Nghiên cứu sản xuất vaccine bổ trợ keo phèn phòng bệnh phù đầu lợn do E. coli

Nghiên cứu sản xuất vaccine bổ trợ keo phèn phòng bệnh phù đầu lợn do E. coli gây ra theo quy mô công nghiệp, nâng cao hiệu quả chăn nuôi.

• Tác giả: Hoàng Thị Thúy
• Người hướng dẫn: TS. Vũ Như Quán
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Thú y
• Đề tài: Nghiên cứu sản xuất vaccine phòng bệnh phù đầu lợn do E. coli
• Loại tài liệu: luận văn
• Năm xuất bản: 2018
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• 1. MỤC LỤC
• 2. DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT
• 3. DANH MỤC BẢNG
• 4. DANH MỤC SƠ ĐỒ VÀ HÌNH ẢNH
• 5. TRÍCH YẾU LUẬN VĂN
• 6. TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI
• 7. MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU
• 7.1. Mục tiêu tổng quát
• 7.2. Mục tiêu cụ thể
• 8. PHẠM VI NGHIÊN CỨU
• 9. THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI
• 10. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 10.1. MỘT SỐ HIỂU BIẾT VỀ VI KHUẨN E. coli
• 10.1.1. Phân loại
• 10.1.2. Kháng nguyên
• 10.1.3. Các yếu tố gây bệnh

Tóm tắt

I. Tổng quan về nghiên cứu sản xuất vaccine phòng bệnh phù đầu lợn do E

Nghiên cứu sản xuất vaccine phòng bệnh phù đầu lợn do E. coli là một trong những vấn đề cấp thiết trong ngành chăn nuôi hiện nay. Bệnh phù đầu lợn do E. coli gây ra đã gây thiệt hại lớn cho người chăn nuôi, đặc biệt là trong giai đoạn lợn con trước và sau cai sữa. Việc phát triển vaccine hiệu quả không chỉ giúp bảo vệ sức khỏe đàn lợn mà còn đảm bảo an toàn thực phẩm cho người tiêu dùng.

1.1. Tình hình bệnh phù đầu lợn do E. coli tại Việt Nam

Bệnh phù đầu lợn do E. coli là một trong những bệnh phổ biến nhất trong chăn nuôi lợn ở Việt Nam. Tỷ lệ mắc bệnh cao, đặc biệt ở lợn con, đã gây ra thiệt hại kinh tế lớn cho người chăn nuôi. Các triệu chứng điển hình bao gồm phù đầu, thần kinh và tỷ lệ chết cao.

1.2. Vai trò của vaccine trong phòng bệnh phù đầu lợn

Vaccine đóng vai trò quan trọng trong việc phòng ngừa bệnh phù đầu lợn do E. coli. Việc sử dụng vaccine không chỉ giúp giảm tỷ lệ mắc bệnh mà còn tăng cường sức đề kháng cho đàn lợn, từ đó nâng cao hiệu quả chăn nuôi.

II. Thách thức trong việc sản xuất vaccine phòng bệnh phù đầu lợn

Sản xuất vaccine phòng bệnh phù đầu lợn do E. coli gặp nhiều thách thức. Các yếu tố như chất lượng giống vi khuẩn, quy trình sản xuất và kiểm nghiệm đều ảnh hưởng đến hiệu quả của vaccine. Đặc biệt, việc đảm bảo an toàn và hiệu lực của vaccine là rất quan trọng.

2.1. Khó khăn trong việc lựa chọn giống vi khuẩn

Việc lựa chọn giống vi khuẩn E. coli phù hợp để sản xuất vaccine là một thách thức lớn. Các chủng vi khuẩn cần phải có độc lực mạnh và khả năng gây bệnh cao để đảm bảo vaccine có hiệu quả.

2.2. Quy trình sản xuất vaccine phức tạp

Quy trình sản xuất vaccine yêu cầu nhiều bước phức tạp, từ nuôi cấy vi khuẩn đến kiểm nghiệm chất lượng. Mỗi bước đều cần được thực hiện cẩn thận để đảm bảo vaccine đạt tiêu chuẩn an toàn và hiệu lực.

III. Phương pháp nghiên cứu sản xuất vaccine phòng bệnh phù đầu lợn

Nghiên cứu sản xuất vaccine phòng bệnh phù đầu lợn do E. coli được thực hiện theo quy trình nghiêm ngặt. Các phương pháp nghiên cứu bao gồm nuôi cấy vi khuẩn, kiểm nghiệm độc lực và sản xuất vaccine theo quy mô công nghiệp.

3.1. Phương pháp nuôi cấy vi khuẩn E. coli

Việc nuôi cấy vi khuẩn E. coli được thực hiện trên môi trường thạch máu và môi trường lỏng. Các điều kiện nuôi cấy cần được kiểm soát chặt chẽ để đảm bảo vi khuẩn phát triển tốt và đạt mật độ cao.

3.2. Kiểm nghiệm độc lực của vi khuẩn

Kiểm nghiệm độc lực là bước quan trọng để đánh giá khả năng gây bệnh của các chủng vi khuẩn. Các thí nghiệm trên động vật thí nghiệm giúp xác định mức độ độc lực và tính an toàn của vaccine.

IV. Kết quả nghiên cứu sản xuất vaccine phòng bệnh phù đầu lợn

Kết quả nghiên cứu cho thấy vaccine sản xuất đạt tiêu chuẩn về an toàn và hiệu lực. Các lô vaccine được kiểm nghiệm đều cho kết quả tích cực, giúp nâng cao khả năng phòng bệnh cho đàn lợn.

4.1. Kết quả kiểm nghiệm vaccine trên chuột thí nghiệm

Các lô vaccine đã được thử nghiệm trên chuột thí nghiệm với tỷ lệ an toàn đạt 100%. Hiệu lực bảo hộ của vaccine đạt từ 70-90%, cho thấy khả năng phòng bệnh tốt.

4.2. Kết quả thử nghiệm vaccine trên lợn

Khi thử nghiệm trên lợn, vaccine cho thấy hiệu quả cao trong việc phòng ngừa bệnh phù đầu. Tỷ lệ mắc bệnh giảm đáng kể, giúp người chăn nuôi yên tâm hơn trong quá trình chăn nuôi.

V. Kết luận và triển vọng tương lai của vaccine phòng bệnh phù đầu lợn

Nghiên cứu sản xuất vaccine phòng bệnh phù đầu lợn do E. coli đã mở ra hướng đi mới cho ngành chăn nuôi. Vaccine không chỉ giúp bảo vệ sức khỏe đàn lợn mà còn góp phần nâng cao hiệu quả kinh tế cho người chăn nuôi.

5.1. Tầm quan trọng của vaccine trong chăn nuôi

Vaccine là giải pháp hiệu quả để phòng ngừa bệnh tật trong chăn nuôi. Việc sử dụng vaccine giúp giảm thiểu thiệt hại kinh tế do bệnh tật gây ra.

5.2. Hướng phát triển vaccine trong tương lai

Trong tương lai, cần tiếp tục nghiên cứu và phát triển các loại vaccine mới, cải thiện quy trình sản xuất và kiểm nghiệm để đáp ứng nhu cầu ngày càng cao của ngành chăn nuôi.

Trích đoạn nội dung tài liệu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM HOÀNG THỊ THÚY NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT VACCINE BỔ TRỢ KEO PHÈN PHÒNG BÊNH PHÙ ĐẦU LỢN DO E.COLI DUNG HUYẾT GÂY RA THEO QUY MÔ CÔNG NGHIỆP Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01 Người hướng dẫn khoa học: TS. Vũ Như Quán NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng được sử dụng để bảo vệ một học vị nào. Tôi cam đoan rằng, mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn này đã được cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn đều được chỉ rõ nguồn gốc.

Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Hoàng Thị Thúy i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn, tôi đã nhận được sự hướng dẫn, chỉ bảo tận tình của các thầy cô giáo, sự giúp đỡ, động viên của bạn bè, đồng nghiệp và gia đình. Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tôi được bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc đến TS. Vũ Như Quán bộ môn Ngoại-Sản đã tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Ngoại-Sản, Khoa Thú y - Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã tận tình giúp đỡ tôi trong quá trình học tập, thực hiện đề tài và hoàn thành luận văn.

Tôi xin chân thành cảm ơn sâu sắc đến PGS. Cù Hữu Phú cùng toàn thể cán bộ công nhân viên tại Trung tâm nghiên cứu phát triển vacxin thuộc Công ty CP Đức Hạnh Marphavet đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài. Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp đã tạo mọi điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi về mọi mặt, động viên khuyến khích tôi hoàn thành luận văn. Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Hoàng Thị Thúy ii MỤC LỤC Lời cam đoan.

ii Mục lục. iii Danh mục chữ viết tắt. vi Danh mục bảng. vii Danh mục sơ đồ hình ảnh.

viii Trích yếu luận văn………………………………………….ix Thesis abstract. Tính cấp thiết của đề tài. Mục tiêu nghiên cứu. Mục tiêu tổng quát.

Mục tiêu cụ thể. Phạm vi nghiên cứu. Thực tiễn của đề tài. Tổng quan tài liệu.

Một số hiểu biết về vi khuẩn E.2 Kháng nguyên.3 Các yếu tố gây bệnh. Đặc tính nuôi cấy, sinh vật, hoá học. Bệnh phù đầu do E. coli gây ra.

Phòng bệnh. Bệnh phù đầu ở lợn con. Các vacxin phòng bệnh phù đầu lợn. Các vacxin phòng bệnh phù đầu do E.

coli gây ra. Vacxin phòng bệnh do E. coli gây ra nhập khẩu. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu.

Địa điểm nghiên cứu. Thời gian nghiên cứu. Nguyên liệu dùng cho nghiên cứu. Vi khuẩn sử dụng chế tạo vaccine vô hoạt phòng bệnh Phù đầu lợn lưu giữ tại Trung tâm nghiên cứu phát triển vaccine.

Môi trường, hóa chất dùng trong nghiên cứu, sản xuất vaccine vô hoạt phòng bệnh Phù đầu lợn. Máy móc, dụng cụ thí nghiệm. Nội dung nghiên cứu. Phương pháp nghiên cứu.

Phương pháp giám định vi khuẩn. Phương pháp giám định vi khuẩn. Phương pháp giám định vi khuẩn. Phương pháp giám định vi khuẩn.

Phương pháp giám định vi khuẩn. Phương pháp phân tích số liệu. Kết quả và thảo luận. Kết quả kiểm định giống E.

coli sản xuất vaccine. Kết quả kiểm tra một số đặc tính nuôi cấy. Kết quả kiểm tra một số đặc tính sinh hoá của vi khuẩn E. Kết quả kiểm tra serotype kháng nguyên O của vi khuẩn E.

Kết quả kiểm tra các gen quy định sinh tổng hợp các yếu tố gây bệnh của vi khuẩn E. Kết quả kiểm tra độc lực của các chủng vi khuẩn E. coli trên chuột bạch 27 4. Quy trình sản xuất vaccine theo quy mô công nghiệp.

Giống vi khuẩn E. coli để sản xuất vaccine. Nhân giống vi khuẩn E. coli trên môi trường thạch máu.

Nhân giống vi khuẩn E. coli trên môi trường lỏng. Bổ sung keo phèn vào canh trùng.5 Giai đoạn đóng chai, dán nhãn vaccine. Quá trình bảo quản vaccine.3 Kết quả kiểm nghiệm vaccine sản xuất thử nghiệm.

Kết quả kiểm tra một số chỉ tiêu các lô vaccine sản xuất theo quy mô công nghiệp. Kết quả kiểm tra thuần khiết của canh trùng sử dụng chế tạo vaccine 34 4. Kết quả kiểm tra vô trùng của 3 lô vaccine sản xuất theo quy mô công nghiệp. Kết quả kiểm tra an toàn trên chuột nhắt trắng.

Kết quả kiểm tra hiệu lực trên chuột nhăt trắng.6 Kết quả kiểm tra an toàn vaccine trên lợn. Kết quả thử hiệu lực vaccine trên lợn. Kết quả xác định liều tiêm vaccine Phù đầu lợn. Kết quả xác định độ dài miễn dịch của vaccine Phù đầu lợn.

Kết quả thử nghiệm vaccine trên diện rộng. Kết luận và kiến nghị. 45 Tài liệu tham khảo. 46 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Tên đầy đủ BHI : Brain Heart Infusion CFU : Colony Forming Unit Cs : Cộng sự DHL : Deoxycholate Hydrogen sulfide Lactose DNA : DeoxyriboNucleic Acid ETEC : EnteroToxigenic E.

coli : Escherichia coli ELISA : Enzyme - linked Immuno sorbant assay GDP : Guanin DiPhosphate GTP : Guanin TriPhosphate IHA : Indirect Haemagglutination test InvA : Invasion A LPS : LipoPolySaccharide PCR : Polymerase Chain Reaction RR : Relative Risk TSA : Tryptic Soya Agar TCVN : Tiêu chuẩn Việt Nam VX : Vaccine vi DANH MỤC BẢNG Bảng 3. Các cặp mồi do công ty Fermentas cung cấp để xác định các yếu tố độc lực và bám dính của vi khuẩn E. Một số đặc tính nuôi cấy của các chủng vi khuẩn E. Một số đặc tính sinh hoá của vi khuẩn E.

Serotyp kháng nguyên O của các chủng vi khuẩn E. coli nghiên cứu 26 Bảng 4. Tỷ lệ các chủng vi khuẩn E. coli mang các gen quy định sinh tổng hợp các yếu tố gây bệnh.

Độc lực của 10 chủng vi khuẩn E. coli trên chuột bạch. Kết quả kiểm tra đậm độ các lô vaccine. Kết quả kiểm tra thuần khiết của 3 lô canh trùng sử dụng chế tạo vaccine.

Kết quả kiểm tra vô trùng của vaccine chế tạo. Kết quả kiểm tra an toàn vaccine trên chuột nhắt trắng. Kết quả kiểm hiệu lực vaccine trên chuột nhắt trắng. Kết quả kiểm tra an toàn vaccine trên lợn.

Kết quả đánh giá hiệu lực vaccine trên lợn. Kết quả xác định kháng thể ở lợn tiêm vaccine với liều tiêm khác nhau. Kết quả kiểm tra hàm lượng kháng thể trên lợn tiêm vaccine. 43 vii DANH MỤC SƠ ĐỒ VÀ HÌNH ẢNH Sơ đồ 4.

Quy trình sản xuất vaccine vô hoạt phù đầu lợn có bổ trợ keo phèn. Hình thái vi khuẩn E. coli mọc trên thạch máu. Hình thái vi khuẩn E.

coli soi trên kính hiển vi quang học. Cấy nhân giống vi khuẩn E. coli trên thạch máu. coli giống nhỡ được nuôi cấy trong tủ lắc.

Máy lên men sục khí 15 lít SATORIUS của CHLB Đức. Máy lên men sục khí 120 lit SATORIUS của CHLB Đức. Hệ thống ra chai tự động của Ý. Dây truyền dán nhãn tự động.

33 viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Hoàng Thị Thúy Tên luận văn: “Nghiên cứu sản xuất vaccine bổ trợ keo phèn phòng bệnh phù đầu lợn do E. coli dung huyết gây ra theo quy mô công nghiệp”. Ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01 Tên cơ sở đào tạo: Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu: Đánh giá đươc quy trình sản xuất vaccine quy mô công nghiệp, quy trình kiểm nghiệm, sử dụng và bảo quản vaccine vô hoạt có bổ trợ keo phèn phòng bệnh Phù đầu lợn do vi khuẩn E. coli dung huyết gây ra.

Phương pháp: Phương pháp giám định vi khuẩn Phương pháp xác định các yếu tố gây bệnh của vi khuẩn phân lập được bằng kỹ thuật PCR Phương pháp kiểm tra độc lực của vi khuẩn trên động vật thí nghiệm Phương pháp chế tạo vaccine phòng bệnh phù đầu lợn Phương pháp kiểm nghiệm vaccine phù đầu lợn. Kết quả chính và kết luận: 1. 5 chủng vi khuẩn E. coli phân lập được sử dụng để chế vaccine phòng bệnh phù đầu cho lợn là đại diện cho các chủng vi khuẩn gây bệnh phù đầu lợn con trước và sau cai sữa tại các tỉnh, sau khi bảo quản thời gian dài dưới dạng thạch lỏng và đông khô, vẫn mang đầy đủ các đặc điểm sau: + Mang đầy đủ các đặc tính hình thái, nuôi cấy, sinh hóa như chủng gây bệnh trong tự nhiên.

+ Mang các gen quy định sinh tổng hợp các yếu tố gây bệnh ổn định sau khi lưu giữ sau thời gian dài ở thạch lỏng Glycerin và đông khô. + Có độc lực mạnh, gây chết 100% chuột thí nghiệm trong vòng 24 giờ. Các lô vaccine chế tạo trên quy mô công nghiệp đều đạt các chỉ tiêu về: + Phương pháp lên men sục khí canh trùng nuôi cấy đạt đậm độ vi 9 khuẩn: từ 17 x 10 vi khuẩn/ml. + Vô trùng bằng Formol 0,5% đạt kết quả 100% vô trùng khi kiểm tra trên các môi trường thạch máu, nước thịt, môi trường yếm khí và thạch nấm.

Các lô vaccine chế tạo trên quy mô công nghiệp đều đạt các chỉ tiêu sau: + Khi thử nghiệm trên chuột bạch, đạt chỉ tiêu an toàn 100% với liều tiêm 0.5ml/chuột với đường tiêm vào phúc xoang và hiệu lực bảo hộ đạt từ 70-90%. + Với liều tiêm gấp đôi và gấp ba liều tiêm miễn dịch: vaccine an toàn 100% với lợn từ 21 ngày tuổi. Vaccine khi được thử nghiệm trên diện rộng đạt chỉ tiêu an toàn cao với liều tiêm 1 ml/con và tạo được miễn dịch phòng hộ tốt. x THESIS ABSTRACT Master candidate: Hoang Thi Thuy Thesis title: Study on the production of vaccine adjuvant alum against head edema of pigs caused by E.coli in industrial scale.

Major: Veterinary Medicine Code: 60 64 01 01 Educational organization: Vietnam National University of Agriculture (VNUA) Research Objectives The study evaluates the vaccine production in industrial scale, test process, use and maintain of inactivated vaccine which supplemented with alum to prevent E. Research Methods Bacterial appraising methods Methods of identification of bacterial pathogens isolated by PCR The virulence test of bacteria on experimental animals Method produce vaccine to prevent head edema disease of pigs Test method for head edema disease of pigs. Main findings and conclusions 1. Five strains of isolated E.

coli used to create vaccine prevent head edema disease of pigs were representative stains of pre-weaning and post-weaning piglets in the provinces. After long time storage in the form of liquid and freeze dried, this stains still had all of the following characteristics: + Had morphological characteristics, culture, biochemical as pathogenic in nature.