Nghiên cứu phát hiện đột biến gene CALR type 1 và type 2 trong bệnh lý huyết học tại Hà Nội

Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật PCR trong phát hiện đột biến gene CALR type 1 và type 2 ở bệnh nhân hội chứng tăng sinh tủy âm tính với JAK2V617F.

• Tác giả: Phạm Thị Phương Thảo
• Người hướng dẫn: Ts. Dương Quốc Chính
• Trường học: Đại học Quốc gia Hà Nội
• Chuyên ngành: Kỹ thuật xét nghiệm y học
• Đề tài: Nghiên cứu phát hiện đột biến gene CALR và JAK2 trong bệnh lý huyết học
• Loại tài liệu: khóa luận tốt nghiệp
• Năm xuất bản: 2023
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CẢM ƠN
• DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT
• DANH MỤC HÌNH
• DANH MỤC BẢNG BIỂU
• 1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 1.1. Tổng quan về hội chứng tăng sinh tuỷ
• 1.2. Khái niệm và đặc điểm dịch tễ học
• 1.3. Cơ chế sinh bệnh
• 1.4. Tổng quan về gen liên quan đến hội chứng rối loạn tăng sinh tuỷ
• 1.5. Tổng quan về gen CALR
• 1.6. Đặc điểm di truyền của gen CALR
• 1.7. Vai trò của gen CALR trong hội chứng tăng sinh tuỷ
• 2. CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.1. Tiêu chuẩn lựa chọn
• 2.2. Tiêu chuẩn loại trừ
• 2.3. Phương pháp chọn mẫu
• 2.4. Địa điểm và thời gian nghiên cứu
• 2.5. Thời gian nghiên cứu
• 2.6. Phương pháp nghiên cứu
• 2.7. Thiết kế nghiên cứu: mô tả cắt ngang
• 2.8. Phương pháp nghiên cứu
• 2.9. Vật tư, hóa chất và trang thiết bị sử dụng trong nghiên cứu
• 2.10. Quy trình nghiên cứu
• 2.11. Quy trình kỹ chiết DNA tủy xương
• 2.12. Kiểm tra, đánh giá năng độ DNA trên máy quang phổ Nano Drop
• 2.13. Kỹ thuật PCR trong phát hiện đột biến CALR type 1 và type 2
• 2.14. Quản lý và phân tích số liệu
• 3. CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ
• 3.1. Đặc điểm chung của bệnh nhân nghiên cứu
• 3.2. Đặc điểm về giới tính của nhóm nghiên cứu
• 3.3. Đặc điểm về tuổi của nhóm nghiên cứu
• 3.4. Đặc điểm về các thể bệnh của nhóm nghiên cứu
• 3.5. Xây dựng và hoàn thiện quy trình PCR phát hiện đột biến CALR type 1 và type 2
• 3.6. Nghiên cứu các cặp mồi cho qui trình PCR
• 3.7. Các cặp mồi suy biến cho đột biến CALR type 1
• 3.8. Các cặp mồi đặc hiệu cho đột biến CALR type 2
• 3.9. Tái ủ nhiệt độ kỹ thuật PCR phát hiện đột biến CALR
• 3.10. Kết quả ứng dụng quy trình PCR phát hiện đột biến CALR type 1 và type 2
• 3.11. Đặc điểm, phân bố hai loại đột biến gen CALR trong nghiên cứu
• 4. CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN
• KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng quan về đột biến gene CALR và JAK2 trong bệnh lý huyết học

Đột biến gene CALR và JAK2 là hai yếu tố quan trọng trong chẩn đoán và điều trị các bệnh lý huyết học, đặc biệt là hội chứng tăng sinh tủy (MPNs). Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng đột biến JAK2V617F xuất hiện ở khoảng 95% bệnh nhân mắc bệnh đa hồng cầu nguyên phát và 50% bệnh nhân mắc bệnh tăng tiểu cầu tiên phát. Trong khi đó, đột biến gene CALR đã được xác định là một dấu hiệu chẩn đoán quan trọng cho những bệnh nhân âm tính với JAK2. Việc phát hiện sớm các đột biến này có thể giúp cải thiện kết quả điều trị và tiên lượng cho bệnh nhân.

1.1. Định nghĩa và vai trò của gene CALR và JAK2

Gene CALR mã hóa cho protein Calreticulin, có vai trò quan trọng trong việc điều chỉnh sự phát triển và chức năng của tế bào. Gene JAK2, ngược lại, là một phần của con đường truyền tín hiệu cho các yếu tố tăng trưởng huyết học. Sự đột biến ở hai gene này có thể dẫn đến rối loạn sản xuất tế bào máu.

1.2. Tình hình nghiên cứu hiện tại về CALR và JAK2

Nghiên cứu về đột biến gene CALR và JAK2 đang ngày càng được chú trọng. Các phương pháp như PCR và NGS đang được áp dụng để phát hiện các đột biến này, giúp nâng cao độ chính xác trong chẩn đoán và điều trị.

II. Vấn đề và thách thức trong phát hiện đột biến gene CALR và JAK2

Mặc dù đã có nhiều tiến bộ trong việc phát hiện đột biến gene CALR và JAK2, nhưng vẫn còn nhiều thách thức trong việc áp dụng các phương pháp này vào thực tiễn lâm sàng. Một trong những vấn đề lớn nhất là sự thiếu hụt các bộ kit xét nghiệm phù hợp tại Việt Nam, dẫn đến khó khăn trong việc chẩn đoán chính xác. Ngoài ra, việc đào tạo nhân lực có chuyên môn cao cũng là một thách thức lớn.

2.1. Khó khăn trong việc tiếp cận công nghệ xét nghiệm hiện đại

Nhiều cơ sở y tế vẫn chưa có đủ trang thiết bị và công nghệ để thực hiện các xét nghiệm phát hiện đột biến gene CALR và JAK2. Điều này dẫn đến việc chẩn đoán không chính xác và chậm trễ trong điều trị.

2.2. Thiếu hụt nhân lực chuyên môn trong lĩnh vực xét nghiệm

Việc thiếu hụt nhân lực có chuyên môn trong lĩnh vực xét nghiệm gene cũng là một vấn đề lớn. Điều này ảnh hưởng đến khả năng thực hiện và phân tích kết quả xét nghiệm một cách chính xác.

III. Phương pháp phát hiện đột biến gene CALR và JAK2 hiệu quả

Để phát hiện đột biến gene CALR và JAK2, các phương pháp như PCR, AS-PCR và NGS đã được áp dụng rộng rãi. Những phương pháp này không chỉ giúp phát hiện nhanh chóng mà còn nâng cao độ chính xác trong chẩn đoán. Việc sử dụng các kỹ thuật này có thể giúp các bác sĩ đưa ra quyết định điều trị kịp thời và hiệu quả hơn.

3.1. Kỹ thuật PCR trong phát hiện đột biến gene

Kỹ thuật PCR (Polymerase Chain Reaction) là một trong những phương pháp phổ biến nhất để phát hiện đột biến gene. Phương pháp này cho phép khuếch đại một đoạn DNA cụ thể, giúp dễ dàng phát hiện các đột biến.

3.2. Ứng dụng NGS trong nghiên cứu gene CALR và JAK2

Next Generation Sequencing (NGS) là một công nghệ tiên tiến cho phép giải trình tự gene một cách nhanh chóng và chính xác. NGS giúp phát hiện nhiều loại đột biến trong cùng một lần xét nghiệm, từ đó nâng cao khả năng chẩn đoán.

IV. Ứng dụng thực tiễn của việc phát hiện đột biến gene CALR và JAK2

Việc phát hiện đột biến gene CALR và JAK2 không chỉ có ý nghĩa trong chẩn đoán mà còn trong điều trị bệnh lý huyết học. Các bác sĩ có thể dựa vào kết quả xét nghiệm để đưa ra phác đồ điều trị phù hợp, từ đó nâng cao chất lượng cuộc sống cho bệnh nhân. Nghiên cứu cũng cho thấy rằng bệnh nhân có đột biến gene CALR thường có tiên lượng tốt hơn so với những bệnh nhân có đột biến JAK2.

4.1. Tác động của đột biến gene đến tiên lượng bệnh

Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng bệnh nhân có đột biến gene CALR thường có tiên lượng tốt hơn so với bệnh nhân có đột biến JAK2. Điều này có thể giúp bác sĩ đưa ra quyết định điều trị hiệu quả hơn.

4.2. Vai trò của xét nghiệm gene trong điều trị cá thể hóa

Xét nghiệm gene giúp xác định các đặc điểm di truyền của bệnh nhân, từ đó cho phép điều trị cá thể hóa, nâng cao hiệu quả điều trị và giảm thiểu tác dụng phụ.

V. Kết luận và tương lai của nghiên cứu về gene CALR và JAK2

Nghiên cứu về đột biến gene CALR và JAK2 đang mở ra nhiều triển vọng mới trong lĩnh vực huyết học. Việc phát hiện sớm và chính xác các đột biến này có thể giúp cải thiện đáng kể kết quả điều trị cho bệnh nhân. Trong tương lai, cần tiếp tục nghiên cứu và phát triển các phương pháp xét nghiệm mới để nâng cao độ chính xác và khả năng tiếp cận cho tất cả bệnh nhân.

5.1. Triển vọng nghiên cứu trong tương lai

Các nghiên cứu tiếp theo cần tập trung vào việc phát triển các phương pháp xét nghiệm mới và cải thiện quy trình chẩn đoán để đáp ứng nhu cầu ngày càng cao trong điều trị bệnh lý huyết học.

5.2. Tầm quan trọng của việc nâng cao nhận thức về đột biến gene

Nâng cao nhận thức về tầm quan trọng của việc phát hiện đột biến gene CALR và JAK2 trong cộng đồng y tế là rất cần thiết. Điều này sẽ giúp cải thiện chất lượng chẩn đoán và điều trị cho bệnh nhân.

Trích đoạn nội dung tài liệu

Đ¾I HàC QUÞC GIA HÀ NÞI TR¯âNG Đ¾I HàC Y D¯þC Ph¿m Thß Ph°¢ng ThÁo ĄNG DĀNG KĀ THUÂT PCR Đ PHÁT HIàN ĐÞT BI¾N GENE CALR TYPE 1 VÀ TYPE 2 ä NHĀNG BàNH NHÂN MÄC HÞI CHĄNG TNG SINH TĂY ÂM TÍNH VàI ĐÞT BI¾N JAK2V617F KHÓA LUÂN TÞT NGHIàP Đ¾I HàC NGÀNH K) THUÂT XÉT NGHIàM Y HàC Hà Nßi - 2023 Đ¾I HàC QUÞC GIA HÀ NÞI TR¯âNG Đ¾I HàC Y D¯þC Ph¿m Thß Ph°¢ng ThÁo ĄNG DĀNG KĀ THUÂT PCR Đ PHÁT HIàN ĐÞT BI¾N GENE CALR TYPE 1 VÀ TYPE 2 ä NHĀNG BàNH NHÂN MÄC HÞI CHĄNG TNG SINH TĂY ÂM TÍNH VàI ĐÞT BI¾N JAK2V617F KHÓA LUÂN TÞT NGHIàP Đ¾I HàC NGÀNH K) THUÂT XÉT NGHIàM Y HàC Cán bß h°áng dÁn: Ts. D°¢ng Qußc Chính Ths. Trần TuÃn Anh Hà Nßi - 2023 Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học LâI CÀM ¡N Tr°ớc tiên, tôi xin gāi lßi cÁm ¢n chân thành và sâu sÁc tới TS. D°¢ng Quác Chính – GiÁng viên tr°ßng đ¿i hãc Y D°ợc – Đ¿i hãc Quác gia Hà Nội kiêm Tr°áng Khoa Di truyền & Sinh hãc phân tā - Viãn HuyÁt hãc và Truyền máu Trung ¯¢ng.

GiÁng viên đã h°ớng dẫn tôi trong quá trình nghiên cāu, đã luôn t¿n tình h°ớng dẫn, quan tâm, giÁi đáp nhăng thÁc mÁc, khó khn, đãng thßi luôn động viên tôi trong suát quá trình, giúp tôi hãc đ°ợc nhăng bài hãc quý báu, đß tôi có thß hoàn thành tát đề tài cÿa mình. Tôi xin trân trãng cÁm ¢n ThS. TrÅn TuÃn Anh- Th¿c sĩ kỹ thu¿t xét nghiãm – Khoa Di truyền & Sinh hãc phân tā - Viãn HuyÁt hãc và Truyền máu Trung ¯¢ng, ng°ßi đã h°ớng dẫn tôi nhăng điều c¢ bÁn nhÃt tÿ ngày đÅu tiên tham gia vào nhóm nghiên cāu thực nghiãm, hç trợ nhiãt tình cho tôi trong suát quá trình thực hành tÿ nhăng thao tác nhß nhÃt và giúp đỡ, chia sẻ cho tôi nhăng tài liãu hău ích trong suát thßi gian là thành viên cÿa nhóm. ĐÁc biãt h¢n cÁ, anh đã giúp tôi thêm gÁn bó chÁt ch¿ với các thành viên trong nhóm và môi tr°ßng thực hành á viãn.

Đãng thßi không thß thiÁu đ°ợc, tôi trân trãng cÁm ¢n sự tài trợ cÿa Viãn HuyÁt hãc Truyền máu Trung °¢ng cho đề tài. Trong quá trình hãc t¿p, làm viãc và thực hiãn khóa lu¿n, tôi đã nh¿n đ°ợc sự giúp đỡ nhiãt tình cÿa các thÅy cô, anh chá và các b¿n sinh viên làm viãc t¿i thực t¿p t¿i Khoa Di truyền – Sinh hãc phân tā. Tôi xin chân thành cÁm ¢n. Đß thực hiãn tát khóa lu¿n này, tôi xin gāi lßi cÁm ¢n tới Ban chÿ nhiãm khoa, cùng toàn thß các thÅy cô giáo tr°ßng đ¿i hãc Y d°ợc - Đ¿i hãc Quác gia Hà Nội đã cho tôi nhăng kiÁn thāc quý báu trong quá trình hãc t¿p t¿i tr°ßng.

Hà Nội, ngày 24 tháng 05 năm 2023 Ph¿m Thß Ph°¢ng ThÁo Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học DANH MĀC CÁC TĆ VI¾T TÄT Tć vi¿t tÅt Tên đầy đă Tć ti¿ng viát CALR Calreticulin Chronic myelogenous Bãnh L¢-xê-mi kinh CML leukemia dòng h¿t DNA Deoxyribonucleotid acid EDTA Ethylenediaminetraacetic acid Bãnh tng tißu cÅu tiên ET Essential thrombocythaemia phát JAK2 Janus kinase 2 Gen JAK2 MPNs Myeloproliferative neoplasm Bãnh tng sinh tÿy m¿n Myeloproliferative leukemia MPL Gen MPL virus oncogene NC Normal Control Mẫu chāng âm GiÁi trình tự gen thÁ hã NGS Next Generation Sequencing mới PhÁn āng khuÁch đ¿i PCR Polymerase chain reaction chuçi Nhiám sÁc thß Ph Philadelphia chromosome Philadelphia Bãnh x¢ tÿy nguyên PMF Primary myelofibrosis phát POS Positive Mẫu chāng d°¢ng Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học PV Polycythaemia vera Bãnh đa hãng cÅu nguyên phát RNA Ribonucleic acid WHO World Health Organization Tå chāc Y tÁ thÁ giới G-CSF Granulocyte YÁu tá kích thích b¿ch colonystimulating factor cÅu h¿t HSC Hematopietic stem cells Các tÁ bào gác t¿o máu TBCAT Tng b¿ch cÅu ái toan TBCAK Tng b¿ch cÅu ái kiềm AS- PCR Allele-specific PCR ĐÁc hiãu allene Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học DANH MĀC HÌNH Hình 1. Vß trí căa nhißm sÅc thà chąa gen CALR. To¿ đß căa gen CALR trên nhißm sÅc thà sß 19. CÃu trúc căa protein Calreticulin.

Đßt bi¿n gen CALR type 1 và type 2 trên exon 9 [18]. Quy trình nghiên cąu. Nguyên lí căa phÁn ąng PCR. Vß trí căa mßi đầu (F) Forward và mßi đầu (R) Reverse.

K¿t quÁ tßi °u nhiát đß gÅn mßi trong PCR phát hián đßt bi¿n CALR type 1. K¿t quÁ tßi °u nhiát đß gÅn mßi trong PCR phát hián đßt bi¿n CALR type 2 .27 Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học DANH MĀC BÀNG BIÂU BÁng 2. Các bi¿n sß trong nghiên cąu. Dāng cā và vÃt t° tiêu hao sÿ dāng trong thí nghiám.

Thành phần và chu trình nhiát phÁn ąng PCR phát hián đßt. 16 bi¿n CALR type 1. Thành phần và điÁu kián phÁn ąng PCR phát hián đßt bi¿nCALR type 2.1: Phân bß vÁ giái tính căa nhóm nghiên cąu .2: Phân bß tćng nhóm bánh nghiên cąu .3: Phân bß khoÁng tuái căa nhóm bánh nghiên cąu. Phân bß khoÁng tuái theo tćng nhóm bánh nghiên cąu.

Thi¿t k¿ mßi phát hián đßt bi¿n CALR type 1. Thi¿t k¿ mßi phát hián đßt bi¿n CALR type 2. Phân bß tÿ lá đßt bi¿n trong nghiên cąu. Phân bß tÿ lá đßt bi¿n theo nhóm bánh.

Phân bß tÿ lá đßt bi¿n theo giái tính å nhóm nghiên cąu. Phân bß tÿ lá đßt bi¿n theo khoÁng tuái å nhóm nghiêncąu. Tÿ lá thà bánh trong nhóm nghiên cąu &&&&&&&&24 MĀC LĀC Đ¾T VÂN ĐÀ.1 CH¯¡NG 1 - TàNG QUAN TÀI LIàU. Tång quan về hội chāng tng sinh tuỷ.

Khái niãm và đÁc đißm dách tá hãc. C¢ chÁ sinh bãnh hãc. Tång quan về gen liên quan đÁn hội chāng rái lo¿n tng sinh tÿy&&. Tång quan về gen CALR.

ĐÁc đißm di truyßn cÿa gen CALR. Vai trò cÿa gen CALR trong hội chāng tng sinh tÿy.7 CH¯¡NG 2 - ĐÞI T¯þNG VÀ PH¯¡NG PHÁP NGHIÊN CĄU. Tiêu chuẩn lựa chãn. Tiêu chuẩn lo¿i trÿ.

Ph°¢ng pháp chãn mẫu. Đáa đißm và thßi gian nghiên cāu. Thßi gian nghiên cāu. Ph°¢ng pháp nghiên cāu.

ThiÁt kÁ nghiên cāu: mô tÁ cÁt ngang. Ph°¢ng pháp nghiên cāu. V¿t t°, hóa chÃt và trang thiÁt bá sā dụng trong nghiên cāu. Quy trình nghiên cāu.

Quy trình kỹ chiÁt DNA tång sá sā dụng h¿t tÿ. Kißm tra, đánh giá nãng độ DNA trên máy quang phå Nano Drop. Kỹ thu¿t PCR trong phát hiãn đột biÁn CALR type 1 và type 2…………14 2. QuÁn lý và phân tích sá liãu.&&19 CH¯¡NG 3 - K¾T QUÀ.

ĐÁc đißm chung cÿa bãnh nhân nghiên cāu. ĐÁc đißm về giới tính cÿa nhóm nghiên cāu. ĐÁc đißm về tuåi cÿa nhóm nghiên cāu. ĐÁc đißm về các thß bãnh cÿa nhóm nghiên cāu.

Xây dựng và hoàn thiãn quy trình PCR phát hiãn đột biÁn CALR type 1 và type 2. Nghiên cāu các cÁp mãi cho qui trình PCR. Các cặp mồi suy biến cho đột biến CALR type 1. Các cặp mồi đặc hiệu cho đột biến CALR type 2.

Tái °u nhiãt độ kỹ thu¿t PCR phát hiãn đột biÁn CALR. KÁt quÁ āng dụng quy trình PCR phát hiãn đột biÁn CALR type 1 và CALR type 2. ĐÁc đißm, phân bá hai lo¿i đột biÁn gen CALR trong nghiên cāu&.27 CH¯¡NG 4 - BÀN LUÂN.31 K¾T LUÂN VÀ ĐÀ XUÂT.34 TÀI LIàU THAM KHÀO.&&& Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học Đ¾T VÂN ĐÀ Hội chāng tng sinh tÿy (Myeloproliferative neoplasm-MPNs) là sự tng sinh bÃt th°ßng cÿa các tÁ bào gác tÿy x°¢ng, bißu hiãn là tng tißu cÅu, tng hãng cÅu hoÁc b¿ch cÅu trong máu và đôi khi tng sinh x¢ trong tÿy x°¢ng với dián biên tiÁp theo là sinh máu ngoài tÿy (sự sÁn xuÃt tÁ bào bên ngoài tÿy x°¢ng) và chúng đ°ợc phân lo¿i là tng tißu cÅu tiên phát (Essential thrombocythaemia - ET), X¢ tÿy nguyên phát (Primary myelofibrosis - PMF), Đa hãng cÅu nguyên phát (Polycythaemia vera - PV), L¢ xê mi kinh dòng tÿy. Ngoài ra các thß tng sinh tÿy ít phå biÁn h¢n bao gãm hội chāng tng b¿ch cÅu ái toan và tng tÁ bào mastocytosis và các hội chāng tng b¿ch cÅu h¿t khác.

Các khái u tng sinh tÿy cjng có thß t°¢ng đãng với các hội chāng tng sinh tÿy. Tuy có tên chung là hội chāng tng sÁn tÿy nh°ng các kißu bãnh khác nhau mang các đÁc đißm di truyền hãc khác nhau và trong đó, đột biÁn gen JAK2V617F và gen CALR đ°ợc xác đánh là nhăng dÃu Ãn có giá trá trong chẩn đoán hội chāng tng sinh tÿy [1]. Janus kinase 2 là một thành viên cÿa hã enzym Tyrosine kinase lo¿i I và tham gia vào quá trình truyền tín hiãu cho các thụ thß erythropoietin, thrombopoietin và yÁu tá kích thích b¿ch cÅu h¿t. Các đột biÁn cÿa gen Janus kinase 2 (JAK2) là nguyên nhân gây ra bãnh đa hãng cÅu và chiÁm một tỷ lã cao các tr°ßng hợp tng tißu cÅu tiên phát và bãnh x¢ tÿy nguyên phát.[2] Gen CALR cjng bá đột biÁn á một tỷ lã đáng kß á bãnh nhân tng tißu cÅu tiên phát và bãnh nhân x¢ tÿy nguyên phát và hiÁm khi á bãnh đa hãng cÅu.

Đột biÁn gen CALR trong hội chāng tng sinh tÿy đã đ°ợc báo cáo là dÃu hiãu quan trãng trong chẩn đoán phân tā, đÁc biãt á nhăng bãnh nhân âm tính với JAK2 V617F[3]. Gen CALR đã đ°ợc xác đánh là đột biÁn gây bãnh á một phÅn t° các bãnh nhân mÁc ET và PMF [4]. Trong nhăng nm gÅn đây ng°ßi ta phát hiãn thÃy sự xuÃt hiãn cÿa đột biÁn gen CALR trên các nhóm hội chāng tng sÁn tÿy không mang đột biÁn JAK2 vì thÁ đột biÁn CALR nhanh chóng trá thành một tiêu chí đß chẩn đoán bãnh này[5]. Đß tìm hißu và chuẩn đoán rõ h¢n về các biÁn thß đột biÁn gen CALR, các đột biÁn CALR đ°ợc phân tích bằng các kỹ thu¿t bao gãm kỹ thu¿t PCR đÁc hiãu 1 Khóa luận tốt nghiệp Phạm Thị Phương Thảo - K8 Kỹ thuật xét nghiệm y học allene (Allele-specific polymer chain reaction- AS-PCR), PCR đánh l°ợng thßi gian thực (Real Time PCR – qPCR), giÁi trình tự thÁ hã mới (Next-Generation Sequencing - NGS),.Trong đó PCR là kỹ thu¿t một dá làm, mang l¿i hiãu quÁ kinh tÁ cao đang đ°ợc sā dụng đß phát hiãn đột biÁn gen CALR á nhăng bãnh nhân mÁc hội chāng tng sinh tÿy.

Tuy nhiên ph°¢ng pháp này và các bộ kit đß xét nghiãm ch°a đ°ợc áp dụng phå biÁn á Viãt Nam. Vì v¿y chúng tôi tiÁn hành nghiên cāu <Āng dụng kỹ thuật PCR phát hiện đột biến gen CALR type 1 và type 2 ở những bệnh nhân mắc hội chāng tăng sinh tÿy âm tính với JAK2V617F= nhằm āng dụng trong chẩn đoán và điều trá hội chāng tng sÁn tÿy.