Nghiên cứu sản xuất gam chuẩn cho RT-PCR ứng dụng trong chẩn đoán cúm và kiểm định vắc xin sởi

• Tác giả: Nguyễn Thị Thường
• Người hướng dẫn: GS. Huỳnh Phương Liên
• Trường học: Trường Đại học Y Hà Nội
• Chuyên ngành: Vi sinh Y học
• Đề tài: Nghiên cứu sản xuất gam chuẩn cho RT-PCR trong chẩn đoán cúm và kiểm định vắc xin sởi
• Loại tài liệu: luận án
• Năm xuất bản: 2014
• Địa điểm: Hà Nội

• LỜI CAM ĐOAN
• 1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN
• 1.1. Tổng quan một số vấn đề về cúm
• 1.2. Phép gọi tên
• 1.3. Hình thái, cấu trúc
• 1.4. Kháng nguyên và tính đa dạng chủng
• 1.5. Sự nhân lên của virus cúm
• 1.6. Dịch tễ học
• 1.7. Chẩn đoán phòng thí nghiệm
• 1.8. Tình hình nghiên cứu về cúm và tỷ lệ nhiễm cúm
• 1.9. Tổng quan một số vấn đề về sởi
• 1.10. Phép gọi tên
• 1.11. Hình thái, cấu trúc
• 1.12. Sự nhân lên của virus
• 1.13. Các triển vọng thanh toán sởi
• 1.14. Các nghiên cứu liên quan đến sởi
• 1.15. Sản xuất chứng dương ARN in vitro và kiểm định công hiệu vắc xin
• 2. ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.1. Đối tượng nghiên cứu
• 2.2. Vật liệu nghiên cứu. Cơ sở vật chất và trang thiết bị, máy móc. Sinh phẩm hóa chất
• 2.3. Mồi và đầu dò
• 2.4. Phần mềm phân tích và nguồn thông tin
• 2.5. Phương pháp nghiên cứu
• 2.6. Sản xuất chứng dương ARN in vitro
• 2.7. Xác định tỷ lệ nhiễm cúm
• 2.8. Xây dựng phương pháp kiểm định vắc xin sởi
• 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
• 3.1. Sản xuất chứng dương ARN
• 3.2. Tạo khuôn mẫu cho phương pháp phiên mã cổ điển
• 3.3. Tạo khuôn mẫu cho phương pháp phiên mã trực tiếp
• 3.4. Xác định tỷ lệ nhiễm cúm bằng RT-PCR
• 3.5. Đặc điểm đối tượng nghiên cứu
• 3.6. Đặc điểm trường hợp tử vong do cúm
• 3.7. Ứng dụng chứng dương trong xác định tỷ lệ nhiễm cúm
• 3.8. Tỷ lệ đồng nhiễm cúm và các virus khác
• 3.9. Phân bố nhiễm cúm theo giới tính, nhóm tuổi và thời gian
• 3.10. Kiểm định công hiệu vắc xin sởi
• 3.11. Công hiệu vắc xin mẫu chuẩn bằng tạo đám hoại tử
• 3.12. Công hiệu vắc xin mẫu chuẩn bằng real-time RT-PCR
• 3.13. Sự ổn định của ARN tách chiết bằng TpLR
• 3.14. Công hiệu vắc xin sởi thành phẩm
• 3.15. Độ lặp lại của phản ứng
• 3.16. Kết quả sản xuất các gam chuẩn
• 3.17. Tạo dòng plasmid tái tổ hợp và chuyển nạp. Kiểm tra chuyển nạp
• 3.18. Tạo mạch thẳng ADN plasmid bằng cắt enzyme giới hạn
• 3.19. Kết quả phiên mã in vitro
• 3.20. Tỷ lệ nhiễm cúm tại Hải Dương năm 2009-2011
• 3.21. Đặc điểm đối tượng nghiên cứu
• 3.22. Tỷ lệ tử vong và nhiễm cúm của bệnh nhân SARI
• 3.23. Phân bố nhiễm cúm theo giới tính, nhóm tuổi và thời gian
• 3.24. Bước đầu xây dựng phương pháp xác định hiệu giá vắc xin sởi đơn bằng real-time RT-PCR
• 3.25. Thử nghiệm tối ưu hóa các điều kiện phản ứng
• 3.26. Công hiệu vắc xin sởi thành phẩm
• 3.27. Thẩm định phương pháp
• 3.28. Bàn luận về các ưu điểm của đề tài
• 3.29. Chất lượng của sinh phẩm
• 3.30. Trang thiết bị máy móc
• 3.31. Quy trình thực hiện thử nghiệm
• 3.32. Phân tích kết quả và sự phù hợp với mục tiêu nghiên cứu
• 3.33. Chứng của phòng thí nghiệm và chứng quốc tế
• 3.34. Hoạt động độc lập
• 3.35. Bàn luận về những hạn chế của đề tài
• 3.36. Hạn chế trong sản xuất chứng dương ARN in vitro
• 3.37. Hạn chế trong xác định tỷ lệ nhiễm cúm
• 3.38. Hạn chế trong nghiên cứu xác định công hiệu vắc xin sởi
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

I. Giới thiệu

Nghiên cứu sản xuất gam chuẩn cho RT-PCR trong chẩn đoán cúm và kiểm định vắc xin sởi là một công trình quan trọng nhằm nâng cao hiệu quả chẩn đoán và kiểm định vắc xin. RT-PCR là phương pháp chính trong việc phát hiện virus cúm và sởi, giúp xác định nhanh chóng và chính xác tình trạng nhiễm bệnh. Việc sản xuất gam chuẩn cho RT-PCR không chỉ giúp cải thiện độ nhạy và độ đặc hiệu của xét nghiệm mà còn đảm bảo tính chính xác trong việc định lượng ARN virus. Theo Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), cúm và sởi là hai bệnh truyền nhiễm nguy hiểm, gây ra nhiều ca tử vong hàng năm. Do đó, việc phát triển các phương pháp chẩn đoán hiệu quả là rất cần thiết.

1.1. Tầm quan trọng của nghiên cứu

Nghiên cứu này không chỉ góp phần vào việc nâng cao chất lượng chẩn đoán mà còn hỗ trợ trong việc kiểm định công hiệu của vắc xin sởi. Việc sử dụng gam chuẩn trong RT-PCR giúp giảm thiểu sai sót trong quá trình xét nghiệm, từ đó nâng cao độ tin cậy của kết quả. Hơn nữa, nghiên cứu cũng chỉ ra rằng việc sản xuất gam chuẩn có thể khắc phục những hạn chế của việc sử dụng mẫu bệnh phẩm tách chiết, vốn thường không đảm bảo tính tinh khiết và định lượng. Điều này đặc biệt quan trọng trong bối cảnh dịch bệnh gia tăng và nhu cầu kiểm soát dịch bệnh ngày càng cao.

II. Phương pháp nghiên cứu

Phương pháp nghiên cứu được áp dụng trong đề tài này bao gồm sản xuất chứng dương ARN in vitro và xác định tỷ lệ nhiễm cúm bằng RT-PCR. Việc sản xuất gam chuẩn cho RT-PCR được thực hiện thông qua các bước như tạo khuôn mẫu cho phương pháp phiên mã cổ điển và trực tiếp. Các mẫu ARN được sản xuất sẽ được sử dụng để kiểm định công hiệu của vắc xin sởi. Phương pháp này không chỉ giúp xác định tỷ lệ nhiễm cúm mà còn cho phép đánh giá hiệu quả của các loại vắc xin hiện có. Sự kết hợp giữa các phương pháp hiện đại và truyền thống trong nghiên cứu này tạo ra một nền tảng vững chắc cho việc phát triển các phương pháp chẩn đoán và kiểm định mới.

2.1. Sản xuất chứng dương ARN

Quá trình sản xuất chứng dương ARN được thực hiện bằng cách sử dụng các kỹ thuật sinh học phân tử tiên tiến. Việc tạo ra các mẫu ARN chuẩn giúp đảm bảo tính chính xác trong việc định lượng virus trong các mẫu bệnh phẩm. Các mẫu ARN này sẽ được sử dụng làm chuẩn trong các xét nghiệm RT-PCR, từ đó nâng cao độ nhạy và độ đặc hiệu của phương pháp chẩn đoán. Sự phát triển của công nghệ sinh học đã mở ra nhiều cơ hội mới trong việc sản xuất các mẫu chuẩn, giúp cải thiện chất lượng xét nghiệm và giảm thiểu rủi ro trong quá trình chẩn đoán.

III. Kết quả nghiên cứu

Kết quả nghiên cứu cho thấy việc sản xuất gam chuẩn cho RT-PCR đã đạt được những thành công nhất định. Tỷ lệ nhiễm cúm được xác định bằng RT-PCR cho thấy sự phân bố nhiễm cúm theo giới tính, nhóm tuổi và thời gian. Đặc biệt, việc kiểm định công hiệu của vắc xin sởi bằng phương pháp real-time RT-PCR đã cho thấy tính hiệu quả cao. Các mẫu vắc xin được kiểm định cho thấy sự ổn định của ARN tách chiết, điều này cho phép đánh giá chính xác công hiệu của vắc xin trong việc phòng ngừa bệnh. Kết quả này không chỉ có giá trị trong nghiên cứu mà còn có ứng dụng thực tiễn trong việc kiểm soát dịch bệnh.

3.1. Ứng dụng thực tiễn

Kết quả nghiên cứu có thể được áp dụng rộng rãi trong các phòng thí nghiệm y tế và các cơ sở nghiên cứu. Việc sử dụng gam chuẩn trong RT-PCR sẽ giúp nâng cao chất lượng chẩn đoán và kiểm định vắc xin, từ đó góp phần vào công tác phòng chống dịch bệnh hiệu quả hơn. Hơn nữa, nghiên cứu cũng mở ra hướng đi mới trong việc phát triển các phương pháp chẩn đoán và kiểm định vắc xin, giúp đáp ứng nhanh chóng và hiệu quả với các dịch bệnh mới nổi. Điều này có ý nghĩa quan trọng trong bối cảnh dịch bệnh ngày càng phức tạp và khó lường.