Nghiên Cứu Chuẩn Hóa Phương Pháp Phân Tích Dư Lượng Ciprofloxacin Trong Thịt Lợn Bằng Kỹ Thuật ELISA

Tài liệu nghiên cứu Luận văn nghiên cứu chuẩn hóa phương pháp phân tích dư lượng ciprofloxacin trong thịt lợn bằng kỹ, tổng hợp lý thuyết và thực hành, cung cấp kiến thức chuyên

• Tác giả: Ngô Đức Dũng
• Người hướng dẫn: TS. Dương Văn Nhiệm
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Thú y
• Đề tài: Nghiên Cứu Phương Pháp Phân Tích Dư Lượng Ciprofloxacin Trong Thịt Lợn Bằng Kỹ Thuật ELISA
• Loại tài liệu: luận văn
• Năm xuất bản: 2017
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• 1. MỤC LỤC
• 1.1. Lời cam đoan
• 1.2. Mục lục
• 1.3. Danh mục chữ viết tắt
• 1.4. Danh mục bảng
• 1.5. Danh mục hình
• 1.6. Trích yếu luận văn
• 2. TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI
• 3. MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI
• 4. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 4.1. Tình hình an toàn thực phẩm
• 4.1.1. Tình hình an toàn thực phẩm trên thế giới
• 4.1.2. Tình hình an toàn thực phẩm ở Việt Nam
• 4.2. Tình hình sản xuất chăn nuôi ở Việt Nam
• 4.2.1. Sản xuất và tiêu thụ thịt ở Việt Nam
• 4.3. Tình hình sản xuất, sử dụng, quản lý thuốc thú y trong chăn nuôi
• 4.4. Giới thiệu khái quát về công ty cổ phần tập đoàn dabaco việt nam
• 4.5. Những hiểu biết cơ bản về kháng sinh nhóm Fluoroquinolone
• 4.5.1. Kháng sinh nhóm Fluoroquinolone
• 4.5.2. Kháng sinh Ciprofloxacin
• 4.6. Tồn dư kháng sinh trong thịt lợn và ảnh hưởng của chúng đối với sức khỏe cộng đồng
• 4.6.1. Khái niệm về tồn dư
• 4.6.2. Ảnh hưởng của tồn dư kháng sinh trong thực phẩm đối với sức khỏe cộng đồng
• 4.7. Một số kỹ thuật phân tích dư lượng kháng sinh trong thực phẩm
• 4.7.1. Khái niệm về ELISA
• 4.7.2. Phân loại ELISA. Ưu, nhược điểm của phương pháp phân tích định tính ELISA
• 4.7.3. Một số yếu tố ảnh hưởng tới kết quả phân tích của phương pháp ELISA
• 4.7.3.1. Các yếu tố ảnh hưởng đến độ nhạy của phản ứng ELISA
• 5. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 5.1. Vật liệu nghiên cứu
• 5.2. Đối tượng nghiên cứu
• 5.3. Địa điểm nghiên cứu
• 5.4. Thời gian nghiên cứu
• 5.5. Vật liệu, hóa chất và thuốc thử
• 5.6. Thiết bị và dụng cụ thí nghiệm
• 5.7. Nội dung nghiên cứu
• 5.8. Phương pháp nghiên cứu
• 5.8.1. Thí nghiệm nghiên cứu tính phù hợp của kit ELISA dùng cho phân tích định tính xác định Ciprofloxacin trong mẫu thịt lợn tươi
• 5.8.2. Ứng dụng kết quả nghiên cứu của phương pháp để phân tích mẫu thực
• 5.9. Phương pháp phân tích số liệu
• 6. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 6.1. Kết quả nghiên cứu tính phù hợp của kit ELISA dùng cho phân tích định tính xác định Ciprofloxacin trong thịt lợn tươi
• 6.2. Kết quả nghiên cứu tính ổn định của kit ELISA
• 6.3. Kết quả xác định giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng của kit ELISA
• 6.4. Kết quả nghiên cứu khả năng phát hiện của kit (CCβ)
• 6.5. Kết quả xác định độ chính xác (Accuracy: AC), độ đặc hiệu (Specificity: SP), độ nhạy (Sensitivity: SE), độ lệch dương (Positive deviation: PD) và độ lệch âm (negative deviation: ND)
• 6.6. Kết quả xác định độ thu hồi, độ lặp lại và độ tái lặp
• 6.7. Kết quả phân tích dư lượng ciprofloxacin trong mẫu thịt lợn tươi bằng Kit Elisa
• 7. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng Quan Nghiên Cứu ELISA Phát Hiện Ciprofloxacin 55 Ký Tự

Nghiên cứu phương pháp phân tích dư lượng Ciprofloxacin trong thịt lợn bằng kỹ thuật ELISA là một lĩnh vực quan trọng trong việc đảm bảo an toàn thực phẩm. Ciprofloxacin là một loại kháng sinh thuộc nhóm Fluoroquinolone, được sử dụng rộng rãi trong thú y để điều trị các bệnh nhiễm khuẩn. Tuy nhiên, việc sử dụng không kiểm soát có thể dẫn đến dư lượng kháng sinh trong thịt lợn, gây nguy cơ kháng kháng sinh và ảnh hưởng đến sức khỏe cộng đồng. Kỹ thuật ELISA là một phương pháp phân tích miễn dịch enzyme, có độ nhạy cao và dễ thực hiện, phù hợp cho việc kiểm nghiệm thực phẩm.

1.1. Giới Thiệu Về Kháng Sinh Ciprofloxacin Trong Chăn Nuôi

Ciprofloxacin là một kháng sinh bán tổng hợp, thuộc nhóm quinolone, có phổ kháng khuẩn rộng. Nó hoạt động bằng cách ức chế DNA gyrase, một enzyme cần thiết cho sự sao chép DNA của vi khuẩn. Việc sử dụng Ciprofloxacin trong chăn nuôi giúp điều trị hiệu quả các bệnh nhiễm khuẩn, nhưng cần tuân thủ nghiêm ngặt các quy định về thời gian ngừng thuốc để tránh dư lượng trong thịt lợn. Việc kiểm soát dư lượng Ciprofloxacin là cần thiết để ngăn ngừa nguy cơ kháng kháng sinh.

1.2. Vai Trò Của ELISA Trong Kiểm Nghiệm An Toàn Thực Phẩm

Kỹ thuật ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) là một phương pháp sinh hóa được sử dụng để phát hiện và định lượng các chất, chẳng hạn như kháng sinh, trong mẫu. ELISA có ưu điểm là độ nhạy cao, dễ thực hiện, và có thể xử lý số lượng lớn mẫu. Do đó, ELISA được ứng dụng rộng rãi trong kiểm nghiệm thực phẩm để đảm bảo an toàn thực phẩm và bảo vệ sức khỏe cộng đồng. Phương pháp này đặc biệt hữu ích trong việc phân tích dư lượng kháng sinh.

II. Thách Thức Về Dư Lượng Ciprofloxacin Trong Thịt Lợn 59 Ký Tự

Vấn đề dư lượng Ciprofloxacin trong thịt lợn đặt ra nhiều thách thức đối với ngành chăn nuôi và an toàn thực phẩm. Việc sử dụng kháng sinh không đúng cách, không tuân thủ thời gian ngừng thuốc, hoặc sử dụng các loại kháng sinh bị cấm có thể dẫn đến tình trạng dư lượng vượt quá mức cho phép. Điều này không chỉ gây nguy cơ kháng kháng sinh mà còn ảnh hưởng trực tiếp đến sức khỏe cộng đồng. Do đó, việc phát triển và áp dụng các phương pháp phân tích hiệu quả để kiểm nghiệm là vô cùng quan trọng.

2.1. Nguy Cơ Kháng Kháng Sinh Từ Dư Lượng Trong Thực Phẩm

Dư lượng kháng sinh trong thực phẩm, đặc biệt là thịt lợn, là một trong những nguyên nhân chính dẫn đến tình trạng kháng kháng sinh. Vi khuẩn tiếp xúc với kháng sinh ở nồng độ thấp có thể phát triển khả năng kháng thuốc, làm giảm hiệu quả điều trị các bệnh nhiễm khuẩn ở người. Việc kiểm soát và giảm thiểu dư lượng kháng sinh là cần thiết để bảo vệ hiệu quả của kháng sinh và đảm bảo sức khỏe cộng đồng.

2.2. Ảnh Hưởng Của Dư Lượng Kháng Sinh Đến Sức Khỏe Cộng Đồng

Dư lượng kháng sinh trong thịt lợn có thể gây ra nhiều ảnh hưởng tiêu cực đến sức khỏe cộng đồng. Ngoài nguy cơ kháng kháng sinh, dư lượng này còn có thể gây dị ứng, rối loạn tiêu hóa, và ảnh hưởng đến hệ miễn dịch. Đặc biệt, trẻ em và người già là những đối tượng dễ bị tổn thương nhất. Việc kiểm nghiệm thực phẩm và kiểm soát dư lượng kháng sinh là biện pháp quan trọng để bảo vệ sức khỏe cộng đồng.

III. Phương Pháp ELISA Định Lượng Ciprofloxacin Quy Trình 58 Ký Tự

Phương pháp ELISA là một giải pháp hiệu quả để phân tích dư lượng Ciprofloxacin trong thịt lợn. Quy trình ELISA bao gồm nhiều bước, từ chuẩn bị mẫu, phản ứng miễn dịch, đến đọc kết quả ELISA và xử lý số liệu. Để đảm bảo độ chính xác và tin cậy của kết quả, cần tuân thủ nghiêm ngặt các quy trình và sử dụng các thiết bị, hóa chất đạt chuẩn. Việc kiểm định và chuẩn hóa phương pháp ELISA là rất quan trọng để đảm bảo tính phù hợp và độ tin cậy.

3.1. Chi Tiết Quy Trình Chuẩn Bị Mẫu Thịt Lợn Cho ELISA

Chuẩn bị mẫu là bước quan trọng trong quy trình ELISA. Mẫu thịt lợn cần được đồng nhất, chiết tách Ciprofloxacin bằng dung môi phù hợp, và làm sạch để loại bỏ các chất gây nhiễu. Quy trình chuẩn bị mẫu cần được tối ưu hóa để đảm bảo thu hồi tối đa Ciprofloxacin và loại bỏ các chất gây ảnh hưởng đến phản ứng ELISA. Các bước này ảnh hưởng trực tiếp đến độ chính xác của phân tích.

3.2. Các Bước Thực Hiện Phản Ứng ELISA Và Đọc Kết Quả

Phản ứng ELISA bao gồm các bước ủ mẫu với kháng thể đặc hiệu, thêm enzyme liên kết, và thêm cơ chất để tạo màu. Cường độ màu tỷ lệ thuận với nồng độ Ciprofloxacin trong mẫu. Đọc kết quả ELISA bằng máy quang phổ và so sánh với đường chuẩn để định lượng Ciprofloxacin. Việc kiểm soát nhiệt độ, thời gian ủ, và nồng độ thuốc thử là rất quan trọng để đảm bảo độ nhạy và độ chính xác của phương pháp.

3.3. Xử Lý Số Liệu Và Đánh Giá Kết Quả Phân Tích ELISA

Xử lý số liệu từ máy quang phổ để tính toán nồng độ Ciprofloxacin trong mẫu. Đánh giá kết quả dựa trên các thông số như giới hạn phát hiện (LOD), giới hạn định lượng (LOQ), độ thu hồi, và độ chính xác. So sánh kết quả với các quy định về dư lượng Ciprofloxacin trong thực phẩm để đánh giá mức độ an toàn thực phẩm. Việc này đảm bảo tính tin cậy của phân tích.

IV. So Sánh ELISA Với HPLC MS Trong Phân Tích Ciprofloxacin 57 Ký Tự

So sánh phương pháp ELISA với các phương pháp khác như HPLC/MS (sắc ký lỏng khối phổ) là cần thiết để đánh giá ưu điểm của ELISA và nhược điểm của ELISA. HPLC/MS là phương pháp có độ chính xác cao, nhưng đòi hỏi thiết bị đắt tiền và kỹ thuật viên có trình độ cao. ELISA có ưu điểm là chi phí thấp, dễ thực hiện, nhưng độ chính xác có thể thấp hơn. Việc lựa chọn phương pháp phù hợp phụ thuộc vào mục đích phân tích và điều kiện của phòng thí nghiệm.

4.1. Ưu Điểm Của Phương Pháp ELISA Trong Kiểm Nghiệm

Ưu điểm của ELISA bao gồm chi phí thấp, dễ thực hiện, và khả năng xử lý số lượng lớn mẫu. ELISA phù hợp cho việc kiểm tra sàng lọc dư lượng Ciprofloxacin trong thịt lợn với số lượng lớn. Phương pháp này đặc biệt hữu ích cho các phòng thí nghiệm có nguồn lực hạn chế nhưng vẫn cần đảm bảo an toàn thực phẩm. ELISA cũng có thể được sử dụng để kiểm định nhanh chóng.

4.2. Nhược Điểm Của ELISA Và Các Hạn Chế Cần Lưu Ý

Nhược điểm của ELISA bao gồm độ chính xác thấp hơn so với HPLC/MS, khả năng bị ảnh hưởng bởi các chất gây nhiễu, và yêu cầu chuẩn bị mẫu kỹ lưỡng. ELISA cũng có thể cho kết quả dương tính giả, đòi hỏi phải xác nhận bằng các phương pháp khác. Do đó, cần lưu ý các hạn chế này khi sử dụng ELISA để phân tích dư lượng Ciprofloxacin.

4.3. Khi Nào Nên Sử Dụng ELISA Thay Vì HPLC MS

Sử dụng ELISA khi cần kiểm tra sàng lọc số lượng lớn mẫu với chi phí thấp. HPLC/MS nên được sử dụng để xác nhận kết quả dương tính từ ELISA hoặc khi cần độ chính xác cao. Việc lựa chọn phương pháp phụ thuộc vào mục đích phân tích, nguồn lực, và yêu cầu về độ chính xác. ELISA phù hợp cho kiểm nghiệm thực phẩm hàng ngày, trong khi HPLC/MS phù hợp cho nghiên cứu và kiểm định chuyên sâu.

V. Ứng Dụng ELISA Kiểm Tra Thịt Lợn Tại Dabaco Kết Quả 59 Ký Tự

Nghiên cứu ứng dụng của ELISA trong kiểm nghiệm thịt lợn tại Công ty Cổ phần Tập đoàn DABACO Việt Nam cho thấy tính hiệu quả của phương pháp này trong việc kiểm soát dư lượng Ciprofloxacin. Kết quả nghiên cứu cho thấy bộ kit ELISA của hãng Biooscientific đạt yêu cầu về tính ổn định và độ chính xác. Phương pháp ELISA phù hợp để ứng dụng tại phòng kiểm nghiệm của DABACO trong phân tích sàng lọc dư lượng Ciprofloxacin.

5.1. Đánh Giá Độ Chính Xác Và Độ Tin Cậy Của Kit ELISA

Đánh giá độ chính xác và độ tin cậy của kit ELISA bằng cách xác định các thông số như độ thu hồi, độ lặp lại, và độ tái lặp. Kết quả cho thấy kit ELISA của Biooscientific đạt yêu cầu về các thông số này, chứng tỏ tính ổn định và độ tin cậy của phương pháp. Điều này đảm bảo rằng kết quả phân tích là chính xác và có thể tin cậy.

5.2. Kết Quả Phân Tích Dư Lượng Ciprofloxacin Trong Mẫu Thịt

Kết quả phân tích dư lượng Ciprofloxacin trong mẫu thịt lợn bằng kit ELISA cho thấy phương pháp này có khả năng phát hiện Ciprofloxacin ở nồng độ thấp. Giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) được xác định để đảm bảo độ nhạy của phương pháp. Kết quả này cho thấy ELISA là một công cụ hữu ích để kiểm soát dư lượng Ciprofloxacin trong thịt lợn.

5.3. Ứng Dụng Thực Tế Và So Sánh Với Tiêu Chuẩn An Toàn

Kết quả phân tích được so sánh với các quy định về dư lượng Ciprofloxacin trong thực phẩm để đánh giá mức độ an toàn thực phẩm. Phòng thí nghiệm quy định diễn giải kết quả thử nghiệm phân tích dư lượng Ciprofloxacin trong thịt lợn bằng kỹ thuật ELISA theo khả năng phát hiện CCß là 1,60 µg/kg. Mẫu thịt lợn dương tính dư lượng Ciprofloxacin cần phân tích khẳng định bằng kỹ thuật LC/MS/MS.

VI. Kết Luận Giải Pháp Giảm Thiểu Dư Lượng Kháng Sinh 58 Ký Tự

Nghiên cứu đã chứng minh tính hiệu quả của phương pháp ELISA trong việc phân tích dư lượng Ciprofloxacin trong thịt lợn. Tuy nhiên, để giảm thiểu dư lượng kháng sinh trong thực phẩm, cần có các giải pháp đồng bộ từ quản lý nhà nước, nhà sản xuất, và người tiêu dùng. Việc tăng cường kiểm tra, kiểm soát, và tuyên truyền về sử dụng kháng sinh hợp lý là rất quan trọng để bảo vệ sức khỏe cộng đồng.

6.1. Tóm Tắt Kết Quả Nghiên Cứu Và Đề Xuất Cải Tiến

Nghiên cứu đã chuẩn hóa phương pháp phân tích dư lượng Ciprofloxacin trong thịt lợn bằng kỹ thuật ELISA tại phòng kiểm nghiệm của Công ty Cổ phần Tập đoàn DABACO Việt Nam. Kết quả cho thấy phương pháp này phù hợp để kiểm tra sàng lọc. Đề xuất cải tiến bao gồm tối ưu hóa quy trình chuẩn bị mẫu và tăng cường kiểm soát chất lượng kit ELISA.

6.2. Giải Pháp Giảm Thiểu Dư Lượng Kháng Sinh Trong Chăn Nuôi

Giải pháp giảm thiểu dư lượng kháng sinh trong chăn nuôi bao gồm sử dụng kháng sinh hợp lý, tuân thủ thời gian ngừng thuốc, tăng cường vệ sinh chuồng trại, và sử dụng các biện pháp phòng bệnh tự nhiên. Cần có sự phối hợp chặt chẽ giữa nhà nước, nhà sản xuất, và người chăn nuôi để đảm bảo an toàn thực phẩm và bảo vệ sức khỏe cộng đồng.

6.3. Kiến Nghị Về Chính Sách Và Quy Định An Toàn Thực Phẩm

Kiến nghị về chính sách và quy định an toàn thực phẩm bao gồm tăng cường kiểm tra và xử phạt các trường hợp vi phạm về sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi. Cần có các quy định cụ thể về giới hạn dư lượng tối đa cho phép của Ciprofloxacin trong thịt lợn. Tăng cường tuyên truyền và giáo dục về an toàn thực phẩm cho người tiêu dùng.

Trích đoạn nội dung tài liệu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGÔ ĐỨC DŨNG NGHIÊN CỨU CHUẨN HÓA PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH DƯ LƯỢNG CIPROFLOXACIN TRONG THỊT LỢN BẰNG KỸ THUẬT ELISA TẠI PHÒNG KIỂM NGHIỆM CỦA CÔNG TY CỔ PHẦN TẬP ĐOÀN DABACO VIỆT NAM Chuyên ngành: Thú y Mã số : 60 64 01 01 Người hướng dẫn khoa học: TS. Dương Văn Nhiệm NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2017 LỜI CAM ĐOAN - Tôi xin cam đoan rằng, số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực và chưa được sử dụng để bảo vệ một học vị nào. - Tôi xin cam đoan rằng, mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn đã được cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn đều được chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Ngô Đức Dũng i LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS.

Dương Văn Nhiệm, người đã tận tình giúp đỡ tôi trong quá trình nghiên cứu đề tài và hoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô Khoa Thú y và Bộ môn Thú y cộng đồng đã tận tình dạy dỗ và đóng góp các ý kiến quý báu để tôi hoàn thành luận văn này. Tôi chân thành cảm ơn lãnh đạo Công ty Cổ phần Tập đoàn DABACO Việt Nam đã cho phép triển khai và tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình nghiên cứu. Tôi cũng xin chân thành cảm ơn các bạn đồng nghiệp của Phòng Kiểm nghiệm của Công ty Cổ phần Tập đoàn DABACO Việt Nam và gia đình đã động viên, giúp đỡ và tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài này.

Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Ngô Đức Dũng ii MỤC LỤC Lời cam đoan. ii Mục lục. iii Danh mục chữ viết tắt.v Danh mục bảng. vii Danh mục hình.

viii Trích yếu luận văn. ix Thesis abstract. Tính cấp thiết của đề tài. Mục tiêu của đề tài.

Tổng quan tài liệu. Tình hình an toàn thực phẩm. Tình hình an toàn thực phẩm trên thế giới. Tình hình an toàn thực phẩm ở Việt Nam.

Tình hình sản xuất chăn nuôi ở Việt Nam. Sản xuất và tiêu thụ thịt ở Việt Nam. Tình hình sản xuất, sử dụng, quản lý thuốc thú y trong chăn nuôi. Giới thiệu khái quát về công ty cổ phần tập đoàn dabaco việt nam.

Những hiểu biết cơ bản về kháng sinh nhóm Fluoroquinolone. Kháng sinh nhóm Fluoroquinolone. Kháng sinh Ciprofloxacin. Tồn dư kháng sinh trong thịt lợn và ảnh hưởng của chúng đối với sức khỏe cộng đồng.

Khái niệm về tồn dư. Ảnh hưởng của tồn dư kháng sinh trong thực phẩm đối với sức khỏe cộng đồng. Một số kỹ thuật phân tích dư lượng kháng sinh trong thực phẩm. Khái niệm về ELISA.

Phân loại ELISA. Ưu, nhược điểm của phương pháp phân tích định tính ELISA. Một số yếu tố ảnh hưởng tới kết quả phân tích của phương pháp ELISA. Các yếu tố ảnh hưởng đến độ nhạy của phản ứng ELISA.

Vật liệu và phương pháp nghiên cứu. Vật liệu nghiên cứu. Đối tượng nghiên cứu. Địa điểm nghiên cứu.

Thời gian nghiên cứu. Vật liệu, hóa chất và thuốc thử. Thiết bị và dụng cụ thí nghiệm. Nội dung nghiên cứu.

Phương pháp nghiên cứu. Thí nghiệm nghiên cứu tính phù hợp của kit ELISA dùng cho phân tích định tính xác định Ciprofloxacin trong mẫu thịt lợn tươi. Ứng dụng kết quả nghiên cứu của phương pháp để phân tích mẫu thực. Phương pháp phân tích số liệu.

Kết quả và thảo luận. Kết quả nghiên cứu tính phù hợp của kit elisa dùng cho phân tích định tính xác định Ciprofloxacin trong thịt lợn tươi. Kết quả nghiên cứu tính ổn định của kit ELISA. Kết quả xác định giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng của kit ELISA.

Kết quả nghiên cứu khả năng phát hiện của kit (CCβ). Kết quả xác định độ chính xác (Accuracy: AC), độ đặc hiệu (Specificity: SP), độ nhạy (Sensitivity: SE), độ lệch dương (Positive deviation: PD) và độ lệch âm (negative deviation: ND). Kết quả xác định độ thu hồi, độ lặp lại và độ tái lặp. Kết quả phân tích dư lượng ciprofloxacin trong mẫu thịt lợn tươi bằng Kit Elisa.

Kết luận và kiến nghị. 44 Tài liệu tham khảo. 49 iv DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Tên Tiếng Anh Nghĩa Tiếng Việt AC Accuracy Độ chính xác ADI Acceptable Daily Intake Lượng ăn vào hàng ngày chấp nhận được CCα Decision limit Giới hạn quyết định CCβ Detection capability Khả năng phát hiện ELISA Enzyme-Linked ImmunoSorbent Phương pháp ELISA Assay EU European Union Liên hiệp Châu Âu FAO Food and Agriculture Organization Tổ chức Lương thực và Nông nghiệp of the United Nations của Liên Hiệp Quốc FDA Food and Drug Administration Cục Quản lý Thực phẩm và Dược phầm Hoa Kỳ FSIS Food Safety and Inspection Service Cơ quan Thanh tra và An toàn thực phẩm GMP Good Manufacturing Practice Thực hành sản xuất tốt HACCP Hazard Analysis and Critical Hệ thống phân tích mối nguy và kiểm Control Point System soát điểm tới hạn HPLC High-performance liquid Sắc ký lỏng hiệu năng cao chromatography LC/MS-MS Liquid Chromatography/Mass Sắc ký lỏng khối phổ hai lần Spectrometry LOD Limit of Detection Giới hạn phát hiện v LOQ Limit of Quantification Giới hạn định lượng MRL Maximum Residue Limit Giới hạn dư lượng tối đa cho phép MRPL Minimum Required Performance Giới hạn phân tích tối thiểu của Limit phương pháp ND Negative deviation Độ lệch âm NN&PTNT Nông nghiệp và Phát triển nông thôn PD Positive deviation Độ lệch dương Ppb Parts per billion Phần tỷ SE Sensitivity Độ nhạy SP Specificity Độ đặc hiệu TĂCN Thức ăn chăn nuôi TP.HCM Thành phố Hồ Chí Minh IUPAC International Union of Pure and Liên minh Quốc tế về Hóa học thuần Applied Chemistry túy và Hóa học ứng dụng WTO World Trade Organization Tổ chức Thương mại thế giới vi DANH MỤC BẢNG Bảng 2. Ký hiệu quy ước mô phỏng các phương pháp ELISA.

Tiêu chí đánh giá về độ thu hồi. Tiêu chí đánh giá về % CV. Kết quả phân tích kiểm tra đường chuẩn và tính ổn định của kit. Kết quả phân tích và kết quả tính toán giới hạn phát hiện (LOD) Ciprofloxacin trong thịt lợn tươi.

Kết quả xác định giới hạn phát hiện của phương pháp ở nồng độ 1,6 g/kg. Kết quả phân tích mẫu xác định độ chính xác, độ đặc hiệu, độ nhạy, độ lệch âm và độ lệch dương của phương pháp. Kết quả phân tích về độ chính xác độ đặc hiệu, độ nhạy, độ lệch âm và độ lệch dương. Kết quả đánh giá độ chính xác (AC), độ đặc hiệu, độ nhạy (SE), độ lệch dương (PD) và độ lệch âm (ND) của kit.

Độ thu hồi (R%), độ lặp lại và độ tái lặp của Ciprofloxacin trên nền mẫu thịt lợn tại 5 µg/kg. Độ thu hồi (R%), độ lặp lại và độ tái lặp của Ciprofloxacin trên nền mẫu thịt lợn tại 7,5 µg/kg. Độ thu hồi (R%), độ lặp lại và độ tái lặp của Ciprofloxacin trên nền mẫu thịt lợn tại 10 µg/kg. Kết quả phân tích dư lượng Ciprofloxacin trong mẫu thịt lợn tươi bằng kỹ thuật ELISA.

42 vii DANH MỤC HÌNH Hình 2. Chuỗi giá trị sản xuất của Công ty Cổ phần Tập đoàn DABACO Việt Nam. Sơ đồ mô phỏng của phương pháp ELISA sandwich và ELISA cạnh tranh. Đường chuẩn biểu thị mối tương quan giữa nồng độ chuẩn Ciprofloxacin và độ hấp thụ của kit.

34 viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Ngô Đức Dũng Tên luận văn: Nghiên cứu chuẩn hóa phương pháp phân tích dư lượng ciprofloxacin trong thịt lợn bằng kỹ thuật ELISA tại phòng kiểm nghiệm của Công ty Cổ phần Tập đoàn DABACO Việt Nam. Ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01 Tên cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu: - Chuẩn hóa được phương pháp phân tích Ciprofloxacin trong thịt lợn tươi bằng kỹ thuật ELISA; - Ứng dụng phương pháp đã chuẩn hóa để kiểm soát tồn dư Ciprofloxacin trong thịt lợn tươi của Công ty Cổ phần Tập đoàn DABACO Việt Nam. Phương pháp: - Thí nghiệm nghiên cứu tính phù hợp của kit ELISA dùng cho phân tích định tính xác định Ciprofloxacin trong mẫu thịt lợn tươi. - Ứng dụng kết quả nghiên cứu của phương pháp để phân tích mẫu thực - Phương pháp phân tích số liệu Kết quả chính và kết luận: 1.

Bộ kit ELISA dùng cho phân tích định tính dư lượng Ciprofloxacin trong thịt lợn của hãng Biooscientific (MaxSignalTM Ciprofloxacin, mã 1068-01) đạt yêu cầu về tính ổn định; các thông số về khả năng phát hiện, hiệu lực của kit trong điều kiện phòng thử nghiệm của DABACO là: Độ chính xác (AC): 95% (AC ≥ 90%) Độ đặc hiệu: 100% (SP ≥ 90%) Độ nhạy (SE): 90% (SE ≥ 90%) Độ lệch dương (PD): 0% (PD ≤ 10%) Độ lệch âm (ND): 9,1% (ND ≤ 10%). Giới hạn phát hiện LOD là 1,52 µg/kg Khả năng phát hiện CCß là 1,60 µg/kg Độ thu hồi trong khoảng từ 81,0 - 109,2% Độ lặp lại là 7,99 – 10,64 ix Độ tái lặp 8,63- 9,43 Kết quả này đáp ứng được yêu cầu của một phương pháp phân tích định tính theo quy định trong Quyết định 657/2002/EC. Phương pháp phân tích dư lượng Ciprofloxacin trong thịt lợn bằng kỹ thuật ELISA đáp ứng các quy định trong Quyết định 657/2002/EC về yêu cầu kỹ thuật của một phương phấp phân tích sàng lọc. Phương pháp là phù hợp để ứng dụng tại phòng kiểm nghiệm của DABACO trong phân tích sàng lọc dư lượng Ciprofloxacin trong thịt lợn.

Phòng thử nghiệm quy định diễm giải kết quả thử nghiệm phân tích dư lượng Ciprofloxacin trong thịt lợn bằng kỹ thuật ELISA theo khả năng phát hiện CCß là 1,60 µg/kg (mẫu thịt lợn dương tính dư lượng Ciprofloxacin, cần phân tích khẳng định bằng kỹ thuật LC/MS/MS). Master candidate: Ngo Duc Dung 2. Thesis title: "A study on validation of analysis method of Ciprofloxaxin residue in pork by the ELISA technique at the laboratory of DABACO Group”. Major: Veterinary Medicine Code: 60 64 01 01 4.

Educational organization: Vietnam National University of Agriculture (VNUA) Research Objectives To validate the analysis method of Ciprofloxaxin residue in fresh pork by the ELISA technique. To apply the validated method to analyze Ciprofloxacin residue in fresh pork of DABACO Group. Materials and Methods Research experiment the suitability of ELISA kit used for qualitative analysis to determine Ciprofloxacin in fresh pork sample. Apply research results of method to analysis real sample.

Method of data analysis.