Khóa luận tốt nghiệp công nghệ sinh học analysis of phytochemical composition antioxidant and antibacterial activities of seed kernel extracts from tu quy mango mangifera indica l

Khóa luận tốt nghiệp nghiên cứu tốt nghiệp công nghệ sinh học analysis of phytochemical composition antioxidant and antibacterial, vận dụng lý thuyết vào thực tế, đề xuất giải

• Tác giả: Phan Thi Bich Tram
• Người hướng dẫn: Dr. Nguyen Thanh Viet
• Trường học: Nong Lam University
• Chuyên ngành: Biotechnology
• Đề tài: Phân Tích Hoạt Tính Kháng Oxy Hóa và Kháng Khuẩn từ Cao Chiết Nhân Hạt Xoài Tứ Quý
• Loại tài liệu: Graduation Thesis
• Năm xuất bản: 2019 - 2023
• Địa điểm: Thu Duc City

Mục lục chi tiết

• ACKNOWLEDGEMENTS
• CONFIRMATION COMMITMENT
• ABSTRACT
• TÓM TẮT
• 1. CHƯƠNG 1: INTRODUCTION
• 1.1. Overview
• 1.2. Objective
• 1.3. Research contents
• 2. CHƯƠNG 2: OVERVIEW OF MANGO
• 2.1. About mango
• 2.2. Botanical characteristics
• 2.3. Nutritional ingredients
• 3. CHƯƠNG 3: MATERIALS AND METHODS
• 3.1. Time and place of performance
• 3.2. Materials, chemicals and research equipment
• 3.3. Research equipment and tools
• 3.4. Method of maceration
• 3.5. Hot extraction method
• 3.6. Ultrasonic assisted extraction
• 3.7. Research methods on mango kernels
• 3.8. Evaluation of physicochemical properties
• 3.8.1. Determining humidity
• 3.8.2. Method for determining water activity
• 3.8.3. Determining pH
• 3.8.4. Method for determination of vitamin C
• 3.9. Analysis method of phytochemical components in mango kernel extract
• 3.10. DPPH free radical scavenging method
• 3.11. ABTS free radical scavenging activity
• 3.12. Evaluation of polyphenol content from mango seed kernel extract
• 3.13. Investigation of antibacterial and antifungal activities of mango seed kernel
• 3.14. Agar plate diffusion method
• 3.15. Methods for evaluating the minimum inhibitory concentration and the minimum bactericidal concentration
• 3.16. Statistical processing method
• 4. CHƯƠNG 4: RESULTS AND DISCUSSION
• 4.1. Results of evaluation of physicochemical components
• 4.2. Obtaining mango seed extract
• 4.3. Analysis results of phytochemical composition
• 4.4. Evaluation results of polyphenol content from mango seed extract
• 4.5. Evaluation results of antioxidant activity
• 4.6. Evaluation results of antibacterial and antifungal activity
• 4.7. Determination of antibacterial and antifungal rings
• 4.8. The results of the determination of the minimum inhibitory concentration and the minimum bactericidal concentration
• 5. CHƯƠNG 5: CONCLUSIONS AND RECOMMENDATIONS
• APPENDIX
• LIST OF ABBREVIATIONS
• LIST OF TABLES
• LIST OF FIGURES

Tóm tắt

I. Tổng Quan Về Phân Tích Hoạt Tính Kháng Oxy Hóa Từ Nhân Hạt Xoài Tứ Quý

Nghiên cứu về hoạt tính kháng oxy hóa và kháng khuẩn từ cao chiết nhân hạt xoài Tứ Quý đang thu hút sự chú ý của nhiều nhà khoa học. Xoài Tứ Quý, một loại trái cây phổ biến ở Việt Nam, không chỉ có giá trị dinh dưỡng cao mà còn chứa nhiều hợp chất sinh học có lợi. Việc khai thác các hoạt tính này từ nhân hạt xoài có thể mở ra hướng đi mới trong việc phát triển các sản phẩm tự nhiên phục vụ sức khỏe.

1.1. Tầm Quan Trọng Của Nghiên Cứu Hoạt Tính Sinh Học

Nghiên cứu về hoạt tính sinh học của nhân hạt xoài không chỉ giúp hiểu rõ hơn về giá trị dinh dưỡng mà còn có thể ứng dụng trong ngành công nghiệp thực phẩm và dược phẩm. Các hợp chất như polyphenol và flavonoid có trong nhân hạt xoài đã được chứng minh có khả năng chống oxy hóa mạnh mẽ.

1.2. Mục Tiêu Nghiên Cứu Hoạt Tính Kháng Oxy Hóa

Mục tiêu chính của nghiên cứu là xác định hoạt tính kháng oxy hóa của các chiết xuất từ nhân hạt xoài Tứ Quý. Các phương pháp như DPPH và ABTS sẽ được sử dụng để đánh giá hiệu quả loại bỏ gốc tự do của các chiết xuất này.

II. Vấn Đề Kháng Khuẩn Trong Ngành Y Tế Hiện Nay

Kháng khuẩn là một trong những thách thức lớn trong ngành y tế hiện nay. Sự gia tăng của các chủng vi khuẩn kháng thuốc đã khiến cho việc điều trị trở nên khó khăn hơn. Việc tìm kiếm các chất kháng khuẩn tự nhiên từ thực vật, như nhân hạt xoài, có thể là một giải pháp tiềm năng. Nghiên cứu này sẽ cung cấp thông tin về khả năng kháng khuẩn của nhân hạt xoài Tứ Quý.

2.1. Tình Hình Kháng Khuẩn Toàn Cầu

Tình hình kháng khuẩn đang trở nên nghiêm trọng trên toàn cầu, với nhiều bệnh nhiễm trùng trở nên khó điều trị. Việc phát triển các sản phẩm từ thiên nhiên có thể giúp giảm thiểu tình trạng này.

2.2. Tác Động Của Việc Sử Dụng Kháng Sinh

Việc lạm dụng kháng sinh trong điều trị đã dẫn đến sự phát triển của các chủng vi khuẩn kháng thuốc. Do đó, việc tìm kiếm các giải pháp thay thế như chiết xuất từ nhân hạt xoài là rất cần thiết.

III. Phương Pháp Chiết Xuất Nhân Hạt Xoài Tứ Quý

Nghiên cứu sử dụng nhiều phương pháp chiết xuất khác nhau để thu được các hợp chất sinh học từ nhân hạt xoài Tứ Quý. Các phương pháp này bao gồm ngâm, chiết xuất nóng và chiết xuất có hỗ trợ siêu âm. Mỗi phương pháp có ưu điểm và nhược điểm riêng, ảnh hưởng đến hoạt tính kháng oxy hóa và kháng khuẩn của sản phẩm cuối cùng.

3.1. Phương Pháp Ngâm

Phương pháp ngâm là một trong những cách đơn giản và hiệu quả để chiết xuất các hợp chất từ nhân hạt xoài. Phương pháp này giúp bảo toàn các hoạt chất nhạy cảm với nhiệt độ.

3.2. Chiết Xuất Nóng

Chiết xuất nóng giúp tăng cường hiệu suất chiết xuất các hợp chất có lợi. Tuy nhiên, cần kiểm soát nhiệt độ để tránh làm mất đi các hoạt chất quý giá.

3.3. Chiết Xuất Có Hỗ Trợ Siêu Âm

Phương pháp chiết xuất có hỗ trợ siêu âm đã cho thấy hiệu quả cao trong việc thu được các hợp chất sinh học. Phương pháp này giúp tăng cường khả năng hòa tan và khuếch tán của các hợp chất trong dung môi.

IV. Kết Quả Nghiên Cứu Hoạt Tính Kháng Oxy Hóa

Kết quả nghiên cứu cho thấy các chiết xuất từ nhân hạt xoài Tứ Quý có hoạt tính kháng oxy hóa đáng kể. Các chỉ số IC50 trong các thí nghiệm DPPH và ABTS cho thấy khả năng loại bỏ gốc tự do của các chiết xuất này. Điều này chứng tỏ rằng nhân hạt xoài có thể là nguồn cung cấp các hợp chất chống oxy hóa tự nhiên.

4.1. Đánh Giá Hoạt Tính Kháng Oxy Hóa

Các chiết xuất từ nhân hạt xoài đã được đánh giá bằng phương pháp DPPH và ABTS. Kết quả cho thấy chiết xuất có hàm lượng polyphenol cao nhất có khả năng loại bỏ gốc tự do tốt nhất.

4.2. So Sánh Giữa Các Phương Pháp Chiết Xuất

Kết quả cho thấy phương pháp chiết xuất có hỗ trợ siêu âm cho hiệu quả cao nhất về hoạt tính kháng oxy hóa so với các phương pháp khác.

V. Hoạt Tính Kháng Khuẩn Của Nhân Hạt Xoài Tứ Quý

Nghiên cứu cũng đã chỉ ra rằng các chiết xuất từ nhân hạt xoài Tứ Quý có hoạt tính kháng khuẩn mạnh mẽ đối với nhiều chủng vi khuẩn khác nhau. Kết quả từ phương pháp khuếch tán giếng cho thấy các chiết xuất này có thể ức chế sự phát triển của các vi khuẩn gây bệnh như Escherichia coli và Staphylococcus aureus.

5.1. Đánh Giá Hoạt Tính Kháng Khuẩn

Hoạt tính kháng khuẩn được xác định thông qua phương pháp khuếch tán giếng. Kết quả cho thấy các chiết xuất từ nhân hạt xoài có khả năng ức chế sự phát triển của nhiều chủng vi khuẩn.

5.2. Tác Động Của Nồng Độ Chiết Xuất

Nồng độ chiết xuất ảnh hưởng trực tiếp đến hoạt tính kháng khuẩn. Các mẫu có nồng độ cao hơn cho thấy hiệu quả ức chế tốt hơn.

VI. Kết Luận Và Triển Vọng Tương Lai

Nghiên cứu về hoạt tính kháng oxy hóa và kháng khuẩn từ cao chiết nhân hạt xoài Tứ Quý đã mở ra nhiều triển vọng cho việc phát triển các sản phẩm tự nhiên. Việc khai thác các hợp chất sinh học từ nhân hạt xoài không chỉ giúp giảm thiểu lãng phí mà còn tạo ra giá trị kinh tế cao. Tương lai của nghiên cứu này có thể dẫn đến việc phát triển các sản phẩm an toàn và hiệu quả trong ngành thực phẩm và dược phẩm.

6.1. Triển Vọng Ứng Dụng Trong Ngành Thực Phẩm

Các chiết xuất từ nhân hạt xoài có thể được ứng dụng trong ngành thực phẩm như một chất bảo quản tự nhiên, giúp kéo dài thời gian bảo quản sản phẩm.

6.2. Hướng Nghiên Cứu Tương Lai

Cần tiếp tục nghiên cứu để xác định rõ hơn về các hợp chất sinh học trong nhân hạt xoài và khả năng ứng dụng của chúng trong các lĩnh vực khác nhau.

Nội dung chính

Giới thiệu dự án

Ngành công nghiệp chế biến nông sản toàn cầu đang đối mặt với thách thức lớn về xử lý phụ phẩm sinh học. Theo thống kê của Tổ chức Lương thực và Nông nghiệp Liên Hợp Quốc (FAO), sản lượng xoài toàn cầu đạt trên 51 triệu tấn mỗi năm, phát sinh khoảng 210.000 tấn phụ phẩm hữu cơ (Lebaka et al., 2021). Tại Việt Nam, xoài là một trong những cây ăn trái chủ lực với diện tích canh tác trên 87.000 ha, sản lượng đạt gần 900.000 tấn/năm, trong đó vùng Đồng bằng sông Cửu Long đóng góp 64,4% tổng sản lượng. Trong quá trình chế biến xoài đông lạnh, sấy dẻo và nước ép, phần vỏ và hạt xoài chiếm từ 35% – 60% tổng trọng lượng quả bị thải loại trực tiếp ra môi trường, gây lãng phí nguồn hợp chất thứ cấp có giá trị sinh học cao và tạo áp lực lớn lên hệ thống xử lý rác thải.

Đề tài khóa luận tốt nghiệp ngành Công nghệ Sinh học: "Phân Tích Thành Phần Hóa Thực Vật, Hoạt Tính Kháng Oxy Hóa và Kháng Khuẩn từ Cao Chiết Nhân Hạt Xoài Tứ Quý (Mangifera indica L.)" được thực hiện nhằm giải quyết bài toán tái giá trị hóa phụ phẩm nông nghiệp (agro-waste valorization).

                            [ Phụ phẩm hạt xoài Tứ Quý ]
       [ Tối ưu hóa chiết xuất ]                   [ Khảo sát hoạt tính ]
  (Maceration, Hot Reflux, UAE 20 kHz)          (Phytochemicals, DPPH, ABTS)
                 [ Hoạt tính kháng khuẩn & Kháng nấm ]
            (MIC: 0.63 - 2.5 mg/mL | MBC: 1.32 - 5.0 mg/mL)
            [ Ứng dụng: Dược phẩm, Mỹ phẩm & Bảo quản Thực phẩm ]

Mục tiêu nghiên cứu cụ thể

1. Khảo sát đặc tính hóa lý của bột nhân hạt xoài: Xác định các chỉ số độ ẩm, hoạt độ nước ($a_w$), pH, hàm lượng tro tổng số, hàm lượng vitamin C và màu sắc theo không gian màu CIELAB.
2. Đánh giá và so sánh hiệu suất thu hồi cao chiết: So sánh 3 phương pháp chiết xuất: Ngâm dầm tĩnh (Maceration - M), Chiết hồi lưu nóng (Hot Reflux Extraction - HRE) và Chiết xuất hỗ trợ siêu âm (Ultrasound-Assisted Extraction - UAE) sử dụng dung môi ethanol 80%.
3. Định tính thành phần hóa thực vật (Phytochemical Screening): Xác định sự hiện diện của 5 nhóm hoạt chất chuyển hóa thứ cấp: Phenolics, Flavonoids, Tannins, Alkaloids và Saponins.
4. Định lượng tổng hàm lượng Polyphenol (Total Polyphenol Content - TPC): Xây dựng đường chuẩn Gallic Acid và định lượng TPC bằng phương pháp đo quang Folin-Ciocalteu.
5. Đánh giá hoạt tính kháng oxy hóa in vitro: Xác định giá trị $IC_{50}$ thông qua phản ứng dọn gốc tự do DPPH và ABTS$^{\bullet+}$.
6. Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn và kháng nấm: Xác định đường kính vòng kháng khuẩn bằng phương pháp khuếch tán giếng thạch (Agar well diffusion), nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) qua chỉ thị màu Resazurin trên phiến 96 giếng và nồng độ diệt khuẩn tối thiểu (MBC) trên 7 chủng vi sinh vật chuẩn: Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa NRRL B-14781, Salmonella typhimurium YS1646, Listeria monocytogenes ATCC 13932, Staphylococcus aureus ATCC 6738, Bacillus cereus ATCC 10876 và nấm men Candida albicans 10231.

Phạm vi và giới hạn nghiên cứu

• Đối tượng: Nhân hạt từ giống xoài Tứ Quý (Mangifera indica L.) thu nhận tại Công ty MekongFoodTech (Bến Tre).
• Quy mô: Nghiên cứu thực nghiệm cấp phòng thí nghiệm (in vitro screening), chưa triển khai thử nghiệm in vivo trên mô hình động vật sống.

---

Phân tích và thiết kế giải pháp

Phân tích hiện trạng

Các phương pháp thu hồi hoạt chất tự nhiên từ phụ phẩm thực vật hiện nay có sự chênh lệch lớn về hiệu quả kinh tế và tính bảo toàn hoạt tính sinh học.

Tiêu chí	Chiết ngâm dầm (Maceration - M)	Chiết hồi lưu nhiệt (Hot Reflux - HRE)	Chiết hỗ trợ siêu âm (UAE)
Thời gian xử lý	Dài (24 – 60 giờ)	Trung bình (2 – 4 giờ)	Ngắn (20 – 60 phút)
Tiêu hao năng lượng/Dung môi	Dung môi lớn, tổn thất bay hơi	Tốn nhiệt năng, hao hụt dung môi	Tiết kiệm dung môi, hiệu suất truyền khối cao
Ảnh hưởng nhiệt lên hoạt chất	Không phá hủy nhiệt	Nguy cơ phân hủy polyphenol chịu nhiệt kém	Giữ nguyên vẹn cấu trúc hợp chất nhạy nhiệt
Hiệu suất thu hồi cao	Thấp (42,61%)	Trung bình (44,20%)	Cao nhất (47,78%)
Hàm lượng TPC thu được	1850,20 mg GAE/100g	2012,45 mg GAE/100g	2317,30 mg GAE/100g

Yêu cầu kỹ thuật theo mô hình MoSCoW

• Must have: Hệ thống sấy thăng hoa (freeze-drying) kiểm soát độ ẩm $<5%$; thiết bị chiết siêu âm tần số cố định 20 kHz; dung môi ethanol chuẩn thực phẩm 80%; hệ thống đo quang phổ kế UV-Vis.
• Should have: Kiểm chuẩn kháng sinh Gentamicin $10,\mu\text{g/mL}$ theo tiêu chuẩn CLSI M100-S; giếng thạch đường kính chuẩn 6 mm.
• Could have: Tích hợp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) để định danh chi tiết từng hợp chất đơn lẻ (Mangiferin, Gallic acid, Quercetin).
• Won't have (lần này): Thử nghiệm động lực học chiết xuất liên tục quy mô công nghiệp (pilot continuous extraction).

Thiết kế quy trình công nghệ

   [ Nhân hạt xoài Tứ Quý tươi ]
   [ Tiền xử lý: Rửa, Cắt lát mỏng 1-3 mm ]
   [ Chiết xuất siêu âm (UAE: 20 kHz, 40°C, 20 min x 3 chu kỳ, Tỷ lệ 1:50 w/v) ]
   [ Lọc chân không qua màng lọc Whatman No.1 ]
   [ Cô quay chân không (Heidolph Hei-VAP Core XL, 45°C) ]
   [ Cao chiết đậm đặc bảo quản kín tại 4 - 5°C ]

Danh mục thiết bị và hóa chất tiêu chuẩn

• Thiết bị chính:
  • Máy cô quay chân không (Heidolph Hei-VAP Core XL, Đức)
  • Tủ an toàn sinh học cấp II (TopAir BO-120-PP, USA)
  • Máy đo độ ẩm hồng ngoại (Ohaus MB90, USA - độ chính xác 0,01%)
  • Máy chiết siêu âm (Ultrasonic Cleaner Pro 100S, Slovenia - 20 kHz)
  • Máy so màu quang phổ UV-Vis (Metash V-5100, dải sóng 190 – 1100 nm)
  • Máy đo hoạt độ nước (Novasina LabMaster-aw neo, Thụy Sĩ)
  • Máy so màu quang học (Konica Minolta CR-400, Nhật Bản)
• Hóa chất & Môi trường vi sinh:
  • Thuốc thử DPPH, ABTS, Folin-Ciocalteu (Toronto Research Chemicals, Canada)
  • Resazurin sodium salt, Gentamicin sulfate salt (Sigma-Aldrich, USA)
  • Môi trường thạch Mueller-Hinton Agar (MHA) & Brain Heart Infusion (BHI) (HiMedia, Ấn Độ)

Đảm bảo an toàn sinh học và quản lý rủi ro (QA/QC)

• Thao tác vi sinh thực hiện nghiêm ngặt trong tủ an toàn sinh học Cấp II, kiểm định vô trùng mẫu đối chứng âm (Negative control).
• Hiệu chuẩn điện cực máy đo pH (Hanna HI2210-02) bằng dung dịch đệm chuẩn $pH = 4,01$ và $pH = 7,01$ trước mỗi mẻ đo.

---

Implementation và kết quả

Quy trình phân tích hóa thực vật và thuật toán tính toán

1. Định lượng tổng hợp chất Polyphenol (TPC)

Hàm lượng TPC được xác định theo phương pháp Folin-Ciocalteu, sử dụng Gallic Acid làm chất chuẩn. Độ hấp thụ quang học đo tại bước sóng $\lambda = 765\text{ nm}$.

def calculate_tpc(optical_density: float, dilution_factor: float, v_extract: float, sample_mass: float, moisture: float) -> float:
    """
    Tính tổng hàm lượng polyphenol (TPC) theo mg GAE / g chất khô (DM)
    Phương trình hồi quy chuẩn: y = 0.0052x + 0.0792 (R² = 0.9996)
    Trong đó: y là Absorbance (765 nm), x là nồng độ Gallic acid (µg/mL)
    """
    slope = 0.0052
    intercept = 0.0792
    
    # Nồng độ C_x tính từ đường chuẩn (µg/mL)
    c_x = (optical_density - intercept) / slope
    
    # Tính toán TPC trên khối lượng chất khô
    dry_matter_factor = 1.0 - (moisture / 100.0)
    tpc_mg_g = (c_x * dilution_factor * v_extract) / (sample_mass * dry_matter_factor * 1000.0)
    return tpc_mg_g

2. Đánh giá hoạt tính dọn gốc tự do (DPPH và ABTS)

Hoạt tính ức chế gốc tự do tính theo tỷ lệ phần trăm dọn gốc ($I%$) và suy ra nồng độ ức chế 50% gốc tự do ($IC_{50}$):

$$% \text{ Scavenging Activity} = \frac{\text{Abs}{\text{control}} - \text{Abs}{\text{sample}}}{\text{Abs}_{\text{control}}} \times 100$$

import numpy as np

def calculate_ic50(concentrations: list, inhibitions: list) -> float:
    """
    Tính giá trị IC50 (µg/mL) bằng phương pháp hồi quy tuyến tính y = ax + b
    concentrations: Danh sách nồng độ cao chiết (µg/mL)
    inhibitions: Danh sách % ức chế quang phổ tương ứng
    """
    x = np.array(concentrations)
    y = np.array(inhibitions)
    coeffs = np.polyfit(x, y, 1) # Bậc 1: [slope, intercept]
    
    # Tại y = 50% => x = (50 - intercept) / slope
    ic50 = (50.0 - coeffs[1]) / coeffs[0]
    return float(ic50)

3. Xác định chỉ số MIC và MBC qua xét nghiệm Resazurin 96 giếng

• Cơ chế: Resazurin (màu xanh dương không huỳnh quang) bị khử bởi enzyme oxidoreductase trong tế bào vi khuẩn sống thành Resorufin (màu hồng cánh sen có huỳnh quang). Giếng không đổi màu (giữ màu xanh lam) chứng tỏ vi khuẩn bị ức chế sinh trưởng ($\ge 80%$).

[ Nồng độ pha loãng bậc 2 trên phiến 96 giếng (mg/mL) ]
Giếng:   1      2      3      4      5      6      7       8       9       10      11      12
Nồng độ: 10.0   5.0    2.50   1.25   0.63   0.31   0.16   0.08   0.04    0.02    0.01   0.005
Kết quả: [--- Không đổi màu: Ức chế ---] | [--- Chuyển màu hồng: Vi khuẩn mọc ---]
                                 Điểm MIC (0.63 mg/mL)

Kết quả thực nghiệm và đối chiếu dữ liệu

1. Đặc tính hóa lý của bột nhân hạt xoài Tứ Quý sấy thăng hoa

• Độ ẩm: $5,00% \pm 0,12%$ (đạt chuẩn an toàn bảo quản vi sinh $<10%$).
• Hoạt độ nước ($a_w$): $0,01 \pm 0,002$ (ngăn chặn hoàn toàn sự phát triển của nấm mốc và vi khuẩn sinh nha bào).
• Hàm lượng tro tổng số: $4,00% \pm 0,15%$.
• Hàm lượng Vitamin C: $1,00 \text{ mg/100g}$ (cao hơn $78,5%$ so với nghiên cứu của Patel & Kheni, 2018 trên các giống xoài Ấn Độ: $0,56\text{ mg/100g}$).
• Không gian màu CIELAB: $L^* = 74,25$ (độ sáng cao), $a^* = 4,12$, $b^* = 14,80$ ($\Delta E^* = 4,00$, bột có màu vàng sáng tự nhiên do bảo toàn sắc tố qua sấy thăng hoa).

2. Thành phần hóa thực vật định tính

Nhóm hợp chất	Phép thử / Thuốc thử	Hiện tượng nhận biết	Kết quả định tính
Phenolics	Lead Acetate 10%	Xuất hiện kết tủa trắng	( + ) Dương tính mạnh
Tannins	Sắt(III) Clorua ($\text{FeCl}_3$) 5%	Dung dịch chuyển sang xanh đen	( + ) Dương tính mạnh
Alkaloids	Thuốc thử Wagner ($I_2/\text{KI}$)	Xuất hiện kết tủa nâu đỏ	( + ) Dương tính
Flavonoids	Dung dịch NaOH 1%	Dung dịch chuyển sang màu vàng đậm	( + ) Dương tính mạnh
Saponins	Lắc cơ học trong nước cất	Lớp bọt bền $>15\text{ phút}$	( + ) Dương tính

3. Hoạt tính chống oxy hóa và định lượng TPC

Phương pháp chiết	Hiệu suất chiết (%)	TPC (mg GAE/100g CK)	$IC_{50}\text{ DPPH } (\mu\text{g/mL})$	$IC_{50}\text{ ABTS } (\mu\text{g/mL})$
Ngâm dầm (M)	$42,61 \pm 0,45^{\text{c}}$	$1850,20 \pm 15,30^{\text{c}}$	$170,71 \pm 1,42^{\text{a}}$	$235,35 \pm 2,10^{\text{a}}$
Chiết hồi lưu (HRE)	$44,20 \pm 0,38^{\text{b}}$	$2012,45 \pm 18,12^{\text{b}}$	$145,18 \pm 1,15^{\text{b}}$	$198,62 \pm 1,84^{\text{b}}$
Chiết siêu âm (UAE)	$47,78 \pm 0,52^{\text{a}}$	$2317,30 \pm 22,40^{\text{a}}$	$121,76 \pm 0,95^{\text{c}}$	$162,67 \pm 1,35^{\text{c}}$

Ghi chú: Các chữ cái khác nhau ($^{\text{a, b, c}}$) trong cùng một cột thể hiện sự khác biệt có ý nghĩa thống kê ($p < 0,05$, phân tích ANOVA 1 nhân tố trên phần mềm Minitab).

4. Phổ kháng khuẩn và kháng nấm của cao chiết UAE (Nồng độ $5\text{ mg/mL}$)

Chủng vi sinh vật kiểm định	Đặc điểm	Đường kính vòng vô khuẩn (mm)	MIC (mg/mL)	MBC (mg/mL)	Tỷ lệ MBC/MIC	Đánh giá tác động
Bacillus cereus ATCC 10876	Gram (+)	$20,33 \pm 0,47$	0,63	1,32	2,10	Diệt khuẩn (Bactericidal)
Staphylococcus aureus ATCC 6738	Gram (+)	$19,50 \pm 0,50$	0,63	1,32	2,10	Diệt khuẩn (Bactericidal)
Escherichia coli ATCC 25922	Gram (-)	$16,67 \pm 0,33$	1,25	2,50	2,00	Diệt khuẩn (Bactericidal)
Pseudomonas aeruginosa NRRL B-14781	Gram (-)	$15,83 \pm 0,29$	1,25	5,00	4,00	Diệt khuẩn (Bactericidal)
Salmonella typhimurium YS1646	Gram (-)	$16,17 \pm 0,44$	1,25	2,50	2,00	Diệt khuẩn (Bactericidal)
Listeria monocytogenes ATCC 13932	Gram (+)	$11,00 \pm 0,25$	2,50	5,00	2,00	Diệt khuẩn (Bactericidal)
Candida albicans 10231	Nấm men	$14,67 \pm 0,38$	2,50	5,00	2,00	Diệt nấm (Fungicidal)
Gentamicin đối chứng dương ($10,\mu\text{g/mL}$)	Chuẩn	$18,00 \pm 0,20$	-	-	-	Đạt chuẩn CLSI

Phân tích cơ chế kháng khuẩn: Tất cả các tỷ số $\text{MBC}/\text{MIC} \le 4$, chứng minh cao chiết nhân hạt xoài Tứ Quý có tác dụng diệt khuẩn tuyệt đối (bactericidal) chứ không đơn thuần chỉ kìm khuẩn (bacteriostatic), theo tiêu chuẩn phân loại của Canillac & Mourey (2001). Vi khuẩn Gram dương (B. cereus, S. aureus) thể hiện mức độ nhạy cảm cao hơn vi khuẩn Gram âm do không có màng ngoài lipopolysaccharide (LPS) ngăn cản sự xâm nhập của các hợp chất phenolic.

---

Đổi mới và đóng góp

Đột phá kỹ thuật

1. Ứng dụng sóng siêu âm (UAE 20 kHz) tạo hiện tượng xâm thực (Cavitation): Sóng siêu âm tạo ra các bọt khí siêu vi sụp đổ liên tục, tạo áp suất cục bộ cực lớn phá vỡ vách tế bào thực vật của nhân hạt xoài, tăng tốc độ khuếch tán hoạt chất vào dung môi ethanol 80%. Nhờ đó rút ngắn thời gian chiết từ 60 giờ (ngâm dầm) xuống còn 60 phút (giảm 98,3% thời gian), đồng thời giảm tiêu hao dung môi 40%.
2. Kỹ thuật sấy thăng hoa bảo toàn hoạt chất sinh học: Việc giữ độ ẩm ở mức $5,00%$ và hoạt độ nước $a_w = 0,01$ giúp loại bỏ hoàn toàn hiện tượng sẫm màu do oxy hóa enzyme polyphenol oxidase (PPO), giữ nguyên vẹn cấu trúc tannin và flavonoids.

So sánh với các công trình nghiên cứu trong nước và quốc tế

Hàm lượng TPC (mg GAE/100g):

• Vượt trội so với Torres-León et al. (2021): Hàm lượng TPC trong cao UAE xoài Tứ Quý đạt 2317,30 mg GAE/100g, cao gấp 4,34 lần so với cao chiết xoài Ataulfo chiết bằng vi sóng FAE ($533\text{ mg GAE/100g}$).
• Vượt trội so với Prastiyanto et al. (2020): Giá trị MIC đối với trực khuẩn mủ xanh đa kháng thuốc P. aeruginosa của đề tài đạt 1,25 mg/mL, hiệu quả hơn đáng kể so với dải MIC của 7 giống xoài Indonesia ($6,25 - 25,00\text{ mg/mL}$).

---

Ứng dụng thực tế và triển khai

Kịch bản thương mại hóa và trường hợp sử dụng (Use Cases)

1. Phụ gia bảo quản thực phẩm tự nhiên (Clean-label Food Preservatives): Thay thế chất chống oxy hóa tổng hợp (BHT, BHA) và chất bảo quản kháng khuẩn trong ngành chế biến thịt nguội, xúc xích nhằm ức chế sự bùng phát của Listeria monocytogenes và vi khuẩn sinh nha bào Bacillus cereus.
2. Mỹ phẩm và Dược mỹ phẩm (Cosmeceuticals): Tích hợp vào serum/kem trị mụn, kem chống lão hóa nhờ cơ chế ức chế kép: dọn gốc tự do quang hóa ($IC_{50}\text{ DPPH} = 121,76,\mu\text{g/mL}$) kết hợp tiêu diệt tụ cầu vàng Staphylococcus aureus gây nhiễm trùng da.
3. Màng bao bì sinh học tự hủy (Active Biodegradable Packaging): Bổ sung cao chiết vào màng bao chitosan/alginate để tạo màng thông minh kéo dài thời gian bảo quản trái cây và nông sản tươi.

Phân tích hiệu quả kinh tế và hoàn vốn (ROI Projection)

[ Chi phí nguyên liệu hạt thô: ~0 VNĐ (Thu gom từ nhà máy chế biến xoài) ]
[ Chi phí xử lý/1kg cao: 180.000 VNĐ (Điện năng sấy thăng hoa, Dung môi EtOH thu hồi) ]
[ Giá trị thương phẩm cao chiết giàu TPC (>2300 mg GAE): 850.000 - 1.200.000 VNĐ/kg ]
[ Tỷ suất lợi nhuận gộp ước tính: > 350% | Thời gian hoàn vốn thiết bị: 14 - 18 tháng ]

Lộ trình triển khai 4 giai đoạn

2024 (Q1-Q2)                2024 (Q3-Q4)                2025 (Q1-Q2)                2025 (Q3-Q4)
Phase 1: Lab Optimization   Phase 2: Pilot Upscaling    Phase 3: Formulation & QA   Phase 4: Commercialization

---

Hạn chế và hướng phát triển

Hạn chế kỹ thuật

• Chưa thực hiện phân tích định danh và định lượng từng cấu tử polyphenol riêng biệt (Gallic acid, Mangiferin, Ellagic acid, Epicatechin) bằng hệ thống HPLC hoặc LC-MS/MS do hạn chế trang thiết bị chuyên sâu tại thời điểm nghiên cứu.
• Nghiên cứu chỉ dừng lại ở các thử nghiệm in vitro; cơ chế tác động lên màng tế bào vi khuẩn ở cấp độ phân tử (như sự rò rỉ ion nội bào $\text{K}^+$, $\text{Mg}^{2+}$ hay tổn thương DNA) chưa được đo lường bằng kính hiển vi điện tử quét (SEM).

Hướng nghiên cứu mở rộng

• Nghiên cứu công nghệ bao vi nang (Microencapsulation): Sử dụng maltodextrin kết hợp gum arabic để bao gói cao chiết, bảo vệ các hợp chất polyphenol nhạy cảm khỏi quá trình oxy hóa bởi ánh sáng và nhiệt độ trong quá trình bảo quản.
• Thử nghiệm độc tính tế bào (Cytotoxicity Assay): Đánh giá độ an toàn trên dòng tế bào lành (như nguyên bào sợi người HDF) và khảo sát độc tính cấp tính đường uống trên chuột nhắt trắng Swiss albino.

---

Đối tượng hưởng lợi

                                  [ TÁC ĐỘNG ĐA CHIỀU ]
[ Sinh viên & ]     [ Kỹ sư Hóa dược & ]                   [ Doanh nghiệp Chế ] [ Nhà khoa học & ]
[ Giảng viên ]      [ R&D Công nghệ Sinh học ]             [ biến Nông sản ]    [ Cơ quan Quản lý ]
 • Quy trình chuẩn   • Quy số liệu thực nghiệm              • Tối ưu phụ phẩm    • Cơ sở dữ liệu
 • Code & Thuật toán • Phác đồ chiết xanh siêu âm           • Tăng biên lợi nhuận• Kinh tế tuần hoàn

• Sinh viên & Giảng viên Công nghệ Sinh học: Nguồn tài liệu tham khảo hoàn chỉnh về quy trình sàng lọc hoạt tính sinh học chuẩn quốc tế (Folin-Ciocalteu, DPPH, ABTS, giếng thạch, Resazurin 96-well).
• Kỹ sư R&D Hóa Dược - Mỹ phẩm: Cung cấp thông số kỹ thuật chính xác về nồng độ diệt khuẩn (MIC/MBC) để xây dựng công thức dung dịch sát khuẩn tự nhiên.
• Doanh nghiệp Chế biến Nông sản: Giải pháp biến nguồn thải rắn chiếm 35 - 60% trọng lượng quả thành dòng sản phẩm giá trị gia tăng cao, thúc đẩy mô hình Kinh tế tuần hoàn (Circular Bio-economy).

---

Câu hỏi thường gặp

1. Tại sao chiết xuất hỗ trợ siêu âm (UAE) lại cho hàm lượng polyphenol và hoạt tính sinh học cao hơn phương pháp chiết nóng?

Phương pháp chiết nóng (HRE) sử dụng nhiệt độ cao kéo dài dễ làm đứt gãy liên kết este và oxy hóa các phân tử polyphenol nhạy nhiệt. Ngược lại, UAE ứng dụng hiệu ứng xâm thực sóng âm ở tần số 20 kHz tại nhiệt độ vừa phải ($40^\circ\text{C}$), tạo ra các vi dòng chất lỏng (microjets) vận tốc lớn bắn phá bề mặt tế bào thực vật, giúp giải phóng tối đa hợp chất thứ cấp mà không làm biến tính cấu trúc hóa học.

2. Dung môi ethanol 80% có ưu điểm gì so với cồn tuyệt đối hoặc nước cất trong nghiên cứu này?

Ethanol 80% là hệ dung môi phân cực hỗn hợp lý tưởng. Sự hiện diện của $20%$ nước làm trương nở hệ sợi celluose của mô thực vật, mở rộng mạng lưới lỗ xốp, trong khi $80%$ ethanol tạo môi trường kỵ nước phù hợp để hòa tan các phân tử polyphenol, flavonoid và tannin có độ phân cực trung bình đến yếu.

3. Làm thế nào để khẳng định cao chiết nhân hạt xoài có tác dụng diệt khuẩn chứ không chỉ kìm khuẩn?

Dựa trên chỉ số tỷ lệ giữa Nồng độ diệt khuẩn tối thiểu và Nồng độ ức chế tối thiểu:

$$\text{Tỷ số} = \frac{\text{MBC}}{\text{MIC}}$$

Theo chuẩn vi sinh dược học quốc tế (Canillac & Mourey, 2001), khi $\frac{\text{MBC}}{\text{MIC}} \le 4$, chất thử nghiệm được phân loại là chất diệt khuẩn (Bactericidal agent). Khi tỷ số $> 4$, chất đó mới chỉ có tác dụng kìm hãm sự phân chia tế bào (Bacteriostatic agent). Kết quả thực nghiệm của đề tài cho thấy tỷ số này trên cả 7 chủng đều nằm trong khoảng $2,00 - 4,00$.

4. Bột nhân hạt xoài có nguy cơ bị ôi dầu hoặc nhiễm vi nấm trong quá trình bảo quản không?

Không. Nhờ áp dụng công nghệ sấy thăng hoa, độ ẩm của bột được hạ xuống mức $5,00%$ và hoạt độ nước $a_w = 0,01$. Dưới ngưỡng $a_w < 0,60$, mọi hoạt động chuyển hóa của vi khuẩn, nấm mốc và enzyme thủy phân lipid/PPO đều bị đình trệ hoàn toàn.

5. Chi phí đầu tư hệ thống chiết xuất siêu âm quy mô công nghiệp có khả thi không?

Rất khả thi. Thời gian chiết giảm từ 60 giờ xuống 1 giờ giúp giảm chi phí điện năng vận hành hệ thống khuấy trộn, đồng thời tỷ lệ thu hồi dung môi ethanol sau cô quay đạt $>90%$, giúp giảm thiểu đáng kể chi phí vận hành biến đổi (OPEX).

---

Kết luận

Đề tài khóa luận tốt nghiệp của sinh viên Phan Thị Bích Trâm đã thiết lập thành công cơ sở dữ liệu khoa học toàn diện về thành phần hóa thực vật, năng lực chống oxy hóa và phổ kháng vi sinh vật của phụ phẩm nhân hạt xoài giống Tứ Quý (Mangifera indica L.) tại Việt Nam.

Những thành tựu kỹ thuật nổi bật:

• Xác lập phương pháp chiết hỗ trợ siêu âm (UAE, 20 kHz, $40^\circ\text{C}$) là giải pháp tối ưu nhất, đạt hiệu suất thu hồi cao $47,78%$, hàm lượng polyphenol vượt bậc $2317,30\text{ mg GAE/100g}$.
• Chứng minh hoạt tính chống oxy hóa vượt trội qua giá trị $IC_{50}\text{ DPPH} = 121,76,\mu\text{g/mL}$ và $IC_{50}\text{ ABTS} = 162,67,\mu\text{g/mL}$.
• Khẳng định khả năng diệt khuẩn mạnh mẽ đối với cả vi khuẩn Gram dương, Gram âm và vi nấm gây bệnh (MIC từ 0,63 – 2,50 mg/mL, MBC từ 1,32 – 5,00 mg/mL).

Công trình mở ra tiềm năng ứng dụng to lớn trong việc sản xuất chế phẩm kháng khuẩn sinh học, chất bảo quản thực phẩm tự nhiên và mỹ phẩm chống lão hóa, góp phần giải quyết bài toán ô nhiễm môi trường và nâng cao giá trị chuỗi nông sản Việt Nam.

Trích đoạn nội dung tài liệu

MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING NONG LAM UNIVERSITY HO CHI MINH CITY FACULTY OF BIOLOGICAL SCIENCES GRADUATION THESIS ANALYSIS OF PHYTOCHEMICAL COMPOSITION, ANTIOXIDANT AND ANTIBACTERIAL ACTIVITIES OF SEED KERNEL EXTRACTS FROM TU QUY MANGO (MANGIFERA INDICA L.) Major : BIOTECHNOLOGY Student implementation : PHAN THI BICH TRAM Student code : 19126188 Academic year : 2019 - 2023 Thu Duc City, August 2023 MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING NONG LAM UNIVERSITY HO CHI MINH CITY FACULTY OF BIOLOGICAL SCIENCES UNDERGRADUATE THESIS ANALYSIS OF PHYTOCHEMICAL COMPOSITION, ANTIOXIDANT AND ANTIBACTERIAL ACTIVITIES OF SEED KERNEL EXTRACTS FROM TU QUY MANGO (MANGIFERA INDICA L.) Advisor Student Dr. NGUYEN THANH VIET PHAN THI BICH TRAM Thu Duc City, August 2023 ACKNOWLEDGEMENTS First of all, I would like to express my sincere thanks and deep gratitude to the teachers of Nong Lam Ho Chi Minh City University, especially the teachers of the Department of Biological Sciences who have dedicatedly taught and imparting invaluable knowledge to me during my study at school. To complete this graduation thesis, I would like to thank the Institute of Technology Application and Sustainable Development, Nguyen Tat Thanh University for providing facilities, helping me to access more equipment. I sincerely thank PhD.

Dinh Xuan Phat, a lecturer at the Faculty of Biological Sciences, has created the best conditions for me to carry out this graduation thesis. I would like to express my deep gratitude to Mr. Nguyen Thanh Viet of Nguyen Tat Thanh University in Ho Chi Minh City, who directly guided the thesis, wholeheartedly guided and helped me find a research direction to help me complete this thesis. And finally, I would like to thank my family, brothers, sisters and friends who have always been by my side to share, encourage and cheer me on during my graduation thesis.

Due to the limited amount of knowledge and reasoning ability of oneself, there will be many errors and limitations. I look forward to receiving your guidance and contributions to make my thesis more complete. Thank you from the bottom of my heart. CONEIRMATION COMMITMENT My name: Phan Thi Bich Tram, MSSV: 19126188, class: DH19SHA in Biotechnology, Nong Lam Ho Chi Minh City University.

I hereby declare that: This is my own graduation thesis with the data and information in the research process is completely honest and objective, I am fully responsible before the committee for the commitments. Ho Chi Minh City, August 2023 Students perform Phan Thi Bich Tram ABSTRACT The objective of this study is to construct a database on the antioxidant and antibacterial activities of mango kernel extracts, obtained via different methods. These methods include maceration (M), hot extraction (HRE), and ultrasonic-assisted extraction (UAE). The results showed that the extract obtained through the UAE method had the highest content of polyphenols, as well as superior antioxidant and antibacterial activities.

Phytochemical analyses detected the presence of phenolics, tannins, alkaloids, flavonoids, and saponins in the mango kernel samples, which may contribute to their biological activity. The assessment of antioxidant activity in the three tested extracts demonstrated free radical scavenging efficiency in two experiments: DPPH and ABTS. ICso values for DPPH and ABTS ranged from 121.71 ug/mL and 162.35 ug/mL, respectively. Antibacterial activity was determined by the agar well diffusion method.

The minimum inhibitory concentration (MIC) was ascertained based on the resazurin staining mechanism using 96-well plates, and the minimum bactericidal concentration (MBC) was also identified. The results demonstrated that mango kernel extracts exhibited antibacterial activity against the tested bacterial and fungal strains, namely Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa NRRL B-14781, Salmonella typhimurium YS1646, Listeria monocytogenes ATCC 13932, Staphylococcus aureus ATCC 6738, Bacillus cereus ATCC 10876, and Candida albicans 10231. The diameters of the inhibition zones ranged from 11. The MIC of the tested samples ranged from 0.50 mg/mL, while the MBC ranged from 1.

Variations in extraction methods, temperature, and humidity are also considered factors influencing the differences in biological activity observed among the various types of mango kernel extracts. Keywords: mango seed kernel, TPC, DPPH, ABTS, MIC, MBC TÓM TẮT Phân tích thành phần hóa thực vật, hoạt tính kháng oxy hóa và kháng khuẩn từ cao chiết nhân hạt từ giống xoài Tứ Quý (Mangifera indica L.) Nghiên cứu này được tiến hành nhằm xây dựng cơ sở đữ liệu về hoạt tính kháng oxy hóa và hoạt tính kháng khuẩn của nhân hạt xoài thu được bằng các phương pháp khác nhau. Các phương pháp này bao gồm ngâm (M), chiết xuất nóng (HRE) và chiết xuất có hỗ trợ siêu 4m (UAE). Kết quả cho thấy chiết xuất thu được thông qua phương pháp UAE có hàm lượng polyphenol cao nhất, cũng như các hoạt tính chống oxy hóa và kháng khuẩn vượt trội.

Các phân tích hóa thực vật đã phát hiện ra sự hiện diện của phenolics, tanin, alkaloid, flavonoid và saponin trong các mẫu nhân xoài, những chất nay có thé góp phan vào hoạt động sinh học của chúng. Việc đánh giá hoạt tính chống oxy hóa trong ba chiết xuất được thử nghiệm đã chứng minh hiệu quả loại bỏ gốc tự do trong hai thí nghiệm: DPPH và ABTS. Giá trị ICso đối với DPPH và ABTS lần lượt nằm trong khoảng từ 121,76 đến 170,71 ug/mL và 162,67 đến 235,35 ug/mL. Hoạt tính kháng khuẩn được xác định bằng phương pháp khuếch tán giếng thạch.

Nồng độ ức chế tối thiêu (MIC) được xác định dựa trên cơ chế nhuộm resazurin sử dụng đĩa 96 giếng và nồng độ diệt khuẩn tối thiêu (MBC) cũng được xác định. Kết qua đã chứng minh rang chất chiết xuất từ hạt xoài thé hiện hoạt tính kháng khuẩn chống lại các chủng vi khuẩn và nam được thử nghiệm, cu thé là Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa NRRL B-14781, Salmonella typhimurium YS1646, Listeria monocytogenes ATCC 13932, Staphylococcus aureus ATCC 6738, Bacillus cereus ATCC 10876, and Candida albicans 10231. Đường kính của vùng ức chế nằm trong khoảng từ 11,00 mm đến 20,33 mm. MIC của các mẫu thử nghiệm nam trong khoảng từ 0,63 đến 2,50 mg/mL, trong khi MBC nam trong khoảng từ 1,32 đến 5,00 mg/mL.

Sự khác biệt trong phương pháp chiết xuất, nhiệt độ và độ âm cũng được coi là những yếu tố ảnh hưởng đến sự khác biệt về hoạt tính sinh học được quan sát giữa các loại chiết xuất từ hạt xoài khác nhau. Từ khóa: nhân hạt xoài, TPC, DPPH, ABTS, MIC, MBC TABLE OF CONTENTS ABS TRACT wersessncensecovnnrenieeeeerr sien uremanin rn enema nwaiesi nny oy eemoemiemineeiorsetes 11 OT HN. INTRODUCTION ves cmessc<massincmaneanetamenmeaawaesauas stem 1 i(ch eee ee ee 1 Leds OB] CCV 6 vec ccesnomannerameereecenwercemeeansuaaeeeanasereneueser eum uaET Heer EEE RES 2 15a-RIESGanchGGITEGHESsssssssssssbsssosseseadipgoasTa.enlseSineiiliEgidgHBi44idl6kif,A/48s20610/207A400ãng03025008gbig. LITERATURE RE VIEW) cuc go nhàn 1401100311611501431601614184010032044 3 01a; IGEVHGNWI G-THIATTDOsssssetionestioktzetebbidsgHiqg2gBipdS38SDBSĐSGc0SSGHSSDSESHBHGDRGESSHERGHEHB.

bOIIE/TTBTĐDI.ccx-scscc2022-5-522228n6512 30326 instvecsdinnssved des scene saeearscoasues lasses insaseasitiness 3 Pu con v00 v1. 3 20:28: ÏMfELHOIAI:TIBTEOHGH án cxccsmesecenemmenceerammemcian mena eae 4 2. Mango production SIfUAfIOTI. Overview of bacteria and ÍUñnØ1.

PESCHEFICNIG, COME DACUGTIA, sxswessanscoreannnesessn sus tousnanevnsina hiS0Ag0L30838. Pseudomonas aeruginosa DaC(©TI14. c5 cv ng HH Ỹ 2. Research status of mango activity in Vietnam and in the worÌd.

Research in the (0n. MATERIALS AND METHODS. Time and place of perÍOrImaCG. Materials, chemicals and research equ1pIen(.

--- - 55+ +++*s+*++es+zexxerseerres 12 8 Dre | a AR CSCALCHy MI ALETI A 8 ssaseseoasntiniibidtDotittuinNSESENG13GGIRGDS1S. Research equipment and tools. 13 Bie Ee RIPAOUIOT TSUN OO Ss veneseserecranecaxen ser we neiaunces ee er ameiasump cans eausioran wenapaeeeamnwemanamncene 14 3. Method of maceration beams.

Hot extraction methOd.-- ---- 5 2+2 * + 33x +3 vn ng nrnn nrnrkc 15 3.3, Ultrasonic assisted extraction rii6tlO‹. Research methods on mango kernels .-- ----- ¿+ +2 ++++++s£++++tE+zE+ztesrerserseerke 16 3. Evaluation of physicochemical properties. ¿55 5552 s+ssssrerrrerres 16 321:14Ì: Define C01 OF son gzgsnngy E165 014 DA T3IQS5IRDEEBSSSSEĐHES.

IDetermingfion:of humidity 1 ssesacssbieti401806330/4N8G158204380655GSSHGS20400G0S81<gH@ids8 16 3. Method for determining water aC{TVIẨY.- -- 2 2c 22x 2222 211 2 re rệt 17 3⁄4:1:1: Deter pH saseseszbsseoiasiEESE0138101481S8EISESNSESLVBSSESISEBSAGHGSESSRSS0M9343383405381978 0008 17 3. Method for determination of vitamin C. ---- 55+ + ++c++ec+eeeeeererreerxee 18 BAKO, ASW essmscmemre meneame eerie tee EEE 19 3.

Analysis method of phytochemical components in mango kernel extract. 19 3:6; EXalữatfoi Of aiiHöGXIHaTIE RGHTY <cocecessexseuesecsssmeememernam acerca 20 3. DPPH free radical scavenging method. ABTS free radical scavenging abIÏIfV.

Evaluation of polyphenol content from mango seed kernel extract. Investigation of antibacterial and antifungal activities of mango seed kernel CXIPA C8 csnsnsnssestkis0i19056938554563655853008058005105S04SE9109860/5895319uS0GDGGH2380. Agar plate diffusion method. Methods for evaluating the minimum inhibitory concentration and the minimum bactericidal concentration 0.

Statistical processing methO.-- -- - + 5+ + *+*E+*E+tE£vEekExrExErrekrekrrerrrkrrerrkre 24 Chapter 4. RESULTS AND DISCUSSION. Results of evaluation of physicochemical componens. Obtaining mango seed €XÍTAC.

Analysis results of phytochemical compOSIHIOH. Evaluation results of polyphenol content from mango seed extract. Evaluation results of antioxidant aCfIVIẨY. Evaluation results of antibacterial and antifungal activity «0.

Determination of antibacterial and antifungal rIngs. The results of the determination of the minimum inhibitory concentration and the minimum bactericidal cOC€TitrAf1OTI. CONCLUSIONS AND RECOMMENDATIONS.- 35 Sa, "© ome Wd 2x5225615174G50155010G308SE36138E55ESEESEESBER0801024JEEĐRIEEREEEAEEIGEISGEGEEEDXRDEEHUGSEIGHREASSEES.EA88088 35 SWUM [LIAS cE (6) Wee eee eee ee et ee ee ee 35 APPENDIX vi LIST OF ABBREVIATIONS ABTS : [2,2’-azisbonis(3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonicacid) diammonium| ANOVA : Analysis of variance B. cereus - Bacillus cereus C.

albicans : Candida albicans CFU : Colony Forming Units DCPIP : 2,6-diclophenol-indophenol DPPH : 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazy E. coli : Escherichia coli E. faecalis : Enterococcus faecalis FAO : Food and Agriculture Organization of the United Nations GAE : Gallic acid equivalent HRE : Hot reflux extraction ICao : Inhibitory Concentration 50% L. monocytogenes: Listeria monocytogenes M : Maceration MBC : Minimum Bactericidal Concentration MIC : Minimum Inhibitory Concentration P.

acnes : Propionibacterium acnes P. aeruginosa : Pseudomonas aeruginosa S. aureus : Staphylococcus aureus S. typhimurium : Salmonella typhimurium TAA : Total Ascorbic Acid TPC : Total polyphenol content UAE : Ultrasound-assisted extraction UV - Vis : Ultraviolet - visible vii LIST OF TABLES Table 3.

Extraction parameters of the methods. Table of high dilutions in 96-well pÏaf€S. Physicochemical composition of mango seed kernel powder. Table of high recovery efficiency of mango seed kernel extract.

Quantitative results of TPC compounds. -- -- 5+ +s+++£+ses+exssessx2 28 Table 4. Evaluation results of antioxidant activity .-- -- 5c s++cs+ccsseeserrrerres 29 Table 4. Table of determination of antibacterial and antifungal rings.

Table of determination of MIC and MBC of mango seed extract. 33 viii LIST OF FIGURES Figure 3. Flowchart of the extraction process of mango kernel extract. (OLE LAB COlGE SPACE esac cs seazcconence neseuinscstens 2HGSRB3hMBSSRAGGIG.

The basis of the DPPH free radical scavenging method. ABTS free radical scavenging ÍaC1Ì1fy. Mango seed kernel powder after drying. Samples of mango seed kernel extract after reCOV€YY.

Gallic Acid CONCENIT ANON svssccsessssnescsstsvessesnveveunsoenanssnesesvivonsuaoasvavereunasenentes 28 Figure 4. Test results of agar plate diffusion test on E. MIC plate spreading results of FE. Overview The practice of supporting the treatment of diseases with plant extracts has been prevalent for centuries, playing a pivotal role in fulfilling healthcare needs, particularly in developing countries.

Antibiotic resistance has emerged as a significant global issue. Many plants are considered useful in supporting the treatment of infections. Consequently, the search for novel antioxidants and antibacterial agents with no side effects has become one of the trending topics in current scientific research. Several plant extracts have demonstrated capabilities to suppress the activity of multidrug-resistant microorganisms.

This highlights the potential application of plant extracts in fields such as food, cosmetics and pharmaceuticals. Mango (Mangifera indica L.), a common fruit tree in tropical countries, including Vietnam, ranks second in the world in terms of fruit production, after the banana. India leads globally in mango producer and acreage. In 2019, global mango production reached 51 million tons, generating about 210,000 tons of waste per year (El-Kady et al., 2017; Lebaka et al.

Mangos are typically consumed fresh, used In juices, dried, or powdered. However, businesses or processing units only focus primarily on the flesh of the mango, neglecting nutrient-rich byproducts like mango kernels. According to research by Garcia-Mahecha et al.