Tóm tắt 3 luận án tiến sĩ tiếng Anh của NCS Nguyễn Khắc Tấn

Luận án tiến sĩ phân tích 3 tóm tắt luận án tiến sĩ tiếng anh ncs nguyễn khắc tấn, xây dựng cơ sở lý luận, kiểm chứng thực nghiệm, đóng góp tri thức mới cho ngành.

• Tác giả: Nguyễn Khắc Tấn
• Người hướng dẫn: Pts. Lưu Thị Bình
• Trường học: Thai Nguyen University
• Chuyên ngành: Internal Medicine
• Đề tài: Research On The Expression And Relationship Of Immune Markers Of Cancer Stem Cells, HER2 In Gastric Adenocarcinoma
• Loại tài liệu: thesis
• Năm xuất bản: 2022
• Địa điểm: Thai Nguyen

Mục lục chi tiết

• ABSTRACT OF MEDICAL PHD THESIS
• 1. CHAPTER I: OVERVIEW
• 1.1. The role of the HER2 in gastric cancer
• 1.1.1. Role of HER2 in gastric cancer prognosis
• 1.1.2. Clinical application of HER2 markers in gastric cancer
• 1.2. The role of CD44 in cancer
• 1.2.1. The role of CD44 in tumorigenesis
• 1.2.2. CD44 and drug resistance of cancer cells
• 1.3. Role of ALDH in gastric cancer
• 1.3.1. ALDH is overexpressed in some cancers
• 1.3.2. ALDH in chemotherapy resistance
• 2. CHAPTER II: SUBJECTS AND METHODS
• 2.1. Studying subjects
• 2.2. Selection criteria for study patients
• 2.3. Exclusive criteria
• 2.4. Research methodology
• 2.5. The main criteria and classifications in the research
• 2.6. The method of data collection
• 2.7. Clinical examination and subclinical indications
• 2.8. Gastroendoscopy with biopsy
• 2.9. Tumor removal surgery and how to handle specimens
• 2.10. Methods of histopathological analysis
• 2.11. Immunohistochemistry and staining methods
• 2.12. Data analysis
• 3. CHAPTER III: RESEARCH RESULTS
• 3.1. Some clinical, endoscopic, and histopathological features of gastric adenocarcinoma
• 3.2. Expression of HER2, CD44, and ALDH in gastric adenocarcinoma
• 3.3. The relationship between HER2, CD44 and ALDH and some factors
• 3.3.1. The relationship between HER2 and some factors
• 3.3.2. Simultaneous relationship between HER2, CD44, ALDH and some factors
• 4. CHAPTER IV: DISCUSSION

Tóm tắt

I. Giới thiệu chung

Luận án tiến sĩ của NCS Nguyễn Khắc Tấn tập trung vào việc nghiên cứu mối quan hệ và biểu hiện của các dấu ấn miễn dịch của tế bào gốc ung thư, HER2 trong ung thư biểu mô dạ dày. Ung thư dạ dày là một trong những bệnh ung thư phổ biến nhất và là nguyên nhân hàng đầu gây tử vong trên toàn thế giới. Luận án nhấn mạnh tầm quan trọng của việc đánh giá biểu hiện HER2 như một tiêu chí quan trọng trong việc lựa chọn phương pháp hóa trị cho bệnh nhân. Bên cạnh đó, nghiên cứu cũng chỉ ra rằng tỷ lệ dương tính với HER2 ở bệnh nhân ung thư dạ dày khá thấp, do đó cần tìm hiểu thêm về các dấu ấn khác ngoài HER2 để nâng cao hiệu quả điều trị. Luận án đã chỉ ra rằng, việc nghiên cứu biểu hiện của HER2 và các tế bào gốc ung thư dạ dày như CD44, ALDH mở ra triển vọng lớn trong việc điều trị và dự đoán kết quả điều trị cho bệnh nhân.

II. Đóng góp mới của luận án

Luận án này là nghiên cứu đầu tiên tại Việt Nam về sự biểu hiện đồng thời của HER2 và các tế bào gốc ung thư dạ dày như CD44 và ALDH. Kết quả nghiên cứu cho thấy tỷ lệ biểu hiện của từng dấu ấn đơn lẻ là 29%, trong khi tỷ lệ biểu hiện đồng thời của hai dấu ấn là 47%, và tỷ lệ biểu hiện đồng thời của cả ba dấu ấn HER2, CD44 và ALDH là 10%. Nghiên cứu cũng chỉ ra rằng biểu hiện của HER2 có sự khác biệt theo các triệu chứng giảm cân, đặc điểm mô học theo Lauren và theo WHO. Điều này cho thấy rằng việc hiểu rõ hơn về mối quan hệ giữa các dấu ấn này có thể giúp cải thiện kết quả điều trị cho bệnh nhân mắc ung thư dạ dày.

III. Phương pháp nghiên cứu

Luận án sử dụng phương pháp nghiên cứu mô tả cắt ngang với 107 bệnh nhân mắc ung thư biểu mô dạ dày được xác nhận chẩn đoán. Tiêu chí lựa chọn bệnh nhân bao gồm các trường hợp được chẩn đoán theo kết quả mô học và đồng ý tham gia nghiên cứu. Các dấu ấn HER2, CD44 và ALDH được đánh giá qua phương pháp nhuộm miễn dịch huỳnh quang. Phương pháp thu thập dữ liệu bao gồm khám lâm sàng, xét nghiệm cận lâm sàng và nội soi dạ dày. Phân tích dữ liệu được thực hiện bằng phần mềm SPSS 22.0. Phương pháp này đảm bảo tính khách quan và chính xác trong việc xác định mối quan hệ giữa các dấu ấn miễn dịch và các đặc điểm lâm sàng, nội soi và mô học của ung thư dạ dày.

IV. Kết quả nghiên cứu

Kết quả nghiên cứu chỉ ra rằng tỷ lệ ung thư dạ dày ở nam giới thường gặp nhất trong nhóm tuổi 50-59. Triệu chứng đau thượng vị là lý do nhập viện phổ biến nhất, chiếm 92%. Kết quả cũng cho thấy tỷ lệ biểu hiện HER2, CD44 và ALDH trong bệnh nhân ung thư dạ dày có sự khác biệt rõ rệt giữa các nhóm triệu chứng và đặc điểm mô học. Cụ thể, bệnh nhân có triệu chứng nôn ra máu hoặc phân đen có tỷ lệ biểu hiện đồng thời cả ba dấu ấn cao nhất. Nghiên cứu cũng cho thấy rằng biểu hiện của các dấu ấn này có thể liên quan đến giai đoạn bệnh và các yếu tố lâm sàng khác, từ đó cung cấp thông tin quan trọng cho việc điều trị và theo dõi bệnh nhân.

V. Thảo luận và kết luận

Luận án đã mở ra một hướng nghiên cứu mới trong việc đánh giá vai trò của các dấu ấn miễn dịch trong ung thư dạ dày. Việc nghiên cứu đồng thời các dấu ấn HER2, CD44 và ALDH không chỉ giúp hiểu rõ hơn về cơ chế bệnh sinh mà còn có thể cải thiện chiến lược điều trị cho bệnh nhân. Kết quả nghiên cứu có thể được áp dụng trong thực tiễn lâm sàng để nâng cao hiệu quả điều trị và dự đoán kết quả cho bệnh nhân mắc ung thư dạ dày. Luận án khuyến nghị cần có các nghiên cứu tiếp theo để xác định rõ hơn vai trò của các dấu ấn này trong điều trị và tiên lượng bệnh.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Ung thư dạ dày hiện là một trong những bệnh lý ác tính đường tiêu hóa phổ biến hàng đầu và đứng thứ tư về tỷ lệ tử vong do ung thư trên toàn cầu. Trong đó, ung thư biểu mô tuyến dạ dày chiếm tỷ lệ áp đảo với tiên lượng sống sau 5 năm còn rất thấp, đặc biệt ở nhóm bệnh nhân tiến triển tại chỗ hoặc đã có di căn xa. Trong thực hành ung bướu hiện đại, việc xác định mức độ bộc lộ thụ thể HER2 là tiêu chuẩn vàng để chỉ định liệu pháp nhắm trúng đích kết hợp hóa trị. Tuy nhiên, các thử nghiệm lâm sàng lớn trên thế giới như nghiên cứu ToGA trên 3.665 bệnh nhân chỉ ghi nhận tỷ lệ HER2 dương tính khoảng 22%, và một phân tích gộp trên 11.337 bệnh nhân ghi nhận tỷ lệ trung bình 18%.

Khoảng trống điều trị đặt ra yêu cầu cấp thiết phải tìm kiếm và đánh giá đồng thời các dấu ấn sinh học mới, tiêu biểu là các dấu ấn miễn dịch của tế bào gốc ung thư như CD44 và ALDH. Quần thể tế bào gốc ung thư này sở hữu khả năng tự làm mới, thúc đẩy di căn và đề kháng mạnh mẽ với các phác đồ hóa trị thông thường. Tại Việt Nam, các công bố toàn diện về sự đồng bộc lộ của bộ ba dấu ấn HER2, CD44 và ALDH trên cùng một nhóm bệnh nhân còn rất hạn chế do chi phí kỹ thuật hóa mô miễn dịch còn cao.

Nghiên cứu này được tiến hành trên 107 bệnh nhân ung thư biểu mô tuyến dạ dày được phẫu thuật cắt dạ dày triệt căn tại Bệnh viện K từ tháng 7/2016 đến tháng 7/2020. Mục tiêu trọng tâm là đánh giá tỷ lệ bộc lộ các dấu ấn CD44, ALDH, HER2 và phân tích mối liên quan giữa các kiểu hình miễn dịch này với đặc điểm lâm sàng, hình thái nội soi và phân loại mô bệnh học. Kết quả nghiên cứu mang lại ý nghĩa then chốt giúp xây dựng bản đồ dịch tễ học phân tử, tối ưu hóa phân tầng nguy cơ và định hướng phác đồ điều trị cá thể hóa cho người bệnh.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu được xây dựng dựa trên sự tích hợp của thuyết tế bào gốc ung thư và cơ chế truyền tín hiệu qua thụ thể màng tế bào trong sinh bệnh học khối u đường tiêu hóa. Khung lý thuyết tập trung vào ba khái niệm và trục phân tử chủ đạo:

Thứ nhất, thuyết tế bào gốc ung thư và dấu ấn CD44: CD44 là glycoprotein xuyên màng đóng vai trò thụ thể bề mặt chính, tham gia hoạt hóa các chuỗi tín hiệu nội bào thúc đẩy quá trình chuyển tiếp biểu mô - trung mô. Khi nồng độ CD44 tăng cao, biểu hiện của E-cadherin bị ức chế, đồng thời gia tăng N-cadherin, vimentin và fibronectin, phá vỡ phức hợp màng E-cadherin-beta-catenin, từ đó kích hoạt khả năng xâm lấn, di chuyển tế bào và tạo lập kháng tính hóa chất.

Thứ hai, vai trò giải độc và bảo vệ của enzym ALDH: Aldehyde Dehydrogenase là họ enzym nội bào chịu trách nhiệm khử độc tố aldehyde nội sinh và ngoại sinh. Các đồng phân ALDH1A1 và ALDH3A1 có khả năng chuyển hóa các tác nhân alkyl hóa như cyclophosphamide thành dạng bất hoạt để bài tiết, giúp quần thể tế bào gốc khối u trốn thoát khỏi tác động gây độc của thuốc hóa trị và tia xạ.

Thứ ba, thụ thể HER2: Thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì người 2 là protein xuyên màng có hoạt tính tyrosine kinase. Khi HER2 bị khuếch đại gen hoặc bộc lộ quá mức, các con đường tăng sinh tế bào bị kích hoạt liên tục, liên quan mật thiết đến mức độ ác tính và tiên lượng xấu của ung thư biểu mô tuyến dạ dày.

Phương pháp nghiên cứu

Nghiên cứu sử dụng thiết kế mô tả cắt ngang với cỡ mẫu gồm 107 bệnh nhân ung thư biểu mô tuyến dạ dày được phẫu thuật cắt bỏ khối u tại Bệnh viện K (cơ sở Tân Triều và cơ sở Quán Sứ) trong thời gian từ tháng 7/2016 đến tháng 7/2020. Phương pháp chọn mẫu thuận tiện có chủ đích được áp dụng dựa trên tiêu chuẩn lựa chọn nghiêm ngặt: bệnh nhân được chẩn đoán mô bệnh học xác định ung thư biểu mô tuyến dạ dày theo tiêu chuẩn ESMO 2016 bằng phương pháp nhuộm Hematoxylin - Eosin, có mẫu bệnh phẩm đúc khối paraffin đạt chuẩn và đồng thuận tham gia nghiên cứu. Tiêu chuẩn loại trừ bao gồm các trường hợp ung thư di căn từ cơ quan khác hoặc đã tiếp nhận hóa xạ trị trước phẫu thuật.

Về quy trình phân tích, toàn bộ các lát cắt mô bệnh học và kỹ thuật nhuộm hóa mô miễn dịch được tiến hành tại Phòng thí nghiệm Inserm U1053 trực thuộc Viện Nghiên cứu Y học Quốc gia Pháp tại Đại học Bordeaux. Quy trình nhuộm sử dụng lát cắt mô dày 3 đến 4 micromet, bộc lộ kháng nguyên ở nhiệt độ 96 độ C trong đệm citrate pH 6, ủ kháng thể đặc hiệu và phức hợp Avidin-Biotin, sau đó hiện màu bằng dung dịch Diamino Benzidine. Kết quả được đọc mù độc lập bởi chuyên gia giải phẫu bệnh dưới kính hiển vi quang học độ phóng đại 100x đến 400x. Mức độ bộc lộ HER2 được phân cấp theo thang điểm 0, 1+, 2+ và 3+, trong đó điểm 2+ và 3+ được xác định là dương tính. CD44 và ALDH được phân định theo trạng thái âm tính hoặc dương tính. Dữ liệu được xử lý và phân tích bằng phần mềm thống kê y học SPSS 22.0 với các thuật toán kiểm định Chi-square và Fisher's exact test, lấy ngưỡng ý nghĩa thống kê p < 0,05.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

Khảo sát trên 107 bệnh nhân ung thư biểu mô tuyến dạ dày đã mang lại bốn nhóm phát hiện cốt lõi:

Thứ nhất, đặc điểm nhân khẩu học và lâm sàng: Bệnh nhân nam chiếm 67,3% (72/107) trong khi nữ chiếm 32,7% (35/107), với tỷ lệ nam trên nữ xấp xỉ 2 trên 1, độ tuổi phổ biến nhất là 50 đến 59 tuổi. Triệu chứng nhập viện hay gặp nhất là đau vùng thượng vị chiếm 92,4%, tiếp theo là sút cân chiếm 26,2% và nôn máu hoặc đi ngoài phân đen chiếm 10,3%. Vị trí u xuất hiện nhiều nhất ở vùng hang vị với 43,9% và bờ cong nhỏ với 32,7%. Về phân loại mô bệnh học, thể ruột theo Lauren chiếm 72,1%, thể lan tỏa chiếm 27,9%; theo phân loại WHO, ung thư tuyến ống chiếm tỷ lệ cao nhất với 56,1%, ung thư tế bào nhẫn chiếm 26,2%, ung thư tuyến nhầy chiếm 11,2% và ung thư tuyến nhú chiếm 6,5%.

Thứ hai, tỷ lệ bộc lộ độc lập của từng dấu ấn: Tỷ lệ dương tính với HER2 đạt 26,2% (28/107 bệnh nhân, với 17,8% bộc lộ mức 1+). Tỷ lệ dương tính của dấu ấn tế bào gốc CD44 đạt mức cao nhất với 67,3% (72/107 bệnh nhân). Tỷ lệ dương tính của enzym ALDH đạt 62,6% (67/107 bệnh nhân).

Thứ ba, phân bố đồng bộc lộ các dấu ấn: Tỷ lệ bệnh nhân chỉ bộc lộ đơn lẻ một dấu ấn chiếm 29,9% (32/107). Tỷ lệ đồng bộc lộ hai dấu ấn chiếm tỷ trọng lớn nhất với 47,7% (51/107 bệnh nhân), trong đó cặp đôi tế bào gốc CD44 và ALDH chiếm ưu thế tuyệt đối với 33,6% (36/107), cặp HER2 và ALDH chiếm 8,4%, cặp HER2 và CD44 chiếm 5,6%. Tỷ lệ đồng bộc lộ đồng thời cả ba dấu ấn HER2, CD44 và ALDH đạt 10,3% (11/107 bệnh nhân), trong khi nhóm không bộc lộ dấu ấn nào chiếm 12,1% (13/107).

Thứ tư, các mối liên quan có ý nghĩa thống kê: Trạng thái bộc lộ HER2 liên quan chặt chẽ với phân loại Lauren (thể ruột đạt tỷ lệ dương tính 89,3% so với thể lan tỏa chỉ đạt 10,7%, p = 0,02) và phân loại WHO (thể tuyến ống đạt 78,6% so với thể tế bào nhẫn chỉ đạt 7,1%, p = 0,02). Sự đồng bộc lộ của cả ba dấu ấn HER2, CD44 và ALDH có sự khác biệt rõ nét ở nhóm bệnh nhân có nôn máu hoặc phân đen (18,2%, p = 0,03), thể ruột theo Lauren (14,1% so với 0% ở thể lan tỏa, p = 0,001) và thể tuyến nhầy theo WHO (16,7%, p = 0,03).

Thảo luận kết quả

Tỷ lệ HER2 dương tính 26,2% trong nghiên cứu này tương thích cao với khoảng ghi nhận 18% đến 38% của y văn thế giới và cao hơn mức 22% trong thử nghiệm quốc tế ToGA. Sự biểu hiện vượt trội của HER2 ở thể ruột (89,3%) và thể tuyến ống (78,6%) lý giải vì sao nhóm bệnh nhân này đáp ứng tốt hơn với liệu pháp kháng thể đơn dòng trastuzumab. Ngược lại, thể lan tỏa và thể tế bào nhẫn có tỷ lệ HER2 dương tính rất thấp nhưng lại mang độ ác tính cao, biểu hiện xâm lấn sớm niêm mạc dạ dày.

Đối với dấu ấn tế bào gốc ung thư, tỷ lệ CD44 dương tính 67,3% hoàn toàn tương đồng với các nghiên cứu mô học của Ghaffarzadehgan (65%) và Wakamatsu (62%). Mức độ bộc lộ ALDH đạt 62,6%, trong đó ở nhóm bệnh nhân tiến triển giai đoạn III và IV tỷ lệ này lên tới 55,2%. Hiện tượng này phản ánh vai trò của ALDH trong việc bảo vệ khối u khỏi tác động của hóa trị liệu và thúc đẩy di căn hạch lympho.

Khi thảo luận về cấu trúc phân bố, các dữ liệu phức hợp này có thể được mô tả trực quan và hiệu quả thông qua biểu đồ cột chồng nhiều thành phần kết hợp bảng phân tích chéo đa biến. Biểu đồ cột chồng giúp làm nổi bật tỷ lệ đồng bộc lộ bộ ba dấu ấn tăng vọt từ 9,1% ở giai đoạn I lên mức 30,0% ở giai đoạn IV, trong khi bảng đối sánh ma trận mô bệnh học làm sáng tỏ sự tương quan giữa các thể mô học biệt hóa kém với kiểu hình miễn dịch kháng thuốc. Sự hiện diện đồng thời của CD44 và ALDH ở 33,6% trường hợp giải thích cơ chế sinh u mạnh mẽ và khả năng kháng các thuốc 5-FU hay Doxorubicin trên lâm sàng.

Đề xuất và khuyến nghị

Dựa trên các bằng chứng thực nghiệm thu được, bốn khuyến nghị hành động cụ thể được đề xuất nhằm nâng cao hiệu quả chẩn đoán và điều trị:

Thứ nhất, thiết lập quy trình xét nghiệm hóa mô miễn dịch đồng thời bộ ba dấu ấn HER2, CD44 và ALDH: Ban Giám đốc và Hội đồng Khoa học tại Bệnh viện K cùng các bệnh viện ung bướu trung ương cần phê duyệt đưa gói xét nghiệm ba marker vào danh mục chẩn đoán mô bệnh học thường quy sau phẫu thuật. Mục tiêu đạt tỷ lệ sàng lọc 100% bệnh nhân ung thư dạ dày thể ruột và thể tuyến nhầy trong giai đoạn 2026-2027 nhằm phân loại chính xác phân nhóm sinh học phân tử.

Thứ hai, xây dựng và thử nghiệm phác đồ đa đích kết hợp thuốc chống thụ thể HER2 và thuốc ức chế tế bào gốc ung thư: Bộ Y tế cùng Hội Ung thư Việt Nam chủ trì thiết kế các nghiên cứu can thiệp lâm sàng giai đoạn II, phối hợp kháng thể kháng HER2 với các tác nhân nhắm vào con đường chuyển hóa ALDH và CD44. Đích đến là cải thiện thời gian sống thêm không tiến triển (PFS) thêm 15% đến 20% cho nhóm bệnh nhân giai đoạn muộn trước năm 2028.

Thứ ba, chuẩn hóa kỹ thuật xử lý mô và nhuộm hóa mô miễn dịch theo tiêu chuẩn quốc tế: Các khoa Giải phẫu bệnh trên toàn quốc cần đồng bộ hóa quy trình cố định mô bằng đệm Formol 20% trung tính và ủ kháng thể theo chuẩn của Viện Inserm U1053 (Cộng hòa Pháp). Chỉ tiêu đặt ra là nâng độ nhạy và độ đặc hiệu của kỹ thuật nhuộm đạt trên 95% vào quý IV năm 2027.

Thứ tư, mở rộng nghiên cứu thuần tập đa trung tâm theo dõi dọc: Các trường đại học y dược phối hợp cùng các viện nghiên cứu triển khai đề tài cấp quốc gia theo dõi thời gian sống thêm toàn bộ (OS) trên cỡ mẫu từ 500 đến 1.000 bệnh nhân trong vòng 5 năm (2026-2030), nhằm hoàn thiện mô hình tiên lượng sinh học chính xác cho người bệnh Việt Nam.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

Nội dung và dữ liệu thực chứng của công trình mang lại giá trị thiết thực cho bốn nhóm đối tượng chuyên môn:

Thứ nhất, bác sĩ chuyên khoa Ung bướu và Phẫu thuật tiêu hóa: Tài liệu cung cấp cơ sở dữ liệu về tỷ lệ HER2 dương tính (26,2%) và các kiểu hình đồng bộc lộ tế bào gốc để tối ưu hóa phác đồ hóa trị bổ trợ, lựa chọn chính xác bệnh nhân phù hợp cho các liệu pháp điều trị trúng đích thế hệ mới.

Thứ hai, bác sĩ và kỹ thuật viên Giải phẫu bệnh - Hóa mô miễn dịch: Bản luận văn chi tiết hóa quy trình kỹ thuật nhuộm IHC 18 bước đạt chuẩn quốc tế từ Viện Inserm U1053 Pháp, bao gồm cách thức xử lý đệm, nhiệt độ ủ kháng thể và tiêu chí chấm điểm bộc lộ từ 0 đến 3+, làm cẩm nang chuẩn hóa thao tác phòng lab.

Thứ ba, học viên sau đại học, nghiên cứu sinh và giảng viên y dược: Công trình là nguồn tham khảo mẫu mực về phương pháp luận nghiên cứu dịch tễ học mô tả cắt ngang, cách thức vận dụng 42 bảng số liệu, 4 biểu đồ và xử lý thống kê nâng cao trên phần mềm SPSS 22.0, cùng hệ thống 139 tài liệu tham khảo chuyên ngành cập nhật.

Thứ tư, nhà quản trị y tế và cơ quan bảo hiểm y tế: Cung cấp bằng chứng dịch tễ và hiệu quả lâm sàng để xây dựng định mức kỹ thuật, tính toán chi phí - hiệu quả và đề xuất đưa các xét nghiệm dấu ấn sinh học phân tử vào danh mục thanh toán bảo hiểm y tế.

Câu hỏi thường gặp

Tỷ lệ dương tính với thụ thể HER2 trong ung thư biểu mô tuyến dạ dày tại Việt Nam là bao nhiêu? Nghiên cứu trên 107 bệnh nhân tại Bệnh viện K ghi nhận tỷ lệ HER2 dương tính đạt 26,2% (với 17,8% ở mức 1+, các mức 2+ và 3+ chiếm 26,2%). Tỷ lệ này tương đồng với các công bố quốc tế dao động từ 18% đến 38%, đồng thời cho thấy HER2 bộc lộ áp đảo ở thể ruột (89,3%) và thể tuyến ống (78,6%).

Dấu ấn CD44 và ALDH đóng vai trò sinh học gì trong sự tiến triển của khối u dạ dày? CD44 và ALDH là các dấu ấn miễn dịch đặc trưng của tế bào gốc ung thư dạ dày. CD44 (dương tính 67,3%) tham gia ức chế E-cadherin để thúc đẩy chuyển tiếp biểu mô - trung mô giúp tế bào xâm lấn mô xung quanh. Trong khi đó, ALDH (dương tính 62,6%) là enzym giải độc giúp khối u kháng lại các tác nhân hóa trị liệu như 5-FU hoặc Cisplatin.

Kiểu hình đồng bộc lộ cả ba dấu ấn HER2, CD44 và ALDH xuất hiện nhiều nhất ở nhóm bệnh nhân nào? Đồng bộc lộ cả ba marker chiếm 10,3% toàn bộ mẫu nghiên cứu. Kiểu hình này xuất hiện với tỷ lệ cao vượt trội ở những bệnh nhân có triệu chứng xuất huyết tiêu hóa nôn máu hoặc phân đen (18,2%), ung thư thể tuyến nhầy theo phân loại WHO (16,7%) và nhóm bệnh nhân có khối u giai đoạn tiến triển muộn IV (30,0%).

Quy trình hóa mô miễn dịch trong luận văn được thực hiện theo tiêu chuẩn nào? Toàn bộ kỹ thuật nhuộm hóa mô miễn dịch được chuẩn hóa tại Phòng thí nghiệm Inserm U1053 thuộc Viện Nghiên cứu Y học Quốc gia Pháp tại Bordeaux. Quy trình sử dụng các lát cắt paraffin 3 đến 4 micromet, bộc lộ kháng nguyên tại 96 độ C trong đệm citrate pH 6 và khuếch đại tín hiệu bằng phức hợp Avidin-Biotin, đảm bảo độ đặc hiệu và độ lặp lại rất cao.

Ý nghĩa then chốt của việc đánh giá đồng thời các dấu ấn sinh học này trong thực tế điều trị là gì? Phát hiện 47,7% bệnh nhân đồng bộc lộ hai marker và 10,3% đồng bộc lộ cả ba marker chứng minh ung thư dạ dày có tính dị sản cao. Đánh giá đồng bộ giúp thầy thuốc không chỉ chỉ định kháng thể kháng HER2 mà còn chủ động dự phòng nguy cơ kháng hóa chất và tái phát di căn do các tế bào gốc ung thư mang CD44 và ALDH gây ra.

Kết luận

Những đóng góp chính và định hướng phát triển từ công trình nghiên cứu bao gồm:

• Xác lập tỷ lệ dương tính của HER2 đạt 26,2%, CD44 đạt 67,3% và ALDH đạt 62,6% trên 107 bệnh nhân ung thư biểu mô tuyến dạ dày tại Việt Nam.
• Khẳng định dạng đồng bộc lộ hai dấu ấn chiếm tỷ lệ cao nhất với 47,7%, trong đó sự phối hợp giữa CD44 và ALDH chiếm tỷ trọng áp đảo 33,6%.
• Phát hiện 10,3% bệnh nhân đồng bộc lộ toàn bộ ba dấu ấn HER2, CD44 và ALDH, có mối liên quan mật thiết với tình trạng nôn máu, đi ngoài phân đen (18,2%) và thể mô học ruột (14,1%).
• Chứng minh bộc lộ HER2 liên quan có ý nghĩa thống kê với sút cân, thể ruột theo Lauren (89,3%) và thể tuyến ống theo WHO (78,6%) với p = 0,02.
• Chuyển giao và chuẩn hóa thành công quy trình kỹ thuật nhuộm hóa mô miễn dịch chuyên sâu từ Phòng thí nghiệm Inserm U1053 (Cộng hòa Pháp) vào thực tiễn y học nước nhà.

Công trình đặt nền móng khoa học vững chắc đầu tiên tại Việt Nam về hồ sơ đồng bộc lộ miễn dịch của tế bào gốc ung thư và HER2 trong ung thư biểu mô tuyến dạ dày. Trong giai đoạn 2026-2028, các nghiên cứu đa trung tâm mở rộng cần tiếp tục được triển khai để hoàn thiện hướng dẫn điều trị đích kết hợp. Quý độc giả, các bác sĩ và nhà nghiên cứu quan tâm có thể khai thác và tra cứu toàn văn luận án tại Thư viện Đại học Thái Nguyên hoặc Thư viện Trường Đại học Y - Dược Thái Nguyên nhằm ứng dụng các phát hiện thực chứng vào nghiên cứu và điều trị lâm sàng.

Trích đoạn nội dung tài liệu

MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING THAI NGUYEN UNIVERSITY NGUYEN KHAC TAN RESEARCH ON THE EXPRESSION AND RELATIONSHIP OF IMMUNE MARKERS OF CANCER STEM CELLS, HER2 IN GASTRIC ADENOCARCINOMA Speciality: Internal Medicine Code: 9720107 ABSTRACT OF MEDICAL PHD THESIS THAI NGUYEN - 2022 The thesis was done in: Thai Nguyen University of Medicine and Pharmacy Supervisor: 1. Luu Thi Binh 2. Phan Quoc Hoan Reviewer 1:………………. The thesis is defended in front of the Thesis Judging Committee at Thai Nguyen University, meeting at: Thai Nguyen University of Medicine and Pharmacy Day Month Year The thesis can be found at: 1.

Thai Nguyen University Library 2. Thai Nguyen University of Medicine and Pharmacy Library 1 INTRODUCTION Stomach cancer is one of the most common cancers and the fourth leading cause of death in the world. Gastric adenocarcinoma has a very poor prognosis, especially in patients with metastatic gastric adenocarcinoma. Evaluation of HER2 expression is an important criterion for choosing chemotherapy for patients.

However, the rate of HER2 positivity in gastric adenocarcinoma patients is quite low. Therefore, further understanding of other gastric adenocarcinoma markers besides HER2 is needed to improve the effectiveness of chemotherapy in patients with gastric adenocarcinoma. Cancer Stem Cells (CSCs) are resistant to chemotherapy and cause metastasis of cancer to other organs. Research on the expression of HER2 and gastric cancer stem cells such as CD44, ALDH opens up a great prospect in the treatment of this type of cancer as well as in the prognosis of treatment outcome and metastatic status of this cancer.

The expression of both HER2, CD44 and ALDH in gastric adenocarcinoma patients in Vietnam has not yet been published elaborately. In addition, immunohistochemical testing is currently still very expensive and not widely available to patients. Therefore, this thesis is conducted with the following objectives: 1. Evaluation of the expression of cancer stem cell immune markers (CD44, ALDH) and HER2 in gastric adenocarcinoma.

Analysis of the relationship between CD44, ALDH, HER2 immune phenotypes with clinical, endoscopic and histopathological characteristics in gastric adenocarcinoma. 2 NEW CONTRIBUTION OF THE THESIS - This is the first research on the simultaneous expression of HER2 and gastric cancer stem cells such as CD44, ALDH, conducted in Vietnam. - Research results have shown that the expression rate of a single marker is 29. Two markers simultaneously expressed the highest rate with 47.

The rate of expression of HER2, CD44 and ALDH concurrently was 10. - The expression of HER2 is different according to weight loss symptoms, Lauren's histopathological characteristics and WHO’s histopathological characteristics. Simultaneous expression of HER2, CD44 and ALDH differed according to symptoms of blood vomitting/black stools, Lauren's histopathological characteristics, and WHO’s histopathological characteristics. THESIS STRUCTURE The thesis consists of 122 pages (excluding references and appendices), 4 chapters (Introduction 2 pages, overview 39 pages, object and research methods 22 pages, research results 27 pages, discussion 30 pages, conclusion 1 pages, proposals 1 page), results has 42 tables, 4 charts, 19 figures, 139 references (9 Vietnamese, 130 English), 3 appendices.

ALDH Aldehyde Dehydrogenase 2. CSC Cancer Stem Cell 3. HER2 Human Epidermal growth factor Receptor 2 3 CHAPTER I OVERVIEW 1. The role of the HER2 in gastric cancer 1.

Role of HER2 in gastric cancer prognosis The rate of HER2 overexpression in gastric adenocarcinoma patients is variable, in the ToGA trial of 3,665 patients, the HER2- positive rate accounted for 810/3665 patients (22%). In a meta- analysis of 49 studies with 11,337 patients, the prevalence was 18%. Approximately 9–38% of all gastric cancer patients show overexpression of human epidermal growth factor receptor-2 (HER2), which may play a prognostic role in a more severe disease and poor outcome, although this issue remains unclear with conflicting results to date in different studies. Clinical application of HER2 markers in gastric cancer The ToGA study evaluated the combination of trastuzumab with a standard fluoropyrimidine plus cisplatin chemotherapy in HER2- positive advanced gastric cancer.

The results of the study suggest that trastuzumab in combination with chemotherapy could be considered a new standard option for patients with HER2-positive advanced gastroesophageal cancer. Based on the role of HER2 in the development and progression of many cancers in general and gastric adenocarcinoma in particular, especially through studies showing that HER2 expression is often associated with poor prognosis, they have applied drugs targeting these molecular targets to treat gastric adenocarcinoma. Anti-HER2 therapy is a promising treatment strategy for patients with gastric adenocarcinoma. The role of CD44 in cancer 1.

The role of CD44 in tumorigenesis CD44 activates and regulates several cell signaling systems, so it plays an important role in mediating the tumorigenic properties of cells leading to tumorigenesis, metastasis, and drug resistance. The function of CD44 in mesenchymal epithelial translocation has been investigated in several types of cancer. Increasing the expression of CD44 reduces the expression of E-cadherin, increasing N-cadherin, α-actin, vimentin, fibronectin inhibits the formation of the E- cadherin-β-catenin membrane complex, which increases the invasive process and cell migration. CD44 and drug resistance of cancer cells Clinical evidence suggests a positive correlation between CD44 expression and metastatic status.

In vitro, decreased expression of CD44 in breast cancer cell lines resulted in a significant reduction in tumor angiogenesis. Cell migration and invasion were prevented by knockout of CD44. Overexpression of CD44 increases tumorigenesis and cell turnover. In vivo, tumor formation in mice was inhibited when injected with CD44 knockout cells.

The number of osteoclasts decreased in metastatic bone with CD44 removed. These studies indicate that cancer cells acquire a tendency toward drug resistance when accompanied by forms of CD44 overexpression. Role of ALDH in gastric cancer 1. ALDH is overexpressed in some cancers Increased ALDH1 enzyme activity has been identified in several types of cancer such as multiple myeloma, acute leukemia, and some solid organ cancers.

Some stem cell markers including ALDH1, 5 CD166, LGR5 have very low concentrations in normal human gastric mucosa, but these markers are very high in gastric adenocarcinoma. ALDH1 expression was significantly correlated with invasion, lymph node metastasis, stage of disease, progression- free survival, and overall survival. However, the prognostic role of ALDH1 isozymes has not been determined. The study results of Chen J.

et al also showed that ALDH1A1 is overexpressed in gastric cancer patients and may play an important role in tumor invasion, metastasis and prognosis. ALDH in chemotherapy resistance ALDH is an enzyme involved in detoxification, protecting tissues from the toxic effects of aldehydes. ALDH1A1 and ALDH3A1 may protect cells against the toxic effects of drugs. The first observations several decades ago in hematopoietic and leukemic stem cells with ALDH were highly resistant to cyclophosphamide and the alkyls, ALDH1A1 and ALDH3A1 modified cyclophosphamide to the active form and 4-hydroperoxy cyclophosphamide into an inactive form for excretion.

Therefore, ALDH can cause drug resistance and resistance to radiation therapy. In recent years, growth factor receptors, tyrosine kinase inhibitors (EGFR-TKIs) have been used as a potential therapy in inhibiting the growth of cancer cells. 6 CHAPTER II SUBJECTS AND METHODS 2. Studying subjects The study subjects were 107 patients with confirmed diagnosis of gastric adenocarcinoma who underwent resection at K Hospital (Tan Trieu and Quan Su campuses), from July 2016 to July 2020.

Selection criteria for study patients - The patient was diagnosed with gastric adenocarcinoma based on histopathological results by Hematoxylin-Eosin (HE) staining according to ESMO 2016 criteria. - Postoperative primary tumor specimens were processed according to standard procedures and stained with immunohistochemistry to identify HER2 markers and cancer stem cell immune markers. - The patient consented and voluntarily participated in the study. Exclusive criteria - Cases of gastric cancer metastasized from other organs.

- Stomach cancer that has been treated with chemotherapy or radiation. Reseach methodology - Cross-sectional descriptive research method. The main criteria and classifications in the research - Tumor location in the stomach on gastroendoscopy. - Tumor morphology according to Borrmann: + Borrmann type I (Polyp form), Borrmann type II (Fungal form), Borrmann type III (Ulcerative form), Borrmann type IV (Infiltrative form).

7 - Tumor size on gastroendoscopy: + Group I: Tumor size < 2 cm. + Group II: Tumor size from 2 to < 5 cm. + Group III: Tumor size ≥ 5 cm. - Histopathological classification according to Lauren: + Intestinal type, diffuse type.

- Histopathological classification according to the WHO 2010 classification system: + Papillary adenocarcinoma. + Signet-ring cell adenocarcinoma. - Histopathological classification according to the degree of differentiation according to WHO: + Poor differentiation. - Diagnosis of TNM stage: According to the 7th AJCC system.

- Assess the expression level of marker HER2 in cancer samples and control samples according to levels: 0, 1+, 2+, 3+. The expression level of HER2 is 0 and 1+ evaluates to negative, the expression level of HER2 is 2+ and 3+ evaluates to positive. - Evaluate the expression level of marker CD44 in cancer samples and control samples according to levels: negative, positive. - Evaluate the expression level of marker ALDH in cancer samples and control samples according to levels: negative, positive.

The method of data collection 2. Clinical examination and subclinical indications - Patients who come to the hospital for examination will be asked about disease, clinical examination, indicated for hematology, biochemistry, coagulation, and immunological tests. - The patient is assigned to have a gastroscopy, when a stomach tumor is found, a biopsy will be performed during the endoscopy. Gastroendoscopy with biopsy - Put the scope through the mouth, throat into the esophagus, stomach, down the duodenum, inflate and observe.

It may be necessary to pump water to clear the mucus in the areas to be observed, and to drain the esophagus and stomach. - If lesions are detected, pump clean, then observe carefully with NBI mode and near focus to evaluate, biopsy for pathology. - Specimens are fixed into tubes containing Formol 20% neutral buffer. Tumor removal surgery and how to handle specimens - When the pathology results are gastric cancer.

The patient was consulted and transferred to the Department of Abdominal Surgery 1,2, K hospital to perform gastric tumor removal surgery. After surgery, the tumor was preserved and a sample was taken for histopathology at K Hospital. Methods of histopathological analysis - Place of implementation: Inserm U1053 laboratory. - Technique: Histopathological analysis by conventional HE staining method.

9 - Read results on HE-stained slide: The HE-stained slide is examined and photographed under a normal light microscope, at 10 - 40x magnification. Immunohistochemistry and staining methods - Place of implementation: Inserm U1053 Laboratory (Helicobacter pylori and gastric cancer research unit), National Institute of Health and Medical Research, Bordeaux, France. The testing process was supported by Prof. * Steps of immunohistochemical staining: - Cut the tissue mass cast in paraffin into slices with a thickness of 3-4 μm.

- Place slices on slides already filled with water and slides are always placed on a 37°C thermostatic plate. - Transfer the slides to a 56°C incubator overnight. - Antigen was expressed by incubation in a water bath at 96°C in citrate buffer pH 6. - Cool the slide for 20 min, wash with a spray nozzle of distilled water 2 times × 5 min.

- Reduce endogenous peroxidase with 3% H2O2 solution × 5 minutes. - Wash the slide with Tris-Buffer-Saline (TBS) solution pH 7. - Deactivation of nonspecific proteins with bovine serum albumin (BSA Bovin SerumAlbumine × 5 min. 10 - Wash the slide with TBS solution 2 times × 5 minutes, always keep the slide in the moist tray.

Cover with 1st antibody against antigen for 60 min. - Wash the slide with TBS solution 2 times × 5 minutes with a gentle spray. - Coat the second antibody with Biotin for 30 minutes. - Wash the slide with TBS solution 2 times × 5 minutes.

- Cover with Avidin-Biotin complex for 30 minutes. - Wash the slide with TBS solution 2 times × 5 minutes. - Cover with Diamino Benzidine (DAB) solution for 10 minutes. - Rinse the slide under running water for 5 minutes.

- Hematoxyline staining for 5 seconds.