Luận văn thạc sĩ: Tổng hợp virút cúm mới từ virút cúm A/H5N1 và A/H3N2 bằng kỹ thuật di truyền ngược

• Tác giả: Lê Thị Thanh
• Người hướng dẫn: TS. Lê Thị Quỳnh Mai
• Trường học: Trường Đại học Khoa học Tự nhiên
• Chuyên ngành: Vi sinh vật học
• Đề tài: Tổng hợp virút cúm mới từ virút cúm A/H5N1 và A/H3N2 bằng kỹ thuật di truyền ngược
• Loại tài liệu: Luận văn thạc sĩ
• Năm xuất bản: 2012
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• MỞ ĐẦU
• 1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN
• 1.1. Khái quát về virút cúm
• 1.2. Hệ gen của virút cúm A
• 1.3. Quá trình nhân lên của virút cúm A
• 1.4. Vai trò của hiện tượng trao đổi và tích hợp vật liệu di truyền trong các vụ đại dịch cúm trên thế giới
• 1.5. Ứng dụng kĩ thuật di truyền ngược tổng hợp virút cúm A
• 1.6. Cơ sở khoa học để thiết kế và thực hiện nghiên cứu
• 1.7. Vấn đề đạo đức và An toàn sinh học trong nghiên cứu
• 2. CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.1. Đối tượng nghiên cứu
• 2.2. Vật liệu nghiên cứu
• 2.3. Plasmid pHW2000 và hệ thống plasmid chứng dương
• 2.4. Sinh phẩm và hóa chất
• 2.5. Hệ thống cảm nhiễm virút cúm
• 2.6. Trang thiết bị và dụng cụ
• 2.7. Phương pháp nghiên cứu
• 2.8. Lựa chọn chủng virút gốc
• 2.9. Chuẩn bị vector nhân dòng
• 2.10. Chuẩn bị ADN nhân dòng
• 2.11. Nhân dòng ADN đích vào plasmid pHW2000
• 2.12. Phản ứng xác định trình tự chuỗi nucleotide (sequence)
• 2.13. Chuẩn bị plasmid cho quá trình chuyển nhiễm
• 2.14. Chuyển nhiễm plasmid vào tế bào
• 2.15. Khuếch đại virút
• 2.16. Xác định hiệu giá virút
• 2.17. Xác định liều gây chết 50% động vật thí nghiệm (LD50)
• 3. CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
• 3.1. TỔNG HỢP VIRÚT CÚM MỚI TỪ VIRÚT A/H5N1 VÀ A/H3N2
• 3.1.1. Lựa chọn chủng virút gốc
• 3.1.2. Chuẩn bị vector nhân dòng và ADN đích
• 3.1.3. Chuẩn bị vector nhân dòng
• 3.1.4. Chuẩn bị ADN đích
• 3.1.5. Xây dựng hệ thống chuyển nhiễm plasmid tạo virút cúm
• 3.1.6. Nhân dòng ADN đích
• 3.1.7. Hệ thống chuyển nhiễm tám plasmid tổng hợp virút cúm rg-A/H5N1
• 3.1.8. Tổng hợp virút cúm rg-A/H5N1 từ hệ thống chuyển nhiễm plasmid
• 3.1.9. Hệ gen của virút cúm rg-A/H5N1
• 3.2. Tìm hiểu đặc tính của virút cúm rg-A/H5N1 (gia cầm – người)
• 3.3. Khả năng thích ứng của virút rg-A/H5N1 với tế bào MDCK và trứng gà có phôi
• 3.4. Định lượng virút rg-A/H5N1 bằng kỹ thuật plaque (tạo đám hoại tử)
• 3.5. Khả năng gây bệnh của virút cúm rg-A/H5N1 trên động vật thí nghiệm

Tóm tắt

I. Tổng quan về nghiên cứu tổng hợp virút cúm H5N1 và H3N2

Nghiên cứu tổng hợp virút cúm mới từ H5N1 và H3N2 bằng kỹ thuật di truyền ngược là một lĩnh vực quan trọng trong y học và vi sinh vật học. Virút cúm A, đặc biệt là các phân típ H5N1 và H3N2, đã gây ra nhiều đại dịch nghiêm trọng trên toàn cầu. Việc hiểu rõ về cấu trúc gen và cơ chế lây nhiễm của các virút này là cần thiết để phát triển các biện pháp phòng ngừa hiệu quả. Kỹ thuật di truyền ngược cho phép các nhà nghiên cứu tạo ra các chủng virút mới nhằm mục đích nghiên cứu và phát triển vaccine.

1.1. Khái quát về virút cúm H5N1 và H3N2

Virút cúm H5N1 và H3N2 thuộc họ Orthomyxoviridae, gây ra các bệnh lý nghiêm trọng ở người và gia cầm. H5N1 thường gây ra các vụ dịch cúm gia cầm, trong khi H3N2 là một trong những phân típ virút cúm mùa phổ biến ở người. Sự khác biệt trong cấu trúc gen của chúng tạo ra những thách thức trong việc phát triển vaccine và điều trị.

1.2. Tầm quan trọng của nghiên cứu virút cúm

Nghiên cứu virút cúm không chỉ giúp hiểu rõ hơn về cơ chế lây nhiễm mà còn hỗ trợ trong việc phát triển các phương pháp điều trị và vaccine hiệu quả. Việc tổng hợp virút cúm mới từ H5N1 và H3N2 có thể giúp xác định các đặc tính kháng nguyên mới, từ đó cải thiện khả năng phòng ngừa dịch bệnh.

II. Vấn đề và thách thức trong nghiên cứu virút cúm

Nghiên cứu virút cúm H5N1 và H3N2 gặp phải nhiều thách thức, bao gồm sự biến đổi gen nhanh chóng của virút và khả năng kháng thuốc. Sự thay đổi này có thể dẫn đến việc các vaccine hiện tại không còn hiệu quả. Ngoài ra, vấn đề đạo đức và an toàn sinh học trong nghiên cứu virút cũng cần được xem xét kỹ lưỡng.

2.1. Sự biến đổi gen của virút cúm

Virút cúm có khả năng biến đổi gen nhanh chóng thông qua các cơ chế như hoán vị kháng nguyên và đột biến. Điều này làm cho việc phát triển vaccine trở nên khó khăn, vì các chủng virút mới có thể xuất hiện bất ngờ và không được dự đoán trước.

2.2. Vấn đề đạo đức trong nghiên cứu virút

Nghiên cứu virút cúm cần phải tuân thủ các quy định về an toàn sinh học và đạo đức. Việc tổng hợp các chủng virút mới có thể gây ra rủi ro cho sức khỏe cộng đồng nếu không được kiểm soát chặt chẽ.

III. Phương pháp nghiên cứu tổng hợp virút cúm mới

Phương pháp di truyền ngược là một trong những kỹ thuật chính được sử dụng để tổng hợp virút cúm mới từ H5N1 và H3N2. Kỹ thuật này cho phép các nhà nghiên cứu tạo ra các chủng virút có đặc điểm gen mong muốn, từ đó nghiên cứu khả năng gây bệnh và phát triển vaccine.

3.1. Kỹ thuật di truyền ngược trong nghiên cứu virút

Kỹ thuật di truyền ngược cho phép tổng hợp virút cúm bằng cách sử dụng các plasmid chứa gen của virút. Quá trình này bao gồm việc chuẩn bị vector, nhân dòng ADN và chuyển nhiễm vào tế bào cảm nhiễm để tạo ra virút mới.

3.2. Quy trình tổng hợp virút cúm mới

Quy trình tổng hợp virút cúm mới bao gồm nhiều bước, từ việc lựa chọn chủng virút gốc, chuẩn bị ADN nhân dòng, đến việc khuếch đại virút và xác định hiệu giá virút. Mỗi bước đều cần được thực hiện cẩn thận để đảm bảo tính chính xác và an toàn.

IV. Ứng dụng thực tiễn của nghiên cứu virút cúm

Nghiên cứu tổng hợp virút cúm mới từ H5N1 và H3N2 có nhiều ứng dụng thực tiễn, đặc biệt trong việc phát triển vaccine và các phương pháp điều trị. Việc hiểu rõ về đặc tính của virút mới giúp các nhà khoa học thiết kế các vaccine hiệu quả hơn và chuẩn bị tốt hơn cho các đợt bùng phát dịch.

4.1. Phát triển vaccine cúm hiệu quả

Nghiên cứu về virút cúm mới giúp xác định các kháng nguyên quan trọng, từ đó phát triển các vaccine có khả năng bảo vệ cao hơn. Việc tổng hợp virút mới cũng giúp kiểm tra hiệu quả của các vaccine hiện có.

4.2. Đánh giá khả năng gây bệnh của virút mới

Nghiên cứu khả năng gây bệnh của các chủng virút mới giúp xác định mức độ nguy hiểm của chúng đối với sức khỏe cộng đồng. Điều này rất quan trọng trong việc xây dựng các biện pháp phòng ngừa và ứng phó kịp thời.

V. Kết luận và tương lai của nghiên cứu virút cúm

Nghiên cứu tổng hợp virút cúm mới từ H5N1 và H3N2 bằng kỹ thuật di truyền ngược mở ra nhiều cơ hội mới trong việc hiểu rõ hơn về virút cúm và phát triển các biện pháp phòng ngừa hiệu quả. Tương lai của nghiên cứu này hứa hẹn sẽ mang lại những tiến bộ đáng kể trong y học và bảo vệ sức khỏe cộng đồng.

5.1. Triển vọng nghiên cứu virút cúm trong tương lai

Với sự phát triển của công nghệ sinh học và di truyền, nghiên cứu virút cúm sẽ tiếp tục tiến bộ, giúp phát hiện và ứng phó kịp thời với các chủng virút mới. Điều này sẽ góp phần quan trọng trong việc bảo vệ sức khỏe cộng đồng.

5.2. Tầm quan trọng của hợp tác quốc tế trong nghiên cứu

Hợp tác quốc tế trong nghiên cứu virút cúm là rất cần thiết để chia sẻ thông tin và tài nguyên. Việc này sẽ giúp các quốc gia cùng nhau đối phó với các mối đe dọa từ virút cúm và bảo vệ sức khỏe toàn cầu.