HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM ĐỖ VĂN ĐỨC NGHIÊN CỨU ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH CỦA CHÓ ĐƯỢC TIÊM VACXIN VÔ HOẠT CARE Chuyên ngành : Thú y Mã số : 60 64 01 01 Người hướng dẫn khoa học: PGS. Nguyễn Thị Lan NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2016 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là trung thực và chưa hề được sử dụng để bảo vệ một học vị nào. Tôi xin cam đoan rằng, mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn này và các thông tin trích dẫn trong luận văn đều đã được chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày tháng 11 năm 2016 Tác giả luận văn Đỗ Văn Đức i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đề tài này, ngoài sự cố gắng của bản thân, tôi còn nhận được rất nhiều sự quan tâm giúp đỡ của các thầy cô giáo, gia đình, bạn bè và đồng nghiệp.
Trước hết tôi xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc tới PGS. Nguyễn Thị Lan đã tận tình hướng dẫn giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài. Lời cảm ơn chân thành của tôi cũng xin gửi tới các thầy cô giáo trong bộ môn Bệnh Lý - Khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã giúp đỡ, tạo điều kiện trong suốt thời gian học tập cũng như trong thời gian thực hiện đề tài. Tôi xin được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình cùng bạn bè đồng nghiệp đã giúp đỡ động viên tôi trong suốt thời gian qua.
Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng 11 năm 2016 Tác giả luận văn Đỗ Văn Đức ii MỤC LỤC Lời cam đoan. ii Mục lục .iii Danh mục các chữ viết tắt. v Danh mục bảng. vi Danh mục hình.
vii Trích yếu luận văn …………………………………………………………………………ix Thesis Abstract. Tính cấp thiết của đề tài. Mục đích của đề tài. Tổng quan tài liệu.
Một số đặc điểm sinh lý của chó. Tần số hô hấp (số lần thở/phút). Tần số tim (lần/phút). Bệnh Care ở chó.
Khái niệm, lịch sử và địa dư bệnh Care ở chó. Dịch tễ học………………………………………………. Cơ chế sinh bệnh. Triệu chứng, bệnh tích.
Phòng và điều trị. Ứng dụng vacxin để phòng bệnh Care. Đối tƣợng, địa điểm, nội dung và phƣơng pháp nghiên cứu. Đối tượng nghiên cứu.
Đối tượng nghiên cứu. Địa điểm và thời gian nghiên cứu. Nội dung nghiên cứu. Nghiên cứu lựa chọn chó thí nghiệm cho tiêm vacxin vô hoạt Care.
Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch của chó được tiêm vacxin vô hoạt Care. Phương pháp nghiên cứu. Phương pháp tiêm vacxin vô hoạt CDV -VNUA-768 cho chó thí nghiệm. Quan sát, khám lâm sàng.
Phương pháp lấy máu để kiểm tra các chỉ tiêu. Xác định hàm lượng kháng thể có trong máu. Phương pháp RT – PCR. Phương pháp công cường độc.
Phương pháp xử lý số liệu. Kết quả và thảo luận. Kết quả nghiên cứu lựa chọn chó thí nghiệm cho tiêm vacxin vô hoạt Care. Hàm lượng kháng thể kháng CDV của chó thí nghiệm.
Kiểm tra sự có mặt của virus CDV và một số virus khác trong cơ thể chó trước khi tiến hành thí nghiệm. Kết quả nghiên cứu đáp ứng miễn dịch của chó được tiêm vacxin vô hoạt Care chủng CDV - VNUA - 05. Kết quả kiểm tra kháng thể kháng CDV của chó được tiêm vacxin vô hoạt Care. Kết quả theo dõi một số chỉ tiêu lâm sàng của chó được tiêm vacxin vô hoạt Care sau khi thử thách cường độc.
Kết qua theo dõi một số chỉ tiêu phi lâm sàng của chó được tiêm vacxin vô hoạt Care sau khi thử thách cường độc. Kết quả kiểm tra hàm lượng kháng thể. Kết quả kiểm tra sự bài thải virus care của chó sau khi thử thách cường độc. Kết luận và kiến nghị.
50 Một số hình ảnh trong quá trình nghiên cứu. 54 Tài liệu tham khảo. 55 iv DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Chữ đầy đủ ARN Acid Ribonucleic BC Bạch cầu CDV Canine Distemper Virus CD Canine Distemper CPE Cytopathogenic Effect cDNA complement Acid Deoxyribo Nucleic DNA Acid Deoxyribo Nucleic IgG Immunoglobulin G Lepto Leptospira RT Reverse Transcription RT - PCR Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction DMEM Dulbecco’s Modified Eagle Medium FCS Fetal calf serum mRNA Messenger Axít ribonucleic OD Độ hấp thụ quang v DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Chỉ tiêu sinh lý, sinh hóa máu trên chó khỏe. Hồ sơ 6 chó thí nghiệm.
Bảng bố trí các lô thí nghiệm và sử dụng chủng vacxin CDV. 21 vô hoạt cho từng chó thí nghiệm. Hàm lượng kháng thể kháng CDV của chó thí nghiệm. Kết quả xét nghiệm sự có mặt của virus Care.
26 và một số virus khác bằng phương pháp RT – PCR. Hàm lượng kháng thể của chó sau khi được tiêm. 27 vacxin vô hoạt Care. Thân nhiệt của chó thí nghiệm sau khi thử thách cường độc.
Tần số hô hấp của chó thí nghiệm sau khi. 32 thử thách cường độc. Tần số tim mạch của chó thí nghiệm sau khi. 35 thử thách cường độc.
Kết quả khảo sát chỉ tiêu bạch cầu và công thức bạch cầu. 38 của chó sau khi thử thách cường độc. Kết quả khảo sát một số chỉ tiêu hệ hồng cầu. 41 ở chó sau khi thử thách cường độc.
Triệu chứng lâm sàng của chó sau khi thử thách cường độc. Nghiên cứu sự bài thải virus Care trên chó được tiêm vacxin vô hoạt Care sau khi công cường độc. 49 vi DANH MỤC HÌNH Hình 4. Đồ thị biểu diễn biến động hàm lượng kháng thể sau khi tiêm vacxin vô hoạt Care của chó thí nghiệm và chó đối chứng.
Đồ thị thể hiện thân nhiệt của chó thí nghiệm. 30 sau khi thử thách cường độc. Đồ thị thể hiện tần số hô hấp của chó thí nghiệm. 33 sau khi thử thách cường độc.
Tần số tim mạch của chó thí nghiệm sau khi thử thách cường độc. Chó chảy dịch mũi xanh………………………………………………. Gan bàn chân sừng hóa………………………………………………. Nốt sài ở vùng da bụng………………………………………………………….
Mắt đầy dử. Chó ỉa chảy phân màu cà phê……………………………………………. Chó có triệu chứng thần kinh (Liệt 2 chân sau)………………………………. Đồ thị biểu diễn biến động hàm lượng kháng thể của chó thí nghiệm và chó đối chứng sau khi thử thách cường độc.
48 vii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Đỗ Văn Đức Tên luận văn: “Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch của chó được tiêm vacxin vô hoạt Care”. Ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01. Tên cơ sở đào tạo: Học Viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Đánh giá được khả năng kích thích sản sinh kháng thể kháng CDV của vacxin vô hoạt Care trên chó. Đánh giá được một số chỉ tiêu lâm sàng và phi lâm sàng của chó được tiêm vacxin vô hoạt Care sau công cường độc.
Từ đó góp phần cung cấp các thông tin khoa học trong việc sản xuất vacxin phòng bệnh care trên quy mô lớn tại Việt Nam. Phƣơng pháp nghiên cứu 6 chó Beagle 6 tuần tuổi được chia thành 2 lô (lô thí nghiệm và lô đối chứng). Sử dụng các phương pháp nghiên cứu: tiêm vacxin vô hoạt Care, quan sát, khám các triệu chứng lâm sàng, lấy máu để xét nghiệm, phương pháp ELISA, phương pháp RT – PCR, phương pháp công cường độc. Kết quả chính và kết luận Kháng thể xuất hiện trong máu chó sau 21 ngày tiêm vacxin và tiếp tục duy trì sau 69 ngày theo dõi.
Chỉ tiêu lâm sàng của chó được tiêm vacxin vô hoạt Care sau khi công cường độc có sự tăng nhẹ về thân nhiệt, sau đó ổn định trở lại sau 10 ngày. Tần số hô hấp và tim mạch, chỉ tiêu huyết học (hồng cầu, bạch cầu), các chỉ tiêu lâm sàng khác ở trạng thái sinh lý bình thường. Hàm lượng kháng thể kháng CDV tăng cao sau khi công cường độc ở chó được tiêm vacxin vô hoạt Care. Virus Care cường động không có khả năng gây bệnh cho chó được tiêm vacxin vô hoạt CDV-VNUA-05 và được bài thải nhanh hơn so với chó không được tiêm.
viii THESIS ABSTRACT Master candidate: Do Van Duc Thesis title: Studying the immune response of the vaccinated dogs inactivated Care. Major: veterinary Code: 60.01 Educational organization: Vietnam National University of Agriculture (VNUA) Research Objectives Assessing the ability to stimulate the production of antibodies to CDV of inactivated vaccine in dogs Care. T he rating was an indicator of clinical and non-clinical inactivated vaccinated dog Care after the toxic intensity. These results would help provide scientific information in the care preventive vaccine production on a large scale in Vietnam.
Materials and Methods 6 Beagle dogs 6 weeks old were divided into 2 treatments (experimental group and the control group). Using the methodology: inactivated vaccine Care, observation, examination of clinical symptoms, blood drawn for testing, ELISA, RT - PCR methods, methods of authoritarian power. Main findings and conclusions Antibodies appear in the blood of vaccinated dogs after 21 days and continued monitoring after 69 days. Clinical indicators of dogs were vaccinated inactivated virulent Care after a slight increase in body temperature, then stabilized again after 10 days.
The frequency of respiratory and cardiovascular, hematologic indicators (red blood cells, white blood cells) and other clinical indicators were in the normal physiological state. CDV antibody concentrations increased after the toxic intensity in dogs vaccinated inactivated Care. Momentum Care virus unable to cause disease in vaccinated dogs inactivated CDV-VNUA-05 and was eliminated faster than the non-vaccinated dogs. TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Từ nhiều năm nay, chó luôn là loài vật sống gần gũi, thân thiết và được con người quý mến.
Chó không chỉ được nuôi với mục đích giữ nhà mà còn với nhiều mục đích khác như làm trông giữ gia súc, săn thú, làm cảnh, thậm chí làm công tác nghiệp vụ quốc phòng an ninh,….Vai trò và giá trị của loài chó dần được khẳng định. Do đó, việc chăm sóc nuôi dưỡng và phòng chống các bệnh ở chó cũng ngày càng được quan tâm. Một trong những bệnh khá phổ biến, gây nguy hiểm cho loài chó, đặc biệt là chó con đó là bệnh Care (hay còn gọi là bệnh sài sốt). Bệnh Care ở chó là một bệnh truyền nhiễm cấp tính nguy hiểm thường xảy ra ở chó con, lây lan nhanh và tỷ lệ chết rất cao.
Nó được biết tới là căn bệnh nguy hiểm nhất trên chó trong nửa đầu thế kỷ 19. Nguyên nhân gây bệnh Care trên chó là do Canine distemper virus (CDV). CDV là một thành viên của giống Morbillivirut, thuộc họ Paramixoviridae. Bệnh Care với các triệu chứng như sốt, viêm cata ở niêm mạc, viêm đường hô hấp, viên phổi, nổi mụn ở da và các triệu chứng thần kinh.
Tất cả các loài chó đều cảm thụ bệnh Care, nhưng mẫn cảm hơn cả là loài chó Becgie, chó lai, chó cảnh, chó nội ít mẫn cảm hơn.