1. CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.1. Bệnh sốt Dengue và sốt xuất huyết Dengue
1.1.1. Biểu hiện lâm sàng
1.1.2. Tác nhân truyền bệnh
1.1.3. Tình hình dịch bệnh trên thế giới
1.1.4. Tình hình dịch bệnh ở Việt Nam
1.2. Đặc điểm hình thái và cấu trúc
1.2.1. Genome của virus
1.2.2. Chu trình nhân lên và cơ chế gây bệnh của virus Dengue
1.2.3. Đặc điểm kháng nguyên
1.3. Phát hiện kháng thể
1.3.1. Phân lập virus
1.4. Nghiên cứu virus corona gây bệnh viêm đường hô hấp cấp SARS ở Việt Nam
1.4.1. Tình hình nghiên cứu trên thế giới
1.4.2. Các nghiên cứu tại Việt Nam
2. CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Bộ sinh phẩm chẩn đoán nhanh bệnh Sốt Dengue/ Sốt xuất huyết Dengue
2.1.1. Đối tượng và vật liệu
2.1.2. Phương pháp
2.2. Các phương pháp sản xuất kháng nguyên và kháng huyết thanh
2.2.1. Sản xuất kháng nguyên
2.2.2. Phương pháp sản xuất kháng huyết thanh
2.2.3. Phương pháp ELISA phát hiện IgM
2.2.4. Kỹ thuật trung hòa (Neutralization Test - NT)
2.2.5. Phương pháp miễn dịch hợp phức liên kết men phát hiện KT IgG (GAC- ELISA)
2.2.6. Các phương pháp phân lập và xác định type virus
2.2.6.1. Cấy truyền trên não chuột sơ sinh (1-3 ngày tuổi)
2.2.6.2. Phương pháp phân lập virus trên tế bào muỗi Aedes
2.2.6.3. Kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang trực tiếp (Direct ImmunoFluorescent Antibody Assay – DFA)
2.2.6.4. Kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang gián tiếp (Indirect ImmunoFluorescent Antibody Assay – IFA)
2.2.6.5. Kỹ thuật Trung hòa giảm đậm hoại tử (Plaque Reduction Neutralization Test - PRNT)
2.2.7. Phương pháp tổng hợp dây chuyền chuỗi nhẹ polymerase (RT-PCR - Polymerase Chain Reaction)
2.3. Bộ sinh phẩm chẩn đoán nhanh bệnh Viêm đường hô hấp cấp SARS
2.3.1. Đối tượng nghiên cứu
2.3.2. Mẫu bệnh phẩm
2.3.3. Sinh phẩm khác
2.3.4. Môi trường và hóa chất
2.3.5. Trang thiết bị và dụng cụ
2.3.6. Phương pháp
2.3.6.1. Phân lập virus SARS-CoV
2.3.6.2. Tạo plasmid tại tế hợp
2.3.6.3. Biểu lệ và tinh sạch kháng nguyên
2.3.6.4. Phương pháp hợp phức miễn dịch liên kết enzyme tạm bắt kháng thể IgM (MAC- ELISA)
2.3.6.5. Phương pháp Western Blot
3. CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.1. Kết quả sản xuất bộ sinh phẩm chẩn đoán nhanh bệnh sốt Dengue/ sốt xuất huyết Dengue
3.1.1. Nuôi cấy virus Dengue type I (D1), virus Dengue type II (D2), virus Dengue type III (D3) và virus Dengue type IV (D4) trên tế bào muỗi Aedes albopictus dòng C6/36
3.1.2. Nhân virus Dengue type I (D1), virus Dengue type II (D2), virus Dengue type III (D3) và virus Dengue type IV (D4) vào tế bào muỗi Aedes albopictus dòng C6/36 để tách chiết ARN
3.2. Quan sát sự nhân lên của virus Dengue trong tế bào muỗi Aedes albopictus dòng C6/36 dưới kính hiển vi điện tử
3.3. Nghiên cứu qui trình công nghệ biểu hiện, tách chiết, tinh chế kháng nguyên Dengue tại tế hợp các type
3.3.1. Kháng nguyên Dengue thứ
3.3.2. Kháng nguyên tại tế hợp
3.3.3. Quy trình tách chiết và tinh chế kháng nguyên tại tế hợp của virus dengue từ chủng E. coli cho cặp biến thể virus dengue
3.3.4. Tách dòng và xác định trình tự đoạn gen PreM và E của 4 type virus Dengue
3.3.4.1. Tách RNA tổng số của tế bào muỗi C6/36
3.3.4.2. Khuếch đại đoạn gene PreM và E bằng phương pháp RT-PCR
3.3.4.3. Biểu hiện kháng nguyên màng và vỏ của virus Dengue type 1, 2, 3, 4 trong hệ nấm men Pichia pastoris
3.3.5. Kiểm tra phản ứng của kháng nguyên DxME tại tế hợp với kháng thể kháng virus Dengue tự nhiên bằng Western Blot
3.4. Thiết kế cặp mồi và xây dựng kế hoạch tách dòng gen màng kháng nguyên của virus Dengue các type I, II, III, IV
3.5. Chọn tạo công hợp (Gold monoclonal antibodies) gắn kháng nguyên vào giá thể (màng thấm Nitrocellulo membrane)
3.6. Nghiên cứu dung dịch đệm tối ưu dùng trong phản ứng
3.7. Hoàn thiện bộ sinh phẩm
3.8. Thử nghiệm bộ sinh phẩm trong phòng thí nghiệm
3.9. Ứng dụng bộ sinh phẩm trong thực địa
3.10. Kết quả kiểm tra tại phòng thí nghiệm Sốt xuất huyết Arbovirus, Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương
3.10.1. Giá thành và chất lượng bộ sinh phẩm chẩn đoán nhanh sốt Dengue/ sốt xuất huyết Dengue
3.10.2. Một số hình ảnh khi tiến hành thí nghiệm tại các điểm nghiên cứu
3.2. Kết quả sản xuất bộ sinh phẩm chẩn đoán nhanh bệnh Viêm đường hô hấp cấp (SARS)
3.2.1. Kháng nguyên tại tế hợp protein N - SARS-CoV
3.2.2. Xác định các thông số cơ bản cho bộ sinh phẩm MAC-ELISA chẩn đoán nhiễm virus SARS-CoV
3.2.3. Xác định thời gian sử dụng tối ưu của bộ sinh phẩm
3.2.4. Xác định độ nhạy của sinh phẩm
3.2.5. Thành phần bộ sinh phẩm
3.2.6. Phát hiện kháng thể IgM trong huyết thanh bệnh nhân SARS và nhân y tế có tiếp xúc trực tiếp với bệnh nhân SARS
3.3. Bàn luận
3.3.1. Một phương pháp chẩn đoán sớm trong phòng thí nghiệm có hiệu quả
3.3.2. Trong giai đoạn đầu của dịch SARS, một số phương pháp ELISA được giới thiệu
3.3.3. Bộ sinh phẩm MAC-ELISA phát hiện sớm nhiễm virus SARS
3.3.4. Toàn bộ bệnh nhân được xác định nhiễm virus SARS-CoV trên lâm sàng được khẳng định lại khi phát hiện được kháng thể IgM kháng đặc hiệu virus SARS –CoV thông qua phương pháp MAC-ELISA
3.3.5. Sự xuất hiện của kháng thể kháng đặc hiệu virus SARS-CoV trên một số người không có biểu hiện lâm sàng
3.4. Kết luận
3.5. Tài liệu tham khảo
