Nghiên Cứu Begomovirus Gây Hại Trên Cây Cà Chua Tại Việt Nam | Khóa Luận Tốt Nghiệp

• Tác giả: Nguyễn Thị Thanh Thắng
• Người hướng dẫn: TS. Trần Nguyễn Hà
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Bệnh cây
• Đề tài: Nghiên cứu begomovirus gây hại cây cà chua tại Việt Nam
• Loại tài liệu: khóa luận tốt nghiệp
• Năm xuất bản: 2021
• Địa điểm: Hà Nội

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• 1. PHẦN 1: MỞ ĐẦU
• 1.1. Mục đích và yêu cầu
• 2. PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 2.1. KHÁI QUÁT CHUNG VỀ CÂY CÀ CHUA
• 2.1.1. Đặc điểm thực vật học
• 2.1.2. Giá trị dinh dưỡng
• 2.2. TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU NGOÀI NƯỚC
• 2.3. TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG NƯỚC
• 2.4. BỆNH XOĂN VÀNG LÁ CÀ CHUA DO BEGOMOVIRUS GÂY RA
• 2.4.1. Tác nhân gây bệnh
• 2.4.2. Hình thái của begomovirus gây bệnh xoăn vàng lá cà chua
• 2.4.3. Đặc điểm bộ gien của begomovirus gây bệnh xoăn vàng lá cà chua
• 2.4.4. Cấu trúc của phân tử DNA-A
• 2.4.5. Cấu trúc của phân tử DNA-B
• 2.4.6. Đặc điểm của vùng IR
• 2.4.7. Phân loại các begomovirus
• 2.4.8. Tái sinh của begomovirus
• 2.4.9. Môi giới và lan truyền của begomovirus
• 2.4.10. Thiệt hại do begomovirus gây ra
• 2.4.11. Phòng trừ begomovirus
• 2.4.12. Bệnh xoăn vàng lá cà chua do Tomato yellow leaf - curl Kachanaburi virus gây ra
• 2.4.13. Bệnh héo xoăn cà chua do Tomato leaf curl Hainan virus gây ra
• 2.4.14. kỹ thuật chẩn đoán bằng pcr
• 3. PHẦN 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 3.1. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU
• 3.2. ĐỊA ĐIỂM VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU
• 3.2.1. Địa điểm nghiên cứu
• 3.2.2. Thời gian nghiên cứu
• 3.3. VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU
• 3.3.1. Các giống cây thí nghiệm
• 3.3.2. Dụng cụ thí nghiệm
• 3.3.3. Đệm điện di phản ứng PCR
• 3.3.4. Các cấu trúc xâm nhiễm của begomovirus
• 3.3.5. Mồi PCR phát hiện begomovirus đã xác định được
• 3.4. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 3.4.1. Chuẩn bị khuôn DNA cho phản ứng PCR
• 3.4.2. Phản ứng PCR
• 3.4.3. Biến nạp cấu trúc xâm nhiễm vào tế bào A.tumefaciens khả biến bằng phương pháp xung điện
• 3.4.4. Lây nhiễm bằng Agroinoculation
• 3.4.5. Phương pháp kiểm tra ELISA (Enzyme linked immune sorbent asay)
• 4. PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 4.1. BIẾN NẠP CẤU TRÚC XÂM NHIỄM CỦA BEGOMOVIRUS VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN AGROBACTERIUM TUMERFACIENS
• 4.1.1. Biến nạp cấu trúc xâm nhiễm của begomovirus vào tế bào A. tumerfaciens bằng xung điện và chọn lọc vi khuẩn trên môi trường
• 4.1.2. Kiểm tra PCR các dòng vi khuẩn A. tumerfaciens đã được biến nạp
• 4.2. ĐÁNH GIÁ TÍNH ĐẶC HIỆU CỦA CÁC CẶP MỒI THIẾT KẾ ĐỐI VỚI CÁC BEGOMOVIRUS GÂY HẠI TRÊN CÂY HỌ CÀ
• 4.3. LÂY NHIỄM NHÂN TẠO CÁC BEGOMOVIRUS BẰNG AGRO- INOCULATION
• 4.3.1. Kết quả lây nhiễm bệnh xoăn vàng lá cà chua gây ra bởi Tomato yellow leaf curl Vietnam virus (TYLCVNV)
• 4.3.2. Kết quả lây nhiễm bệnh xoăn lá cà chua gây ra bởi Tomato leaf curl Vietam virus (ToLCuVV)
• 4.3.3. Kết quả lây nhiễm bệnh xoăn lá cà chua gây ra bởi Tomato leaf curl Hanoi virus (ToLCHanV)
• 4.3.4. Kết quả lây nhiễm bệnh xoăn lá cà chua gây ra bởi Tomato leaf curl Hainan virus (ToLCHnV)
• 4.3.5. Kết quả lây nhiễm bệnh xoăn lá cà chua gây ra bởi Tomato leaf curl China virus (ToLCCNV)
• 4.3.6. Kết quả lây nhiễm bệnh xoăn vàng lá trinh nữ gây ra bởi Mimosa yellow leaf curl virus (MiYLCV)
• 4.3.7. Kết quả lây nhiễm bệnh vàng gân cây hoa ngũ vị gây ra bởi Ageratum yellow vein virus (AYVV)
• 4.3.8. Kết quả lây nhiễm bệnh xoăn vàng lá ớt gây ra bởi Pepper yellow leaf curl Vietnam virus (PepYLCVNV)
• 4.3.9. Kết quả lây nhiễm bệnh xoăn vàng lá cà chua gây ra bởi Tomato yellow leaf curl Kanchanaburi virus (TYLCKaV)
• 5. PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

I. Giới thiệu về begomovirus và tác động đến cây cà chua tại Việt Nam

Begomovirus là một nhóm virus thực vật thuộc họ Geminiviridae, gây ra nhiều bệnh nghiêm trọng trên cây trồng, đặc biệt là cây cà chua. Tại Việt Nam, begomovirus đã được xác định là nguyên nhân chính gây bệnh xoăn vàng lá cà chua, dẫn đến thiệt hại lớn về năng suất và chất lượng. Nghiên cứu này tập trung vào việc đánh giá tính gây bệnh của các loài begomovirus phân lập từ cây cà chua tại Việt Nam, sử dụng phương pháp lây nhiễm nhân tạo và kỹ thuật PCR để chẩn đoán.

1.1. Tổng quan về begomovirus

Begomovirus là virus có bộ gen DNA sợi vòng đơn, lan truyền qua trung gian là bọ phấn Bemisia tabaci. Chúng gây ra các bệnh như xoăn vàng lá cà chua, làm giảm năng suất đáng kể. Tại Việt Nam, hai loài begomovirus chính được phát hiện là Tomato leaf curl Vietnam virus (ToLCVV) và Tomato yellow leaf curl Kanchanaburi virus (TYLCKaV). Các bệnh này thường xuất hiện vào mùa khô, gây thiệt hại nghiêm trọng cho nông nghiệp.

1.2. Tác động của begomovirus đến cây cà chua

Bệnh xoăn vàng lá cà chua do begomovirus gây ra làm lá cây biến dạng, vàng úa, và cây còi cọc, không đậu quả. Thiệt hại có thể lên đến 60-70% năng suất, thậm chí mất trắng. Nghiên cứu này nhằm tìm hiểu sâu hơn về cơ chế gây bệnh và đề xuất các biện pháp quản lý dịch hại hiệu quả.

II. Phương pháp nghiên cứu và kỹ thuật sử dụng

Nghiên cứu sử dụng các phương pháp tiên tiến như biến nạp cấu trúc xâm nhiễm vào tế bào vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens, PCR để kiểm tra tính đặc hiệu của các cặp mồi, và lây nhiễm nhân tạo bằng kỹ thuật agroinoculation. Các phương pháp này giúp đánh giá chính xác tính gây bệnh của các loài begomovirus.

2.1. Biến nạp cấu trúc xâm nhiễm

Các cấu trúc xâm nhiễm của begomovirus được biến nạp vào tế bào Agrobacterium tumefaciens bằng phương pháp xung điện. Kết quả cho thấy 12 cấu trúc xâm nhiễm của 9 loài begomovirus và 1 DNA vệ tinh đã được biến nạp thành công. Các dòng vi khuẩn biến nạp được kiểm tra bằng PCR khuẩn lạc để đảm bảo tính chính xác.

2.2. Đánh giá tính đặc hiệu của các cặp mồi

Nghiên cứu đã đánh giá tính đặc hiệu của 8 cặp mồi PCR, trong đó 6 cặp có tính đặc hiệu cao, phù hợp cho việc chẩn đoán các loài begomovirus. Các cặp mồi này được sử dụng để phát hiện các loài virus như TYLCVNV, ToLCVV, và AYVV.

III. Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Kết quả nghiên cứu cho thấy cây thuốc lá cảnh (Nicotiana benthamiana) là cây chỉ thị mẫn cảm với các loài begomovirus. Các thí nghiệm lây nhiễm nhân tạo bằng agroinoculation trên các cây họ cà như cà chua, ớt, và thuốc lá cho thấy chỉ cây thuốc lá cảnh biểu hiện triệu chứng bệnh rõ ràng. Các cây khác không biểu hiện triệu chứng dù kết quả ELISA dương tính.

3.1. Lây nhiễm nhân tạo và triệu chứng bệnh

Các thí nghiệm lây nhiễm nhân tạo bằng agroinoculation đã được thực hiện trên các cây họ cà. Kết quả cho thấy cây thuốc lá cảnh là cây chỉ thị mẫn cảm nhất, biểu hiện triệu chứng bệnh rõ ràng sau lây nhiễm. Các cây khác như cà chua và ớt không biểu hiện triệu chứng, điều này có thể do ảnh hưởng của điều kiện ngoại cảnh như nhiệt độ cao.

3.2. Đóng góp mới của nghiên cứu

Nghiên cứu này cung cấp thông tin quan trọng về tính gây bệnh của các loài begomovirus trên cây họ cà tại Việt Nam. Đồng thời, nghiên cứu khẳng định vai trò của cây thuốc lá cảnh như một cây chỉ thị mẫn cảm trong việc nghiên cứu các bệnh do begomovirus gây ra.

IV. Kết luận và kiến nghị

Nghiên cứu đã thành công trong việc biến nạp các cấu trúc xâm nhiễm của begomovirus và đánh giá tính gây bệnh của chúng. Kết quả cho thấy cây thuốc lá cảnh là cây chỉ thị mẫn cảm, phù hợp cho các nghiên cứu tiếp theo. Nghiên cứu cũng đề xuất các biện pháp quản lý dịch hại hiệu quả để giảm thiểu thiệt hại do begomovirus gây ra.

4.1. Kết luận

Nghiên cứu đã cung cấp thông tin quan trọng về tính gây bệnh của các loài begomovirus trên cây họ cà tại Việt Nam. Cây thuốc lá cảnh được xác định là cây chỉ thị mẫn cảm, phù hợp cho các nghiên cứu tiếp theo.

4.2. Kiến nghị

Cần tiếp tục nghiên cứu sâu hơn về cơ chế gây bệnh của begomovirus và phát triển các biện pháp bảo vệ thực vật hiệu quả. Đồng thời, cần nâng cao nhận thức của nông dân về các biện pháp phòng trừ dịch hại để giảm thiểu thiệt hại.