Luận văn thạc sĩ vnua nghiên cứu chuẩn hóa phương pháp phân tích dư lượng ciprofloxacin trong thịt lợn bằng kỹ thuật elisa tại phòng kiểm nghiệm của công ty cổ phần tập đoàn dabaco việt nam

Luận văn thạc sĩ kỹ thuật nghiên cứu vnua nghiên cứu chuẩn hóa phương pháp phân tích dư lượng ciprofloxacin trong thịt lợn bằng kỹ thuật, khảo sát thực trạng, phân tích nguyên

• Tác giả: Ngô Đức Dũng
• Người hướng dẫn: TS. Dương Văn Nhiệm
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Thú y
• Đề tài: Nghiên cứu chuẩn hóa phương pháp phân tích dư lượng ciprofloxacin trong thịt lợn bằng kỹ thuật ELISA tại phòng kiểm nghiệm của Công ty Cổ phần Tập đoàn DABACO Việt Nam
• Loại tài liệu: Luận văn
• Năm xuất bản: 2017
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• 1. MỤC LỤC
• 1.1. Lời cam đoan
• 1.2. Mục lục
• 1.3. Danh mục chữ viết tắt
• 1.4. Danh mục bảng
• 1.5. Danh mục hình
• 1.6. Trích yếu luận văn
• 1.7. Thesis abstract
• 2. TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI
• 3. MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI
• 4. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 4.1. TÌNH HÌNH AN TOÀN THỰC PHẨM
• 4.1.1. Tình hình an toàn thực phẩm trên thế giới
• 4.1.2. Tình hình an toàn thực phẩm ở Việt Nam
• 4.2. TÌNH HÌNH SẢN XUẤT CHĂN NUÔI Ở VIỆT NAM
• 4.2.1. Sản xuất và tiêu thụ thịt ở Việt Nam
• 4.2.2. Tình hình sản xuất thịt lợn ở Việt Nam
• 5. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 5.1. Vật liệu nghiên cứu
• 5.2. Đối tượng nghiên cứu
• 5.3. Địa điểm nghiên cứu
• 5.4. Thời gian nghiên cứu
• 5.5. Vật liệu, hóa chất và thuốc thử
• 5.6. Thiết bị và dụng cụ thí nghiệm
• 5.7. Nội dung nghiên cứu
• 5.8. Phương pháp nghiên cứu
• 5.8.1. Thí nghiệm nghiên cứu tính phù hợp của kit ELISA dùng cho phân tích định tính xác định Ciprofloxacin trong mẫu thịt lợn tươi
• 5.8.2. Ứng dụng kết quả nghiên cứu của phương pháp để phân tích mẫu thực
• 5.8.3. Phương pháp phân tích số liệu
• 6. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 6.1. Kết quả nghiên cứu tính phù hợp của kit ELISA dùng cho phân tích định tính xác định Ciprofloxacin trong thịt lợn tươi
• 6.2. Kết quả nghiên cứu tính ổn định của kit ELISA
• 6.3. Kết quả xác định giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng của kit ELISA
• 6.4. Kết quả nghiên cứu khả năng phát hiện của kit (CCβ)
• 6.5. Kết quả xác định độ chính xác (Accuracy: AC), độ đặc hiệu (Specificity: SP), độ nhạy (Sensitivity: SE), độ lệch dương (Positive deviation: PD) và độ lệch âm (negative deviation: ND)
• 6.6. Kết quả xác định độ thu hồi, độ lặp lại và độ tái lặp
• 6.7. Kết quả phân tích dư lượng ciprofloxacin trong mẫu thịt lợn tươi bằng Kit Elisa
• 7. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng quan về nghiên cứu phương pháp phân tích ciprofloxacin trong thịt lợn bằng kỹ thuật ELISA

Nghiên cứu này tập trung vào việc phân tích dư lượng ciprofloxacin trong thịt lợn, một vấn đề quan trọng trong an toàn thực phẩm. Ciprofloxacin là một loại kháng sinh thuộc nhóm fluoroquinolone, thường được sử dụng trong chăn nuôi. Việc phát hiện và kiểm soát dư lượng của nó trong thực phẩm là cần thiết để bảo vệ sức khỏe cộng đồng. Kỹ thuật ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) được lựa chọn vì tính chính xác và độ nhạy cao trong việc phát hiện các chất tồn dư.

1.1. Khái niệm về ciprofloxacin và tác động của nó

Ciprofloxacin là một kháng sinh phổ rộng, có khả năng ức chế sự phát triển của vi khuẩn. Tuy nhiên, việc sử dụng không đúng cách có thể dẫn đến tồn dư trong thực phẩm, gây ảnh hưởng đến sức khỏe con người. Nghiên cứu đã chỉ ra rằng tồn dư kháng sinh có thể gây ra các vấn đề về sức khỏe như kháng thuốc và dị ứng.

1.2. Tại sao cần phân tích dư lượng ciprofloxacin trong thịt lợn

Việc phân tích dư lượng ciprofloxacin trong thịt lợn là cần thiết để đảm bảo an toàn thực phẩm. Tồn dư kháng sinh có thể ảnh hưởng đến sức khỏe người tiêu dùng, gây ra các bệnh lý nghiêm trọng. Hơn nữa, việc kiểm soát dư lượng này cũng giúp nâng cao chất lượng sản phẩm thịt lợn trên thị trường.

II. Vấn đề và thách thức trong việc kiểm soát ciprofloxacin trong thịt lợn

Mặc dù có nhiều quy định về việc sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi, nhưng việc thực hiện vẫn còn nhiều hạn chế. Nhiều người chăn nuôi vẫn lạm dụng kháng sinh, dẫn đến tình trạng tồn dư trong thực phẩm. Điều này không chỉ ảnh hưởng đến sức khỏe người tiêu dùng mà còn gây ra những thách thức lớn cho ngành chăn nuôi.

2.1. Thực trạng lạm dụng kháng sinh trong chăn nuôi

Lạm dụng kháng sinh trong chăn nuôi đang trở thành vấn nạn. Nhiều người chăn nuôi sử dụng kháng sinh không theo chỉ định, dẫn đến tình trạng tồn dư trong thịt lợn. Điều này gây ra lo ngại về an toàn thực phẩm và sức khỏe cộng đồng.

2.2. Các quy định hiện hành về sử dụng kháng sinh

Mặc dù có nhiều quy định về việc sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi, nhưng việc thực hiện vẫn chưa nghiêm túc. Cần có các biện pháp mạnh mẽ hơn để kiểm soát việc sử dụng kháng sinh, đảm bảo an toàn thực phẩm cho người tiêu dùng.

III. Phương pháp phân tích ciprofloxacin trong thịt lợn bằng kỹ thuật ELISA

Kỹ thuật ELISA là một trong những phương pháp hiệu quả nhất để phát hiện dư lượng ciprofloxacin trong thịt lợn. Phương pháp này có độ nhạy và độ chính xác cao, giúp phát hiện các chất tồn dư ở nồng độ thấp. Nghiên cứu đã tiến hành thử nghiệm để xác định tính phù hợp của kit ELISA trong việc phân tích ciprofloxacin.

3.1. Nguyên lý hoạt động của kỹ thuật ELISA

Kỹ thuật ELISA dựa trên nguyên lý phản ứng giữa kháng thể và kháng nguyên. Khi mẫu thịt lợn được xử lý, nếu có ciprofloxacin, nó sẽ liên kết với kháng thể, tạo ra tín hiệu có thể đo được. Điều này cho phép xác định nồng độ ciprofloxacin trong mẫu.

3.2. Quy trình thực hiện phân tích bằng kỹ thuật ELISA

Quy trình thực hiện phân tích bằng kỹ thuật ELISA bao gồm các bước chuẩn bị mẫu, thêm dung dịch kháng thể, và đo tín hiệu. Mỗi bước cần được thực hiện cẩn thận để đảm bảo độ chính xác của kết quả phân tích.

IV. Kết quả nghiên cứu và ứng dụng thực tiễn của phương pháp phân tích

Kết quả nghiên cứu cho thấy kit ELISA có khả năng phát hiện ciprofloxacin với độ chính xác cao. Các thông số như độ nhạy, độ đặc hiệu và độ chính xác đều đạt yêu cầu. Phương pháp này có thể được ứng dụng rộng rãi trong kiểm tra an toàn thực phẩm, giúp đảm bảo sức khỏe người tiêu dùng.

4.1. Đánh giá hiệu quả của kit ELISA trong phân tích

Kết quả cho thấy kit ELISA đạt độ chính xác 95%, độ nhạy 90% và độ đặc hiệu 100%. Điều này chứng tỏ rằng phương pháp này rất hiệu quả trong việc phát hiện ciprofloxacin trong thịt lợn.

4.2. Ứng dụng thực tiễn trong ngành thực phẩm

Phương pháp phân tích ciprofloxacin bằng kỹ thuật ELISA có thể được áp dụng trong các phòng kiểm nghiệm thực phẩm. Điều này giúp nâng cao chất lượng sản phẩm thịt lợn, đảm bảo an toàn cho người tiêu dùng.

V. Kết luận và triển vọng tương lai của nghiên cứu

Nghiên cứu đã chứng minh tính khả thi của phương pháp phân tích ciprofloxacin trong thịt lợn bằng kỹ thuật ELISA. Việc áp dụng phương pháp này không chỉ giúp kiểm soát dư lượng kháng sinh mà còn nâng cao chất lượng thực phẩm. Tương lai, cần tiếp tục nghiên cứu và phát triển các phương pháp phân tích mới để đảm bảo an toàn thực phẩm.

5.1. Tầm quan trọng của việc kiểm soát dư lượng kháng sinh

Kiểm soát dư lượng kháng sinh trong thực phẩm là rất quan trọng để bảo vệ sức khỏe cộng đồng. Cần có các biện pháp mạnh mẽ hơn để đảm bảo an toàn thực phẩm cho người tiêu dùng.

5.2. Hướng nghiên cứu trong tương lai

Nghiên cứu cần tiếp tục phát triển các phương pháp phân tích mới, cải thiện độ nhạy và độ chính xác. Điều này sẽ giúp nâng cao hiệu quả trong việc kiểm soát dư lượng kháng sinh trong thực phẩm.

Trích đoạn nội dung tài liệu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGÔ ĐỨC DŨNG NGHIÊN CỨU CHUẨN HÓA PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH DƯ LƯỢNG CIPROFLOXACIN TRONG THỊT LỢN BẰNG KỸ THUẬT ELISA TẠI PHÒNG KIỂM NGHIỆM CỦA CÔNG TY CỔ PHẦN TẬP ĐOÀN DABACO VIỆT NAM Chuyên ngành: Thú y Mã số : 60 64 01 01 Người hướng dẫn khoa học: TS. Dương Văn Nhiệm NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2017 LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] LỜI CAM ĐOAN - Tôi xin cam đoan rằng, số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực và chưa được sử dụng để bảo vệ một học vị nào. - Tôi xin cam đoan rằng, mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn đã được cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn đều được chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Ngô Đức Dũng i LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS.

Dương Văn Nhiệm, người đã tận tình giúp đỡ tôi trong quá trình nghiên cứu đề tài và hoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô Khoa Thú y và Bộ môn Thú y cộng đồng đã tận tình dạy dỗ và đóng góp các ý kiến quý báu để tôi hoàn thành luận văn này. Tôi chân thành cảm ơn lãnh đạo Công ty Cổ phần Tập đoàn DABACO Việt Nam đã cho phép triển khai và tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình nghiên cứu. Tôi cũng xin chân thành cảm ơn các bạn đồng nghiệp của Phòng Kiểm nghiệm của Công ty Cổ phần Tập đoàn DABACO Việt Nam và gia đình đã động viên, giúp đỡ và tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài này.

Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Ngô Đức Dũng ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] MỤC LỤC Lời cam đoan. ii Mục lục. iii Danh mục chữ viết tắt.v Danh mục bảng. vii Danh mục hình.

viii Trích yếu luận văn. ix Thesis abstract. Tính cấp thiết của đề tài. Mục tiêu của đề tài.

Tổng quan tài liệu. Tình hình an toàn thực phẩm. Tình hình an toàn thực phẩm trên thế giới. Tình hình an toàn thực phẩm ở Việt Nam.

Tình hình sản xuất chăn nuôi ở Việt Nam. Sản xuất và tiêu thụ thịt ở Việt Nam. Tình hình sản xuất, sử dụng, quản lý thuốc thú y trong chăn nuôi. Giới thiệu khái quát về công ty cổ phần tập đoàn dabaco việt nam.

Những hiểu biết cơ bản về kháng sinh nhóm Fluoroquinolone. Kháng sinh nhóm Fluoroquinolone. Kháng sinh Ciprofloxacin. Tồn dư kháng sinh trong thịt lợn và ảnh hưởng của chúng đối với sức khỏe cộng đồng.

Khái niệm về tồn dư. Ảnh hưởng của tồn dư kháng sinh trong thực phẩm đối với sức khỏe cộng đồng. Một số kỹ thuật phân tích dư lượng kháng sinh trong thực phẩm. Khái niệm về ELISA.

Phân loại ELISA. Ưu, nhược điểm của phương pháp phân tích định tính ELISA. Một số yếu tố ảnh hưởng tới kết quả phân tích của phương pháp ELISA .24 iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Các yếu tố ảnh hưởng đến độ nhạy của phản ứng ELISA.

Vật liệu và phương pháp nghiên cứu. Vật liệu nghiên cứu. Đối tượng nghiên cứu. Địa điểm nghiên cứu.

Thời gian nghiên cứu. Vật liệu, hóa chất và thuốc thử. Thiết bị và dụng cụ thí nghiệm. Nội dung nghiên cứu.

Phương pháp nghiên cứu. Thí nghiệm nghiên cứu tính phù hợp của kit ELISA dùng cho phân tích định tính xác định Ciprofloxacin trong mẫu thịt lợn tươi. Ứng dụng kết quả nghiên cứu của phương pháp để phân tích mẫu thực. Phương pháp phân tích số liệu.

Kết quả và thảo luận. Kết quả nghiên cứu tính phù hợp của kit elisa dùng cho phân tích định tính xác định Ciprofloxacin trong thịt lợn tươi. Kết quả nghiên cứu tính ổn định của kit ELISA. Kết quả xác định giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng của kit ELISA.

Kết quả nghiên cứu khả năng phát hiện của kit (CCβ). Kết quả xác định độ chính xác (Accuracy: AC), độ đặc hiệu (Specificity: SP), độ nhạy (Sensitivity: SE), độ lệch dương (Positive deviation: PD) và độ lệch âm (negative deviation: ND). Kết quả xác định độ thu hồi, độ lặp lại và độ tái lặp. Kết quả phân tích dư lượng ciprofloxacin trong mẫu thịt lợn tươi bằng Kit Elisa.

Kết luận và kiến nghị. 44 Tài liệu tham khảo. 49 iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Tên Tiếng Anh Nghĩa Tiếng Việt AC Accuracy Độ chính xác ADI Acceptable Daily Intake Lượng ăn vào hàng ngày chấp nhận được CCα Decision limit Giới hạn quyết định CCβ Detection capability Khả năng phát hiện ELISA Enzyme-Linked ImmunoSorbent Phương pháp ELISA Assay EU European Union Liên hiệp Châu Âu FAO Food and Agriculture Organization Tổ chức Lương thực và Nông nghiệp of the United Nations của Liên Hiệp Quốc FDA Food and Drug Administration Cục Quản lý Thực phẩm và Dược phầm Hoa Kỳ FSIS Food Safety and Inspection Service Cơ quan Thanh tra và An toàn thực phẩm GMP Good Manufacturing Practice Thực hành sản xuất tốt HACCP Hazard Analysis and Critical Hệ thống phân tích mối nguy và kiểm Control Point System soát điểm tới hạn HPLC High-performance liquid Sắc ký lỏng hiệu năng cao chromatography LC/MS-MS Liquid Chromatography/Mass Sắc ký lỏng khối phổ hai lần Spectrometry LOD Limit of Detection Giới hạn phát hiện v LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] LOQ Limit of Quantification Giới hạn định lượng MRL Maximum Residue Limit Giới hạn dư lượng tối đa cho phép MRPL Minimum Required Performance Giới hạn phân tích tối thiểu của Limit phương pháp ND Negative deviation Độ lệch âm NN&PTNT Nông nghiệp và Phát triển nông thôn PD Positive deviation Độ lệch dương Ppb Parts per billion Phần tỷ SE Sensitivity Độ nhạy SP Specificity Độ đặc hiệu TĂCN Thức ăn chăn nuôi TP.HCM Thành phố Hồ Chí Minh IUPAC International Union of Pure and Liên minh Quốc tế về Hóa học thuần Applied Chemistry túy và Hóa học ứng dụng WTO World Trade Organization Tổ chức Thương mại thế giới vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC BẢNG Bảng 2. Ký hiệu quy ước mô phỏng các phương pháp ELISA.

Tiêu chí đánh giá về độ thu hồi. Tiêu chí đánh giá về % CV. Kết quả phân tích kiểm tra đường chuẩn và tính ổn định của kit. Kết quả phân tích và kết quả tính toán giới hạn phát hiện (LOD) Ciprofloxacin trong thịt lợn tươi.

Kết quả xác định giới hạn phát hiện của phương pháp ở nồng độ 1,6 g/kg. Kết quả phân tích mẫu xác định độ chính xác, độ đặc hiệu, độ nhạy, độ lệch âm và độ lệch dương của phương pháp. Kết quả phân tích về độ chính xác độ đặc hiệu, độ nhạy, độ lệch âm và độ lệch dương. Kết quả đánh giá độ chính xác (AC), độ đặc hiệu, độ nhạy (SE), độ lệch dương (PD) và độ lệch âm (ND) của kit.

Độ thu hồi (R%), độ lặp lại và độ tái lặp của Ciprofloxacin trên nền mẫu thịt lợn tại 5 µg/kg. Độ thu hồi (R%), độ lặp lại và độ tái lặp của Ciprofloxacin trên nền mẫu thịt lợn tại 7,5 µg/kg. Độ thu hồi (R%), độ lặp lại và độ tái lặp của Ciprofloxacin trên nền mẫu thịt lợn tại 10 µg/kg. Kết quả phân tích dư lượng Ciprofloxacin trong mẫu thịt lợn tươi bằng kỹ thuật ELISA.

42 vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC HÌNH Hình 2. Chuỗi giá trị sản xuất của Công ty Cổ phần Tập đoàn DABACO Việt Nam. Sơ đồ mô phỏng của phương pháp ELISA sandwich và ELISA cạnh tranh. Đường chuẩn biểu thị mối tương quan giữa nồng độ chuẩn Ciprofloxacin và độ hấp thụ của kit.

34 viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Ngô Đức Dũng Tên luận văn: Nghiên cứu chuẩn hóa phương pháp phân tích dư lượng ciprofloxacin trong thịt lợn bằng kỹ thuật ELISA tại phòng kiểm nghiệm của Công ty Cổ phần Tập đoàn DABACO Việt Nam. Ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01 Tên cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu: - Chuẩn hóa được phương pháp phân tích Ciprofloxacin trong thịt lợn tươi bằng kỹ thuật ELISA; - Ứng dụng phương pháp đã chuẩn hóa để kiểm soát tồn dư Ciprofloxacin trong thịt lợn tươi của Công ty Cổ phần Tập đoàn DABACO Việt Nam. Phương pháp: - Thí nghiệm nghiên cứu tính phù hợp của kit ELISA dùng cho phân tích định tính xác định Ciprofloxacin trong mẫu thịt lợn tươi. - Ứng dụng kết quả nghiên cứu của phương pháp để phân tích mẫu thực - Phương pháp phân tích số liệu Kết quả chính và kết luận: 1.

Bộ kit ELISA dùng cho phân tích định tính dư lượng Ciprofloxacin trong thịt lợn của hãng Biooscientific (MaxSignalTM Ciprofloxacin, mã 1068-01) đạt yêu cầu về tính ổn định; các thông số về khả năng phát hiện, hiệu lực của kit trong điều kiện phòng thử nghiệm của DABACO là: Độ chính xác (AC): 95% (AC ≥ 90%) Độ đặc hiệu: 100% (SP ≥ 90%) Độ nhạy (SE): 90% (SE ≥ 90%) Độ lệch dương (PD): 0% (PD ≤ 10%) Độ lệch âm (ND): 9,1% (ND ≤ 10%). Giới hạn phát hiện LOD là 1,52 µg/kg Khả năng phát hiện CCß là 1,60 µg/kg Độ thu hồi trong khoảng từ 81,0 - 109,2% Độ lặp lại là 7,99 – 10,64 ix LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] Độ tái lặp 8,63- 9,43 Kết quả này đáp ứng được yêu cầu của một phương pháp phân tích định tính theo quy định trong Quyết định 657/2002/EC. Phương pháp phân tích dư lượng Ciprofloxacin trong thịt lợn bằng kỹ thuật ELISA đáp ứng các quy định trong Quyết định 657/2002/EC về yêu cầu kỹ thuật của một phương phấp phân tích sàng lọc. Phương pháp là phù hợp để ứng dụng tại phòng kiểm nghiệm của DABACO trong phân tích sàng lọc dư lượng Ciprofloxacin trong thịt lợn.

Phòng thử nghiệm quy định diễm giải kết quả thử nghiệm phân tích dư lượng Ciprofloxacin trong thịt lợn bằng kỹ thuật ELISA theo khả năng phát hiện CCß là 1,60 µg/kg (mẫu thịt lợn dương tính dư lượng Ciprofloxacin, cần phân tích khẳng định bằng kỹ thuật LC/MS/MS). x LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] THESIS ABSTRACT 1. Master candidate: Ngo Duc Dung 2. Thesis title: "A study on validation of analysis method of Ciprofloxaxin residue in pork by the ELISA technique at the laboratory of DABACO Group”.

Major: Veterinary Medicine Code: 60 64 01 01 4. Educational organization: Vietnam National University of Agriculture (VNUA) Research Objectives To validate the analysis method of Ciprofloxaxin residue in fresh pork by the ELISA technique.