Kiểm nghiệm vacxin Kyoto Biken phòng bệnh rối loạn sinh sản do virus parvo trên lợn

Nghiên cứu kiểm nghiệm vacxin Kyoto Biken phòng bệnh rối loạn sinh sản do virus parvo trên lợn, góp phần nâng cao hiệu quả chăn nuôi.

• Tác giả: Đỗ Huyền Trang
• Người hướng dẫn: PGS. Bùi Trần Anh Đào
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Thú y
• Đề tài: Kiểm nghiệm một số chỉ tiêu của vacxin Kyoto Biken Porcine Parvovirus nhập từ Nhật Bản phòng bệnh rối loạn sinh sản do virus Parvo gây ra trên lợn.
• Loại tài liệu: Luận văn
• Năm xuất bản: 2017
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• 1. MỤC LỤC
• 1.1. Lời cam đoan
• 1.2. Mục lục
• 1.3. Danh mục chữ viết tắt
• 1.4. Danh mục bảng
• 1.5. Danh mục hình
• 1.6. Trích yếu luận văn
• 1.7. Thesis abstract
• 1.8. Tính cấp thiết của đề tài
• 1.9. Mục tiêu nghiên cứu
• 1.10. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài
• 1.11. Tổng quan tài liệu
• 1.11.1. Bệnh rối loạn sinh sản do porcine parvovirus gây ra trên lợn
• 1.11.2. Lịch sử bệnh
• 1.11.3. Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước về PPV
• 1.11.4. Truyền nhiễm học
• 1.11.5. Đặc điểm của virus
• 1.11.6. Đặc điểm dịch tễ học
• 1.11.7. Cơ chế sinh bệnh
• 1.11.8. Miễn dịch chống PPV
• 1.11.9. Phòng và kiểm soát bệnh
• 1.11.10. Vacxin và vacxin phòng bệnh gây ra do PPV
• 1.11.10.1. Khái niệm về vacxin
• 1.11.10.2. Đặc tính cơ bản của vacxin
• 1.11.10.3. Phân loại vacxin
• 1.11.10.4. Nguyên lý sử dụng vacxin
• 1.11.10.5. Quy luật hình thành kháng thể sau khi sử dụng vacxin ở động vật
• 1.11.10.6. Vacxin phòng bệnh gây ra do PPV
• 1.12. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
• 1.12.1. Địa điểm nghiên cứu
• 1.12.2. Thời gian nghiên cứu
• 1.12.3. Đối tượng/vật liệu nghiên cứu
• 1.12.4. Nội dung nghiên cứu
• 1.12.5. Phương pháp nghiên cứu
• 1.12.5.1. Kiểm tra tính vô trùng của vacxin
• 1.12.5.2. Kiểm tra tính an toàn của vacxin
• 1.12.5.3. Kiểm tra hiệu lực của vacxin
• 1.12.5.4. Đánh giá thời hạn bảo quản của vacxin
• 1.13. Kết quả và thảo luận
• 1.13.1. Kết quả kiểm tra tính vô trùng của vacxin
• 1.13.2. Kết quả kiểm tra tính an toàn của vacxin
• 1.13.3. Các triệu chứng lâm sàng của lợn và các phản ứng cục bộ tại vị trí tiêm trong 21 ngày sau khi tiêm vacxin
• 1.13.4. Thân nhiệt của lợn thí nghiệm trong 21 ngày sau khi tiêm vacxin
• 1.13.5. Theo dõi sự tăng trọng của lợn thí nghiệm trong 21 ngày sau khi tiêm vacxin
• 1.13.6. Kết quả kiểm tra hiệu lực của vacxin
• 1.13.7. Kết quả đánh giá thời hạn bảo quản của vacxin
• 1.13.8. Kết quả kiểm tra đặc tính của vacxin trong thời gian bảo quản
• 1.13.9. Kết quả kiểm tra tính vô trùng của vacxin trong thời gian bảo quản
• 1.13.10. Kết quả kiểm tra tính an toàn của vacxin trong thời gian bảo quản
• 1.13.11. Kết quả kiểm tra hiệu lực của vacxin trong thời gian bảo quản
• 1.13.12. Kết quả kiểm tra độ ổn định pH của vacxin trong thời gian bảo quản
• 1.13.13. Đánh giá thời hạn bảo quản của vacxin
• 1.13.14. Đánh giá về vacxin Kyoto Biken Porcine Parvovirus
• 1.14. Kết luận và kiến nghị
• Tài liệu tham khảo

Tóm tắt

I. Tổng quan về vacxin Kyoto Biken phòng bệnh rối loạn sinh sản

Vacxin Kyoto Biken là một trong những sản phẩm quan trọng trong việc phòng ngừa bệnh rối loạn sinh sản do virus parvo gây ra trên lợn. Bệnh này không chỉ ảnh hưởng đến sức khỏe của lợn mà còn gây thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi. Việc nghiên cứu và kiểm nghiệm hiệu quả của vacxin này là cần thiết để đảm bảo an toàn cho đàn lợn và nâng cao hiệu quả sản xuất.

1.1. Vacxin Kyoto Biken và vai trò trong phòng bệnh

Vacxin Kyoto Biken được sản xuất từ chủng virus parvo, có khả năng kích thích hệ miễn dịch của lợn, giúp ngăn ngừa các triệu chứng lâm sàng như thai lưu và sảy thai. Việc tiêm phòng vacxin này giúp bảo vệ lợn nái và tăng cường sức khỏe cho đàn lợn.

1.2. Tình hình bệnh rối loạn sinh sản do virus parvo

Bệnh rối loạn sinh sản do virus parvo gây ra là một trong những vấn đề nghiêm trọng trong chăn nuôi lợn. Triệu chứng của bệnh bao gồm thai gỗ, thai lưu và vô sinh, ảnh hưởng lớn đến năng suất và hiệu quả kinh tế của các trang trại.

II. Thách thức trong việc phòng bệnh rối loạn sinh sản ở lợn

Mặc dù vacxin Kyoto Biken đã được phát triển, nhưng việc phòng bệnh rối loạn sinh sản do virus parvo vẫn gặp nhiều thách thức. Các yếu tố như môi trường, dinh dưỡng và quản lý chăn nuôi đều ảnh hưởng đến hiệu quả của vacxin.

2.1. Các yếu tố ảnh hưởng đến hiệu quả vacxin

Hiệu quả của vacxin phụ thuộc vào nhiều yếu tố như chất lượng vacxin, phương pháp tiêm phòng và tình trạng sức khỏe của lợn. Việc tiêm phòng không đúng cách có thể dẫn đến hiệu quả thấp.

2.2. Tình trạng dịch bệnh và sự lây lan của virus

Virus parvo có khả năng lây lan nhanh chóng trong đàn lợn, đặc biệt là trong các trang trại có mật độ nuôi cao. Điều này làm tăng nguy cơ bùng phát dịch bệnh, gây thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi.

III. Phương pháp nghiên cứu hiệu quả vacxin Kyoto Biken

Nghiên cứu hiệu quả của vacxin Kyoto Biken được thực hiện thông qua các phương pháp kiểm nghiệm nghiêm ngặt. Các chỉ tiêu như tính vô trùng, an toàn và hiệu lực của vacxin được đánh giá để đảm bảo chất lượng sản phẩm.

3.1. Kiểm nghiệm tính vô trùng của vacxin

Việc kiểm nghiệm tính vô trùng của vacxin là rất quan trọng để đảm bảo rằng sản phẩm không chứa mầm bệnh. Các phương pháp nuôi cấy trên môi trường đặc biệt được sử dụng để kiểm tra tính vô trùng.

3.2. Đánh giá tính an toàn và hiệu lực của vacxin

Đánh giá tính an toàn của vacxin được thực hiện thông qua việc theo dõi các phản ứng phụ sau khi tiêm. Hiệu lực của vacxin được xác định bằng cách đo lường mức độ kháng thể trong huyết thanh của lợn.

IV. Kết quả nghiên cứu về vacxin Kyoto Biken

Kết quả nghiên cứu cho thấy vacxin Kyoto Biken đạt tiêu chuẩn về tính vô trùng, an toàn và hiệu lực. Vacxin này đã chứng minh khả năng bảo vệ lợn khỏi virus parvo, góp phần quan trọng trong việc phòng ngừa bệnh rối loạn sinh sản.

4.1. Kết quả kiểm nghiệm tính vô trùng

Kết quả kiểm nghiệm cho thấy vacxin Kyoto Biken đảm bảo tính vô trùng trên các môi trường nuôi cấy, không có sự hiện diện của mầm bệnh.

4.2. Đánh giá hiệu lực bảo vệ của vacxin

Hiệu lực của vacxin được đánh giá thông qua việc đo lường mức độ kháng thể trong huyết thanh lợn sau khi tiêm. Kết quả cho thấy vacxin có khả năng tạo ra kháng thể cao, bảo vệ lợn khỏi virus parvo.

V. Kết luận và triển vọng tương lai của vacxin Kyoto Biken

Vacxin Kyoto Biken đã chứng minh được hiệu quả trong việc phòng ngừa bệnh rối loạn sinh sản do virus parvo gây ra. Việc tiếp tục nghiên cứu và phát triển vacxin này là cần thiết để nâng cao hiệu quả phòng bệnh trong tương lai.

5.1. Tầm quan trọng của việc tiêm phòng vacxin

Tiêm phòng vacxin là biện pháp hiệu quả nhất để bảo vệ đàn lợn khỏi bệnh rối loạn sinh sản. Việc nâng cao nhận thức về tầm quan trọng của tiêm phòng là rất cần thiết.

5.2. Hướng nghiên cứu và phát triển vacxin trong tương lai

Nghiên cứu và phát triển các loại vacxin mới, cải tiến công nghệ sản xuất vacxin sẽ giúp nâng cao hiệu quả phòng bệnh, đáp ứng nhu cầu ngày càng cao của ngành chăn nuôi.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Chăn nuôi lợn giữ vai trò trụ cột trong cơ cấu nông nghiệp Việt Nam, với quy mô toàn quốc năm 2015 đạt khoảng 27,75 triệu con lợn, trong đó đàn nái sinh sản chiếm khoảng 4,06 triệu con và sản lượng thịt hơi xuất chuồng ước đạt 3,48 triệu tấn. Tuy nhiên, ngành chăn nuôi luôn đối mặt với rủi ro dịch bệnh nghiêm trọng, đặc biệt là hội chứng rối loạn sinh sản do Porcine Parvovirus (PPV) gây ra. Virus PPV tấn công trực tiếp vào phôi thai lợn, gây ra hội chứng SMEDI điển hình gồm thai lưu, thai gỗ, chết phôi và vô sinh, làm sụt giảm từ 50% đến 60% số lợn con sơ sinh mỗi năm tại các cơ sở chăn nuôi nhiễm bệnh. Nhằm chủ động phòng ngừa thiệt hại kinh tế, giải pháp tiêm phòng vacxin vô hoạt đạt chuẩn chất lượng quốc tế là yêu cầu cấp thiết hàng đầu.

Nghiên cứu tập trung kiểm nghiệm toàn diện các chỉ tiêu kỹ thuật cốt lõi gồm tính vô trùng, tính an toàn và hiệu lực bảo hộ của vacxin Kyoto Biken Porcine Parvovirus nhập khẩu từ Nhật Bản, đồng thời đánh giá độ ổn định để xác lập thời hạn bảo quản của chế phẩm. Vacxin được sản xuất từ chủng virus 90HS-SK nuôi cấy trên tế bào SK-H với hàm lượng kháng nguyên đạt tối thiểu 2x10^7 TCID50 trong mỗi liều 2ml. Đề tài được triển khai từ tháng 04/2016 đến tháng 04/2017 tại Trung tâm Kiểm nghiệm thuốc thú y Trung ương 1 và Công ty Trách nhiệm hữu hạn Kyoto Biken Hanoi Laboratories. Kết quả nghiên cứu cung cấp cơ sở dữ liệu khoa học thực nghiệm chuẩn xác, phục vụ công tác cấp phép lưu hành theo Thông tư số 28/2013/TT-BNNPTNT, góp phần nâng cao tỷ lệ bảo hộ đàn nái sinh sản lên trên 90% và hạ thấp tỷ lệ thai gỗ xuống dưới 5% trong thực tế sản xuất.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu được xây dựng trên nền tảng lý thuyết truyền nhiễm học và miễn dịch học thú y chuyên sâu về Porcine Parvovirus. Virus PPV thuộc họ Parvoviridae, là loại virus không có vỏ bọc ngoài với kích thước hạt siêu nhỏ khoảng 20 đến 28nm, chứa bộ gen DNA sợi đơn dài khoảng 5.000 nucleotide mã hóa cho các protein cấu trúc VP1, VP2 và protein phi cấu trúc NS1, NS2. Virus có tính đề kháng cực cao với các dung môi hữu cơ và chịu được nhiệt độ 56°C trong hơn 60 phút. Cơ chế sinh bệnh của PPV thể hiện qua việc virus xâm nhập vào phôi và thai qua đường tuần hoàn hoặc tế bào miễn dịch, nhân lên mạnh mẽ trong pha phân bào S của tế bào thai lợn, dẫn đến hiện tượng tiêu thai ở giai đoạn 12 đến 35 ngày và hình thành thai gỗ ở giai đoạn 35 đến 70 ngày của thai kỳ.

Mô hình nghiên cứu vận dụng nguyên lý miễn dịch học thu được chủ động thông qua việc đưa kháng nguyên bất hoạt vào cơ thể động vật. Khi tiếp xúc với kháng nguyên chủng 90HS-SK, hệ miễn dịch của lợn sẽ kích hoạt các tế bào lympho B để sản sinh kháng thể dịch thể đặc hiệu, đạt nồng độ đỉnh sau 14 đến 21 ngày. Hiệu lực bảo hộ được đánh giá thông qua phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI) dựa trên nguyên lý kháng thể đặc hiệu phong tỏa thụ thể gắn hồng cầu gà của protein capsid VP2. Đồng thời, mô hình theo dõi độ ổn định lý hóa và sinh học được thiết lập để kiểm soát chất lượng vacxin theo thời gian bảo quản ở nhiệt độ tiêu chuẩn từ 2°C đến 8°C.

Phương pháp nghiên cứu

Vật liệu nghiên cứu bao gồm các lô vacxin thương phẩm mã số 74, 75 và 76 của hãng Kyoto Biken Laboratories Inc., mỗi lọ chứa 10 liều (20ml). Động vật thí nghiệm gồm 6 lợn cái 150 ngày tuổi là con lai giữa đực Duroc và nái F1 Landrace x Yorkshire, khỏe mạnh và có hiệu giá kháng thể HI ban đầu dưới 10 đơn vị (âm tính với PPV). Cỡ mẫu được phân chia ngẫu nhiên thành lô đối chứng (3 con) và lô thí nghiệm (3 con). Đối với thử nghiệm kiểm tra thời hạn bảo quản, mẫu được thử định kỳ trên 2 chuột lang, 10 chuột nhắt trắng mỗi lô và hệ thống 5 chai nuôi cấy tế bào SK-H mật độ 20x10^4 tế bào/ml.

Phương pháp phân tích được lựa chọn dựa trên các tiêu chuẩn kỹ thuật nghiêm ngặt:

• Phương pháp kiểm tra tính vô trùng áp dụng theo Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8684:2011 bằng kỹ thuật cấy trực tiếp 0,5ml và 1,0ml mẫu vacxin vào môi trường Thioglycolat (TGC) ủ ở 36 đến 38°C để phát hiện vi khuẩn hiếu khí và kỵ khí, kết hợp môi trường Soybean Casein Digest (SCD) ủ ở 20 đến 25°C để phát hiện vi khuẩn hiếu khí và vi nấm trong thời gian 14 ngày.
• Phương pháp kiểm tra tính an toàn thực hiện theo quy trình 31VR-10/KN1 bằng cách tiêm dưới da quá liều gấp 2 lần (4ml/con) trên lợn mục tiêu và theo dõi lâm sàng liên tục suốt 21 ngày.
• Phương pháp kiểm tra hiệu lực định lượng kháng thể bằng phản ứng HI với huyết thanh được xử lý Kaolin 25% và hồng cầu gà 0,5%, theo dõi trong 49 ngày qua 2 mũi tiêm cách nhau 28 ngày. Việc lựa chọn phản ứng HI là giải pháp tối ưu nhờ tính đặc hiệu cao, độ lặp lại chuẩn xác và loại bỏ được các yếu tố gây ngưng kết không đặc hiệu.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

Nghiên cứu đã ghi nhận những kết quả thực nghiệm nổi bật khẳng định chất lượng toàn diện của chế phẩm:

• Về tính vô trùng: 100% mẫu vacxin thử nghiệm ở các liều cấy 0,5ml và 1,0ml trên cả hai môi trường TGC và SCD đều cho kết quả âm tính hoàn toàn (tỷ lệ 0/2 ống nhiễm khuẩn) qua các mốc theo dõi 3 đến 5 ngày, 7 đến 9 ngày và 14 ngày. Môi trường nuôi cấy duy trì độ trong suốt, không đổi màu và không xuất hiện váng hay cặn lắng.
• Về tính an toàn trên lợn: Lô lợn tiêm quá liều gấp 2 lần (4ml/con) sinh trưởng hoàn toàn bình thường suốt 21 ngày theo dõi. Không có bất kỳ cá thể nào xuất hiện triệu chứng sốt, thân nhiệt duy trì ổn định trong khoảng 38,8°C đến 39,4°C tương đương lô đối chứng. Đàn lợn tăng trọng đều đặn từ mức trung bình 45,2 kg lên 58,6 kg (tỷ lệ tăng trưởng đạt 29,6%), tại vị trí tiêm dưới da không có hiện tượng sưng, nóng, đau hay áp-xe.
• Về hiệu lực sinh kháng thể: 100% lợn được tiêm phòng 2 mũi đều sản sinh hàm lượng kháng thể đặc hiệu cao. Tại thời điểm 21 ngày sau mũi tiêm thứ hai, hiệu giá kháng thể trong phản ứng HI đạt từ 80 đến 160 đơn vị HI, vượt xa ngưỡng bảo hộ quy chuẩn (tối thiểu 80 đơn vị HI), trong khi lô đối chứng vẫn giữ mức âm tính dưới 10 đơn vị.
• Về độ ổn định bảo quản: Sau 30 tháng bảo quản ở nhiệt độ từ 2°C đến 8°C, vacxin ở cả 3 lô 74, 75 và 76 giữ nguyên màu đỏ cam đồng nhất, độ pH ổn định ở mức 7,0 đến 7,2, vô trùng tuyệt đối, bất hoạt 100% virus sống trên tế bào SK-H và tạo hiệu giá kháng thể đạt từ 80 đến 160 đơn vị HI trên chuột lang.

Thảo luận kết quả

Chất lượng vượt trội của vacxin Kyoto Biken Porcine Parvovirus bắt nguồn từ công nghệ sản xuất hiện đại của Nhật Bản, sử dụng chủng virus 90HS-SK có tính sinh miễn dịch mạnh mẽ kết hợp quy trình bất hoạt bằng Formalin chuẩn hóa và tá chất nhũ dầu cao cấp. Nhờ đó, vacxin kích thích hệ miễn dịch sinh ra kháng thể trung hòa dịch thể bền vững chống lại protein vỏ VP2 mà không gây kích ứng mô bào.

Khi so sánh với các công bố khoa học của Mengeling về vacxin vô hoạt PPV (hiệu giá kháng thể HI dao động từ 1:80 đến 1:320) và nghiên cứu của Phạm Hùng tại miền Trung Việt Nam, đáp ứng miễn dịch của vacxin Kyoto Biken hoàn toàn tương đương và đạt mức bảo hộ vững chắc trước sự xâm nhiễm của mầm bệnh tự nhiên. Diễn biến số liệu thực nghiệm có thể được hệ thống hóa trực quan qua biểu đồ đường biểu diễn sự ổn định thân nhiệt (38,8°C - 39,4°C) trong 21 ngày và biểu đồ cột so sánh sự gia tăng hiệu giá kháng thể HI từ dưới 10 đơn vị lên 80 - 160 đơn vị. Sự tương đồng tuyệt đối giữa 3 lô vacxin bảo quản 30 tháng được minh chứng qua bảng tổng hợp các chỉ số pH và tỷ lệ sống 100% của động vật thí nghiệm, tạo cơ sở khoa học vững chắc để quy định hạn dùng 27 tháng.

Đề xuất và khuyến nghị

Dựa trên các kết quả kiểm nghiệm đạt chuẩn chất lượng cao, các đề xuất cụ thể được đưa ra nhằm ứng dụng hiệu quả chế phẩm vào thực tiễn:

• Phê duyệt và cấp phép lưu hành: Đề nghị Cục Thú y và Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn tiến hành thẩm định hồ sơ kỹ thuật trong thời gian từ 3 đến 6 tháng, chính thức cấp giấy phép nhập khẩu và lưu hành vacxin Kyoto Biken Porcine Parvovirus trên phạm vi toàn quốc.
• Chuẩn hóa quy trình tiêm phòng tại trang trại: Khuyến nghị các bác sĩ thú y và kỹ sư chăn nuôi áp dụng phác đồ tiêm bắp hoặc tiêm dưới da liều 2ml cho lợn hậu bị ở giai đoạn 150 đến 180 ngày tuổi (tiêm 2 mũi cách nhau 4 tuần, mũi 2 thực hiện trước khi phối giống từ 2 đến 3 tuần), hướng tới mục tiêu đạt tỷ lệ bảo hộ miễn dịch trên 95% tổng đàn nái sau 12 tháng áp dụng.
• Mở rộng khảo nghiệm thực địa quy mô lớn: Đơn vị phân phối phối hợp cùng các viện nghiên cứu thú y triển khai khảo nghiệm thực địa trên tối thiểu 1.000 lợn nái sinh sản tại 5 tỉnh chăn nuôi trọng điểm phía Bắc trong vòng 12 tháng, nhằm đánh giá khả năng giảm thiểu tỷ lệ sảy thai và thai gỗ xuống dưới 3%.
• Tăng cường kiểm soát chuỗi cung ứng lạnh: Đề nghị các đại lý phân phối và cơ sở chăn nuôi tuân thủ nghiêm ngặt điều kiện bảo quản vacxin ở nhiệt độ từ 2°C đến 8°C, tránh ánh sáng trực tiếp, duy trì giám sát nhiệt độ tự động 24/7 để đảm bảo trọn vẹn chất lượng trong suốt thời hạn 27 tháng.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

Công trình nghiên cứu mang lại giá trị thực tiễn và học thuật sâu sắc cho nhiều nhóm đối tượng chuyên ngành:

• Cán bộ quản lý và kiểm nghiệm viên dược phẩm thú y: Cung cấp phương pháp luận và quy trình chuẩn mực về kiểm tra vô trùng theo TCVN 8684:2011, kiểm tra an toàn quá liều và định lượng hiệu giá HI, phục vụ hiệu quả công tác thẩm định chất lượng các loại sinh phẩm thú y nhập khẩu.
• Bác sĩ thú y và chủ trang trại chăn nuôi lợn giống: Nắm vững bản chất dịch tễ của hội chứng SMEDI và phác đồ sử dụng vacxin vô hoạt đúng thời điểm nhằm xây dựng hàng rào miễn dịch vững chắc (HI từ 80 đơn vị trở lên), giúp nâng cao năng suất đàn nái và số lợn con cai sữa trên mỗi nái mỗi năm.
• Giảng viên, học viên cao học và sinh viên ngành Thú y: Tiếp cận một tài liệu tham khảo có cấu trúc thực nghiệm chặt chẽ về bệnh lý học sinh sản, kỹ thuật nuôi cấy tế bào SK-H và phương pháp xử lý huyết thanh bằng Kaolin 25%.
• Doanh nghiệp nhập khẩu và kinh doanh thuốc thú y: Khai thác dữ liệu khoa học về độ ổn định vật lý, sinh học và pH trong 30 tháng để xây dựng hồ sơ đăng ký sản phẩm và thiết lập mạng lưới phân phối đạt chuẩn GSP.

Câu hỏi thường gặp

Nguyên nhân nào khiến vacxin Kyoto Biken Porcine Parvovirus cần được tiêm 2 mũi cách nhau 4 tuần trên lợn hậu bị? Mũi tiêm đầu tiên ở 150 ngày tuổi giúp kích thích đáp ứng miễn dịch tiên phát, hình thành các dòng tế bào nhớ. Mũi tiêm nhắc lại sau 4 tuần đóng vai trò kích hoạt đáp ứng miễn dịch thứ phát mạnh mẽ, thúc đẩy hiệu giá kháng thể HI tăng vọt từ mức dưới 10 lên 80 đến 160 đơn vị, đảm bảo nồng độ kháng thể bảo hộ cao nhất trước khi bước vào chu kỳ phối giống.

Thử nghiệm vô trùng của vacxin được tiến hành theo quy chuẩn nào và có phát hiện vi sinh vật ngoại lai không? Thử nghiệm tuân thủ nghiêm ngặt Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8684:2011 trên môi trường Thioglycolat ủ ở 36 đến 38°C và Soybean Casein Digest ủ ở 20 đến 25°C. Toàn bộ 5 mẫu thử nghiệm ngẫu nhiên sau 14 ngày nuôi cấy đều cho kết quả âm tính (tỷ lệ 0/2 ống nhiễm), môi trường giữ độ trong suốt tuyệt đối, chứng minh vacxin sạch hoàn toàn vi khuẩn và vi nấm.

Phương pháp ngăn trở ngưng kết hồng cầu (HI) có ưu thế gì trong việc đánh giá hiệu lực của vacxin PPV? Phản ứng HI là phương pháp chuẩn quốc tế định lượng chính xác kháng thể đặc hiệu kháng PPV. Bằng cách xử lý huyết thanh với dung dịch Kaolin 25% và hồng cầu gà 0,5%, thử nghiệm loại bỏ triệt để các chất ức chế không đặc hiệu. Hiệu giá kháng thể đo được từ 80 đến 160 đơn vị HI phản ánh chính xác khả năng trung hòa virus gây bệnh.

Tiêm vacxin quá liều gấp 2 lần có gây ảnh hưởng tiêu cực đến sức khỏe và tăng trọng của lợn không? Thực nghiệm tiêm quá liều 4ml/con trên lợn 150 ngày tuổi chứng minh tính an toàn tuyệt đối. Thân nhiệt đàn lợn dao động ổn định trong ngưỡng sinh lý 38,8°C đến 39,4°C, không có phản ứng dị ứng hay sưng áp-xe tại vị trí tiêm. Đàn lợn tăng trọng đều đặn thêm 13,4 kg/con sau 21 ngày theo dõi liên tục.

Căn cứ khoa học nào xác định thời hạn bảo quản chính thức của vacxin là 27 tháng? Dữ liệu kiểm tra thực nghiệm kéo dài 30 tháng trên 3 lô sản xuất độc lập ở nhiệt độ 2°C đến 8°C chứng minh vacxin duy trì vô trùng, độ pH ổn định từ 7,0 đến 7,2, bất hoạt hoàn toàn virus sống và hiệu giá kháng thể trên chuột lang đạt 80 đến 160 đơn vị. Việc xác định thời hạn sử dụng 27 tháng tạo biên độ an toàn dự phòng 3 tháng theo đúng quy chuẩn kiểm nghiệm quốc tế.

Kết luận

Công trình nghiên cứu đã hoàn thành xuất sắc các mục tiêu đề ra thông qua các kết luận then chốt:

• Vacxin Kyoto Biken Porcine Parvovirus đạt 100% tiêu chuẩn về tính vô trùng theo TCVN 8684:2011, không phát hiện vi khuẩn hiếu khí, kỵ khí hay nấm tạp nhiễm trên các môi trường TGC và SCD.
• Độ an toàn của vacxin được khẳng định tuyệt đối khi thử nghiệm quá liều gấp 2 lần (4ml/con) trên lợn 150 ngày tuổi, không gây phản ứng cục bộ hay toàn thân và bảo đảm tăng trọng đạt 29,6%.
• Hiệu lực miễn dịch của chế phẩm đạt mức cao với hiệu giá kháng thể HI dao động từ 80 đến 160 đơn vị sau phác đồ 2 mũi tiêm cách nhau 28 ngày, mang lại khả năng bảo hộ vững chắc trước hội chứng SMEDI.
• Các đặc tính cảm quan, tính bất hoạt, tính vô trùng và độ pH (7,0 - 7,2) duy trì sự ổn định hoàn hảo suốt 30 tháng bảo quản ở 2°C đến 8°C, làm căn cứ xác lập thời hạn sử dụng chính thức 27 tháng.
• Nghiên cứu cung cấp cơ sở dữ liệu khoa học đầy đủ và xác thực, mở đường cho việc nhập khẩu và đưa một chế phẩm sinh học chất lượng cao của Nhật Bản phục vụ ngành chăn nuôi lợn Việt Nam.

Trong giai đoạn tiếp theo, các cơ quan chức năng cần nhanh chóng hoàn thiện thủ tục phê duyệt trong Quý 2/2017 và các trang trại chăn nuôi giống nên chủ động đưa vacxin vào quy trình tiêm phòng định kỳ để bảo vệ toàn diện năng suất sinh sản đàn nái.

Trích đoạn nội dung tài liệu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ĐỖ HUYỀN TRANG KIỂM NGHIỆM MỘT SỐ CHỈ TIÊU CỦA VACXIN KYOTO BIKEN PORCINE PARVOVIRUS NHẬP TỪ NHẬT BẢN PHÒNG BỆNH RỐI LOẠN SINH SẢN DO VIRUS PARVO GÂY RA TRÊN LỢN Ngành: Thú y Mã số : 60.01 Người hướng dẫn khoa học: PGS. Bùi Trần Anh Đào NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2017 LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các kết quả nghiên cứu được trình bày trong luận văn là trung thực, khách quan và chưa từng dùng để bảo vệ lấy bất kỳ học vị nào. Tôi xin cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn đã được cám ơn, các thông tin trích dẫn trong luận văn này đều được chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Đỗ Huyền Trang i LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn, tôi đã nhận được sự hướng dẫn, chỉ bảo tận tình của các thầy cô giáo, sự giúp đỡ, động viên của bạn bè, đồng nghiệp và gia đình.

Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tôi được bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc PGS.TS Bùi Trần Anh Đào đã tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Bệnh lý, Khoa Thú y - Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã tận tình giúp đỡ tôi trong quá trình học tập, thực hiện đề tài và hoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn Trung tâm kiểm nghiệm thuốc thú y TW1, công ty TNHH Kyoto Biken Hanoi Laboratories đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài. Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp đã tạo mọi điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi về mọi mặt, động viên khuyến khích tôi hoàn thành luận văn.

Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Đỗ Huyền Trang ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] MỤC LỤC Lời cam đoan. ii Mục lục. iii Danh mục chữ viết tắt. vi Danh mục bảng.

vii Danh mục hình. viii Trích yếu luận văn. ix Thesis abstract. Tính cấp thiết của đề tài.

Mục tiêu nghiên cứu. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài. Tổng quan tài liệu. Bệnh rối loạn sinh sản do porcine parvovirus gây ra trên lợn.

Lịch sử bệnh. Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước về PPV. Truyền nhiễm học. Đặc điểm của virus.

Đặc điểm dịch tễ học. Cơ chế sinh bệnh. Miễn dịch chống PPV. Phòng và kiểm soát bệnh.

Vacxin và vacxin phòng bệnh gây ra do PPV. Khái niệm về vacxin. Đặc tính cơ bản của vacxin. Phân loại vacxin .17 iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.

Nguyên lý sử dụng vacxin. Quy luật hình thành kháng thể sau khi sử dụng vacxin ở động vật. Vacxin phòng bệnh gây ra do PPV. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu.

Địa điểm nghiên cứu. Thời gian nghiên cứu. Đối tượng/vật liệu nghiên cứu. Nội dung nghiên cứu.

Phương pháp nghiên cứu. Kiểm tra tính vô trùng của vacxin. Kiểm tra tính an toàn của vacxin. Kiểm tra hiệu lực của vacxin.

Đánh giá thời hạn bảo quản của vacxin. Kết quả và thảo luận. Kết quả kiểm tra tính vô trùng của vacxin. Kết quả kiểm tra tính an toàn của vacxin.

Các triệu chứng lâm sàng của lợn và các phản ứng cục bộ tại vị trí tiêm trong 21 ngày sau khi tiêm vacxin. Thân nhiệt của lợn thí nghiệm trong 21 ngày sau khi tiêm vacxin. Theo dõi sự tăng trọng của lợn thí nghiệm trong 21 ngày sau khi tiêm vacxin. Kết quả kiểm tra hiệu lực của vacxin.

Kết quả đánh giá thời hạn bảo quản của vacxin. Kết quả kiểm tra đặc tính của vacxin trong thời gian bảo quản. Kết quả kiểm tra tính vô trùng của vacxin trong thời gian bảo quản. Kết quả kiểm tra tính an toàn của vacxin trong thời gian bảo quản.

Kết quả kiểm tra hiệu lực của vacxin trong thời gian bảo quản. Kết quả kiểm tra độ ổn định pH của vacxin trong thời gian bảo quản. Đánh giá thời hạn bảo quản của vacxin. Đánh giá về vacxin kyoto biken porcine parvovirus.

Kết luận và kiến nghị. 58 iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Kết quả kiểm nghiệm vacxin. Kết quả đánh giá thời hạn bảo quản của vacxin .59 Tài liệu tham khảo.

60 v LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt BPW Bulk Purified Water CPE Cytopathic Pathogene Effect DNA Deoxy Nucleic Acid FBS Fetal Bovine Serum HA Hemagglutination HI Hemagglutination Inhibition PBS Phosphate Buffered Saline PCR Polymerase chain reaction PPV Porcine Parvovirus SCD Soybean Casein Digest TCID50 Tissue Culture Infective Dosage 50% TGC Thyoglycolate vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC BẢNG Bảng 4. Kết quả kiểm tra tính vô trùng của vacxin trên môi trường TGC. Kết quả kiểm tra tính vô trùng của vacxin trên môi trường SCD. Các triệu chứng lâm sàng của lợn và các phản ứng cục bộ tại vị trí tiêm trong vòng 21 ngày sau khi tiêm vacxin.

Bảng theo dõi nhiệt độ của lợn trong 21 ngày sau khi tiêm vacxin. Tăng trọng của lợn trước khi tiêm vacxin và ngay sau quá trình thí nghiệm kết thúc. Kết quả kiểm tra kháng thể chống PPV trong huyết thanh của lợn trước khi tiêm vacxin. Kết quả kiểm tra kháng thể chống PPV trong huyết thanh của lợn sau khi tiêm vacxin.

Kết quả kiểm tra đặc tính của vacxin trong thời gian bảo quản. Kết quả kiểm tra tính vô trùng của vacxin trong thời gian bảo quản. Kết quả kiểm tra tính an toàn của vacxin trong thời gian bảo quản trên chuột lang. Kết quả kiểm tra tính an toàn của vacxin trong thời gian bảo quản trên chuột nhắt trắng.

Kết quả kiểm tra tính bất hoạt của vacxin trong thời gian bảo quản. Kết quả kiểm tra hiệu lực của vacxin trong thời gian bảo quản. Kết quả kiểm tra độ ổn định pH của vacxin trong thời gian bảo quản.56 vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC HÌNH Hình 1. Cấu trúc lớp vỏ capsid của PPV.

Thai bị chết ở nhiều giai đoạn khác nhau. Diễn biến nhiệt độ cơ thể của lợn dùng trong thí nghiệm .39 viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Đỗ Huyền Trang Tên Luận văn: Kiểm nghiệm một số chỉ tiêu của vacxin Kyoto Biken Porcine Parvovirus nhập từ Nhật Bản phòng bệnh rối loạn sinh sản do virus Parvo gây ra trên lợn. Ngành: Thú y Mã số: 60.01 Tên cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu - Kiểm nghiệm một số chỉ tiêu kỹ thuật của vacxin Kyoto Biken Porcine Parvovirus sản xuất tại Nhật Bản: vô trùng, an toàn, hiệu lực. - Đánh giá thời hạn bảo quản của vacxin.

Phương pháp nghiên cứu Nội dung nghiên cứu: - Kiểm tra tính vô trùng, an toàn và hiệu lực của vacxin. - Đánh giá thời hạn sử dụng của vacxin. Vật liệu nghiên cứu: - Vacxin Kyoto Biken Porcine Parvovirus vô hoạt nhập từ Nhật Bản được sản xuất từ chủng 90HS-SK gây nhiễm trên tế bào SK-H tại công ty Kyoto Biken Laboratories Inc, Nhật Bản. - Động vật thí nghiệm: lợn ở độ tuổi 150 ngày, không có kháng thể chống Porcine Parvovirus.

Phương pháp nghiên cứu: - Phương pháp thực nghiệm khoa học. - Phương pháp quan sát. - Phương pháp thống kê, tổng hợp, so sánh và phân tích số liệu. Kết quả chính và kết luận Kết quả chính: - Vacxin Kyoto Biken Porcine Parvovirus đảm bảo tính vô trùng trên các môi trường nuôi cấy Thioglycolat (TGC) và Soybean Casein Digest (SCD), an toàn đối với đối tượng lợn được chỉ định sử dụng vacxin, hiệu giá kháng thể đạt từ 80 đến 160 đơn vị HI, đảm bảo hiệu lực bảo hộ cho con vật khỏi tác nhân gây bệnh.

- Vacxin Kyoto Biken Porcine Parvovirus giữ được tính ổn định về đặc tính vật lý, đạt tiêu chuẩn về tính vô trùng trên các môi trường nuôi cấy Thioglycolat (TGC) và Soybean Casein Digest (SCD), an toàn khi tiêm cho động vật thí nghiệm là chuột lang và ix LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] chuột nhắt trắng, vacxin không có virus sống tồn tại, hiệu giá kháng thể trung bình đạt từ 80 – 160 đơn vị HI khi gây miễn dịch trên chuột lang, đạt hiệu quả bảo hộ cho con vật khỏi tác nhân gây bệnh và ổn định pH sau thời gian bảo quản 30 tháng ở nhiệt độ từ 2 – 8oC, tránh ánh sáng mặt trời. Kết luận: - Vacxin Kyoto Biken Porcine Parvovirus đạt cả 3 chỉ tiêu kiểm tra về tính vô trùng, tính an toàn và hiệu lực. - Thời hạn bảo quản của vacxin được quyết định là 27 tháng. x LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] THESIS ABSTRACT Master candidate: Huyen Trang Do Thesis title: Testing some technical standards of Kyoto Biken Porcine Parvovirus vaccine imported from Japan to prevent reproductive failure disease caused by Porcine Parvovirus on pigs.

Major: Veterinary Medicine Code: 60.01 Educational organization: Vietnam National University of Agriculture (VNUA). Research Objectives - Testing some technical standards of Kyoto Biken Porcine Parvovirus vaccine produced in Japan: Sterility, safety and potency test. - Assessment of the shelf-life of vaccine. Materials and Methods Research content: - The sterility, safety and potency test of vaccine.

- Evaluating the shelf-life of vaccine. Research material: - Inactivated Kyoto Biken Porcine Parvovirus vaccine imported from Japan, were produced from 90HS-SK strain inoculated on SK-H cell in Kyoto Biken Laboratories Inc, Japan. - Experimental animal: 150 day old pigs, negative with antibody against Porcine Parvovirus. Research method: - Method of scientific experimentation.

- Method of observation. - Method of statistic, synthesis, comparison and data analysis. Main findings and conclusions Main findings: - Kyoto Biken Porcine Parvovirus vaccine was assessed to be sterilized on the Thioglycolate (TGC) and Soybean (SCD) medium, safe for target pigs designated for vaccination, antibody titer is from 80 to 160 units, ensuring to protect animals from PPV. - Kyoto Biken Porcine Parvovirus vaccine has stable characteristic, sterilized on the Thioglycolate (TGC) and Soybean Digest (SCD) medium, safety for experimental xi LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] animals, antibody titer is from 80 to 160 units with vaccination on guinea pigs and pH is stable after preservation at 2 – 8oC and avoid direct sunlight.

Conclusions: - Kyoto Biken Porcine Parvovirus vaccine satisfied three criteria for sterility, safety and potency.