Luận văn thạc sĩ: Xây dựng quy trình nhân nuôi và tinh chế virút dengue trong sản xuất vắc xin sống giảm độc lực

• MỞ ĐẦU
• 1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN
• 1.1. Đặc điểm virút Dengue
• 1.1.1. Đặc điểm hình thái và phân loại
• 1.1.2. Cấu trúc phân tử và các protein chức năng
• 1.1.3. Quá trình lây nhiễm và sao chép của virút
• 1.1.4. Đáp ứng miễn dịch với virút dengue
• 1.2. Dịch tễ học bệnh sốt xuất huyết
• 1.2.1. Tình hình dịch tễ bệnh trên thế giới
• 1.2.2. Tình hình dịch tễ bệnh tại Việt Nam
• 1.2.3. Nguồn bệnh trong tự nhiên
• 1.2.4. Đường lây và vector truyền bệnh
• 1.2.5. Đặc điểm lâm sàng và cận lâm sàng bệnh sốt xuất huyết dengue
• 1.2.6. Các yếu tố ảnh hưởng
• 1.2.7. Các phương pháp phòng ngừa dịch bệnh
• 1.3. Tình hình nghiên cứu phát triển vắc xin phòng SXHD trên thế giới
• 1.3.1. Vắc xin sống, giảm độc lực
• 1.3.2. Vắc xin bất hoạt
• 1.3.3. Vắc xin tiểu đơn vị tái tổ hợp
• 1.3.4. Vắc xin DNA
• 1.4. Đặc điểm chủng vắc xin dengue tái tổ hợp được sử dụng tại VABIOTECH
• 2. CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
• 2.1. Vật liệu
• 2.1.1. Tế bào Vero
• 2.1.2. Các chủng virút dengue tái tổ hợp
• 2.1.3. Môi trường nuôi cấy và các dung dịch trong nghiên cứu
• 2.1.4. Các hóa chất và sinh phẩm
• 2.1.5. Dụng cụ và trang thiết bị
• 2.2. Phương pháp
• 2.2.1. Phương pháp cấy chuyển tế bào Vero từ điều kiện bảo quản và nhân số lượng tế bào Vero trên chai nuôi một lớp hoặc chai Cell factory
• 2.2.2. Phương pháp gây nhiễm và nuôi cấy virút dengue trên tế bào
• 2.2.3. Phương pháp thu hoạch virút dengue sau gây nhiễm
• 2.2.4. Phương pháp ly tâm
• 2.2.5. Phương pháp lọc loại xác tế bào
• 2.2.6. Phương pháp xử lý DNA tế bào chủ bằng enzyme benzonase
• 2.2.7. Phương pháp thẩm tích
• 2.2.8. Phương pháp chuẩn độ virút dengue bằng tạo đám hoại tử
• 2.2.9. Phương pháp thử vô khuẩn
• 2.2.10. Phương pháp định lượng protein theo phương pháp Lowry
• 2.2.11. Phương pháp định lượng DNA tổng số bằng phương pháp lai phân tử
• 3. CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
• 3.1. Xây dựng quy trình nhân nuôi virút dengue ở quy mô phòng thí nghiệm
• 3.1.1. Liều gây nhiễm và thời gian hấp phụ virút
• 3.1.2. Thời gian nuôi cấy và số lượng mẻ gặt
• 3.1.3. Quy trình nhân nuôi virút dengue ở quy mô phòng thí nghiệm
• 3.2. Xây dựng qui trình tinh chế virút ở quy mô phòng thí nghiệm
• 3.2.1. Qui trình tinh sạch hỗn dịch virút
• 3.2.2. Qui trình xử lý loại DNA tế bào bằng enzyme
• 3.2.3. Qui trình thẩm tích hỗn dịch
• 3.2.4. Quy trình lọc vô trùng hỗn dịch virút
• 3.2.5. Qui trình tinh chế virút dengue ở quy mô phòng thí nghiệm
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

I. Tổng quan về quy trình nhân nuôi virút dengue cho vắc xin

Quy trình nhân nuôi và tinh chế virút dengue là một trong những bước quan trọng trong sản xuất vắc xin sống giảm độc lực. Việc hiểu rõ về virút dengue, đặc điểm sinh học và các phương pháp nuôi cấy là cần thiết để phát triển vắc xin hiệu quả. Nghiên cứu này sẽ cung cấp cái nhìn tổng quan về quy trình này, từ việc lựa chọn chủng virút đến các phương pháp nuôi cấy và tinh chế.

1.1. Đặc điểm của virút dengue và tầm quan trọng trong nghiên cứu

Virút dengue thuộc họ Flaviviridae, gây ra bệnh sốt xuất huyết dengue. Có bốn týp huyết thanh của virút này, mỗi týp đều có khả năng gây bệnh nghiêm trọng. Việc nghiên cứu đặc điểm của virút giúp xác định phương pháp nuôi cấy và tinh chế hiệu quả.

1.2. Tình hình dịch tễ học bệnh sốt xuất huyết tại Việt Nam

Sốt xuất huyết dengue là một trong những bệnh truyền nhiễm phổ biến tại Việt Nam. Tình hình dịch tễ học cho thấy số ca mắc bệnh ngày càng gia tăng, đặc biệt là trong mùa mưa. Việc phát triển vắc xin là cần thiết để kiểm soát dịch bệnh này.

II. Thách thức trong quy trình nhân nuôi virút dengue

Quy trình nhân nuôi virút dengue gặp nhiều thách thức, từ việc lựa chọn môi trường nuôi cấy đến việc kiểm soát các yếu tố ảnh hưởng đến sự phát triển của virút. Những thách thức này cần được giải quyết để đảm bảo hiệu suất và chất lượng của vắc xin.

2.1. Các yếu tố ảnh hưởng đến quy trình nuôi cấy virút

Nhiệt độ, pH, và nồng độ dinh dưỡng là những yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến sự phát triển của virút dengue trong môi trường nuôi cấy. Việc tối ưu hóa các yếu tố này là cần thiết để đạt được hiệu suất cao nhất.

2.2. Vấn đề an toàn sinh học trong quy trình nhân nuôi

An toàn sinh học là một yếu tố quan trọng trong quy trình nhân nuôi virút. Cần có các biện pháp kiểm soát để ngăn ngừa sự lây lan của virút ra môi trường bên ngoài và đảm bảo an toàn cho nhân viên nghiên cứu.

III. Phương pháp nhân nuôi virút dengue hiệu quả

Để sản xuất vắc xin sống giảm độc lực, quy trình nhân nuôi virút dengue cần được thực hiện theo các phương pháp khoa học và công nghệ hiện đại. Các phương pháp này bao gồm cấy chuyển tế bào, gây nhiễm virút và nuôi cấy trong môi trường thích hợp.

3.1. Phương pháp cấy chuyển tế bào Vero

Tế bào Vero là một trong những dòng tế bào phổ biến được sử dụng để nuôi cấy virút dengue. Quy trình cấy chuyển cần được thực hiện trong điều kiện vô trùng để đảm bảo sự phát triển của virút.

3.2. Quy trình gây nhiễm và nuôi cấy virút

Quy trình gây nhiễm virút dengue vào tế bào Vero cần được thực hiện với liều lượng và thời gian hấp phụ phù hợp. Việc theo dõi sự phát triển của virút trong quá trình nuôi cấy là rất quan trọng.

IV. Quy trình tinh chế virút dengue sau nuôi cấy

Sau khi nuôi cấy, virút dengue cần được tinh chế để loại bỏ các tạp chất và đảm bảo chất lượng cho vắc xin. Quy trình tinh chế bao gồm nhiều bước như ly tâm, lọc và xử lý bằng enzyme.

4.1. Phương pháp ly tâm và lọc virút

Ly tâm là phương pháp chính để tách virút dengue ra khỏi môi trường nuôi cấy. Sau đó, virút sẽ được lọc để loại bỏ các tạp chất và tế bào chết, đảm bảo độ tinh khiết cao.

4.2. Xử lý DNA tế bào chủ bằng enzyme

Việc xử lý DNA tế bào chủ bằng enzyme benzonase giúp loại bỏ hoàn toàn DNA không mong muốn, đảm bảo an toàn cho vắc xin. Quy trình này cần được thực hiện cẩn thận để không làm ảnh hưởng đến virút.

V. Ứng dụng thực tiễn của vắc xin sống giảm độc lực

Vắc xin sống giảm độc lực được sản xuất từ virút dengue có thể giúp giảm thiểu sự lây lan của bệnh sốt xuất huyết. Việc áp dụng vắc xin này trong cộng đồng sẽ góp phần bảo vệ sức khỏe cộng đồng và giảm gánh nặng cho hệ thống y tế.

5.1. Kết quả nghiên cứu và thử nghiệm lâm sàng

Các nghiên cứu và thử nghiệm lâm sàng cho thấy vắc xin sống giảm độc lực có hiệu quả trong việc ngăn ngừa bệnh sốt xuất huyết. Kết quả này mở ra hy vọng cho việc kiểm soát dịch bệnh trong tương lai.

5.2. Tương lai của vắc xin dengue tại Việt Nam

Với sự phát triển của công nghệ và nghiên cứu, vắc xin dengue có thể được sản xuất tại Việt Nam trong thời gian tới. Điều này không chỉ giúp giảm chi phí mà còn đảm bảo nguồn cung vắc xin cho người dân.

VI. Kết luận và triển vọng nghiên cứu vắc xin dengue

Nghiên cứu quy trình nhân nuôi và tinh chế virút dengue là bước quan trọng trong việc phát triển vắc xin sống giảm độc lực. Những kết quả đạt được từ nghiên cứu này sẽ góp phần vào việc kiểm soát dịch bệnh sốt xuất huyết tại Việt Nam và trên thế giới.

6.1. Tầm quan trọng của nghiên cứu vắc xin trong y tế công cộng

Nghiên cứu vắc xin không chỉ giúp bảo vệ sức khỏe cộng đồng mà còn giảm gánh nặng cho hệ thống y tế. Việc phát triển vắc xin dengue là cần thiết để đối phó với tình hình dịch bệnh ngày càng gia tăng.

6.2. Hướng đi tương lai cho nghiên cứu vắc xin dengue

Nghiên cứu cần tiếp tục được đẩy mạnh để cải thiện quy trình sản xuất vắc xin, đảm bảo an toàn và hiệu quả. Các công nghệ mới có thể được áp dụng để nâng cao chất lượng vắc xin trong tương lai.