Khám Phá Saccharomyces Boulardii Trong Chế Phẩm Probiotic

LỜI CAM ĐOAN

I. PHẦN I: MỞ ĐẦU

I.1. Đặt vấn đề

I.2. Mục tiêu của đề tài

I.3. Yêu cầu của đề tài

II. PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

II.1. Giới thiệu chung về nấm men Saccharomyces boulardii. Lịch sử nghiên cứu Saccharomyces boulardii

II.2. Phân loại

II.3. Đặc điểm về hình thái, kích thước, cấu tạo tế bào

II.4. Cấu trúc hệ gen nấm

II.5. Đặc điểm sinh học của nấm men Saccharomyces boulardii

II.6. Sinh sản ở nấm men

III. PHẦN III: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

III.1. Địa điểm thực hiện

III.2. Phương pháp nghiên cứu

III.3. Phương pháp phân lập và làm thuần nấm men Saccharomyces boulardii từ mẫu nghiên cứu (chế phẩm probiotic)

III.4. Chuẩn bị môi trường

III.5. Chuẩn bị mẫu thử

III.6. Cấy trải trên đĩa thạch

III.7. Phương pháp xác định mật độ và một số đặc tính sinh học của nấm men Saccharomyces boulardii

III.8. Phương pháp định danh Saccharomyces boulardii bằng giải trình tự gen vùng ITS với cặp mồi ITS1 và ITS4

III.9. Tách chiết DNA của nấm

III.10. Giải trình tự gen theo phương pháp Sanger

IV. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

IV.1. Khảo sát nồng độ kháng sinh thích hợp cho môi trường chọn lọc nấm men Saccharomyces boulardii

IV.2. Kết quả 4 mẫu chế phẩm probiotic được nuôi cấy trên môi trường chọn lọc YPDA có bổ sung các nồng độ kháng sinh Chloramphenicol

IV.3. Phân lập chủng nấm Saccharomyces boulardii trong các mẫu men probiotic

IV.3.1. Kết quả phân lập nấm men Saccharomyces boulardii trong mẫu BF

IV.3.2. Kết quả phân lập nấm men Saccharomyces boulardii trong mẫu BM

IV.3.3. Kết quả phân lập nấm men Saccharomyces boulardii trong mẫu BL

IV.3.4. Kết quả phân lập nấm men Saccharomyces boulardii trong mẫu BZ

IV.4. Định danh nấm men phân lập bằng phương pháp giải trình tự vùng ITS

IV.4.1. Tách chiết DNA

IV.4.2. Khuếch đại trình tự vùng ITS bằng phản ứng PCR

IV.4.3. Định danh bằng phân tích kết quả giải trình tự gen vùng ITS

IV.4.3.1. Kết quả giải trình tự gen vùng ITS ở mẫu BF

IV.4.3.2. Kết quả giải trình tự gen vùng ITS ở mẫu BM

IV.4.3.3. Kết quả giải trình tự gen vùng ITS ở mẫu BL

IV.4.3.4. Kết quả giải trình tự gen vùng ITS ở mẫu BZ

IV.5. Xác định nồng độ pha loãng thích hợp để tính mật độ nấm men Saccharomyces boulardii trong 4 mẫu chế phẩm probiotic

IV.5.1. Mật độ nấm men trong mẫu BF với độ pha loãng 10-6 – 10-9

IV.5.2. Mật độ nấm men trong mẫu BM với độ pha loãng 10-3-10-5

IV.5.3. Mật độ nấm men trong mẫu BL ở nồng độ 10-5-10-8

IV.5.4. Mật độ nấm men trong mẫu BZ ở nồng độ 10-2-10-4

V. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ

TÀI LIỆU THAM KHẢO

I. Giới thiệu về Saccharomyces Boulardii

Saccharomyces Boulardii là một loại nấm men probiotic được sử dụng rộng rãi trong các chế phẩm probiotic nhờ khả năng hỗ trợ hệ tiêu hóa và tăng cường sức khỏe đường ruột. Nghiên cứu này tập trung vào việc phân lập và định danh chủng nấm men này từ các sản phẩm probiotic thương mại. Saccharomyces Boulardii được phát hiện bởi Henri Boulard vào những năm 1920 và từ đó đã trở thành một thành phần quan trọng trong các thực phẩm chức năng hỗ trợ tiêu hóa.

1.1 Lịch sử nghiên cứu

Saccharomyces Boulardii được phát hiện khi Henri Boulard quan sát người dân Đông Nam Á sử dụng trà từ vỏ trái cây để điều trị bệnh tả. Từ đó, ông đã phân lập được chủng nấm men này và đặt tên theo mình. Các nghiên cứu sau này đã chứng minh khả năng điều trị tiêu chảy và hỗ trợ miễn dịch của Saccharomyces Boulardii.

1.2 Đặc điểm sinh học

Saccharomyces Boulardii có khả năng tồn tại trong môi trường khắc nghiệt như pH thấp và nhiệt độ cao. Đây là một vi khuẩn có lợi giúp cân bằng hệ vi sinh đường ruột. Ngoài ra, nó còn có khả năng ức chế các cytokine gây viêm, mang lại lợi ích cho sức khỏe đường ruột.

II. Phương pháp nghiên cứu

Nghiên cứu này sử dụng phương pháp phân lập và định danh Saccharomyces Boulardii từ các chế phẩm probiotic thông qua giải trình tự gen vùng ITS. Các mẫu được nuôi cấy trên môi trường YPDA bổ sung kháng sinh Chloramphenicol để đảm bảo độ chính xác trong việc phân lập chủng nấm men này.

2.1 Phân lập nấm men

Các mẫu chế phẩm probiotic được nuôi cấy trên môi trường YPDA với nồng độ kháng sinh Chloramphenicol khác nhau. Quá trình này giúp phân lập Saccharomyces Boulardii từ các mẫu thử, đảm bảo độ tinh khiết của chủng nấm men.

2.2 Định danh bằng giải trình tự gen

Sau khi phân lập, Saccharomyces Boulardii được định danh bằng phương pháp giải trình tự gen vùng ITS. Kết quả giải trình tự được so sánh với cơ sở dữ liệu NCBI để xác nhận chính xác loài nấm men.

III. Kết quả và ứng dụng

Nghiên cứu đã thành công trong việc phân lập và định danh Saccharomyces Boulardii từ các chế phẩm probiotic. Kết quả cho thấy mật độ nấm men trong các mẫu tương đồng với thông số của nhà sản xuất, chứng minh tính hiệu quả của phương pháp nghiên cứu.

3.1 Kết quả phân lập

Các mẫu BF, BM, BL, BZ đều chứa Saccharomyces Boulardii với mật độ phù hợp. Kết quả này khẳng định sự hiện diện của vi khuẩn có lợi trong các sản phẩm probiotic thương mại.

3.2 Ứng dụng thực tiễn

Nghiên cứu này cung cấp cơ sở khoa học cho việc kiểm định chất lượng các chế phẩm probiotic. Saccharomyces Boulardii không chỉ hỗ trợ hệ tiêu hóa mà còn có tiềm năng trong điều trị tiêu chảy và hỗ trợ miễn dịch.

IV. Kết luận và kiến nghị

Nghiên cứu đã chứng minh hiệu quả của việc phân lập và định danh Saccharomyces Boulardii từ các chế phẩm probiotic. Kết quả này mở ra hướng nghiên cứu mới trong việc ứng dụng men vi sinh để cải thiện sức khỏe đường ruột và hỗ trợ điều trị các bệnh liên quan.

4.1 Kết luận

Saccharomyces Boulardii là một vi khuẩn có lợi quan trọng trong các chế phẩm probiotic. Nghiên cứu này đã thành công trong việc phân lập và định danh chủng nấm men này, đóng góp vào việc kiểm soát chất lượng các sản phẩm thương mại.

4.2 Kiến nghị

Cần tiếp tục nghiên cứu sâu hơn về cơ chế hoạt động và tác dụng phụ của Saccharomyces Boulardii để tối ưu hóa hiệu quả của các sản phẩm probiotic trong tương lai.

Phân Lập và Định Danh Saccharomyces Boulardii Trong Các Chế Phẩm Probiotic