TỔNG HỢP VÀ THIẾT LẬP TẬP CHẤT ĐỐI CHIẾU CỦA ALLOPURINOL SỬ DỤNG TRONG KIỂM NGHIỆM

Nghiên cứu tổng hợp, thiết lập chuẩn đối chiếu allopurinol dùng trong kiểm nghiệm. Đảm bảo chất lượng và độ tin cậy của thuốc allopurinol.

• Tác giả: Lữ Thiện Phúc
• Người hướng dẫn: PGS. Trương Ngọc Tuyến
• Trường học: Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh
• Chuyên ngành: Kiểm Nghiệm Thuốc và Độc Chất
• Đề tài: Tổng Hợp và Thiết Lập Tập Chất Đối Chiếu của Allopurinol Sử Dụng Trong Kiểm Nghiệm
• Loại tài liệu: Luận Án Tiến Sĩ Dược Học
• Năm xuất bản: 2024
• Địa điểm: Thành phố Hồ Chí Minh

Mục lục chi tiết

• LỜI CẢM ƠN
• LỜI CAM ĐOAN
• MỤC LỤC
• DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT VÀ THUẬT NGỮ ANH VIỆT
• DANH MỤC HÌNH
• 1. ĐẶT VẤN ĐỀ
• 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 2.1. Tổng quan về allopurinol và tạp chất liên quan
• 2.2. Kiểm nghiệm tạp chất allopurinol theo Dược điển tham chiếu và các công trình nghiên cứu
• 2.3. Mật số phương pháp xác định đá tinh khiết
• 2.4. Chất chuẩn đối chiếu
• 2.5. Tổng quan và thẩm định quy trình theo ICH Q2(R2) và phương pháp LC-MS/MS trong định lượng tạp chất liên quan
• 3. ĐÀI TẠNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 3.1. Thời gian và địa điểm nghiên cứu
• 3.2. Cỡ mẫu của nghiên cứu
• 3.3. Xác định các biến số đặc lập và biến phụ thuộc
• 3.4. Phương pháp và công cụ đo lường thu thập số liệu
• 3.5. Quy trình thu thập và cách phân tích số liệu
• 3.6. Phương pháp phân tích dữ liệu
• 3.7. Tổng hợp và tinh chất tạp chất liên quan của allopurinol
• 3.8. Xây dựng tiêu chuẩn và thiết lập tập chất đối chiếu của allopurinol
• 3.9. Xây dựng, thẩm định và ứng dụng quy trình định lượng dạng thải 6 tập A, B, C, D, E, F của allopurinol bằng LC-MS/MS
• 3.10. Bàn luận về quy trình tổng hợp và tinh chất 6 tập của allopurinol
• 3.11. Bàn luận về xây dựng và đánh giá tập chất đối chiếu của allopurinol
• 3.12. Bàn luận về xây dựng, thẩm định và ứng dụng quy trình định lượng dạng thải 6 tập A, B, C, D, E, F của allopurinol bằng LC-MS/MS
• 4. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• 4.1. Về tổng hợp 6 tập chất liên quan của allopurinol A, B, C, D, E, F ở quy mô phòng thí nghiệm
• 4.2. Về thiết lập tập chuẩn A, B, C, D, E, F đạt yêu cầu chất đối chiếu quốc gia
• 4.3. Về xây dựng, thẩm định và ứng dụng quy trình định lượng dạng thải 6 tập A, B, C, D, E, F của allopurinol bằng phương pháp LC-MS/MS
• DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng Quan Về Allopurinol Tác Dụng Ứng Dụng Kiểm Nghiệm

Ngày nay, cùng với sự phát triển của ngành công nghiệp dược, ngành dược Việt Nam cũng phát triển. Với hơn 280 nhà máy đạt chuẩn GMP-WHO, GMP-EU, các sản phẩm generic phổ biến như kháng viêm, điều trị gút, kháng sinh, tiểu đường và tim mạch. Allopurinol, một dược phẩm thiết yếu từ năm 2018, thường được chỉ định trong điều trị gút và tăng uric huyết thứ phát do hóa trị. Nhiều công ty dược phẩm nội địa sản xuất Allopurinol. Tuy nhiên, việc kiểm tra tạp liên quan gặp khó khăn do thiếu chuẩn tạp đầy đủ. Ngành công nghiệp dược Việt Nam phụ thuộc vào nhập khẩu Allopurinol. Kiểm tra chất lượng nguyên liệu đầu vào và thành phẩm là ưu tiên để đảm bảo chất lượng sản phẩm nội địa và ngoại nhập chứa hoạt chất Allopurinol. Trong quá trình tổng hợp, sản xuất, bảo quản, Allopurinol có thể tồn tại hoặc phát sinh tạp chất, gây độc tính, ảnh hưởng đến hiệu quả điều trị và an toàn cho bệnh nhân. Các nghiên cứu chỉ ra rằng tạp A và D là sản phẩm trung gian, tạp A và B là sản phẩm phân hủy khi gặp kiềm. Tạp C, E, F là sản phẩm phụ từ các chất tham gia phản ứng. Các tạp A, B, C, D, E, F có khả năng gây độc tính trên da và hội chứng Steven Johnson. Tạp F có khả năng gây đột biến gen và ung thư.

1.1. Dược chất Allopurinol Cấu trúc tính chất ứng dụng lâm sàng

Allopurinol là một dẫn xuất purine, có cấu trúc tương tự hypoxanthine. Nó hoạt động bằng cách ức chế enzyme xanthine oxidase, một enzyme quan trọng trong quá trình chuyển đổi hypoxanthine thành xanthine và xanthine thành acid uric. Bằng cách ức chế enzyme này, Allopurinol làm giảm sản xuất acid uric, giúp giảm nồng độ acid uric trong máu và nước tiểu. Allopurinol được sử dụng rộng rãi trong điều trị bệnh gút, tăng acid uric máu và sỏi thận do acid uric. Nó cũng được sử dụng trong điều trị các tình trạng khác liên quan đến tăng sản xuất acid uric, chẳng hạn như hội chứng ly giải khối u. Liều dùng Allopurinol thường bắt đầu từ liều thấp và tăng dần để đạt được mục tiêu giảm acid uric máu.

1.2. Tạp chất trong Allopurinol Nguồn gốc độc tính và kiểm soát

Tạp chất trong Allopurinol có thể phát sinh từ nhiều nguồn khác nhau, bao gồm các sản phẩm trung gian trong quá trình tổng hợp, các sản phẩm phân hủy do bảo quản không đúng cách, hoặc các chất ô nhiễm trong nguyên liệu đầu vào. Một số tạp chất có thể gây độc tính, ảnh hưởng đến hiệu quả điều trị hoặc gây ra các tác dụng phụ không mong muốn. Các Dược điển lớn như BP, USP và DĐVN đều quy định các giới hạn tạp chất cụ thể cho Allopurinol nhằm đảm bảo chất lượng và an toàn của thuốc. Kiểm soát tạp chất bao gồm kiểm tra nguyên liệu đầu vào, quy trình sản xuất và bảo quản, cũng như sử dụng các phương pháp phân tích phù hợp để xác định và định lượng tạp chất.

1.3. Các loại tạp chất chính trong Allopurinol

Các tạp chất chính trong Allopurinol bao gồm tạp chất A (4-aminopyrazolo[3,4-d]pyrimidine), tạp chất B (4-hydroxypyrazolo[3,4-d]pyrimidine-5-carbaldehyde), tạp chất C (4,6-dihydroxypyrazolo[3,4-d]pyrimidine), tạp chất D (4-hydroxypyrazolo[3,4-d]pyrimidine-5-carboxamide), tạp chất E (4-hydroxypyrazolo[3,4-d]pyrimidine-5-carboxylic acid), và tạp chất F (N-(4-hydroxypyrazolo[3,4-d]pyrimidin-5-yl)formamide). Mỗi tạp chất này có cấu trúc và tính chất hóa học khác nhau, và có thể gây ra các tác dụng phụ khác nhau. Việc kiểm soát và định lượng các tạp chất này là rất quan trọng để đảm bảo chất lượng và an toàn của dược phẩm Allopurinol.

II. Thách Thức Kiểm Nghiệm Allopurinol Thiếu Chuẩn Đối Chiếu Chi Phí Cao

Hiện nay, các chuyên luận của các dược điển tham chiếu và DĐVN V đều yêu cầu kiểm tra tạp chất liên quan Allopurinol là một tiêu chuẩn bắt buộc. Dược điển Anh (BP 2023) bắt buộc kiểm tra tạp A, B, C, D, E cả trong nguyên liệu và thành phẩm Allopurinol. DĐVN V và USP NF-2023 không yêu cầu kiểm tra tạp chất trong thành phẩm nhưng bắt buộc kiểm tra tạp A, B, C, D, E, F và hydrazin trong nguyên liệu Allopurinol như đầu vào của quá trình đăng ký, sản xuất. Trong khi đó, các chuẩn tạp này được bán với giá rất đắt, phải nhập khẩu từ nước ngoài với giá bán trung bình mỗi tạp là 2500 USD/100 mg (USP standard 2023) và một số tạp lại không sẵn có như tạp F. Vì thế gây không ít khó khăn cho công tác kiểm nghiệm nguyên liệu và chế phẩm chứa Allopurinol.

2.1. Vấn đề chuẩn đối chiếu Allopurinol Giá thành nguồn cung độ tinh khiết

Việc thiếu hụt và giá thành cao của chuẩn đối chiếu Allopurinol gây khó khăn lớn cho các phòng thí nghiệm kiểm nghiệm dược phẩm. Các chuẩn đối chiếu từ các nguồn uy tín như USP, EP, BP có giá thành rất cao, đặc biệt là khi cần kiểm tra nhiều tạp chất cùng lúc. Nguồn cung cũng có thể không ổn định, dẫn đến thời gian chờ đợi kéo dài. Độ tinh khiết của chuẩn đối chiếu cũng là một yếu tố quan trọng, vì nó ảnh hưởng trực tiếp đến độ chính xác của kết quả kiểm nghiệm. Do đó, việc tìm kiếm các giải pháp thay thế, chẳng hạn như tự tổng hợp chuẩn đối chiếu hoặc sử dụng các phương pháp phân tích thay thế, là rất cần thiết.

2.2. Ảnh hưởng của việc thiếu chuẩn đối chiếu đến kiểm soát chất lượng Allopurinol

Việc thiếu chuẩn đối chiếu Allopurinol có thể ảnh hưởng nghiêm trọng đến khả năng kiểm soát chất lượng của các sản phẩm chứa Allopurinol. Nếu không có chuẩn đối chiếu phù hợp, việc xác định và định lượng các tạp chất có thể không chính xác, dẫn đến nguy cơ sản phẩm không đạt tiêu chuẩn chất lượng lưu hành trên thị trường. Điều này có thể gây hại cho sức khỏe của người bệnh. Ngoài ra, việc thiếu chuẩn đối chiếu cũng có thể gây khó khăn cho việc phát triển và thẩm định các phương pháp phân tích mới.

III. Tổng Hợp Allopurinol Phương Pháp Quy Trình và Kiểm Soát Tạp Chất

Trên thế giới hiện có một số công trình nghiên cứu liên quan đến tạp chất của Allopurinol, nhưng chưa có công trình nào công bố về thiết lập chuẩn tạp, cũng như quy trình định lượng đồng thời các tạp chất liên quan trong thành phẩm bằng các kỹ thuật phân tích hiện đại như sắc ký lỏng hiệu năng cao ghép đầu dò khối phổ 2 lần. Cho đến nay chưa có nghiên cứu nào trong nước công bố quy trình tổng hợp các tạp liên quan Allopurinol.

3.1. Các phương pháp tổng hợp Allopurinol và tạp chất liên quan

Có nhiều phương pháp khác nhau để tổng hợp Allopurinol và các tạp chất liên quan. Một số phương pháp phổ biến bao gồm phản ứng Robins, phản ứng Traube và các biến thể của chúng. Mỗi phương pháp có ưu và nhược điểm riêng về hiệu suất, độ tinh khiết và tính khả thi. Việc lựa chọn phương pháp tổng hợp phù hợp phụ thuộc vào nhiều yếu tố, bao gồm quy mô sản xuất, chi phí và yêu cầu về chất lượng. Việc kiểm soát các điều kiện phản ứng, chẳng hạn như nhiệt độ, thời gian và tỷ lệ các chất phản ứng, là rất quan trọng để giảm thiểu sự hình thành tạp chất.

3.2. Kiểm soát tạp chất trong quá trình tổng hợp Allopurinol

Việc kiểm soát tạp chất trong quá trình tổng hợp Allopurinol là rất quan trọng để đảm bảo chất lượng của sản phẩm cuối cùng. Các biện pháp kiểm soát bao gồm sử dụng nguyên liệu đầu vào có độ tinh khiết cao, tối ưu hóa các điều kiện phản ứng để giảm thiểu sự hình thành tạp chất, và sử dụng các phương pháp tinh chế hiệu quả để loại bỏ tạp chất. Các phương pháp tinh chế phổ biến bao gồm kết tinh lại, sắc ký và chiết. Cần thực hiện phân tích định kỳ trong suốt quá trình tổng hợp để theo dõi sự hình thành tạp chất và điều chỉnh các điều kiện phản ứng khi cần thiết.

IV. Thiết Lập Chuẩn Đối Chiếu Allopurinol Quy Trình Tiêu Chuẩn và Đánh Giá

Mục tiêu của đề tài là: 1. Tổng hợp 6 tạp chất liên quan của allopurinol A, B, C, D, E, F ở quy mô phòng thí nghiệm. Xây dựng tiêu chuẩn và thiết lập tạp chất đối chiếu của allopurinol A, B, C, D, E, F đạt yêu cầu chất đối chiếu quốc gia. Xây dựng, thẩm định và ứng dụng quy trình định lượng đồng thời 6 tạp A, B, C, D, E, F của allopurinol bằng phương pháp LC-MS/MS.

4.1. Xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho chuẩn đối chiếu Allopurinol

Việc xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cho chuẩn đối chiếu Allopurinol là một bước quan trọng để đảm bảo chất lượng và độ tin cậy của các kết quả kiểm nghiệm. Các tiêu chuẩn này bao gồm các yêu cầu về độ tinh khiết, hàm lượng nước, hàm lượng tro sulfat, kim loại nặng và các tạp chất khác. Độ tinh khiết của chuẩn đối chiếu phải được xác định bằng các phương pháp phân tích phù hợp, chẳng hạn như HPLC, NMR và MS. Các tiêu chuẩn này phải tuân thủ các hướng dẫn của các tổ chức quốc tế như ICH và USP.

4.2. Đánh giá chất lượng chuẩn đối chiếu Allopurinol Phương pháp tiêu chí

Việc đánh giá chất lượng chuẩn đối chiếu Allopurinol là một quá trình quan trọng để đảm bảo rằng chuẩn đối chiếu đáp ứng các tiêu chuẩn chất lượng đã đặt ra. Các phương pháp đánh giá bao gồm xác định độ tinh khiết, xác định hàm lượng, xác định độ ổn định và kiểm tra tính đồng nhất. Các tiêu chí đánh giá phải được xác định rõ ràng và tuân thủ các hướng dẫn của các tổ chức quốc tế. Kết quả đánh giá phải được ghi lại đầy đủ và được sử dụng để xác định xem chuẩn đối chiếu có phù hợp để sử dụng hay không.

4.3. Phương pháp Kiểm nghiệm Allopurinol

Các phương pháp kiểm nghiệm Allopurinol bao gồm sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) để định lượng Allopurinol và tạp chất, phương pháp quang phổ tử ngoại khả kiến (UV-Vis) để xác định hàm lượng Allopurinol, và phương pháp sắc ký khí khối phổ (GC-MS) để xác định các tạp chất bay hơi. Các phương pháp này phải được thẩm định để đảm bảo tính chính xác, độ lặp lại và độ tin cậy. Các phương pháp kiểm nghiệm phải tuân thủ các hướng dẫn của các tổ chức quốc tế như ICH và USP.

V. Nghiên Cứu Kiểm Nghiệm Allopurinol LC MS MS Kết Quả và Thảo Luận

Tổng quan tài liệu về allopurinol và tạp chất liên quan. Kiểm nghiệm tạp chất allopurinol theo Dược điển tham chiếu và các công trình nghiên cứu. Một số phương pháp xác định độ tinh khiết. Chất chuẩn đối chiếu. Tổng quan về thẩm định quy trình theo ICH Q2(R2) và phương pháp LC-MS/MS trong định lượng tạp chất liên quan.

5.1. Ứng dụng LC MS MS trong kiểm nghiệm Allopurinol Ưu điểm và thách thức

Sắc ký lỏng ghép khối phổ (LC-MS/MS) là một kỹ thuật phân tích mạnh mẽ, được sử dụng rộng rãi trong kiểm nghiệm Allopurinol. Kỹ thuật này có độ nhạy và độ chọn lọc cao, cho phép xác định và định lượng đồng thời nhiều tạp chất với độ chính xác cao. Tuy nhiên, LC-MS/MS cũng có một số thách thức, bao gồm chi phí thiết bị đắt đỏ, yêu cầu kỹ năng vận hành cao và khả năng gây nhiễu từ các chất nền phức tạp. Do đó, việc phát triển và thẩm định các phương pháp LC-MS/MS cho Allopurinol đòi hỏi sự cẩn thận và kinh nghiệm.

5.2. Kết quả nghiên cứu kiểm nghiệm Allopurinol bằng LC MS MS

Các kết quả nghiên cứu kiểm nghiệm Allopurinol bằng LC-MS/MS cho thấy rằng kỹ thuật này có thể được sử dụng để xác định và định lượng một loạt các tạp chất trong Allopurinol, bao gồm các sản phẩm trung gian trong quá trình tổng hợp, các sản phẩm phân hủy và các chất ô nhiễm khác. Các kết quả này cũng cho thấy rằng các phương pháp LC-MS/MS có độ chính xác và độ lặp lại cao, đáp ứng các yêu cầu của các tổ chức quốc tế. Các kết quả này có thể được sử dụng để cải thiện quy trình sản xuất Allopurinol và đảm bảo chất lượng của sản phẩm cuối cùng.

VI. Kết Luận và Kiến Nghị Allopurinol Tạp Chất và Kiểm Soát Chất Lượng

Về tổng hợp 6 tạp chất liên quan của allopurinol A, B, C, D, E, F ở quy mô phòng thí nghiệm. Về thiết lập tạp chuẩn A, B, C, D, E, F đạt yêu cầu chất đối chiếu quốc gia. Về xây dựng, thẩm định và ứng dụng quy trình định lượng đồng thời 6 tạp A, B, C, D, E, F của allopurinol bằng phương pháp LC-MS/MS.

6.1. Tổng kết về quá trình tổng hợp và thiết lập chuẩn đối chiếu Allopurinol

Quá trình tổng hợp và thiết lập chuẩn đối chiếu Allopurinol đòi hỏi sự cẩn thận và kinh nghiệm trong việc lựa chọn phương pháp tổng hợp, kiểm soát tạp chất và đánh giá chất lượng. Các bước quan trọng bao gồm lựa chọn phương pháp tổng hợp phù hợp, sử dụng nguyên liệu đầu vào có độ tinh khiết cao, tối ưu hóa các điều kiện phản ứng, sử dụng các phương pháp tinh chế hiệu quả, xây dựng tiêu chuẩn chất lượng và đánh giá chất lượng chuẩn đối chiếu.

6.2. Kiến nghị về kiểm soát chất lượng Allopurinol và chuẩn đối chiếu

Cần tăng cường kiểm soát chất lượng Allopurinol bằng cách sử dụng các phương pháp phân tích hiện đại như LC-MS/MS, thiết lập các tiêu chuẩn chất lượng nghiêm ngặt và tăng cường đào tạo cho các cán bộ kiểm nghiệm. Cần khuyến khích các nghiên cứu về tổng hợp và thiết lập chuẩn đối chiếu Allopurinol để giảm sự phụ thuộc vào nguồn cung nước ngoài và giảm chi phí kiểm nghiệm. Cần tăng cường hợp tác giữa các phòng thí nghiệm, các nhà sản xuất và các cơ quan quản lý để đảm bảo chất lượng và an toàn của Allopurinol.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Trong bối cảnh phát triển mạnh mẽ của ngành công nghiệp dược phẩm Việt Nam với hơn 280 nhà máy đạt chuẩn GMP-WHO và GMP-EU, việc kiểm soát chất lượng nguyên liệu và thành phẩm thuốc ngày càng trở nên cấp thiết. Allopurinol, một thuốc thiết yếu trong điều trị bệnh gout và tăng acid uric máu, đã được Bộ Y tế đưa vào danh mục thuốc thiết yếu từ năm 2018. Tuy nhiên, việc kiểm nghiệm các tạp chất liên quan đến allopurinol vẫn còn nhiều khó khăn do thiếu các chuẩn đối chiếu nội địa và quy trình phân tích hiện đại.

Mục tiêu nghiên cứu là tổng hợp 6 tạp chất liên quan của allopurinol (A, B, C, D, E, F) ở quy mô phòng thí nghiệm, xây dựng tiêu chuẩn và thiết lập chuẩn đối chiếu đạt yêu cầu quốc gia, đồng thời phát triển quy trình định lượng các tạp chất này trong nguyên liệu và thành phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ LC-MS/MS. Nghiên cứu được thực hiện tại các phòng thí nghiệm kiểm nghiệm dược phẩm tại TP. Hồ Chí Minh trong giai đoạn 2022-2024.

Nghiên cứu có ý nghĩa quan trọng trong việc nâng cao năng lực kiểm nghiệm nội địa, giảm phụ thuộc vào nhập khẩu chuẩn đối chiếu đắt đỏ (trung bình 2500 USD/100 mg), đồng thời góp phần đảm bảo chất lượng, an toàn và hiệu quả điều trị của thuốc allopurinol trên thị trường Việt Nam. Các chỉ số đánh giá như độ tinh khiết, độ ổn định và giới hạn phát hiện tạp chất được xác định cụ thể nhằm đáp ứng các tiêu chuẩn quốc tế và dược điển Việt Nam.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu dựa trên các lý thuyết và mô hình sau:

• Lý thuyết tổng hợp hóa dược: Áp dụng các quy trình tổng hợp hóa học để tạo ra 6 tạp chất liên quan allopurinol, dựa trên các phản ứng hóa học đã được công bố trong tài liệu quốc tế như quy trình của Roland K. Robins (1956) và Jean Druey (1959).
• Mô hình phân tích sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS/MS): Sử dụng kỹ thuật sắc ký lỏng kết hợp khối phổ với Multiple Reaction Monitoring (MRM) để định lượng chính xác các tạp chất dựa trên khối lượng phân tử đặc trưng và các ion con phân mảnh.
• Khái niệm tạp chất liên quan (Related Substances): Bao gồm các tạp chất trung gian, sản phẩm phân hủy hoặc sản phẩm phụ phát sinh trong quá trình tổng hợp, bảo quản và lưu hành thuốc, có thể ảnh hưởng đến tính an toàn và hiệu quả của thuốc.
• Tiêu chuẩn thẩm định quy trình phân tích theo hướng dẫn ICH Q2(R2): Đánh giá các chỉ tiêu như tính đặc hiệu, độ tuyến tính, độ chính xác, độ đúng, giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ).
• Khái niệm chuẩn đối chiếu hóa học (Chemical Reference Standards): Phân loại chuẩn đối chiếu chính (PCRS), chuẩn đối chiếu quốc tế (ICRS) và chuẩn đối chiếu thứ cấp (SCRS) nhằm đảm bảo tính nhất quán và độ tin cậy trong kiểm nghiệm.

Phương pháp nghiên cứu

• Nguồn dữ liệu: Dữ liệu thu thập từ các phòng thí nghiệm kiểm nghiệm dược phẩm tại TP. Hồ Chí Minh, tài liệu khoa học quốc tế, dược điển Việt Nam V, Dược điển Anh (BP 2023), Dược điển Mỹ (USP-NF 2023) và các công trình nghiên cứu liên quan.
• Cỡ mẫu: Tổng hợp 6 tạp chất liên quan allopurinol với số lượng mẫu tối thiểu 18 lô cho mỗi tạp chất để đánh giá độ ổn định và độ tinh khiết.
• Phương pháp chọn mẫu: Lựa chọn mẫu dựa trên quy trình tổng hợp chuẩn hóa, đảm bảo tính đại diện và độ tinh khiết cao.
• Phương pháp phân tích:
  • Tổng hợp tạp chất theo các quy trình hóa học đã được chuẩn hóa.
  • Xác định độ tinh khiết bằng phương pháp nhiệt độ nóng chảy, sắc ký lớp mỏng (TLC), phổ hồng ngoại (IR), phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR).
  • Thiết lập và thẩm định quy trình định lượng tạp chất bằng LC-MS/MS với các chỉ tiêu thẩm định theo ICH Q2(R2).
• Timeline nghiên cứu:
  • Giai đoạn 1 (6 tháng): Tổng hợp và tinh chế 6 tạp chất liên quan.
  • Giai đoạn 2 (6 tháng): Xác định đặc tính vật lý, hóa học và độ tinh khiết.
  • Giai đoạn 3 (12 tháng): Thiết lập, thẩm định quy trình LC-MS/MS và xây dựng chuẩn đối chiếu.
  • Giai đoạn 4 (6 tháng): Ứng dụng quy trình vào kiểm nghiệm nguyên liệu và thành phẩm.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

1. Tổng hợp thành công 6 tạp chất liên quan allopurinol (A, B, C, D, E, F) với độ tinh khiết đạt trên 98,5% theo đánh giá DSC và sắc ký lớp mỏng. Hiệu suất tổng hợp dao động từ 72,5% đến 95% tùy từng tạp chất, trong đó tạp chất A đạt hiệu suất 80-95%, tạp chất B đạt 91%, tạp chất C đạt 75-80%.

2. Thiết lập chuẩn đối chiếu hóa học đạt tiêu chuẩn quốc gia với các chỉ tiêu vật lý, hóa học và độ ổn định phù hợp. Các chuẩn đối chiếu được bảo quản ở nhiệt độ 2-8°C, đảm bảo độ ổn định trên 3 năm theo quy định ASEAN Chemical Reference Standard (ACRS).

3. Phát triển quy trình định lượng tạp chất bằng LC-MS/MS với thời gian phân tích rút ngắn còn khoảng 16,5 phút, độ phân giải các tạp chất B và C đạt trên 1,5 (vượt tiêu chuẩn dược điển), giới hạn phát hiện (LOD) đạt khoảng 0,01%, giới hạn định lượng (LOQ) khoảng 0,05%.

4. So sánh với các quy trình sắc ký truyền thống (HPLC-UV/DAD) cho thấy phương pháp LC-MS/MS có độ nhạy và độ đặc hiệu cao hơn, đặc biệt trong việc tách biệt tạp chất B và C, cũng như phát hiện tạp chất F có khả năng gây đột biến gen.

Thảo luận kết quả

Việc tổng hợp và thiết lập chuẩn đối chiếu 6 tạp chất liên quan allopurinol là bước tiến quan trọng giúp giảm chi phí và thời gian kiểm nghiệm, đồng thời nâng cao độ tin cậy kết quả kiểm nghiệm trong nước. Các quy trình tổng hợp được tối ưu hóa để sử dụng các hóa chất phổ biến, giảm thiểu phản ứng phụ và tăng hiệu suất.

Phương pháp LC-MS/MS được lựa chọn do khả năng phân tích đặc hiệu dựa trên khối lượng phân tử và các ion con phân mảnh, giúp giải quyết hạn chế của các phương pháp sắc ký UV truyền thống như tạp chất B và C có pic gần nhau, gây khó khăn trong phân tích định lượng. Kết quả thẩm định quy trình đáp ứng đầy đủ các tiêu chuẩn ICH Q2(R2), đảm bảo tính chính xác, độ lặp lại và độ tuyến tính cao.

So với các nghiên cứu quốc tế, quy trình tổng hợp và phân tích trong nghiên cứu này có sự cải tiến về thời gian phân tích và độ phân giải, phù hợp với điều kiện phòng thí nghiệm trong nước. Việc thiết lập chuẩn đối chiếu nội địa cũng góp phần giảm phụ thuộc vào nhập khẩu chuẩn đối chiếu đắt đỏ, đồng thời tăng cường năng lực kiểm nghiệm thuốc của các cơ sở trong nước.

Dữ liệu có thể được trình bày qua biểu đồ so sánh hiệu suất tổng hợp từng tạp chất, bảng tổng hợp các chỉ tiêu thẩm định quy trình LC-MS/MS và biểu đồ phân giải sắc ký thể hiện sự tách biệt rõ ràng các tạp chất.

Đề xuất và khuyến nghị

1. Triển khai áp dụng quy trình LC-MS/MS trong kiểm nghiệm nguyên liệu và thành phẩm allopurinol tại các phòng kiểm nghiệm dược phẩm trong vòng 12 tháng tới nhằm nâng cao độ chính xác và hiệu quả kiểm soát chất lượng.

2. Xây dựng kho chuẩn đối chiếu nội địa cho 6 tạp chất liên quan allopurinol tại Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung ương và Viện Kiểm nghiệm Thuốc TP. Hồ Chí Minh, đảm bảo cung cấp chuẩn đối chiếu ổn định, giảm chi phí nhập khẩu.

3. Đào tạo chuyên sâu cho cán bộ kiểm nghiệm về kỹ thuật LC-MS/MS và quy trình thẩm định chuẩn đối chiếu trong 6 tháng, nâng cao năng lực phân tích và đánh giá chất lượng thuốc.

4. Khuyến khích các nhà sản xuất dược phẩm trong nước áp dụng quy trình kiểm nghiệm mới để đảm bảo chất lượng nguyên liệu đầu vào và thành phẩm, góp phần nâng cao uy tín sản phẩm trên thị trường.

5. Đề xuất Bộ Y tế và các cơ quan quản lý xem xét cập nhật chuyên luận kiểm nghiệm tạp chất allopurinol trong dược điển Việt Nam dựa trên kết quả nghiên cứu nhằm phù hợp với tiêu chuẩn quốc tế và thực tiễn trong nước.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

1. Các nhà kiểm nghiệm dược phẩm: Nghiên cứu cung cấp quy trình tổng hợp chuẩn đối chiếu và phương pháp phân tích hiện đại, giúp nâng cao chất lượng kiểm nghiệm nguyên liệu và thành phẩm allopurinol.

2. Các nhà sản xuất thuốc generic: Tham khảo để áp dụng quy trình kiểm soát chất lượng tạp chất, đảm bảo sản phẩm đạt tiêu chuẩn an toàn và hiệu quả, giảm thiểu rủi ro về độc tính.

3. Cơ quan quản lý dược và y tế: Sử dụng kết quả nghiên cứu làm cơ sở khoa học để xây dựng chính sách, quy định kiểm nghiệm và quản lý chất lượng thuốc trong nước.

4. Các nhà nghiên cứu và sinh viên ngành kiểm nghiệm thuốc và hóa dược: Tài liệu tham khảo quý giá về kỹ thuật tổng hợp tạp chất, thiết lập chuẩn đối chiếu và ứng dụng LC-MS/MS trong phân tích dược phẩm.

Câu hỏi thường gặp

1. Tại sao cần kiểm tra tạp chất liên quan trong allopurinol?
   Tạp chất liên quan có thể ảnh hưởng đến hiệu quả và an toàn của thuốc, một số tạp chất như tạp chất F có khả năng gây đột biến gen và dị ứng nghiêm trọng. Kiểm tra giúp đảm bảo thuốc đạt tiêu chuẩn chất lượng.

2. Phương pháp LC-MS/MS có ưu điểm gì so với HPLC-UV truyền thống?
   LC-MS/MS có độ nhạy và độ đặc hiệu cao hơn, khả năng tách biệt các tạp chất có cấu trúc tương tự tốt hơn, thời gian phân tích ngắn và phát hiện được các tạp chất ở nồng độ rất thấp.

3. Chuẩn đối chiếu nội địa có thể thay thế chuẩn nhập khẩu không?
   Chuẩn đối chiếu nội địa được thiết lập và thẩm định nghiêm ngặt có thể thay thế chuẩn nhập khẩu, giúp giảm chi phí và thời gian kiểm nghiệm, đồng thời tăng cường năng lực kiểm nghiệm trong nước.

4. Quy trình tổng hợp tạp chất có thể áp dụng cho sản xuất công nghiệp không?
   Quy trình tổng hợp được tối ưu cho quy mô phòng thí nghiệm, tuy nhiên có thể được điều chỉnh và mở rộng để áp dụng trong sản xuất công nghiệp với các bước kiểm soát chất lượng nghiêm ngặt.

5. Làm thế nào để bảo quản chuẩn đối chiếu đạt độ ổn định lâu dài?
   Chuẩn đối chiếu nên được bảo quản trong điều kiện nhiệt độ 2-8°C, tránh ánh sáng và độ ẩm cao, đóng gói kín và kiểm tra định kỳ theo chu kỳ 3 năm để đảm bảo độ ổn định và tính chính xác.

Kết luận

• Đã tổng hợp thành công 6 tạp chất liên quan allopurinol với độ tinh khiết trên 98,5%, đáp ứng yêu cầu kiểm nghiệm.
• Thiết lập chuẩn đối chiếu nội địa đạt tiêu chuẩn quốc gia, giảm phụ thuộc nhập khẩu và chi phí kiểm nghiệm.
• Phát triển và thẩm định quy trình định lượng tạp chất bằng LC-MS/MS với độ phân giải và độ nhạy cao, thời gian phân tích rút ngắn.
• Quy trình phân tích đáp ứng đầy đủ các tiêu chuẩn ICH Q2(R2), đảm bảo tính chính xác, độ lặp lại và độ tuyến tính.
• Đề xuất áp dụng rộng rãi quy trình và chuẩn đối chiếu trong kiểm nghiệm nguyên liệu và thành phẩm allopurinol tại các phòng thí nghiệm trong nước.

Các cơ sở kiểm nghiệm và nhà sản xuất thuốc nên phối hợp triển khai áp dụng quy trình và chuẩn đối chiếu mới, đồng thời phối hợp với cơ quan quản lý để cập nhật chuyên luận kiểm nghiệm phù hợp. Để biết thêm chi tiết và hỗ trợ kỹ thuật, vui lòng liên hệ Viện Kiểm nghiệm Thuốc TP. Hồ Chí Minh.

Trích đoạn nội dung tài liệu

Bà GIÁO DĀC VÀ ĐÀO T¾O Bà Y TÀ Đ¾I HâC Y D¯ĀC THÀNH PHà Hâ CHÍ MINH LĂ THIÞN PHÚC TäNG HĀP VÀ THI¾T LÂP T¾P CHÂT ĐàI CHI¾U CĄA ALLOPURINOL SĀ DĂNG TRONG KIÂM NGHIÞM LUÂN ÁN TI¾N S) D¯ĀC HâC TP. Hà CHÍ MINH – Năm 2024 Bà GIÁO DĀC VÀ ĐÀO T¾O Bà Y TÀ Đ¾I HâC Y D¯ĀC THÀNH PHà Hâ CHÍ MINH LĂ THIÞN PHÚC TäNG HĀP VÀ THI¾T LÂP T¾P CHÂT ĐàI CHI¾U CĄA ALLOPURINOL SĀ DĂNG TRONG KIÂM NGHIÞM NGÀNH: KIÂM NGHIÞM THUàC VÀ ĐÞC CHÂT Mà Sà: 62720410 LUÂN ÁN TI¾N S) D¯ĀC HâC NG¯âI H¯àNG DÀN KHOA HâC PGS. TR¯¡NG NGàC TUYÂN PGS. TRÀN VIàT HÙNG TP.

Hà CHÍ MINH – Năm 2024 i LâI CÀM ¡N Tôi xin chân thành cảm ¢n Quý ThÁy, Cô thuác Đ¿i hác Y D°ÿc TP.HCM; Tr°ßng Đ¿i hác Y D°ÿc CÁn Th¢ và Vián kiểm nghiám thußc TP.HCM đã t¿o điÃu kián cho tôi thực hián nghiên cąu và thu thập sß liáu. Tôi cũng xin gái lßi cám ¢n sâu sắc đÁn ThÁy, Cô, anh, chß và các b¿n đáng nghiáp đã quan tâm, giúp đỡ và đáng viên tôi trong sußt quá trình nghiên cąu. Xin gái lßi cám ¢n đÁn gia đình luôn là chß dựa tinh thÁn vững chắc cho tôi. Tôi cũng xin phép tỏ lòng biÁt ¢n PGS.

Tr°¢ng Ngác TuyÃn, PGS. TrÁn Viát Hùng đã tận tâm h°ớng dẫn tôi thực hián đà tài nghiên cąu này. Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2024 Tác giÁ Lữ Thián Phúc ii LâI CAM ĐOAN Tôi tên là Lữ Thián Phúc, là Nghiên cąu sinh ngành kiểm nghiám thußc – Đác ch¿t, khóa 2017 – 2020, xin cam đoan: (1) Luận án là do chính bản thân tôi thực hián, d°ới sự h°ớng dẫn khoa hác căa PGS. Tr°¢ng Ngác TuyÃn; PGS.

TrÁn Viát Hùng (2) Các tài liáu tham khảo đ°ÿc tôi xem xét, chán lác kỹ l°ỡng, trích dẫn và liát kê tài liáu tham khảo đÁy đă; (3) KÁt quả trình bày trong luận án đ°ÿc hoàn thành dựa trên các kÁt quả nghiên cąu căa bản thân tôi và các kÁt quả căa nghiên cąu này ch°a đ°ÿc dùng cho b¿t cą đà tài cùng c¿p nào khác. Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2024 Ng°ãi h°áng dÁn Tác giÁ thực hißn PGS. Tr°¢ng Ngác TuyÃn PGS. TrÁn Viát Hùng Lữ Thián Phúc iii MĂC LĂC LâI CÀM ¡N.

i LâI CAM ĐOAN. iii DANH MĂC CHĂ VI¾T TÄT VÀ THUÂT NGĂ ANH VIÞT. xi DANH MĂC HÌNH. xiii ĐÀT VÂN ĐÀ.

TäNG QUAN TÀI LIÞU. Tổng quan và allopurinol và t¿p ch¿t liên quan. Kiểm nghiám t¿p ch¿t allopurinol theo D°ÿc điển tham chiÁu và các công trình nghiên cąu. Mát sß ph°¢ng pháp xác đßnh đá tinh khiÁt.

Ch¿t chuẩn đßi chiÁu. Tổng quan và thẩm đßnh quy trình theo ICH Q2(R2) và ph°¢ng pháp LC- MS/MS trong đßnh l°ÿng t¿p ch¿t liên quan. ĐàI T¯ĀNG VÀ PH¯¡NG PHÁP NGHIÊN CĆU. Thßi gian và đßa điểm nghiên cąu.

Cỡ mẫu căa nghiên cąu. Xác đßnh các biÁn sß đác lập và biÁn phā thuác. Ph°¢ng pháp và công cā đo l°ßng thu thập sß liáu. Quy trình thu thập và cách phân tích sß liáu.

Ph°¢ng pháp phân tích dữ liáu. Tổng hÿp và tinh chÁ t¿p ch¿t liên quan căa allopurinol. Xây dựng tiêu chuẩn và thiÁt lập t¿p ch¿t đßi chiÁu căa allopurinol. Xây dựng, thẩm đßnh và ąng dāng quy trình đßnh l°ÿng đáng thßi 6 t¿p A, B, C, D, E, F căa allopurinol bằng LC-MS/MS.

Bàn luận và quy trình tổng hÿp và tinh chÁ 6 t¿p căa allopurinol. Bàn luận và xây dựng và đánh giá t¿p ch¿t đßi chiÁu căa allopurinol. Bàn luận và xây dựng, thẩm đßnh và ąng dāng quy trình đßnh l°ÿng đáng thßi 6 t¿p A, B, C, D, E, F căa allopurinol bằng LC-MS/MS. K¾T LUÂN VÀ KI¾N NGHà.

Và tổng hÿp 6 t¿p ch¿t liên quan căa allopurinol A, B, C, D, E, F á quy mô phòng thí nghiám. Và thiÁt lập t¿p chuẩn A, B, C, D, E, F đ¿t yêu cÁu ch¿t đßi chiÁu qußc gia. Và xây dựng, thẩm đßnh và ąng dāng quy trình đßnh l°ÿng đáng thßi 6 t¿p A, B, C, D, E, F căa allopurinol bằng ph°¢ng pháp LC-MS/MS .150 DANH MĂC CÁC CÔNG TRÌNH Đà CÔNG Bà TÀI LIÞU THAM KHÀO PHĂ LĂC v DANH MĂC CHĂ VI¾T TÄT VÀ THUÂT NGĂ ANH VIÞT Chă vi¿t tÅt Tÿ nguyên Ngh*a ACN Acetonitrile Acetonitril ADN Acid Deoxyribonucleic Vật liáu di truyÃn ASEAN Association of South East Hiáp hái các Qußc gia Đông Nam Asian Nations Á ACRS ASEAN Chemical Reference Ch¿t chuẩn đßi chiÁu ASEAN Standard BP British Pharmacopoeia D°ÿc điển Anh CCĐC Ch¿t chuẩn đßi chiÁu Ch¿t chuẩn đßi chiÁu CĐC Ch¿t đßi chiÁu Ch¿t đßi chiÁu CE Capillary electrophoresis Đián di mao quản CTPT Công thąc phân tử Công thąc phân tử DAD Detector Diod Array ĐÁu dò dãy diod quang DĐVN D°ÿc điển Viát Nam D°ÿc điển Viát Nam DMSO Dimethyl sulfoxide Dimethyl sulfoxid DSC Differential scanning Phân tích nhiát quét vi sai calorimetry EDQM European Directorate for the Hái đáng châu Âu và ch¿t l°ÿng Quality of Medicines and thußc và chăm sóc sąc khỏe HealthCare EEMCA Ethyl-(ethoxymethylen) Ethyl-(ethoxymethylen) cyanoacetat cyanoacetat FDA Food and Drug Administration Cāc quản lý Thực phẩm và D°ÿc phẩm Hoa Kỳ GC Gas chromatography Sắc ký khí GLP Good Laboratory Practice Thực hành tßt phòng thí nghiám GMP Good Manufacturing Practice Thực hành tßt sản xu¿t thußc vi GPP Good Pharmacy Practice Thực hành tßt quản lý nhà thußc GTAĐ Giá trß ¿n đßnh Giá trß ¿n đßnh LC Liquid chromatography Sắc ký lỏng LOD Limit of detection Giới h¿n phát hián LOQ Limit of quantitation Giới h¿n đßnh l°ÿng HPLC High-performance liquid Sắc ký lỏng hiáu năng cao chromatography HRMS High Resolution Mass Khßi phổ phân giải cao Spectrometry ICH International Conference on Hái nghß qußc tÁ và hài hòa hóa Harmonization các thă tāc đăng ký d°ÿc phẩm sử dāng cho con ng°ßi ICRS International Chemical Ch¿t chuẩn qußc tÁ Reference Substances IR Infrared red Háng ngo¿i ISO International Organization for Tổ chąc tiêu chuẩn hóa qußc tÁ Standardization NT Nguyên tr¿ng Nguyên tr¿ng MRM Multiple Reaction Monitoring ChÁ đá quét kiểm tra đa phản ąng MS Mass spectrometry Khßi phổ NMR Nuclear Magnetic Resonance Cáng h°áng từ h¿t nhân PCRS Primary chemical reference Ch¿t chuẩn đßi chiÁu hóa hác gßc standard PL Phā lāc Phā lāc PPPT Ph°¢ng pháp phân tích Ph°¢ng pháp phân tích PTN Phòng thí nghiám Phòng thí nghiám Rf Retention factor Há sß di chuyển Rs Resolution Đá phân giải RSD Relative Standard Deviation Đá lách chuẩn t°¢ng đßi vii SIM Selected Ion Monitoring ChÁ đá quét ion chán lác SKLM Sắc ký lớp mỏng Sắc ký lớp mỏng SRM Selected Reaction Monitoring ChÁ đá quét chán lác phản ąng ion US United States Hÿp chăng qußc Hoa Kỳ UPLC Ultra Performance Liquid Sắc ký lỏng siêu hiáu năng Chromatography USP United States Pharmacopoeia D°ÿc điển Hoa Kỳ UV Ultraviolet Tia tử ngo¿i WHO World Health Organization Tổ chąc Y tÁ thÁ giới viii DANH MĂC BÀNG BÁng 1. Giới h¿n các t¿p allopurinol theo DĐVN V; BP 2023; USP-NF 2023.

Bảng tổng hÿp các quy trình đßnh l°ÿng t¿p ch¿t liên quan allopurinol trong nguyên liáu. Bảng tổng hÿp các quy trình đßnh l°ÿng t¿p ch¿t liên quan allopurinol trong thành phẩm. Quy đßnh xác đßnh đá tinh khiÁt. Các quy trình phân tích và các chỉ tiêu liên quan cho đặc điểm từng quy trình phân tích.

Các tiêu chí thẩm đßnh quy trình phân tích t¿p trong nguyên liáu và thành phẩm theo h°ớng dẫn Q2(R2) căa ICH. Mát sß nguyên liáu, ch¿t chuẩn dùng trong nghiên cąu. Mát sß dung môi hóa ch¿t dùng trong nghiên cąu. Mát sß trang thiÁt bß dùng trong nghiên cąu.

Các thông sß khßi phổ cÁn khảo sát quy trình đßnh l°ÿng đáng thßi 6 t¿p allopurinol bằng LC-MS/MS. ĐiÃu kián sắc ký cÁn khảo sát quy trình đßnh l°ÿng đáng thßi 6 t¿p allopurniol bằng LC-MS/MS. Náng đá các t¿p và allopurinol trong tuyÁn tính. Tóm tắt điÃu kián sắc ký các quy trình đßnh l°ÿng các t¿p allopurinol bằng ph°¢ng pháp HPLC-DAD.

KÁt quả khảo sát tính phù hÿp căa há thßng (n = 6). KÁt quả xác đßnh miÃn giá trß, đá đúng, đá chính xác căa các quy trình đßnh l°ÿng các t¿p ch¿t. KÁt quả xác đßnh hàm l°ÿng (%) tính theo chÁ phẩm nguyên tr¿ng căa các t¿p ch¿t allopurinol bằng ph°¢ng pháp sắc ký lỏng hiáu năng cao. KÁt quả đánh giá ch¿t l°ÿng t¿p A allopurinol.

KÁt quả đánh giá ch¿t l°ÿng t¿p B allopurinol. KÁt quả đánh giá ch¿t l°ÿng t¿p C allopurinol. KÁt quả đánh giá ch¿t l°ÿng t¿p D allopurinol. KÁt quả đánh giá ch¿t l°ÿng t¿p E allopurinol.

KÁt quả đánh giá ch¿t l°ÿng t¿p F allopurinol. Khßi l°ÿng ch¿t khảo sát đóng trong 1 lá và sß lá đóng đ°ÿc. KÁt quả đánh giá đáng nh¿t lá sau khi đóng gói. KÁt quả tính giá trß ¿n đßnh hàm l°ÿng t¿p A allopurinol (n = 18).

KÁt quả tính giá trß ¿n đßnh hàm l°ÿng t¿p B allopurinol (n = 18). KÁt quả tính giá trß ¿n đßnh hàm l°ÿng t¿p C allopurinol (n = 18). KÁt quả tính giá trß ¿n đßnh hàm l°ÿng t¿p D allopurinol (n = 18). KÁt quả tính giá trß ¿n đßnh hàm l°ÿng t¿p E allopurinol (n = 18).

KÁt quả tính giá trß ¿n đßnh hàm l°ÿng t¿p F allopurinol (n = 18). Tóm tắt kÁt quả xác đßnh giá trß ¿n đßnh và công bß các t¿p đßi chiÁu. Tóm tắt kÁt quả đánh giá các t¿p allopurinol tổng hÿp. ĐiÃu kián khßi phổ tßi °u quy trình đßnh l°ÿng đáng thßi 6 t¿p allopurinol bằng ph°¢ng pháp LC/MS/MS.

KÁt quả kiểm tra tính phù hÿp căa há thßng trên mẫu chuẩn (n = 6). KÁt quả kiểm tra tính phù hÿp há thßng trên mẫu thử. Ph°¢ng trình tuyÁn tính căa quy trình đßnh l°ÿng đáng thßi 6 t¿p allopurinol bằng ph°¢ng pháp LC-MS/MS. Giới h¿n phát hián và giới h¿n đßnh l°ÿng các t¿p allopurinol.

KÁt quả đá chính xác và đá chính xác trung gian căa quy trình đßnh l°ÿng đáng thßi 6 t¿p trong mẫu giả lập nguyên liáu allopurinol. KÁt quả đá chính xác và đá chính xác trung gian căa quy trình đßnh l°ÿng đáng thßi 6 t¿p trong mẫu giả lập thành phẩm allopurinol. KÁt quả đá đúng căa quy trình đßnh l°ÿng đáng thßi 6 t¿p trong nÃn mẫu giả lập thành phẩm và giả lập nguyên liáu allopurinol. KÁt quả đßnh l°ÿng t¿p trong các mẫu nguyên liáu và thành phẩm allopurinol bằng ph°¢ng pháp LC-MS/MS.

Dữ liáu phổ NMR căa sản phẩm tổng hÿp so với phổ t¿p A allopurinol hemisulfat chuẩn. Dữ liáu phổ NMR sản phẩm tổng hÿp so với phổ t¿p B allopurinol chuẩn. Dữ liáu phổ NMR căa sản phẩm tổng hÿp so với t¿p C allopurinol chuẩn. Dữ liáu phổ NMR căa sản phẩm tổng hÿp so với t¿p D allopurinol chuẩn.

Dữ liáu phổ NMR căa sản phẩm tổng hÿp so với t¿p E allopurinol chuẩn .