Nghiên cứu nhận diện và nhân bản gen defensin từ ruồi lính đen (Hermetia illucens) vào plasmid pTAG2

• Tác giả: Dinh Xuan Hoang
• Người hướng dẫn: Ph. Lê Minh Thông
• Trường học: Nong Lam University
• Chuyên ngành: Biotechnology
• Đề tài: Nhận diện và nhân bản gen defensin từ ruồi lính đen (Hermetia illucens) vào plasmid pTAG2
• Loại tài liệu: Graduate thesis
• Năm xuất bản: 2019-2023
• Địa điểm: Thu Duc City

• ACKNOWLEDGEMENT
• AFFIRMATION AND COMMITMENT
• ABSTRACT
• 1. CHƯƠNG 1: TÓM TẮT
• 2. CHƯƠNG 2: INTRODUCTION
• 2.1. Antimicrobial peptides (AMPs)
• 2.2. Mechanisms of action
• 2.3. Insect defensins
• 2.4. Black soldier fly (Hermetia illucens)
• 3. CHƯƠNG 3: MATERIALS AND METHODS
• 3.1. Time and location of the study
• 3.2. Materials and reagents
• 3.3. Identification of Candidate Defensin Genes from BSF Genomes
• 3.4. Evaluation of Physicochemical Properties
• 3.5. Verification of transformants with DNA insert using PCR
• 3.6. Competent Cell Preparation
• 4. CHƯƠNG 4: RESULTS AND DISCUSSION
• 4.1. Antimicrobial activity prediction
• 4.2. The 3D structure analysis of chr1_def4
• 4.3. Primer design and PCR amplification
• 4.4. PCR amplicons purification and sequencing
• 5. CHƯƠNG 5: CONCLUSION AND FUTURE WORK
• APPENDIX
• appendix.1. LIST OF ABBREVIATIONS
• appendix.2. LIST OF TABLES
• appendix.3. LIST OF FIGURES

I. Tổng quan về gen defensin từ ruồi lính đen Hermetia illucens

Gen defensin là một trong những thành phần quan trọng trong hệ miễn dịch của nhiều loài động vật, bao gồm cả ruồi lính đen (Hermetia illucens). Nghiên cứu về gen này không chỉ giúp hiểu rõ hơn về cơ chế phòng vệ tự nhiên mà còn mở ra cơ hội ứng dụng trong công nghệ sinh học. Ruồi lính đen được biết đến với khả năng sản xuất các peptid kháng vi khuẩn, có thể được sử dụng trong nhiều lĩnh vực như y tế và nông nghiệp.

1.1. Đặc điểm sinh học của ruồi lính đen Hermetia illucens

Ruồi lính đen là một loài côn trùng thuộc họ Stratiomyidae, nổi bật với khả năng phân hủy chất hữu cơ. Chúng có thể phát triển trong môi trường giàu dinh dưỡng và có vai trò quan trọng trong chu trình sinh thái.

1.2. Vai trò của gen defensin trong hệ miễn dịch

Gen defensin đóng vai trò quan trọng trong việc bảo vệ cơ thể khỏi các tác nhân gây bệnh. Chúng có khả năng tiêu diệt vi khuẩn, nấm và virus, giúp duy trì sức khỏe cho loài vật.

II. Thách thức trong việc nhân bản gen defensin từ ruồi lính đen

Việc nhân bản gen defensin từ ruồi lính đen gặp nhiều thách thức, bao gồm việc xác định chính xác các gen mã hóa và tối ưu hóa quy trình nhân bản. Các phương pháp truyền thống có thể không hiệu quả trong việc xử lý các gen phức tạp từ loài này.

2.1. Khó khăn trong việc xác định gen defensin

Xác định gen defensin từ genome của ruồi lính đen yêu cầu sử dụng các công nghệ tiên tiến như phân tích in silico và các thuật toán học máy để dự đoán các gen có khả năng mã hóa peptid kháng vi khuẩn.

2.2. Thách thức trong quy trình nhân bản gen

Quy trình nhân bản gen defensin cần phải được tối ưu hóa để đảm bảo hiệu quả và độ chính xác. Việc lựa chọn vectơ plasmid phù hợp như pTAG2 cũng là một yếu tố quan trọng.

III. Phương pháp xác định và nhân bản gen defensin

Nghiên cứu sử dụng các phương pháp in silico để xác định gen defensin từ genome của ruồi lính đen. Sau đó, các gen này được nhân bản vào plasmid pTAG2 thông qua các thí nghiệm PCR và cloning.

3.1. Sử dụng công nghệ in silico để xác định gen

Công nghệ in silico cho phép phân tích genome của ruồi lính đen để tìm ra các gen defensin tiềm năng. Các thuật toán học máy được áp dụng để dự đoán hoạt tính kháng vi khuẩn của các gen này.

3.2. Quy trình PCR và cloning gen vào plasmid pTAG2

Quy trình PCR được thực hiện để khuếch đại gen defensin đã xác định, sau đó gen này được chèn vào plasmid pTAG2 để tạo ra các dòng tế bào biến đổi gen.

IV. Kết quả nghiên cứu và ứng dụng thực tiễn

Kết quả nghiên cứu cho thấy gen defensin từ ruồi lính đen có khả năng kháng vi khuẩn mạnh mẽ. Việc nhân bản thành công gen này vào plasmid pTAG2 mở ra nhiều cơ hội ứng dụng trong y tế và nông nghiệp.

4.1. Đánh giá hoạt tính kháng vi khuẩn của gen defensin

Các thí nghiệm cho thấy gen defensin từ ruồi lính đen có khả năng tiêu diệt nhiều loại vi khuẩn, bao gồm cả những chủng kháng thuốc. Điều này cho thấy tiềm năng ứng dụng trong phát triển thuốc kháng sinh mới.

4.2. Ứng dụng trong công nghệ sinh học

Gen defensin có thể được sử dụng để phát triển các sản phẩm sinh học mới, giúp cải thiện sức khỏe cây trồng và vật nuôi, đồng thời giảm thiểu việc sử dụng hóa chất độc hại trong nông nghiệp.

V. Kết luận và triển vọng tương lai của nghiên cứu

Nghiên cứu về gen defensin từ ruồi lính đen không chỉ cung cấp kiến thức mới về hệ miễn dịch của loài này mà còn mở ra hướng đi mới trong việc phát triển các sản phẩm kháng sinh tự nhiên. Tương lai của nghiên cứu này hứa hẹn sẽ mang lại nhiều giá trị cho y tế và nông nghiệp.

5.1. Tầm quan trọng của nghiên cứu gen defensin

Nghiên cứu gen defensin từ ruồi lính đen có thể giúp phát hiện ra các peptid kháng vi khuẩn mới, góp phần vào việc giải quyết vấn đề kháng thuốc hiện nay.

5.2. Hướng nghiên cứu tiếp theo

Các nghiên cứu tiếp theo có thể tập trung vào việc tối ưu hóa quy trình sản xuất và ứng dụng các peptid kháng vi khuẩn trong thực tiễn, mở rộng khả năng ứng dụng của chúng trong nhiều lĩnh vực khác nhau.