BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CHIẾT CAO GIAU HOP CHAT THU CAP TỪ QUÁ KHO QUA (Momordica charantia L.) Nganh hoc : CONG NGHE SINH HOC Sinh viên thực hiện : NGUYÊN HOÀI NAM Mã số sinh viên : 19126104 Niên khóa : 2019 — 2023 TP. Thủ Đức, 08/2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CHIẾT CAO GIAU HOP CHAT THỨ CAP TỪ QUÁ KHO QUA (Momordica charantia L.) Ngành học : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực hiện : NGUYÊN HOÀI NAM Mã số sinh viên : 19126104 Niên khóa : 2019 — 2023 TP. Thủ Đức, 08/2023 LỜI CẢM ƠN ĐỀ hoàn thành khóa luận này, em xin chân thành gửi lời cảm ơn đến ban Giám hiệu, khoa Khoa học Sinh học trường Đại hoc Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh và Viện nghiên cứu Công nghệ Sinh học và môi trường đã hỗ trợ và tạo điều kiện thuận lợi cho em trong quá trình em thực hiện khóa luận tốt nghiệp. Em xin đặc biệt gửi lời cảm ơn chân thành đến TS.
Phùng Võ Câm Hồng đã tận tình hướng dẫn em trong quá trình thực hiện nghiên cứu đề tài. Em xin gửi lời cảm ơn đến TS. Trịnh Thị Phi Ly, ThS. Nguyễn Thị Vân Anh và tập thể sinh viên phòng Thử nghiệm Hóa đã tạo điều kiện, giúp đỡ em khi thực hiện các thí nghiệm trong thời gian hoàn thành khóa luận.
Cuôi cùng em xin bày tỏ lòng biệt on và yêu thương đền gia đình van luôn cô vũ va động viên trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài này. Em xIn chân thành cảm ơn. XÁC NHẬN VÀ CAM ĐOAN Tôi tên: Nguyễn Hoài Nam, MSSV: 19126104, Lớp DH19SHA, thuộc ngành Công nghệ Sinh học Trường Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh, xin cam đoan: Đây là Khóa luận tốt nghiệp do bản thân tôi trực tiếp thực hiện, các số liệu và thông tin trong nghiên cứu là hoàn toàn trung thực và khách quan.
Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm trước Hội đồng về những cam kết này. Ho Chi Minh, ngay tháng năm Nguoi viét cam doan (Ký va ghi rõ họ tên) li TÓM TAT Đề tài được thực hiện nhằm khảo sát sơ bộ những thành phần hóa thực vật từ thịt quả khổ qua và đưa ra quy trình chiết xuất cao giàu các hợp chất thứ cấp, đồng thời đánh giá hoạt tính kháng oxy hóa và hoạt tính kháng khuẩn của cao chiết. Trong nghiên cứu này, bột khổ qua có độ âm 8,19%, thành phần hóa thực vật được xác định bao gồm phenolic tổng số: 4,48 mg/g, flavonoid tổng số: 0,70 mg/g, hoạt tính kháng oxy hóa theo phương pháp khử sắt và bắt gốc tự do DPPH lần lượt là 4,25 mg/g và 1,20 mg/g. Quy trình chiết xuất với dung môi ethanol 70%, siêu âm 5 phút, hồi lưu 90 phút có hàm lượng phenolic tổng số: 37,66 mg/g, flavonoid tông số: 3,45 mg/g.
Hiệu suất chiết đạt 37,09%, độ âm cao chiết thu được là 18,45%. Cao chiết khô qua có hoạt tính kháng oxy hóa với giá trị ICso = 4,22 mg/mL và thể hiện tinh kháng đối với Staphylococcus aureus, Escherichia coli va Bacillus subtilis subsp. Từ khóa: Momordica charantia L., chiết xuất, hợp chất thứ cấp, khang oxy hóa, kháng khuẩn. iil ABSTRACT The study was carried out to investigate the phytochemical components of bitter melon flesh, propose a high extraction process rich in secondary compounds, and evaluate its antioxidant and antibacterial activities.
The results showed that the moisture content of the materials was 8.19%, and the phytochemical components were determined including total phenolic: 4.48 mg/g, total flavonoid: 0.70 mg/g, antioxidant activity by iron reduction and DPPH free radical scavenging methods were 4. Extraction process with 70% ethanol, 5 min sonication, 90 min reflux achieved 37. The total phenolic and total flavonoid contents of the extract were 37. Bitter melon extract had antioxidant activity with an ICso value of 4.22 mg/mL and exhibited resistance to Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Bacillus subtilis subsp.
Keywords: Momordica charantia L., extraction, secondary compounds, antioxidant, antibacterial. IV MỤC LỤC 989. i XÁC NHAN VA CAM DOAN .sscssssssssesseseesessesssssesvescsessteseaesessesissussssessesseeseansneaeeses ii TOM TAT. cseccssccsecssesssesssessesssesssessssssesuecsnssusessssssesuscsnssusessessassussiesseessssessssinessseseesieeseeeess iii AMS RPC cscosrrectaisnnnnons ecient inne.
tein eileen nee IV MỤC LUC wieeeesssssessesssvessessvessessvcssesssessesssevsvessessvessesssecevessessesssessesssesssesseeseessessseseveteeseveeeeceee V DANH SÁCH CAC CHỮ VIET TẮTT.----2-©22©+22++22++2E++2EE+2EEE2EE+zExrerrrrrrrrrr viii DANH SÁCH CAC BẢNG. x CR th 5P PT“ C Ủh C | a ee 1 1. Mục tiêu đề tai. edu Thee THIỆN ung t0RGUS0GG HGNTGIIGTGIGSKGIGGGQTSHUDHSRIIDHIENG.DGSBiG88 1808 2 CHƯƠNG 2.
TONG QUAN TÀI LIỆU .--2- 2 522S22E22E2EE2EE2EE2EE2E2EE2EE2E22222222See. Tổng quan về khổ Se ee ee ee 3 RG Y [ngu napoagg iin0rYNGryrgtrygyaytgtryyaedgdaasgrotrgraraaararayareatre 3 2.2 Đặc điềm hình thái. - -- 2-52 SS<2EEEE2EE212152121521211212111121111211112112122212221 12a 3 2. Tổng quan về một số thành phan trong quả khổ qua.
Tổng quan về các hợp chất thứ cấp.----- 2 2+22+22+EE+2E2+2E+2E22E22EE2EE222222222222222xe2 5 2. C&e hop chat phenolic 88. 5 ie acd GÀ HỘ NIÊT sccescacnenens ease ssc 0 ESE CNRS SURO NE SESE ENS SS SERENA 6 DA, Tome dựnh Ve C0 GIẾT. ccotsinsvnceniacnnevanvinericeicnonssienmnniin HA ĐH CHÚ 210000072013 1020016.
Tổng quan các phương pháp chiết Xuất.---2--22©222222222S+22E2EE22E2E+22222EzExczxrrxez 7 0s951L20EIRHOTOI IDÌNGTÔ KNIULIGTRHossesauizseszzasmissab einen oi ie alee desi datrria loan ora di 7 2. Phương pháp chiết hồi lưu. Các nghiên cứu trong nước và quốc tế về chiết cao từ thịt quả khổ qua. Nghiên cứu quốc t6.ccccccceccsessessessuessesseesessessessussssssessessessessessssiesseeseesessesseseneseeeees 9 CHƯƠNG 3.
VAT LIEU VÀ PHƯƠNG PHÁP. Thời gian và địa điểm nghiên cứu.----2- ¿2+ +2+S++S£+E++E£2E£EE+EE2EE2E22E22322E22. Vật liệu và phương pháp nghiên CỨU.-- -- ---- 2< E 2E S2 EE SE *#EE* Vy cư. 10 Sun, NI TU, YN se asst detest iS i cnc 10 3.
Thiết bị và hóa chất .ccceccccsscscssesssseesesecsessesvsveeessssvesesvssssvssssvsssstsessvsesstsevetseseeeeeees 10 E5: a1010201119480)772103019401191009101PS7Ẹ2 TỶ n ốốớẽnốcaốaốaố cố Cố acc 10 3. Dinh tinh một số hợp chat thứ cấp trong thịt quả khổ qua. Định tính flavonoId. ESTO CEE PATI TUT x ccancexaosonnannnmeansinanasheansinesiaannnndnenssneninceusmasindnevennnacsnnemnuntamannsnetessaavese 11 3.
Dinh tinh saponin 76. Định lượng các nhóm hợp chat thứ cấp trong thịt quả khổ qua. Ham lượng flavonoid tổng sỐ. BHÿØL tính Kháng 08v HỮN.
«ke SALAHe HE H011 1840. Khao sát quy trình chiết cao khổ qua. Phương pháp chiết xuất .5, Binh Ot Tiện: su eet saanggggaghieoovGhoaGIGGENGGGISEGSS214GB. Khảo sát hoạt tính sinh học của cao chiẾT .----- + 2 2x+E£2E+E£E£E2E£EEZEzEzkerxez 18 3;3:4:1: Hoat tinh kháng oxy Nace c cement OEE 18 3.
Hoạt tĩnh Kháng Wh tiasicesssissvscssscscsasisnncenernernacencesstannceontorioavamaconnenweveieranneceecest 19 555. Pines nền nữ lý gỗ ieee eereoneeneenees 19 CHƯƠNG 4. KET QUA VA THẢO LUAN. Thanh phan hóa thực vật của thịt quả khổ qua.
Định tinh occ eeccccccececsssessesssecseesseesuecsessvecsesssessucssecsucssesssessusssessuessessuessessueesceseesseeseesees 20 4. Dib WONG nace nena een 21 4. Khao sát quy trình chiết xuất cao khổ qua. Khảo sát các điều kiện chiết xuất.
Hiệu suất chiẾt. Khảo sát chất lượng cao chiẾt.- 5-5221 212E2E12121211212121211212121111112111112121111110111111121112111012 xe 28 A D2) OAT ĐH khán: GRY) HỘI ssaissssssssdkssaddletdasocsss-bliiLikiieDd4SĐI)5ã8icgisrig. Định lượng một số hợp chat thứ cấp trong cao chiết. KET LUẬN VA DE NGHỊ.
- 2-2222 22222222122122122122121121121121121121111211211211211211211121212121 1y ee 33 TÀI LIEU THAM KHẢO.---- 5225 S+SSSE+E2EEEEEE2EEEEEE2EE111212111111121111111111111 E1 1x6 34 PHU LỤC.---2-©2222222222222221221122122212211221211211211211121121121121121121111211221221212 1e Vil DANH SÁCH CÁC CHU VIET TAT ctv : cộng tác viên DPPH 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazy FRAP : Ferric reducing antioxidant power GAE : Gallic Acid Equivalent H Humid IC : Inhibitory Concentration QE : Quercertin Equivalent SA : Siêu âm TCVN : Tiêu chuẩn Việt Nam TFC : Total Flavonoid Content LPG Total Phenolic Content UV —- Vis : Ultra violet — Visible Vili DANH SÁCH CAC BANG Bang 3. Các nghiệm thức khảo sát chiết xuất. Kết quả định tinh một số hợp chat trong thịt quả khổ qua. Kết quả định lượng các chỉ tiêu hóa thực vật của khổ qua.
Đánh giá hiệu suất chiết cao. Kết quả định lượng hợp chat thứ cấp trong cao chiết khổ qua. Kết qua đường kính vòng vô khuân .- 2-2 2¿22222222Ez+2E22E222Ezzzxzzzze2 31 ix DANH SÁCH CÁC HÌNH Hình 4. Hàm lượng phenolic tổng số ở các nghiệm thức thời gian chiết hồi lưu 30 phút.
So sánh ham lượng phenolic tổng số thu được từ các nghiệm thức tối ưu. Hoạt tinh khang oxy hóa cua ascorbic acid - DPPPH. Hoạt tính kháng oxy hóa của khổ qua - DPPH. Dat van dé Thực vật là nguồn tài nguyên quý báu trên Trái Dat.
Từ lâu, các dược chất quý giá từ thực vật đã được con người biết và sử dụng phục vụ cho lợi ích về sức khỏe. Trong thực vật có các hợp chất thứ cấp có tác dụng chống oxy hóa, nhiều vitamin, chất khoáng, chất XƠ.ØIÚp giam nguy cơ mắc bệnh tiểu đường, các bệnh về tim mạch, hỗ trợ hệ tiêu hóa, tăng cường hệ miễn dịch, nâng cao sức khỏe tinh thần. Theo y học cổ truyền, các hợp chat thứ cấp từ thực vật còn giúp làm chậm tốc độ lão hóa của tế bào, điều trị các bệnh liên quan đền tuôi tác, kéo dài tuôi thọ con người. Khô qua (Momordica charantia L.), hay còn gọi mướp đẳng, là một loài thực vật được trồng phố biến ở Đông Nam A và các khu vực cận nhiệt đới ở Nam và Trung Mỹ (Avinash và ctv, 2022).
Theo Đông y, khổ qua có vị đắng, lạnh, có tác dụng thanh nhiệt, giải độc. Quả là bộ phận chính của cây được sử dụng trong chế biến thực phẩm và dược liệu. Quả khé qua có nhiều hợp chat thứ cấp có hoạt tính sinh học như triterpenoid, protein, steroid, alkaloid, saponin, flavonoid do đó có tác dụng kháng nắm, kháng khuẩn, chống ký sinh trùng, kháng virus mạnh (Almad và ctv, 2016; Kumar và ctv, 2010). Ngoài ra, khổ qua còn có nhiều lợi ích cho sức khỏe như tăng cường miễn dịch, hỗ trợ tiêu hóa, ngăn ngừa bệnh tim mạch, tiêu đường.
và được ứng dụng trong sản xuất mỹ phẩm chống lão hoá. Với những đặc tính quý về giá trị y học, từ xưa xưa đến nay, khổ qua được con người sử dụng với nhiều hình thức và mục đích khác nhau. Bên cạnh những món ăn bố dưỡng thường thấy trong những bữa ăn, khổ qua còn được nấu với nước đề tạo thành dịch chiết. Dịch chiết khổ qua có thể sử dụng như một thức uống có tác dụng giảm ho, khô họng, hạ sốt và giảm nguy cơ tiểu đường.
Ngoài ra, theo y học cô truyền nước khô qua sau khi chiết có thé được dùng dé tắm giúp trị các bệnh về da như rôm say. Hiện nay trên thị trường đã có nhiều sản phâm thương mại từ khổ qua, da dạng hình thức từ các loại trà, bột, viên uống hay đến các nhu yếu pham hằng ngày như xà phòng, kem dưỡng da, sữa tắm,. Trong đó, cao chiết là một chế phẩm có hàm lượng hợp chat thứ cấp cao, dé dàng bảo quan và có thé ứng dụng vào nhiều loại sản phẩm khác nhau. Theo số liệu của Hiệp hội trồng khổ qua khu vực châu A (2014), Việt Nam chiếm 6% tông sản lượng trong khu vực.
Do đó ngoài các cách sử dụng thông thường, việc điều chế cao chiết sẽ giúp tận dụng được nguồn nguyên liệu lớn góp phan tăng giá trị sản phẩm của khổ qua, đồng thời là cơ sở dé điều chế các dược phẩm hoặc thực phẩm chức năng nhờ những hợp chất quý.