định là nguy cơ cao gây ung thư. Việc chẩn đoán chính xác các kiểu gen này là rất cần thiết để có phương pháp điều trị hiệu quả.

1.2. Tình hình nhiễm HPV tại Việt Nam và trên thế giới

Tỷ lệ nhiễm HPV trên toàn cầu ước tính khoảng 11,7%, với các khu vực như Châu Phi và Đông Âu có tỷ lệ cao hơn. Tại Việt Nam, nghiên cứu cho thấy tỷ lệ nhiễm HPV ở phụ nữ có thể lên đến 19,79%, với tỷ lệ nhiễm các kiểu gen nguy cơ cao chiếm ưu thế.

II. Vấn đề và thách thức trong chẩn đoán HPV

Mặc dù có nhiều phương pháp chẩn đoán HPV, nhưng vẫn còn nhiều thách thức trong việc phát hiện chính xác các kiểu gen nguy cơ cao và thấp. Các phương pháp hiện tại thường tốn kém và không hiệu quả trong việc phát hiện đồng thời nhiều kiểu gen.

2.1. Những hạn chế của các phương pháp chẩn đoán hiện tại

Các phương pháp như xét nghiệm ELISA và PCR truyền thống thường không đủ nhạy và đặc hiệu để phát hiện đồng thời nhiều kiểu gen HPV. Điều này dẫn đến việc chẩn đoán không chính xác và tốn kém cho bệnh nhân.

2.2. Nhu cầu cấp thiết về bộ kit chẩn đoán mới

Việc phát triển bộ kit chẩn đoán HPV nguy cơ cao và thấp bằng kỹ thuật realtime PCR là cần thiết để đáp ứng nhu cầu chẩn đoán chính xác và nhanh chóng, giúp cải thiện hiệu quả điều trị.

III. Phương pháp phát triển kit chẩn đoán HPV bằng realtime PCR

Kỹ thuật realtime PCR là một trong những phương pháp tiên tiến nhất hiện nay trong việc phát hiện virus HPV. Phương pháp này cho phép phát hiện đồng thời nhiều kiểu gen HPV trong một mẫu bệnh phẩm.

3.1. Nguyên lý hoạt động của kỹ thuật realtime PCR

Realtime PCR sử dụng các mồi và đầu dò huỳnh quang để phát hiện sự hiện diện của DNA virus trong mẫu bệnh phẩm. Kỹ thuật này cho phép theo dõi quá trình khuếch đại DNA theo thời gian thực, từ đó xác định chính xác số lượng virus có trong mẫu.

3.2. Quy trình phát triển bộ kit chẩn đoán

Quy trình phát triển bộ kit bao gồm việc thiết kế mồi và đầu dò đặc hiệu cho các kiểu gen HPV, tối ưu hóa điều kiện phản ứng PCR và đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu của bộ kit.

IV. Kết quả nghiên cứu và ứng dụng thực tiễn của kit chẩn đoán HPV

Kết quả nghiên cứu cho thấy bộ kit chẩn đoán HPV phát triển có độ nhạy và độ đặc hiệu cao, cho phép phát hiện đồng thời nhiều kiểu gen nguy cơ cao và thấp. Điều này mở ra cơ hội mới trong việc chẩn đoán và điều trị bệnh.

4.1. Đánh giá hiệu quả của bộ kit chẩn đoán

Bộ kit mới phát triển đã được thử nghiệm trên nhiều mẫu bệnh phẩm và cho kết quả chính xác, giúp phát hiện sớm các trường hợp nhiễm HPV nguy cơ cao.

4.2. Ứng dụng trong thực tiễn lâm sàng

Bộ kit chẩn đoán HPV có thể được sử dụng rộng rãi trong các bệnh viện và phòng khám, giúp nâng cao chất lượng chẩn đoán và điều trị cho bệnh nhân.

V. Kết luận và triển vọng tương lai của nghiên cứu HPV

Nghiên cứu phát triển bộ kit chẩn đoán HPV nguy cơ cao và thấp bằng kỹ thuật realtime PCR không chỉ giúp nâng cao khả năng phát hiện virus mà còn mở ra hướng đi mới trong việc phòng ngừa và điều trị ung thư cổ tử cung.

5.1. Tầm quan trọng của việc phát triển công nghệ chẩn đoán mới

Công nghệ chẩn đoán mới sẽ giúp cải thiện khả năng phát hiện sớm các trường hợp nhiễm HPV, từ đó giảm thiểu tỷ lệ mắc ung thư cổ tử cung.

5.2. Hướng nghiên cứu tiếp theo trong lĩnh vực HPV

Các nghiên cứu tiếp theo cần tập trung vào việc cải thiện độ nhạy và độ đặc hiệu của bộ kit, cũng như mở rộng khả năng phát hiện các kiểu gen HPV khác.