Luận Văn Thạc Sĩ: Kỹ Thuật Nhân Giống Cây Xạ Đen Ehretia Asperula Bằng Phương Pháp In Vitro

Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống cây xạ đen Ehretia Asperula bằng phương pháp in vitro tại Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, ứng dụng công nghệ sinh học hiện đại.

Trường đại học

Đại Học Nông Lâm Thái Nguyên

Chuyên ngành

Công Nghệ Sinh Học

Người đăng

Ẩn danh

Thể loại

khóa luận tốt nghiệp đại học

2015

68
2
0

Phí lưu trữ

30 Point

Mục lục chi tiết

LỜI CẢM ƠN

DANH MỤC BẢNG

DANH MỤC HÌNH

DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT

MỤC LỤC

1. Phần 1: Mục tiêu của đề tài

1.1. Yêu cầu của đề tài

1.2. Ý nghĩa của đề tài

2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1. Giới thiệu về cây Xạ đen

2.2. Nguồn gốc và phân loại

2.3. Sự phân bố cây Xạ đen

2.4. Đặc điểm hình thái cây Xạ đen

2.5. Giá trị của cây Xạ đen

2.5.1. Giá trị về kinh tế

2.5.2. Giá trị dược liệu

2.6. Khái quát về nuôi cấy mô tế bào thực vật

2.7. Cở sở của nuôi cấy mô tế bào thực vật

2.8. Một số yếu tố ảnh hưởng tới quá trình nuôi cây mô tế bào thực vật

2.9. Các giai đoạn của nhân giống vô tính in vitro

2.10. Tình hình nhân giống và sử dụng cây Xạ đen

2.10.1. Tình hình nghiên cứu cây Xạ đen trong và ngoài nước

2.10.1.1. Tình hình nghiên cứu cây Xạ đen trong nước
2.10.1.2. Tình hình nghiên cứu cây Xạ đen ngoài nước

3. ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1. Đối tượng và phạm vi nghiên cứu

3.2. Địa điểm và thời gian tiến hành nghiên cứu

3.3. Thiết bị, dụng cụ và hóa chất nuôi cấy mô

3.4. Nội dung nghiên cứu

3.4.1. Nghiên cứu ảnh hưởng của thời gian khử trùng ng NaClO 1% và HgCl2 0,1% đến khả năng tạo vật liệu vô trùng phục vụ tái sinh cây Xạ đen

3.4.2. Nghiên cứu ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy MS, ½MS, WPM, B5 đến khả năng tái sinh chồi Xạ đen

3.4.3. Nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến khả năng nhân chồi từ cây Xạ đen

3.4.4. Nghiên cứu ảnh hưởng của NAA đến khả năng ra rễ tạo cây hoàn chỉnh của chồi Xạ đen in vitro

3.4.5. Nghiên cứu ảnh hưởng của một số giá thể đến khả năng sinh trưởng của cây Xạ đen ở giai đoạn vườn ươm

3.5. Phương pháp đánh giá và xử lý số liệu

4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

4.1. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của hóa chất và thời gian khử trùng bằng NaOCl 1% và HgCl2 1% đến khả năng tạo vật liệu vô trùng phục vụ tái sinh cây Xạ đen (sau 1 tuần nuôi cấy)

4.2. Kết quả ảnh hưởng của thời gian khử trùng bằng NaOCl 1% đến khả năng tạo vật liệu vô trùng phục vụ tái sinh in vitro của cây Xạ đen (sau 1 tuần nuôi cấy)

4.3. Kết quả ảnh hưởng của thời gian khử trùng của HgCl2 0,1% đến khả năng tạo vật liệu vô trùng phục vụ tái sinh in vitro của cây Xạ đen (sau 1 tuần nuôi cấy)

4.4. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy MS, ½MS, B5, WPM, đến khả năng tái sinh chồi Xạ đen (sau 2 tuần nuôi cấy)

4.5. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến khả năng nhân nhanh chồi cây Xạ đen tái sinh từ đoạn thân (sau 4 tuần nuôi cấy)

4.6. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ BA đến khả năng nhân nhanh chồi cây Xạ đen tái sinh từ đoạn thân (sau 4 tuần nuôi cấy)

4.7. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của BA kết hợp với KIN đến khả năng nhân nhanh chồi cây Xạ đen tái sinh từ đoạn thân (sau 4 tuần nuôi cấy)

4.8. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của BA kết hợp với đến khả năng nhân nhanh chồi cây Xạ đen tái sinh từ đoạn thân (sau 4 tuần nuôi cấy)

4.9. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng một số Auxin đến khả năng ra rễ tạo cây hoàn chỉnh (sau 4 tuần nuôi cấy)

4.10. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến khả năng ra rễ của chồi Xạ đen in vitro (sau 4 tuần nuôi cấy)

4.11. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng IBA đến khả năng ra rễ của chồi Xạ đen in vitro (sau 4 tuần nuôi cấy)

4.12. Kết quả ảnh hưởng của một số loại giá thể đến khả năng sinh trưởng và phát triển của cây Xạ đen ở giai đoạn sau nuôi cấy mô ở ngoài vườn ươm (sau 4 tuần theo dõi)

5. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ

TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Giới thiệu về cây xạ đen

Cây xạ đen, có tên khoa học là Ehretia Asperula, là một loại cây thuốc quý mọc tự nhiên trong các khu rừng ở Việt Nam. Cây thường mọc ở độ cao từ 1000 đến 1500 mét, phân bố chủ yếu tại các tỉnh như Sơn La, Hà Nam, Quảng Ninh, và Hòa Bình. Theo y học cổ truyền, cây xạ đen có nhiều tác dụng dược lý, bao gồm giải độc, tiêu viêm, và hỗ trợ điều trị ung thư. Các hợp chất trong cây như Phylamin và Saponin Triterbenoid đã được nghiên cứu và chứng minh có tác dụng phòng chống ung thư. Tuy nhiên, do giá trị dược liệu cao, cây xạ đen đang bị khai thác quá mức, dẫn đến sự suy giảm quần thể tự nhiên. Do đó, việc nghiên cứu và phát triển kỹ thuật nhân giống cây xạ đen bằng phương pháp in vitro là rất cần thiết để bảo tồn nguồn gen quý hiếm này.

II. Kỹ thuật nhân giống cây xạ đen bằng phương pháp in vitro

Kỹ thuật nhân giống cây xạ đen bằng phương pháp in vitro được thực hiện nhằm tạo ra cây giống sạch bệnh và đảm bảo chất lượng. Quy trình này bao gồm các bước như khử trùng mẫu, nuôi cấy mô, và kích thích sinh trưởng. Nghiên cứu đã chỉ ra rằng việc sử dụng hóa chất như NaOCl và HgCl2 trong quá trình khử trùng có ảnh hưởng lớn đến khả năng tạo vật liệu vô trùng. Môi trường nuôi cấy như MS, ½MS, và WPM cũng đóng vai trò quan trọng trong việc tái sinh chồi. Các chất kích thích sinh trưởng như BA và NAA được sử dụng để tăng cường khả năng nhân chồi và ra rễ của cây xạ đen. Kết quả từ nghiên cứu cho thấy, việc áp dụng kỹ thuật này không chỉ giúp nhân giống hiệu quả mà còn bảo tồn nguồn gen cây xạ đen.

III. Ý nghĩa của nghiên cứu

Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống cây xạ đen bằng phương pháp in vitro không chỉ có ý nghĩa khoa học mà còn mang lại giá trị thực tiễn cao. Kết quả nghiên cứu sẽ góp phần xây dựng và hoàn thiện quy trình nhân giống cây xạ đen, từ đó cung cấp nguồn giống sạch bệnh, chất lượng cao cho thị trường. Điều này không chỉ giúp bảo tồn nguồn gen quý hiếm mà còn đáp ứng nhu cầu ngày càng tăng về sản phẩm từ cây xạ đen trong y học cổ truyền. Hơn nữa, việc phát triển kỹ thuật nhân giống hiện đại sẽ hỗ trợ nông dân trong việc trồng và phát triển cây xạ đen, góp phần xóa đói giảm nghèo và nâng cao thu nhập cho người dân địa phương.

IV. Kết luận

Từ những kết quả nghiên cứu, có thể khẳng định rằng kỹ thuật nhân giống cây xạ đen Ehretia Asperula bằng phương pháp in vitro là một giải pháp hiệu quả để bảo tồn và phát triển nguồn gen quý hiếm này. Việc áp dụng các phương pháp hiện đại trong nhân giống không chỉ giúp tăng cường sản lượng cây giống mà còn đảm bảo chất lượng và tính đồng nhất của sản phẩm. Nghiên cứu này mở ra hướng đi mới cho việc phát triển bền vững cây xạ đen, đồng thời góp phần vào việc bảo tồn và phát huy giá trị dược liệu của cây thuốc nam tại Việt Nam.

02/03/2025
Luận văn thạc sĩ nghiên cứu kỹ thuật nhân nhanh giống cây xạ đen ehretia asperula zoll mor tại trường đại học nông lâm thái nguyên bằng phương pháp in vitro

Trích đoạn nội dung tài liệu

Đặt vấn đề Cây Xạ đen (Ehretia asperula Zoll.) còn được gọi là cây Dót. Xạ đen thường mọc ở độ cao 1000 -1500 m, phân bố tập trung ở Trung Quốc, Myanmar, Thái Lan, Việt Nam. Ở nước ta, Xạ đen phân bố chủ yếu tại các tỉnh Sơn La, Hà Nam, Quảng Ninh, Quảng Bình, Hòa Bình, Vườn Quốc gia Cúc Phương, Vườn Quốc gia Ba Vì. mọc tự nhiên trong rừng.

Theo y học cổ truyền và nghiên cứu lâm sàng của Lê Thế Trung và cs cây Xạ đen có vị chát, tính hàn, có tác dụng trong giải độc, tiêu viêm, giảm tiết dịch trong xơ gan cổ chướng; điều trị mụn nhọt, ung thũng và ung thư; tăng cường sức đề kháng cho cơ thể, trong nghiên cứu còn khẳng định Xạ đen là một trong số ít vị thuốc nam có tác dụng hỗ trợ bệnh nhân ung thư [13]. Trong Xạ đen có một số hợp chất có tác dụng dược lý như: Phylamin, Fanavolnoid, Quinon có tác dụng phòng chống ung thư làm cho tế bào ung thư hóa lỏng dễ tiêu; Saponin Triterbenoid có tác dụng chống nhiễm khuẩn, hai hợp chất Phenolic: acid rosmarinic và methyl rosmarinat có tác dụng ức chế tế bào ung thư gan [13]. Các hợp chất chiết xuất từ cây Xạ đen kết hợp với các loài dược liệu khác như: Linh chi, Tam thất, Lược vàng, Thông đỏ, Hồng Sâm,. tạo nên các chế phẩm có tác dụng phòng chống ung thư như: Ancan, Kỳ tích, Trà Xạ đen- Tam thất.

Chính vì giá trị dược liệu của Xạ đen dẫn đến tình trạng khai thác quá mức, do đó số lượng quần thể trong tự nhiên giảm sút nghiêm trọng. Bên cạnh đó phương pháp nuôi trồng cây Xạ đen chủ yếu hiện nay là giâm hom cho số lượng cây giống còn hạn chế, mang nhiều bệnh từ cây mẹ [5]. Trong khi phương pháp nhân giống in vitro-phương pháp nhân giống hiện đại. Quy trình nhân giống đơn giản hệ số nhân giống cao và các nghiên cứu đều khẳng định không có sự thay đổi về hình thái và đặc điểm di truyền.

Xuất phát từ thực tế trên, tôi tiến hành đề tài: “Nghiên cứu kỹ thuật nhân nhanh giống cây Xạ đen (Ehretia asperula Zoll.) tại Trƣờng Đại học Nông lâm Thái Nguyên bằng phƣơng pháp in vitro”. Mục tiêu của đề tài - Nghiên cứu thành công kỹ thuật nhân nhanh giống cây Xạ đen (Ehretia asperula Zoll.) tại Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên bằng phương pháp in vitro. Yêu cầu của đề tài - Xác định được hóa chất và thời gian khử trùng mẫu Xạ đen để tạo vật liệu vô trùng tái sinh in vitro. - Xác định được ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến khả năng tái sinh chồi cây Xạ đen.

- Xác định được ảnh hưởng của một số chất kích thích sinh trưởng đến khả năng nhân chồi cây Xạ đen. - Xác định được ảnh hưởng của một số Auxin đến khả năng ra rễ tạo cây Xạ đen hoàn chỉnh. - Xác định được ảnh hưởng của một số giá thể đến khả năng sinh trưởng và phát triển của cây Xạ đen ở giai đoạn vườn ươm. Ý nghĩa của đề tài - Ý nghĩa khoa học Quá trình nghiên cứu sẽ đánh giá được ảnh hưởng của một số chất kích thích sinh trưởng đến khả năng tái sinh, nhân nhanh và ra rễ của cây Xạ đen; góp phần xây dựng và hoàn thiện kỹ thuật nhân giống cây Xạ đen bằng phương pháp in vitro.

-Ý nghĩa thực tiễn Kết quả nghiên cứu góp phần bổ sung cho kĩ thuật nhân giống Xạ đen, nhân nhanh cây giống sạch bệnh, chất lượng đảm bảo và bảo tồn nguồn gen quý hiếm. e 3 Phần 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2. Giới thiệu về cây Xạ đen 2. Nguồn gốc và phân loại Xạ đen là một loại cây thuốc nam quý mọc tự nhiên trong các khu rừng ở nước ta.

Xạ đen có tên khoa học là Ehretia asperula Zoll. & Mort thuộc [14]: Giới: Thực vật Ngành : Magnoliophyta Lớp: Magnoliopsida Bộ : Solanales Họ: Borraginaceae Chi: Ehretia Theo Hoàng Quỳnh Hoa (2010) dựa trên phân tích 111 số hiệu tiêu bản thực vật có nguồn gốc từ các phòng tiêu bản trong và ngoài nước và được thu hái từ thực địa đã phân loại và xác định tên khoa học của các loài trong chi Ehretia P. ở miền Bắc Việt Nam, bao gồm: E. Trong luận án tác giả Hoàng Quỳnh Hoa đã kiểm tra về mặt phân loại một loài mang tên “Xạ đen” mọc ở Hòa Bình và khẳng định tên khoa học là Ehretia asperula Zoll.

Trong tự nhiên có 2 loài cùng họ Vòi voi đó là Xạ đen và Xạ vàng, hai loài này có hình dáng gần giống nhau. Nếu không quan sát kỹ thì sẽ dễ bị nhầm lẫm. Về mặt y học hiện nay chỉ có cây Xạ đen là có tác dụng chữa bệnh còn Xạ vàng thì không. Một số đặc điểm khác nhau giữa 2 loài như sau: Xạ đen nhìn bề ngoài lá có 1 màu Tím Đen, còn Xạ vàng chỉ có 1 màu xanh.

Nếu để ý kỹ sẽ thấy lá của cây Xạ đen có màu đen tím, búp cây cũng màu tím. Còn hình cây Xạ vàng thì không. Nếu lấy lá của 2 loại cây này vò trên bàn tay Xạ đen sẽ cho ra 1 màu nhựa đen dính vào tay còn Xạ vàng thì không có. Nếu chặt thân hai loại cây này ra, thân loại cây nào sau khoảng 5 phút có chuyển sang xỉm đen thì đó mới là cây Xạ đen, còn không có màu xỉm đen thì đó là Xạ vàng [5].1: Cây Xạ đen Hình 2.2: Cây Xạ vàng 2.

Sự phân bố cây Xạ đen Ở nước ta, Xạ đen phân bố chủ yếu tại các tỉnh Hà Nam, Quảng Ninh, Ninh Bình, Hòa Bình, Phú Thọ, Vườn Quốc gia Ba Vì,. mọc tự nhiên trong rừng. Xạ đen là một loại cây thuốc nam mọc tự nhiên trong các khu rừng già của nước ta [5], [7]. Xạ đen là loài cây thích hợp khí hậu nhiệt đới gió mùa, có mùa đông lạnh.

Xạ đen sống được trong môi trường chịu bóng, nó có thể mọc tự nhiên dưới tán rừng tự nhiên, hoặc được gây trồng dưới tán rừng trồng, dưới tán cây ăn quả. Ngoài ra, nó cũng có thể sinh trưởng phát triển bình thường trong điều kiện chiếu sáng hoàn toàn [5]. Xạ đen có thể mọc được trên nhiều loại đất có nguồn gốc đá mẹ khác nhau (sa thạch, phiến thạch, trầm tích, mắc ma. Xạ đen có thể sinh trưởng và phát triển trên nhiều nhóm đất như: đất dốc tụ, đất feralit, đất đen, đất bạc màu.

Có thể chịu được điều kiện đất nghèo dinh dưỡng nhưng yêu cầu phải thoát nước tốt. Xạ đen phân bố cả trên núi đá và đồi đất, thường mọc ở các khe dưới chân núi đá nơi đất ẩm, xốp, thành phần cơ giới thịt trung bình. Đất hơi chua đến trung tính [5]. Đặc điểm hình thái cây Xạ đen 2.1 Thân, lá Xạ đen là cây thân gỗ mọc leo thành bụi, nhánh non tròn, không lông.

Dài trung bình 5-7m có khi tới hàng chục mét, thân già vỏ nâu đốm trắng, chồi và lá non có màu tím đỏ [5].3: Lá cây Xạ đen Lá đơn mọc cách, hình trái xoan dài 10-20 cm, rộng 5-10 cm, trên mặt lá xanh đậm, mặt dưới lá xanh nhạt, mép lá có răng cưa. Gân mạng lưới hình lông chim, có một gân chính ở giữa và 10-15 gân phụ. Chiều dài cuống lá biến động trong khoảng 0,8-1,4 cm [6].2 Hoa, quả Xạ đen có hoa, quả và hạt. Xạ đẹn ra hoa trong khoảng thời gian từ tháng 3 tới tháng 5 [5].

Hoa dạng hình xim, mọc cụm ở ngọn (đầu cành) hay nách lá. Tràng hoa màu trắng, dính liền nhau ở phía dưới, phân 5 cánh ở phía trên, dài 5-10 cm, đường kính 4-6 cm, có lông mịn. Lá bắc hình dải đến ngọn giáo, dài 3-10 mm. Hoa nhỏ có cuống dài 1,5-3 mm.

Đài hoa màu nâu, cao 1,5-2,5 mm, 5 thuỳ, có lông mịn. Tràng màu trắng, phần dưới dính liền thành hình phễu, dài 3,5-4 mm, họng rộng 5 mm, 5 thuỳ hình trứng hay tam giác, dài 2-2,5 mm. Nhị 5, chỉ nhị dài 3,5-4 mm, đính cách gốc tràng khoảng 1 mm. Bao phấn hình mũi tên, dài khoảng 1 mm.

Bầu gần hình cầu. Vòi nhuỵ dài 3-4 mm, xẻ nhánh dài khoảng 1 mm [5]. Cây ra quả vào khoảng thời gian từ tháng 8 đến tháng 9. Quả chín khoảng tháng 10 tới tháng 11 [5].

Quả non màu xanh, khi chín chuyển sang màu vàng. Quả nang hình trứng, dài cỡ 1cm, nổ thành 3 mảnh. Khi chín màu đỏ hay màu cam, đường kính 3-4 mm. Mỗi quả có 4 hạch, mỗi hạch chứa một hạt [5].4: Hoa và quả Xạ đen 2.

Giá trị của cây Xạ đen 2. Giá trị về kinh tế Xạ đen là cây thuốc nam quý mọc tự nhiên trong các khu rừng ở nước ta. Không chỉ có tác dụng y học, cây Xạ đen còn có giá trị về mặt kinh tế và đây cũng là cây trồng “xóa đói giảm nghèo” tăng thu nhập cho người dân ở một số huyện của tỉnh Hòa Bình. Thị trường tiêu thụ sản phẩm từ cây thuốc nam Xạ đen rất rộng lớn [5].

Xạ đen có hai cách chế biến: Xạ đen sau khi thu hái về sẽ được phơi khô, đối với thân, cành sẽ được chặt thành lát mỏng. Giá bán các sản phẩm từ thân, cành cây Xạ đen khô dao động trung bình từ 120.000 đồng/kg; còn các sản phẩm từ lá phơi khô dao động từ 150. Nấu Cao xạ đen: Cây xạ đen còn được kết hợp với cây bán chi liên, bạch hoa xà thiệt thảo để nấu thành cao xạ đen hay cao ung thư [5]. Hiện nay, ở một số địa phương của tỉnh Hòa Bình đang mở rộng phát triển diện tích vườn trang trại trồng cây Xạ đen.

Phát triển mở rộng diện tích trồng Xạ đen không những nhằm đáp ứng nhu cầu của thị trường cung cấp dược liệu quý mà còn giảm bớt nạn khai thác, chặt phá bừa bãi cây xạ đen trong nhân dân các địa phương, bảo tồn phát huy được nguồn gen cây thuốc nam quý [5]. Giá trị dược liệu Theo y học cổ truyền, cây Xạ đen có vị thơm mát, là vị thuốc đa công dụng có tác dụng hữu hiệu trong điều trị mụn nhọt, tiêu u thũng, tiêu viêm, giải độc, giảm tiết dịch, tăng cường sức đề kháng cho cơ thể [7], [13]. Trước đây, mế Hậu (cụ Bùi e 7 Thị Bẻn, dân tộc Mường, ở huyện Kim Bôi, Hoà Bình, là mẹ của lương y Đinh Thị Phiển) đã dùng cây Xạ đen để chữa bệnh vô sinh. Nay bà Phiển là người thừa kế bài thuốc Xạ đen của mế Hậu để chữa bệnh ung thư.

Do đó mà cây này còn có tên là cây ung thư. GS Lê Thế Trung (Viện Quân y 103) đã cho điều tra 14 cây thuốc Nam mà dân gian cho là có tác dụng trị bệnh ung thư.

Nội dung được bảo vệ bản quyền — Tải xuống đầy đủ

Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống cây xạ đen Ehretia Asperula bằng phương pháp in vitro tại Đại học Nông Lâm Thái Nguyên là một tài liệu chuyên sâu về việc ứng dụng công nghệ in vitro trong nhân giống cây xạ đen, một loại dược liệu quý. Nghiên cứu này không chỉ cung cấp quy trình chi tiết mà còn phân tích các yếu tố ảnh hưởng đến hiệu quả nhân giống, giúp tối ưu hóa quá trình sản xuất cây giống chất lượng cao. Đây là nguồn thông tin hữu ích cho các nhà nghiên cứu, sinh viên và những người quan tâm đến lĩnh vực nhân giống thực vật.

Để mở rộng kiến thức về các phương pháp nhân giống khác, bạn có thể tham khảo Luận văn nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất điều hòa sinh trưởng đến khả năng nhân giống trà hoa vàng bằng phương pháp giâm cành tại Yên Bái, Luận văn nghiên cứu ảnh hưởng của một số yếu tố nội tại đến khả năng hình thành cây hom dâm bụt Hibiscus Rosa Sinensis tại Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, và Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng phát triển và nhân giống một số dòng lan huệ lai bằng phương pháp chẻ củ tại Gia Lâm Hà Nội. Mỗi tài liệu này đều mang đến góc nhìn mới và phương pháp thực tiễn, giúp bạn hiểu sâu hơn về các kỹ thuật nhân giống hiện đại.