I. Nguyên liệu và địa điểm nghiên cứu
Chương 2 của luận văn tập trung vào nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu để tạo chế phẩm Lactobacillus acidophilus. Nguyên liệu chính được sử dụng là sữa gày và giống vi khuẩn lactic Lactobacillus acidophilus từ chế phẩm ANTIBIO. Địa điểm nghiên cứu được thực hiện tại hai phòng thí nghiệm: Phòng thí nghiệm Công nghệ Thực phẩm, Trường Đại học Bách Khoa Tp.HCM và Phòng thí nghiệm vi sinh, Trường Cao đẳng Kinh tế – Công nghệ Tp.HCM. Ngoài ra, luận văn cũng liệt kê chi tiết các dụng cụ và thiết bị cần thiết cho quá trình nghiên cứu, bao gồm các dụng cụ thí nghiệm cơ bản như ống nghiệm, que cấy, micropipet, nồi hấp autoclave, máy đo pH, máy đồng hóa, máy sấy phun, máy đo độ hấp thụ, kính hiển vi, cân điện tử, cũng như các môi trường và hóa chất cần thiết như môi trường MRS broth, MRS agar, huyết thanh sữa, carbonate agar, môi trường thử khả năng lên men carbohydrate, và thuốc thử Uphenmen. Việc liệt kê đầy đủ này cho thấy sự chuẩn bị kỹ lưỡng về mặt vật chất và kỹ thuật cho quá trình nghiên cứu.
II. Phương pháp phân lập chọn lọc và khảo sát đặc điểm của L
Luận văn trình bày chi tiết quy trình phân lập và chọn lọc giống vi khuẩn L. acidophilus thuần chủng. Phương pháp này dựa trên sự pha loãng và kết hợp với nuôi cấy trên môi trường dinh dưỡng chọn lọc. Cụ thể, mẫu được pha loãng trong dung dịch nước muối sinh lý ở các nồng độ khác nhau, sau đó được cấy trải trên môi trường MRS agar và ủ ở 37°C trong 24 giờ. Các khuẩn lạc mọc rời rạc được chọn lọc và cấy ria trên môi trường MRS agar, quá trình này được lặp lại để đảm bảo tính thuần chủng. Đặc điểm hình thái của chủng L. acidophilus được xác định bằng phương pháp nhuộm Gram. Nguyên tắc của phương pháp này dựa trên khả năng bắt màu của tế bào chết và màng tế bào với thuốc nhuộm tím kết tinh và iod. Việc nhuộm Gram cho phép phân biệt vi khuẩn Gram dương và Gram âm dựa trên sự khác biệt về cấu trúc thành tế bào. Ngoài ra, luận văn cũng mô tả các thử nghiệm để khảo sát khả năng sinh acid lactic, khả năng lên men các nguồn carbonhydrate, quan hệ với oxy, ảnh hưởng của pH và nhiệt độ đến sự phát triển của L. acidophilus. Các thử nghiệm này giúp đánh giá các đặc tính sinh lý và sinh hóa quan trọng của chủng vi khuẩn.
III. Phương pháp xác định đường cong sinh trưởng và tối ưu hóa môi trường
Phương pháp xác định đường cong sinh trưởng của L. acidophilus được thực hiện bằng cách đo độ đục (OD). Nguyên tắc của phương pháp này dựa trên mối quan hệ giữa mật độ tế bào và độ đục của môi trường nuôi cấy. Việc xây dựng đường cong sinh trưởng giúp theo dõi sự phát triển của vi khuẩn theo thời gian. Luận văn cũng trình bày phương pháp tối ưu hóa môi trường huyết thanh sữa bằng phương pháp quy hoạch thực nghiệm. Ba yếu tố được khảo sát là hàm lượng peptone, yeast extract và K2HPO4. Mục tiêu của quy hoạch thực nghiệm là tìm ra điều kiện tối ưu để L. acidophilus phát triển tốt nhất, từ đó nâng cao hiệu quả sản xuất chế phẩm. Việc sử dụng phương pháp quy hoạch thực nghiệm cho thấy cách tiếp cận khoa học và bài bản trong việc tối ưu hóa điều kiện nuôi cấy.
IV. Sản xuất chế phẩm Lactobacillus acidophilus bằng phương pháp sấy phun
Chương này mô tả quy trình sản xuất chế phẩm L. acidophilus bằng phương pháp sấy phun. Sấy phun là phương pháp chuyển sản phẩm từ dạng lỏng sang dạng bột. Vi khuẩn được nuôi cấy trong môi trường huyết thanh sữa tối ưu, sau đó được ly tâm để thu sinh khối. Sinh khối này được trộn với dịch nhũ hóa, có tác dụng bảo vệ vi khuẩn khỏi nhiệt độ cao trong quá trình sấy phun. Hỗn hợp sau đó được đồng hóa và đưa vào máy sấy phun. Luận văn cũng đề cập đến việc xác định độ ẩm của mẫu sấy phun và đánh giá khả năng sống sót của vi khuẩn sau quá trình sấy. Việc sử dụng phương pháp sấy phun cho thấy sự quan tâm đến việc bảo quản và duy trì hoạt tính của vi khuẩn trong chế phẩm cuối cùng.
