Luận văn thạc sĩ: Nghiên cứu tạo chủng Escherichia coli sản xuất vanillin từ axit ferulic

Nghiên cứu tạo chủng Escherichia coli sản xuất vanillin từ axit ferulic, mở ra hướng đi mới trong công nghệ sinh học và thực phẩm.

• Tác giả: Ma Thị Trang
• Người hướng dẫn: TS. Dương Văn Cường
• Trường học: Trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên
• Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học
• Đề tài: Nghiên cứu tạo chủng Escherichia coli có khả năng sản xuất vanillin từ axit ferulic
• Loại tài liệu: Luận văn thạc sĩ
• Năm xuất bản: 2016
• Địa điểm: Thái Nguyên

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• 1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 1.1. Giới thiệu về vanillin
• 1.2. Cấu trúc, đặc điểm lí hóa
• 1.3. Đặc tính sinh học
• 1.4. Vai trò vanillin trong công nghiệp và đời sống
• 1.5. Các con đường sinh tổng hợp vanillin
• 1.6. Các phương pháp sản xuất vanillin
• 1.7. Tình hình nghiên cứu sản xuất vanillin bằng ứng dụng công nghệ ADN tái tổ hợp
• 2. CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU, NỘI DUNG, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.1. Vật liệu nghiên cứu
• 2.2. Các chủng vi sinh vật
• 2.3. Các vector tách dòng và biểu hiện nền tảng
• 2.4. Mồi khuếch đại các gene gltA, fcs và ech
• 2.5. Địa điểm và thời gian nghiên cứu
• 2.6. Nội dung nghiên cứu
• 2.7. Phương pháp nghiên cứu
• 2.8. Quy trình tách dòng gene và thiết kế vector biểu hiện
• 2.8.1. Nhân gene đích bằng PCR
• 2.8.2. Điện di trên gel agarose
• 2.8.3. Tách chiết ADN plasmid
• 2.8.4. Lập bản đồ giới hạn
• 2.8.5. Thu nhận ADN từ gel agarose
• 2.8.6. Nối ADN bằng ADN ligase
• 2.8.7. Chuẩn bị tế bào khả biến
• 2.8.8. Biến nạp ADN vào E. coli khả biến
• 2.8.9. Xác định trình tự nucleotide
• 2.8.10. Phân tích trình tự gene đã tách dòng
• 2.9. Lên men sinh tổng hợp vanillin từ cơ chất axit ferulic
• 2.9.1. Phân tích vanillin và axit ferulic bằng HPLC
• 3. CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 3.1. Tách dòng và giải trình tự các gene mã hóa các enzyme xúc tác con đường sinh tổng hợp vanillin từ axit ferulic
• 3.1.1. Tách dòng và giải trình tự gene gltA từ E. coli
• 3.1.2. Tách dòng và giải trình tự gene ech từ Pseudomonas fluorescens VTCC-B-668
• 3.1.3. Tách dòng và giải trình tự gene fcs từ Amycolatopsis sp.
• 3.2. Thiết kế vector biểu hiện chứa 3 gene gltA, ech, fcs trên nền tảng vector pET22b+
• 3.2.1. Chuyển gene gltA từ pTZ-gltA sang pET22b+ tạo vector tái tổ hợp pET22-G
• 3.2.2. Chuyển gene ech từ pTZ-ech sang pET22-G tạo vector tái tổ hợp pET22-GE
• 3.2.3. Chuyển gene fcs từ pTZ-fcs sang pET22-GE tạo vector tái tổ hợp pET22-GEF
• 3.2.4. Chuyển gene fcs từ pTZ-fcs sang vector pRSET tạo vector pRSET-F
• 3.2.5. Chuyển cụm hai gene gltA và ech từ pET22-GE sang pRSET-F tạo vector tái tổ hợp pRSET-GEF
• 3.3. Sinh tổng hợp vanillin từ axit ferulic sử dụng E. coli tái tổ hợp làm tế bào chủ
• 3.3.1. Ảnh hưởng của nồng độ axit ferulic đến sinh trưởng của E. coli
• 3.3.2. Xác định axit ferulic tồn dư và vanillin được tổng hợp bởi hệ thống pET22
• 3.3.3. Ảnh hưởng của các điều kiện nuôi cấy lên năng suất sinh tổng hợp vanillin
• 3.3.3.1. Ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy
• 3.3.3.2. So sánh các môi trường LB, M9 và 2YT
• 3.3.3.3. Ảnh hưởng của nồng độ chất cảm ứng IPTG
• 3.3.3.4. So sánh hiệu suất sinh tổng hợp vanillin giữa hai hệ vector pET22 và pRSET
• 4. CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng quan về nghiên cứu sản xuất vanillin từ axit ferulic

Nghiên cứu sản xuất vanillin từ axit ferulic bằng chủng Escherichia coli đang thu hút sự chú ý trong lĩnh vực công nghệ sinh học. Vanillin là một hợp chất quan trọng trong ngành thực phẩm và mỹ phẩm, được biết đến với hương vị đặc trưng và nhiều ứng dụng. Việc sản xuất vanillin từ axit ferulic không chỉ giúp giảm chi phí mà còn bảo vệ môi trường. Nghiên cứu này nhằm tạo ra một chủng vi khuẩn có khả năng chuyển hóa axit ferulic thành vanillin, mở ra hướng đi mới cho ngành công nghiệp hương liệu.

1.1. Giới thiệu về vanillin và axit ferulic

Vanillin (3-methoxy-4-hydroxybenzaldehyde) là một hợp chất hữu cơ có mùi thơm đặc trưng. Axit ferulic là một phenolic acid có nhiều trong thành tế bào thực vật, đặc biệt là trong các phế phẩm nông nghiệp. Việc sử dụng axit ferulic làm nguyên liệu để sản xuất vanillin không chỉ tiết kiệm chi phí mà còn tận dụng nguồn tài nguyên sẵn có.

1.2. Tầm quan trọng của nghiên cứu này

Nghiên cứu sản xuất vanillin từ axit ferulic bằng Escherichia coli có ý nghĩa lớn trong việc phát triển công nghệ sinh học. Nó không chỉ giúp tạo ra sản phẩm tự nhiên mà còn giảm thiểu tác động tiêu cực đến môi trường từ các phương pháp sản xuất hóa học truyền thống.

II. Thách thức trong sản xuất vanillin từ axit ferulic

Mặc dù có nhiều tiềm năng, việc sản xuất vanillin từ axit ferulic gặp phải một số thách thức. Các chủng vi khuẩn hiện tại thường không có khả năng chuyển hóa hiệu quả axit ferulic thành vanillin. Hơn nữa, quá trình lên men có thể bị ảnh hưởng bởi độ nhớt cao của dịch nuôi cấy, gây khó khăn trong việc thu hồi sản phẩm. Những thách thức này cần được giải quyết để tối ưu hóa quy trình sản xuất.

2.1. Khó khăn trong việc chuyển hóa axit ferulic

Nhiều chủng vi khuẩn có khả năng phân hủy axit ferulic nhưng lại không sản xuất được vanillin. Việc tìm kiếm và phát triển các chủng vi khuẩn mới có khả năng chuyển hóa hiệu quả là một thách thức lớn.

2.2. Vấn đề về độ nhớt trong quá trình lên men

Độ nhớt cao của dịch nuôi cấy do sự phát triển của nấm và bào tử có thể làm giảm hiệu suất sản xuất vanillin. Cần có các biện pháp kỹ thuật để kiểm soát độ nhớt và tối ưu hóa điều kiện nuôi cấy.

III. Phương pháp nghiên cứu sản xuất vanillin từ axit ferulic

Để sản xuất vanillin từ axit ferulic, nghiên cứu đã áp dụng các phương pháp sinh học hiện đại. Việc sử dụng Escherichia coli tái tổ hợp cho phép tạo ra các chủng vi khuẩn có khả năng sản xuất vanillin mà không bị phân hủy. Các bước tách dòng gene và thiết kế vector biểu hiện là những bước quan trọng trong quy trình này.

3.1. Tách dòng gene và thiết kế vector

Quá trình tách dòng gene gltA, ech và fcs từ các chủng vi sinh vật khác nhau là bước đầu tiên trong việc tạo ra vector biểu hiện. Các gene này mã hóa cho enzyme cần thiết trong con đường sinh tổng hợp vanillin.

3.2. Biến nạp ADN vào Escherichia coli

Sau khi thiết kế vector, ADN được biến nạp vào Escherichia coli để tạo ra các chủng vi khuẩn tái tổ hợp. Việc này giúp tăng cường khả năng sản xuất vanillin từ axit ferulic.

IV. Kết quả nghiên cứu sản xuất vanillin từ axit ferulic

Kết quả nghiên cứu cho thấy các chủng Escherichia coli tái tổ hợp có khả năng sản xuất vanillin từ axit ferulic với hiệu suất cao. Các điều kiện nuôi cấy như nồng độ axit ferulic, thời gian nuôi cấy và nồng độ IPTG đã được tối ưu hóa để đạt được năng suất tốt nhất. Phân tích HPLC cho thấy nồng độ vanillin đạt được là đáng kể.

4.1. Hiệu suất sản xuất vanillin

Các thí nghiệm cho thấy rằng Escherichia coli tái tổ hợp có thể sản xuất vanillin với hiệu suất cao hơn so với các phương pháp truyền thống. Điều này mở ra cơ hội cho việc sản xuất vanillin tự nhiên với chi phí hợp lý.

4.2. Phân tích sản phẩm bằng HPLC

Phân tích bằng HPLC cho thấy nồng độ vanillin trong dịch nuôi cấy đạt mức tối ưu. Kết quả này chứng minh rằng phương pháp nghiên cứu đã thành công trong việc chuyển hóa axit ferulic thành vanillin.

V. Kết luận và triển vọng tương lai của nghiên cứu

Nghiên cứu sản xuất vanillin từ axit ferulic bằng Escherichia coli đã mở ra hướng đi mới cho ngành công nghiệp hương liệu. Kết quả đạt được không chỉ có giá trị khoa học mà còn có ý nghĩa thực tiễn trong việc cung cấp vanillin tự nhiên với giá cả hợp lý. Tương lai của nghiên cứu này hứa hẹn sẽ tiếp tục phát triển và ứng dụng rộng rãi.

5.1. Tầm quan trọng của sản xuất vanillin tự nhiên

Việc sản xuất vanillin tự nhiên từ axit ferulic không chỉ đáp ứng nhu cầu thị trường mà còn bảo vệ môi trường. Sản phẩm này có thể thay thế vanillin tổng hợp, mang lại lợi ích cho sức khỏe người tiêu dùng.

5.2. Hướng nghiên cứu tiếp theo

Nghiên cứu sẽ tiếp tục tìm kiếm các chủng vi khuẩn mới và tối ưu hóa quy trình sản xuất để nâng cao hiệu suất. Các ứng dụng công nghệ sinh học trong sản xuất vanillin sẽ được mở rộng hơn nữa trong tương lai.

Trích đoạn nội dung tài liệu

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1. Giới thiệu về vanillin 1. Nguồn gốc Vanillin là hỗn hợp chất thơm tự nhiên phổ biến trên thế giới được tách chiết từ vỏ quả loài lan Vanilla planifolia. Trong số hơn 250 thành phần chất hóa học khác nhau được tách chiết từ vỏ quả, vanillin chiếm thành phần chủ yếu.

Lịch sử về nguồn gốc vanillin bắt đầu từ sự khám phá ra loài lan Vanilla planifolia ở Mesoamerica suốt những năm 1930. Người Aztecs (Mexico) được coi là cái nôi đầu tiên trong việc sử dụng vanilla cho đồ uống của họ. Sau đó, người Tây Ban Nha xâm chiếm và mang nó về Châu Âu, song mọi cố gắng để có thể trồng được cây Vanilla planifolia đều thất bại do không có sự thụ phấn tự nhiên. Cho đến khi nhà thực vật học Charles Morren phát hiện ra bí mật của sự miễn cưỡng sinh sản ở những vùng đất ngoài Mexico, điều này đã dẫn tới khám phá ra sự thụ phấn nhân tạo cho hoa cuả vanilla [71].

Ngày nay, vanilla được trồng phổ biến ở một số quốc gia như Indonesia, Trung Quốc, Madagascar, Mexico,… Hình 1.1: Sơ đồ phân bố vanilla trên thế giới LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Cấu trúc, đặc điểm lí hóa Vanillin có dạng bột kết tinh màu trắng với mùi thơm mạnh, dễ chịu. Về mặt hóa học, vanillin là một phenolic aldehyde (3-methoxy-4-hydroxybenzaldehyde), có công thức phân tử là C8H8O3, bao gồm các nhóm aldehyte, ete, phenol [18].2: Công thức cấu tạo của vanillin và vanillin dạng bột (Converti et al., 2010) Các đặc tính lí hóa của vanillin được thể hiện dưới bảng sau: Bảng 1.1: Các đặc tính hóa lí của vanillin (Ravendra, Sharma, & Prem Shanker, 2012) Đặc tính Dữ liệu Trọng lượng phân tử 152.15 Nhiệt độ nóng chảy 80-810C Nhiệt độ sôi 2850C Độ hòa tan 1g/100ml Tỉ trọng hơi (không khí=1) 5.2 x 10-3 mmHg ở 250C Hằng số phân li pKa1= 7.4(250C) LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Đặc tính sinh học Các nhà nghiên cứu đã phát hiện ra những đặc tính của vanillin như chống oxy hóa, kháng khuẩn, chống ung thư, chống bệnh hồng cầu lưỡi liềm,… [71].

Hoạt tính kháng vi sinh vật Vanillin và dẫn xuất thể hiện mức độ khác nhau về hoạt tính kháng nấm bao gồm các loại nấm men, nấm mốc gây hư hại thực phẩm [23]. Vanillin còn ức chế sự sinh trưởng của nấm men và nấm mốc trong nước hoa quả ép, thạch hoa quả [45] và trong bảo quản xoài chế biến tươi và chống lại một số nấm men gây bệnh quan trong trong y học như Candida albicans, Cryptococcus neoformans [16], [56]. Vanillin đóng vai trò như một tác nhân kháng khuẩn chống lại Escherichia coli, Lactobacillusp lantarum, Listeria innocua. Tuy nhiên cần có hướng nghiên cứu xác định nồng độ nhỏ nhất mà ở đó vanillin hoạt động như một chất kháng vi sinh vật cũng như chất bảo quản tự nhiên.

Hoạt tính kháng oxy hóa Vanillin đã được công nhận với khả năng chống oxy hóa cũng như hoạt tính phân hủy các gốc tự do. Vanillin có khả năng chống lại các tổn thương ở não dưới sự cảm ứng của carbon tetrachloride (CCl 4) tác nhân gây oxy hóa ở chuột [47], bảo vệ lớp màng ty thể gan khỏi quá trình oxy hóa được cảm ứng bởi sự nhạy cảm ánh sáng trên ty thể gan chuột [35]. Sự có mặt của vanillin với lượng nhỏ trong thực phẩm cũng giúp chống lại oxy hóa, ức chế sự tự oxy hóa ở sữa béo. LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.

Hoạt tính chống ung thư và đột biến Vanillin đã được nghiên cứu về hoạt tính chống ung thư và đột biến. Vanillin ức chế đột biến ở locus CD59 trên NST 11 ở người được cảm ứng bởi hydrogene peroxide, N-methyl-N-nitrosoguanidine và mitomycin C [27]. Vanillin ức chế con đường Non-homologous ADN end- joining (NHEJ) gây ra sự đứt gãy trên mạch kép ADN bởi ức chế hoạt tính của ADN-PK (ADN protein kinase) , làm giảm số lượng khối u ruột cảm ứng bởi nhiều tác nhân trong mô hình chuột [7]. Hoạt tính hạ lipid trong máu Vanillin được sử dụng để ngăn chặn sự phát triển tình trạng bệnh lí như siêu mỡ trong máu.

Hoạt tính dược lí của vanillin như một tác nhân hạ lipid trong máu khi nồng độ vượt quá phạm vi cho phép trong điều trị bệnh tiểu đường (type 2), rối loạn tim mạch, béo phì. Trước đó đã có nghiên cứu vanillin làm giảm lượng triglycerin trong huyết tương, triglycerin liên kết với lipoprotein và triglycerin trong gan trên đối tượng chuột [72]. Hoạt tính chống tạo hồng cầu lưỡi liềm Vanillin trong các thí nghiệm in vitro đã chứng minh khả năng chống tạo hồng cầu lưỡi liềm bởi tác động của nhóm aldehyde với hemoglobin trong tế bào hồng cầu [5]. Tuy nhiên vanillin được hấp thụ theo đường uống không có tác động trị liệu bởi vì nó có sự phân hủy nhanh chóng trong dịch tiêu hóa.

Để khắc phục vấn đề này, chế phẩm vanillin MX- 1520 đã được tổng hợp. Lợi ích sinh học của loại thuốc này chống tạo thành hồng cầu lưỡi liềm mạnh gấp 5 lần so với vanillin tự nhiên [89]. Các hoạt tính khác Các loại dầu dễ bay hơi tách chiết từ nghệ, cỏ xả, húng quế kết hợp với 5% vanillin có tác dụng hiệu quả chống lại các loài muỗi [74]. LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.

Vai trò vanillin trong công nghiệp và đời sống Vanillin được sử dụng nhiều trong công nghiệp thực phẩm, sản xuất nước hoa, mỹ phẩm và dược phẩm [71]. Trong công nghiệp thực phẩm, vanillin là một phụ gia rất thông dụng, đặc biệt trong sản xuất kem đá lạnh (ice cream). Ngoài sử dụng trong sản xuất kem, vanillin còn được dùng rất nhiều để làm tăng hương vị và tạo mùi thơm cho bánh, kẹo, cho các loại đồ uống. Hương thơm đặc trưng của vanillin được sử dụng trong lĩnh vực mỹ phẩm như tạo mùi cho nước hoa, kem, sữa dưỡng ẩm, nước hoa xịt phòng, xà phòng ,….2: Mức độ sử dụng vanillin trong các hạng mục thực phẩm Mức độ sử dụng (ppm) Sản phẩm Bình thường Tối đa Đồ nướng 74.0 Chất béo, tinh dầu 96.0 Nước sốt ngọt 358.4 Các sản phẩm sữa 221.0 Đồ uống loại II 26.2 Bơ sữa đông lạnh 1.7 Các sản phẩm sữa 247.1 Nguồn: CAS N°: 121-33-5 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.3: Hàm lượng vanillin có trong các mặt hàng thực phẩm và mỹ phẩm Trạng thái Sản phẩm Hàm lượng TLTK vật lí Đồ uống không cồn 0.022% Bellanca, 1975) Nước ngọt 0.0% Hoà tan hoặc rắc lên Chocolate 0.097% bề mặt Kẹo Bonbons Lên tới 0.05% Chocolate sữa Lên tới 0.03% Đường cô Lên tới 0.015% ACF Mứt kẹo Lên tới 0.055% ChemieFarmaNV Đường vanillin 2% Bột Bình thường: 0.2% Nước hoa Tối đa: 0.005% Kem, sữa dưỡng ẩm Hòa tan Opdyke, 1977 Tối đa: 0.03% Bình thường:0.01% Xà bông Tối đa: 0.1% Nguồn: CAS N°: 121-33-5 Vanillin còn được sử dụng trong tổng hợp thuốc một số loại thuốc như: Aldomet (thuốc chống tăng huyết áp), L-dopa (điều trị di chứng của bệnh Parkinson) và Trimethoprim (điều trị chứng viêm đường hô hấp cấp và một số biến dạng của bệnh hoa liễu) [18], [24].

Vanillin còn là một chất khử mùi hữu hiệu để che giấu mùi khó chịu của nhiều loại mặt hàng như đồ may mặc, sản phẩm cao su, giấy và chất dẻo,…Thông thường chỉ cần đến một lượng nhỏ, vì mùi của vanillin có thể cảm nhận được ngay ở độ pha loãng khoảng 0,0000002 mg trong 1 m3 không khí [2]. Ngoài ra, vanillin còn được sử dụng ngăn chặn tạo bọt trong sự bôi trơn nhiều loại dầu, làm sáng trong lớp phủ kẽm bồn tắm, hỗ trợ sự oxi hóa tinh dầu hạt lanh, hấp dẫn côn trùng, ngăn chặn xỉn màu răng gây ra bởi khói thuốc lá, hòa tan vitamin B1 và xúc tác phản ứng trùng hợp methyl methacrylate [39]. LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Các con đường sinh tổng hợp vanillin 1.

Con đường sinh tổng hợp vanillin trong thực vật Quả vanilla được thu hoạch khoảng từ 6 đến 8 tháng sau quá trình thụ phấn và ở giai đoạn này chúng chưa bộc lộ ra hương vanilla [79]. Mùi hương chỉ được giải phóng ra trong quá trình lên men, được gọi là “curing”. Khi glucoside, glucovanillin, các ß-glucoside liên quan bị thủy phân bởi enzyme ß-D-glucosidase sẽ giải phóng ra vanillin tự do và các chất liên quan [57]. Mặc dù vanillin là một trong số những chất hóa học được nghiên cứu nhiều song những con đường sinh tổng hợp chúng trong thực vật vẫn c̣ n gây nhiều tranh luận, bởi v́ chưa có nghiên cứu chính xác nào xác định và nêu ra đặc trưng của tất cả các bước trong con đường được đề xuất.

Có một giả thiết nói rằng vanillin là sản phẩm của con đường acid shikimic. Ở con đường này, phenylalanine hoặc tyrosine trải qua khử amin hóa tới C 6 – C 3 phenylpropanoid, tiếp đó đóng vai trò như một cơ chất cho vanillin [30]. Con đường sinh tổng hợp vanillin từ axit ferulic trong vi sinh vật Một số vi sinh vật như vi khuẩn, nấm men, nấm mốc đã được nghiên cứu để xác định các gene mã hóa các enzyme xúc tác phản ứng tổng hợp vanillin từ các cơ chất khác nhau như lignin, eugeneol, isoeugeneol, axit ferulic, glucose,…Trong đó đáng chú ý nhiều là các chuyển hóa sinh học từ axit ferulic. Axit ferulic là thành phần phenolic chủ yếu được tìm thấy trong thành tế bào của thực vật hai lá mầm, nên nó có thể được thu từ các nguồn phế phẩm nông nghiệp như vỏ ngu, cám ngu, củ cải đường, thành tế bào nội nhũ gạo, LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] 11 lúa mỳ, lúa mạch.

Axit ferulic còn là cơ chất ít độc tính nhất với vi sinh vật trong số các cơ chất được nghiên cứu. Vì vậy, có thể coi đây là cơ chất thích hợp cho sản xuất vanillin sinh học [50]. Các nhà nghiên cứu đã đưa ra 5 con đường chuyển hóa axit ferulic thành vanillin, đó là con đường Non-β-oxidative deacetylation (CoA-dependent), β- oxidative deacetylation (CoA-dependent), Non-oxidative decarboxylation, CoA-Independent Deacetylation, Side-Chain Reductive. Con đường Non-β-oxidative deacetylation (CoA-dependent) Các gene mã hóa enzyme cần cho con đường Non-β-oxidative deacetylation đã được xác định và xác nhận hoạt tính của chúng [25].3: Con đường Non-β-oxidative deacetylation (CoA-dependent) (Havkin-Frenkel & Belanger, 2010) Con đường này có ba bước xúc tác với sự tham gia của hai enzyme: 4- hydroxycinnamate-CoA ligase (4-CL) hay feruloyl-CoA synthetase, mã hóa bởi gene fcsvà 4-hydroxycinnamate CoA-hydratase/lyase (HCHL) hay enoyl-CoA hydratase/aldolas được mã hóa bởi gene ech.

Đầu tiên, enzyme HCHL chuyển axit ferulic thành feruloyl-ScoA, sau đó 4-CL xúc tác thủy phân feruloyl-ScoA thành một chất trung gian tạm thời 4-hydroxy-3-methoxyphenyl-b-hydroxypropionyl- ScoA và tách chuỗi bên theo kiểu retro-aldol thành vanillin và acetyl-ScoA. Một LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] 12 gene khác liên kết với gene fcs và gene ech mã hóa enzyme vanillin-xidoreductase gây oxi hóa vanillin thành sản phẩm khác [25].