HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ÂU XUÂN KHOA GIÁM SÁT SỰ LƯU HÀNH VIRUS CÚM A/H5N1 TẠI MỘT SỐ CHỢ BUÔN BÁN GIA CẦM Ở TỈNH VĨNH LONG NĂM 2016 Ngành: Thú y Mã số: 60.01 Người hướng dẫn khoa học: 1. Tô Long Thành NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP – 2017 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các kết quả nghiên cứu được trình bày trong luận văn là trung thực, khách quan và chưa từng dùng để bảo vệ lấy bất kỳ học vị nào. Tôi xin cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn đã được cám ơn, các thông tin trích dẫn trong luận văn này đều được chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Âu Xuân Khoa i LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn, tôi đã nhận được sự hướng dẫn, chỉ bảo tận tình của các thầy cô giáo, sự giúp đỡ, động viên của bạn bè, đồng nghiệp và gia đình.
Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tôi được bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới PGS. Tô Long Thành và TS. Lê Văn Phan đã tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Vi sinh vật – Truyền nhiễm, Khoa Thú y - Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã tận tình giúp đỡ tôi trong quá trình học tập, thực hiện đề tài và hoàn thành luận văn.
Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán bộ viên chức Trung tâm Chẩn đoán Thú y Trung ương đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài. Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp đã tạo mọi điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi về mọi mặt, động viên khuyến khích tôi hoàn thành luận văn. Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Âu Xuân Khoa ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC Lời cam đoan. ii Mục lục.
iii Danh mục từ viết tắt. v Danh mục hình .vii Trích yếu luận văn .viii Thesis abstract. Tính cấp thiết của đề tài. Mục tıêu nghıên cứu của đề tàı.
Ý nghĩa khoa học của đề tàı. Tổng quan tài liệu. Giới thiệu chung về virus cúm gia cầm. Khái niệm bệnh cúm gia cầm.
Tình hình bệnh cúm gia cầm trên thế giới. Tình hình bệnh cúm gia cầm ở Việt Nam. Dịch tễ học bệnh cúm gia cầm. Triệu chứng, bệnh tích bệnh cúm gia cầm.
Một số đặc điểm của virus cúm A. Phân loại và danh pháp. Đặc điểm hình thái và cấu trúc của virus cúm A. Các loại kháng nguyên.
Phương thức biến đổi của kháng nguyên HA và NA. Độc lực của virus cúm gia cầm. Sự xuất hiện và lưu hành các clade virus H5N1 tại Việt Nam. Nội dung, nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu.
Nội dung nghiên cứu. Địa điểm nghiên cứu. Vật liệu nghiên cứu. 23 iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.
Phương pháp nghiên cứu. Phương pháp phát hiện virus cúm A/H5N1. Phương pháp giải trình tự gen. Kết quả và thảo luận.
Tình hình chăn nuôi và tiêm phòng vacxin cho gia cầm tại tỉnh Vĩnh Long. Tình hình dịch cúm gia cầm tại tỉnh Vĩnh Long. Tình hình dịch cúm gia cầm tại tỉnh Vĩnh Long năm 2014. Tình hình dịch cúm gia cầm tại tỉnh Vĩnh Long năm 2015.
Xác định virus cúm type A. Kết quả xác định sự lưu hành virus cúm A/H5N1 theo loài. Kết quả xác định sự lưu hành virus cúm A/H5N1 theo tháng. Kết quả xác định sự lưu hành virus cúm A/H5N1 trên gà theo tháng.
Kết quả xác định sự lưu hành virus cúm A/H5N1 trên vịt theo tháng. Kết quả xác định clade virus của cúm A/H5N1. Nghiên cứu xác định độc lực của virus cúm A/H5N1. Kết luận và kiến nghị.
49 Tài liệu tham khảo. 60 iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt ADN Axit deoxyribonucleic AI Bệnh cúm gia cầm (Avian Influenza) ARN Axit ribonucleic BCĐQG Ban chỉ đạo quốc gia Ct Giá trị ngưỡng chu kỳ của phản ứng (Cycle Threshold) ELISA Phản ứng miễm dịch huỳnh quang gắn enzym (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) FAO Tổ chức Nông Lương Thế giới (Food and Agriculture Organisation) HA Phản ứng ngưng kết hồng cầu (Hemaglutinin) HI Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu (Hemagglutination Inhibition) HPAI Cúm gia cầm độc lực cao (Highly Pathogenic Avian Influenza ) IVPI Chỉ số gây bệnh qua đường mạch máu (Intravenous Pathogenicity Index) LPAI Cúm gia cầm độc lực thấp (Low Pathogenic Avian Influenza) OIE Tổ chức Thú y Thế giới (Office International des Epizooties) rRT-PCR Phản ứng chuỗi Polyme phiên mã ngược thời gian thực (Realtime Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction) TCVN Tiêu chuẩn quốc gia TT Thị trấn TX Thị xã WHO Tổ chức Y tế Thế giới (World Health Organisation ) v LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC BẢNG Bảng 2. Những thay đổi của nhánh H5N1 HA được phát hiện tại Việt Nam từ năm 2003 đến 2014 (FAO, 2016). Các primer và probe để phát hiện virus cúm gia cầm A/H5N1.
Thành phần của phản ứng Real time RT-PCR. Trình tự primer để nhân gen HA. Thành phần của phản ứng RT-PCR. Tình hình chăn nuôi và tiêm phòng vacxin cho gia cầm.
Tình hình dịch cúm gia cầm tại tỉnh Vĩnh Long năm 2014. Tình hình dịch cúm gia cầm tại tỉnh Vĩnh Long năm 2015. Kết quả xét nghiệm virus cúm type A. Kết quả xét nghiệm virus cúm A/H5.
Kết quả xét nghiệm virus cúm A/H5N1. Kết quả xét nghiệm virus cúm A/H5N1 theo loài. Kết quả xét nghiệm virus cúm A/H5N1 trên gà theo tháng. Kết quả xét nghiệm virus cúm A/H5N1 trên vịt theo tháng.
Danh sách mẫu gửi giải trình tự gen. Danh sách các chủng virus cúm sử dụng làm tham chiếu. Trình tự axit amin tại chuỗi nối protein HA của các chủng virus cúm H5 dòng Goose/Guangdong độc lực cao. 48 vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC HÌNH Hình 2.
Sự phân bố của virus cúm A/H5. Cấu trúc của virus cúm A. Phân bố không gian của các nhánh virus H5N1 HA được phát hiện ở Việt Nam từ năm 2003 đến 2014. Bản đồ tỉnh Vĩnh Long.
Tỷ lệ nhiễm virus cúm A. Tỷ lệ nhiễm virus cúm A/H5 / số mẫu xét nghiệm. Tỷ lệ nhiễm virus cúm A/H5 / số mẫu dương tính cúm A. Tỷ lệ nhiễm virus cúm A/H5N1 / tổng số mẫu xét nghiệm.
Tỷ lệ nhiễm virus cúm A/H5N1 / số mẫu dương tính virus cúm A/H5. Tỷ lệ nhiễm virus cúm A/H5N1 theo loài. Tỷ lệ nhiễm virus cúm A/H5N1 trên gà theo tháng. Tỷ lệ nhiễm virus cúm A/H5N1 trên vịt theo tháng.
Cây phả hệ dựa trên chuỗi nucleotide gen H5 của các virus cúm A/H5N1 thu được. Trình tự axit amin tại chuỗi nối protein HA của virus A/H5N1 thu được .48 vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Âu Xuân Khoa Tên luận văn: Giám sát sự lưu hành virus cúm A/H5N1 tại một số chợ buôn bán gia cầm ở tỉnh Vĩnh Long năm 2016. Ngành: Thú y Mã số: 60.01 Tên cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam. Mục đích nghiên cứu Giám sát sự lưu hành và biến đổi (nếu có) của virus cúm gia cầm A/H5N1 ở các chợ buôn bán gia cầm tại tỉnh Vĩnh Long để giúp cho công tác quản lý dịch bệnh tại địa phương.
Phương pháp nghiên cứu - Xét nghiệm virus cúm A/H5N1 bằng phương pháp rRT - PCR các mẫu swab thu được. - Dựng cây phả hệ của các chủng virus cúm A/H5N1 bằng phần mềm Biodit và Mega 7. Kết quả chính và kết luận Các kết quả nghiên cứu cho thấy virus cúm A/H5N1 có lưu hành trên gia cầm (gà, vịt) buôn bán tại một số chợ ở tỉnh Vĩnh Long năm 2016. Tỷ lệ lưu hành virus cúm A là 16,30%, virus cúm A/H5 là 4,26% và virus cúm A/H5N1 là 2,87%.
Trong đó, tỷ lệ lưu hành virus cúm A/H5N1 trên vịt cao gấp 2-3 lần ở gà. Tỷ lệ lưu hành virus cúm A/H5N1 trên gà tại các chợ (chợ Cái Ngang, chợ Cái Nhum và chợ Thị Trấn Long Hồ) cao nhất là tháng 4 và tháng 6 và thấp nhất là từ tháng 11 đến tháng 3. Tỷ lệ lưu hành virus cúm A/H5N1 trên vịt tại các chợ (chợ Cái Ngang, chợ Cái Nhum và chợ Thị Trấn Long Hồ) cao nhất là từ tháng 5 đến tháng 7 và thấp nhất là từ tháng 11 đến tháng 3. Các chủng virus cúm A/H5N1 thu được thuộc clade 2.1c, đây là clade đang lưu hành rộng khắp cả nước, đặc biệt là ở các tỉnh phía Nam.
Do đó, có thể sử dụng các loại vacxin Navet-Vifluvac (Công ty Navetco) và H5N1 Re-5 (Trung Quốc) theo khuyến cáo của Cục Thú y để phòng bệnh cúm gia cầm tại tỉnh Vĩnh Long. Các chủng virus cúm A/H5N1 thu được là chủng virus có độc lực cao. viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com THESIS ABSTRACT Master candidate: Âu Xuân Khoa Thesis title: Surveillance for avian influenza A/H5N1 virus in some live bird markets of Vinh Long provine in 2016. Major: Veterinary Code:60.01 Educational organization: Vietnam National University of Agriculture (VNUA) Research Objectives Determine the circulation and change (if any) of the avian influenza A/H5N1 in poultry in some live bird markets in Vinh Long provine to help manage disease.
Materials and Methods - Detection of A/H5N1 influenza virus in obtained swab samples using rRT-PCR method. - Constructing the phylogeny tree for A/H5N1 virus strains using Biodit and Mega 7 software. Main findings and conclusions - Study results showed that A/H5N1 influenza virus circulated in poultry (chickens and ducks) traded in some markets in Vinh Long provine in 2016. The prevalence of influenza A virus was 16,30%, A/H5 influenza virus was 4,26% and A/H5N1 influenza virus was 2,87%.
In particular, the prevalence of influenza A/H5N1 virus on ducks was 2-3 times higher in chickens. - The prevalence of avian influenza A (H5N1) virus in chickens in poultry markets (Cai Ngang, Cai Nhum and Long Ho) peaked in April and June, and the lowest was from November to March. - The prevalence of avian influenza A (H5N1) virus in ducks in poultry markets (Cai Ngang, Cai Nhum and Long Ho) peaked from May to July, and the lowest was from November to March. - Circulating A/H5N1 virus strains belonged to clade 2.