Khảo Sát Mức Độ Methyl Hóa Tại Vùng Promoter Của Gen DNMT3L Trên Bệnh Nhân Ung Thư Cổ Tử Cung

• Tác giả: Bùi Thị Tuyết Nga
• Người hướng dẫn: Th.S. Lê Thị Trúc Linh
• Trường học: Trường Đại Học Mở TP.HCM
• Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học
• Đề tài: Khảo Sát Mức Độ Methyl Hóa Tại Vùng Promoter Của Gen DNMT3L Trên Bệnh Nhân Ung Thư Cổ Tử Cung
• Loại tài liệu: khóa luận tốt nghiệp
• Năm xuất bản: 2011
• Địa điểm: TP HCM

• LỜI CẢM ƠN
• DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT
• I. SƠ LƯỢC VỀ UNG THƯ CỔ TỬ CUNG
• I.1. Tình hình ung thư, cụ thể ung thư cổ tử cung trên thế giới và ở Việt Nam
• I.1.1. Trên thế giới
• I.1.2. Tại Việt Nam
• I.2. Tác nhân gây bệnh
• I.2.1. Tác nhân
• I.2.2. Cơ chế gây bệnh nhiễm HPV
• I.3. Một số phương pháp chuẩn đoán
• I.4. Phết tế bào cổ tử cung
• I.5. Soi cổ tử cung (SCTC)
• I.6. Sinh thiết cổ tử cung
• I.7. Khoét chóp cổ tử cung
• I.8. Vaccine phòng ngừa ung thư cổ tử cung
• II. ĐẠI CƯƠNG HỌ GEN DNMTs
• II.1. Sự methyl hóa DNA
• II.2. Biến đổi histone
• II.3. DNA Cytosine -5- Methyltransferases
• II.3.1. DNMT3A và DNMT3B
• II.4. Phương pháp khảo sát mức độ methyl hóa gen DNMT3L trên bệnh nhân ung thư cổ tử cung
• III. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
• III.1. PHƯƠNG PHÁP
• III.1.1. Khảo sát in silico
• III.1.2. Các phần mềm và trang web sử dụng
• III.1.3. Phương pháp tiến hành
• III.1.4. Khảo sát thực nghiệm
• III.1.4.1. Tách chiết DNA
• III.1.4.2. Kiểm tra chất lượng DNA thu nhận
• III.1.4.3. Biến đổi bisulfite bằng Epitect Bisulfite Kit
• III.1.4.4. Phương pháp BSP
• IV. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• IV.1. KẾT QUẢ IN SILICO
• IV.2. Xác định trình tự gen, vùng cần khảo sát
• IV.2.1. Xác định các nhân tố phiên mã
• IV.2.2. Thiết kế và khảo sát các thông số của Primer
• IV.3. KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM
• IV.3.1. Kết quả tách chiết DNA và kiểm tra DNA bộ gen sau tách chiết
• IV.3.2. Tối ưu hóa điều kiện cho các phản ứng BSP để phát hiện tình trạng methyl hóa của gen DNMT3L sử dụng cặp mồi DNMT3L-S
• IV.4. Phản ứng BSP với DNMT3L
• V. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO
• PHỤ LỤC

I. Tổng Quan Về Khảo Sát Mức Độ Methyl Hóa Gen DNMT3L

Khảo sát mức độ methyl hóa gen DNMT3L trên bệnh nhân ung thư cổ tử cung là một nghiên cứu quan trọng. Nghiên cứu này không chỉ giúp hiểu rõ hơn về cơ chế bệnh lý mà còn mở ra hướng đi mới trong việc chẩn đoán và điều trị. Methyl hóa DNA là một quá trình sinh học có ảnh hưởng lớn đến sự biểu hiện gen và có thể dẫn đến sự phát triển của bệnh ung thư. Việc tìm hiểu mức độ methyl hóa của gen DNMT3L có thể cung cấp thông tin quý giá về tình trạng bệnh nhân.

1.1. Khái Niệm Về Methyl Hóa DNA

Methyl hóa DNA là quá trình thêm nhóm methyl vào DNA, ảnh hưởng đến sự biểu hiện gen. Quá trình này có thể điều chỉnh hoạt động của gen mà không thay đổi trình tự DNA. Sự thay đổi này có thể dẫn đến các bệnh lý, bao gồm ung thư.

1.2. Vai Trò Của Gen DNMT3L Trong Ung Thư

Gen DNMT3L đóng vai trò quan trọng trong việc duy trì mức độ methyl hóa DNA. Sự bất thường trong hoạt động của gen này có thể dẫn đến sự phát triển của các tế bào ung thư, đặc biệt là ung thư cổ tử cung.

II. Vấn Đề Methyl Hóa Gen DNMT3L Trên Bệnh Nhân Ung Thư Cổ Tử Cung

Mức độ methyl hóa gen DNMT3L trên bệnh nhân ung thư cổ tử cung đang là một vấn đề đáng quan tâm. Nghiên cứu cho thấy sự giảm methyl hóa ở gen này có thể liên quan đến sự phát triển của bệnh. Việc hiểu rõ vấn đề này sẽ giúp cải thiện khả năng chẩn đoán và điều trị cho bệnh nhân.

2.1. Tình Trạng Methyl Hóa Ở Bệnh Nhân

Nhiều nghiên cứu đã chỉ ra rằng bệnh nhân ung thư cổ tử cung có mức độ methyl hóa gen DNMT3L thấp hơn so với người khỏe mạnh. Điều này cho thấy sự bất thường trong quá trình methyl hóa có thể là yếu tố nguy cơ cho sự phát triển của bệnh.

2.2. Thách Thức Trong Việc Khảo Sát

Khảo sát mức độ methyl hóa gen DNMT3L gặp nhiều thách thức, bao gồm việc thu thập mẫu bệnh phẩm và phân tích chính xác mức độ methyl hóa. Các yếu tố như tuổi tác, tình trạng sức khỏe và phương pháp xét nghiệm cũng ảnh hưởng đến kết quả.

III. Phương Pháp Khảo Sát Mức Độ Methyl Hóa Gen DNMT3L

Để khảo sát mức độ methyl hóa gen DNMT3L, các phương pháp sinh học phân tử hiện đại được áp dụng. Các phương pháp này giúp xác định chính xác tình trạng methyl hóa và cung cấp thông tin cần thiết cho việc chẩn đoán và điều trị.

3.1. Phương Pháp Tách Chiết DNA

Tách chiết DNA từ mẫu bệnh phẩm là bước đầu tiên trong quá trình khảo sát. Phương pháp này cần đảm bảo chất lượng DNA thu được đạt yêu cầu để tiến hành các phân tích tiếp theo.

3.2. Phân Tích Methyl Hóa Bằng Phương Pháp BSP

Phương pháp BSP (Bisulfite Sequencing PCR) được sử dụng để phân tích mức độ methyl hóa của gen DNMT3L. Phương pháp này cho phép xác định chính xác vị trí methyl hóa trên DNA và đánh giá tình trạng methyl hóa của gen.

IV. Kết Quả Nghiên Cứu Về Methyl Hóa Gen DNMT3L

Kết quả nghiên cứu cho thấy có sự khác biệt rõ rệt về mức độ methyl hóa gen DNMT3L giữa bệnh nhân ung thư cổ tử cung và người khỏe mạnh. Những phát hiện này có thể giúp xác định biomarker tiềm năng cho việc chẩn đoán sớm bệnh.

4.1. Phân Tích Kết Quả Methyl Hóa

Kết quả phân tích cho thấy mức độ methyl hóa gen DNMT3L ở bệnh nhân ung thư cổ tử cung thấp hơn so với nhóm đối chứng. Điều này cho thấy sự bất thường trong methyl hóa có thể liên quan đến sự phát triển của bệnh.

4.2. Ứng Dụng Kết Quả Nghiên Cứu

Kết quả nghiên cứu có thể được ứng dụng trong việc phát triển các phương pháp chẩn đoán sớm và điều trị ung thư cổ tử cung. Việc xác định mức độ methyl hóa gen DNMT3L có thể giúp theo dõi tiến triển của bệnh.

V. Kết Luận Về Methyl Hóa Gen DNMT3L

Khảo sát mức độ methyl hóa gen DNMT3L trên bệnh nhân ung thư cổ tử cung là một nghiên cứu quan trọng. Những phát hiện từ nghiên cứu này có thể mở ra hướng đi mới trong việc chẩn đoán và điều trị bệnh. Cần tiếp tục nghiên cứu để xác định rõ hơn vai trò của gen này trong sự phát triển của ung thư cổ tử cung.

5.1. Tương Lai Của Nghiên Cứu

Nghiên cứu về methyl hóa gen DNMT3L cần được mở rộng để xác định rõ hơn mối liên hệ giữa methyl hóa và sự phát triển của ung thư cổ tử cung. Điều này có thể giúp phát triển các liệu pháp điều trị mới.

5.2. Khuyến Nghị Cho Nghiên Cứu Tiếp Theo

Cần có các nghiên cứu sâu hơn về cơ chế hoạt động của gen DNMT3L và ảnh hưởng của methyl hóa đến sự phát triển của ung thư. Việc này sẽ giúp cải thiện khả năng chẩn đoán và điều trị cho bệnh nhân.