HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM HOÀNG THỊ THU HIỀN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM BỆNH LÝ CHỦ YẾU CỦA LỢN MẮC BỆNH DỊCH TẢ LỢN CHÂU PHI TẠI MỘT SỐ TỈNH PHÍA BẮC VIỆT NAM Ngành: Thú y Mã số: 8.01 Người hướng dẫn khoa học: GS. Nguyễn Thị Lan TS. Trương Quang Lâm NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2020 c LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng được ai công bố trong bất kì công trình nào khác.
Tôi xin cam đoan các thông tin trích dẫn trong luận văn đều đã được chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày tháng năm 2020 Tác giả luận văn Hoàng Thị Thu Hiền i c LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn, tôi đã nhận được sự hướng dẫn, chỉ bảo tận tình của các thầy giáo, sự giúp đỡ động viên của bạn bè, đồng nghiệp và gia đình. Tôi xin trân trọng cảm ơn đối với sự quan tâm, giúp đỡ đặc biệt của thầy cô giáo hướng dẫn khoa học – GS. Nguyễn Thị Lan và TS.
Trương Quang Lâm và các thầy, các cô trong Khoa Thú y đã tận tình hướng dẫn, giúp đỡ và tạo mọi điều kiện cho tôi hoàn thành luận văn này. Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám đốc Học Viện, Ban quản lý Đào Tạo và các bạn bè, đồng nghiệp đã hết lòng giúp đỡ tôi trong quá trình học tập, xây dựng và hoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán bộ công nhân viên tại Phòng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ sinh học Thú y, khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã tận tình giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện đề tài. Xin chân thành cảm ơn gia đình của tôi đã tạo mọi điều kiện và động viên tôi suốt trong quá trình học tập và hoàn thành luận văn này.
Hà Nội, ngày tháng năm 2020 Tác giả luận văn Hoàng Thị Thu Hiền ii c MỤC LỤC Lời cam đoan. ii Mục lục. iii Danh mục chữ viết tắt. v Danh mục bảng.
vi Danh mục hình. vii Trích yếu luận văn. viii Thesis abstract. Tính cấp thiết của đề tài.
Mục tiêu của đề tài. Phạm vi nghiên cứu. Những đóng góp mới của đề tài. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài.
Tổng quan tài liệu. Tình hình nghiên cứu bệnh dịch tả lợn Châu Phi. Tình hình nghiên cứu bệnh Dịch tả lợn Châu Phi trên thế giới và Việt Nam. Dịch tễ học.
Chẩn đoán bệnh Dịch tả lợn Châu Phi. Phòng bệnh. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu. Địa điểm nghiên cứu.
Thời gian nghiên cứu. Đối tượng nghiên cứu. Nội dung nghiên cứu. Nguyên liệu nghiên cứu.
Phương pháp nghiên cứu. Phương pháp quan sát, mô tả. Phương pháp mổ khám. Phương pháp lấy mẫu và xử lý mẫu.
Phương pháp Realtime PCR. Phương pháp RT-PCR. Phương pháp PCR. Phương pháp phân lập vi khuẩn.
Phương pháp làm tiêu bản vi thể. Phương pháp hóa mô miễn dịch. Phương pháp xử lý số liệu. KẾt quẢ và thảo luận.
Kết quả thu thập mẫu ca bệnh, sàng lọc và xác định một số triệu trứng lâm sàng của lợn mắc bệnh DTLCP. Kết quả thu thập ca bệnh phẩm và sàng lọc lợn mắc bệnh DTLCP đạt tiêu chuẩn nghiên cứu. Triệu chứng lâm sàng chủ yếu của lợn mắc bệnh DTLCP. Kết quả nghiên cứu bệnh tích đại thể và vi thể chủ yếu của lợn mắc bệnh DTLCP.
Bệnh tích đại thể chủ yếu của lợn mắc bệnh DTLCP. Bệnh tích vi thể chủ yếu của lợn mắc bệnh DTLCP. Kết quản nghiên cứu sự phân bố kháng nguyên virus dịch tả lợn châu phi bằng kỹ thuật hóa mô miễn dịch. Kết quả phát hiện kháng nguyên virus Dịch tả lợn Châu Phi bằng kỹ thuật hóa mô miễn dịch.
Kết luận và đề nghị. 62 Tài liệu tham khảo. 63 iv c DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Viết đầy đủ ASF African Swine Fever DTLCP Dịch tả lợn Châu Phi ASFV African Swine Fever Virus CSFV Classical Swine Fever Virus Ct Cycle threshold DNA Deoxyribonucleic acid ELISA Enzyme – Linked ImmunSorbent Assay IFT Indirect Fmmumnofluorescence Test HP Haemophilus parasuis APP Actinobacillus pleuropneumoniae PM Pasteurella multocida MH Mycoplasma hyopneumoniae PAM Porcine Alveolar Macrophages PBS Phosphate Buffer Saline PCR Polymerase Chain Reaction PCV2 Porcine Circo Virus type 2 PRRSV Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus RNA Ribonucleic acid v c DANH MỤC BẢNG Bảng 2. Sức đề kháng của virus Dịch tả lợn Châu Phi.
Khả năng tồn tại của virus DTLCP trong nhiều điều kiện môi trường. Trình tự mồi – mẫu dò. Thành phần phản ứng Realtime PCR. Chu kỳ nhiệt cho phản ứng Realtime PCR.
Thành phần phản ứng RT-PCR. Thành phần phản ứng PCR. Số lượng mẫu lợn nghi mắc bệnh DTLCP thu thập được. Kết quả chẩn đoán lợn mắc bệnh Dịch tả lợn Châu Phi bằng kỹ thuật Realtime PCR.
Kết quả kiểm tra đồng nhiễm với các tác nhân gây bệnh khác ở lợn mắc DTLCP. Một số triệu chứng lâm sàng chủ yếu của lợn mắc bệnh DTLCP. Bệnh tích đại thể chủ yếu của lợn mắc bệnh DTLCP. Bệnh tích vi thể ở một số cơ quan của lợn mắc bệnh DTLCP.
Kết quả phát hiện kháng nguyên virus DTLCP tại các mô lợn mắc bệnh bằng kỹ thuật hóa mô miễn dịch. Kết quả so sánh tương quan phân bố kháng nguyên virus DTLCP bằng kỹ thuật hóa mô miễn dịch và Realtime PCR. 60 vi c DANH MỤC HÌNH Hình 2. Tình hình DTLCP trên thế giới giai đoạn 2016-2018.
Tình hình DTLCP trên thế giới từ 01/01/2019-01/03/2019. Cấu trúc virus DTLCP. Sơ đồ truyền lây của virus DTLCP. Tóm tắt sơ đồ lây lan của bệnh Dịch tả lợn Châu Phi.
Mối nguy chính gây lây nhiễm bệnh DTLCP với lợn nuôi. Tỷ lệ chết của lợn mắc bệnh theo độc lực của các chủng virus DTLCP. Hình ảnh triệu chứng lâm sàng chủ yếu của lợn mắc bệnh DTLCP. Hình ảnh bệnh tích đại thể chủ yếu của lợn mắc bệnh DTLCP.
Hình ảnh bệnh tích đại thể chủ yếu của lợn mắc bệnh DTLCP (tiếp). Hình ảnh bệnh tích vi thể của lợn mắc bệnh DTLCP. Hình ảnh bệnh tích vi thể lợn mắc bệnh DTLCP (tiếp). Hình ảnh bệnh tích vi thể lợn mắc bệnh DTLCP (tiếp).
Hình ảnh các tế bào dương tính với kháng nguyên virus DTLCP (IHC400X). Đánh giá mức độ phân bố kháng nguyên virus DTLCP trên mẫu mô dương tính (IHC40X). Hình ảnh tế bào đại thực bào dương tính với kháng nguyên virus DTLCP ở một số cơ quan (IHC40X). 59 vii c TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Hoàng Thị Thu Hiền Tên luận văn: Nghiên cứu đặc điểm bệnh lý chủ yếu của lợn mắc bệnh Dịch tả lợn Châu Phi tại một số tỉnh phía Bắc Việt Nam.
Ngành: Thú y Mã số: 8.01 Tên cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu - Xác định được triệu chứng lâm sàng, bệnh tích đại thể, vi thể của lợn mắc bệnh Dịch tả lợn Châu Phi tại một số tỉnh ở miền Bắc Việt Nam. - Xác định được sự phân bố virus Dịch tả lợn Châu Phi tại các cơ quan nội tạng của lợn mắc bệnh Dịch tả lợn Châu Phi. Phương pháp nghiên cứu - Phương pháp quan sát, mô tả; - Phương pháp mổ khám, quan sát bệnh tích đại thể; - Phương pháp lấy mẫu và xử lý mẫu; - Phương pháp PCR, Realtime PCR và RT-PCR - Phương pháp làm tiêu bản vi thể - Phương pháp hóa mô miễn dịch; - Phương pháp xử lý số liệu. Kết quả chính và kết luận Các đặc điểm bệnh lý đặc trưng của lợn mắc bệnh DTLCP thể hiện thể cấp tính và á cấp tính: - Triệu chứng lâm sàng của lợn mắc bệnh DTLCP: mệt mỏi, ủ rũ, kém ăn (100%), sốt cao 40 - 42oC (100%), có triệu chứng hô hấp như ho, khó thở (73,33%), triệu chứng thần kinh (60,00%), xuất huyết ngoài da ở vùng tai, hông (53,33%), chết đột ngột (10,00%).
- Bệnh tích đại thể của lợn mắc bệnh DTLCP: hạch lympho xuất huyết, phù thũng, màu đỏ sẫm (100%), thận xuất huyết (100%), lách sậm màu sưng to, nhồi huyết (96,66%), màng não xuất huyết (60%), phổi xuất huyết (60,00%,), ruột xuất huyết (53,33%); viii c - Bệnh tích vi thể đặc trưng của lợn mắc DTLCP là xuất huyết tràn lan ở các cơ quan nội tạng, hoại tử ở nhu mô gan và tế bào lympho và hiện tượng teo, vỡ nhân ở tế bào lympho ở hạch và lách. - Kháng nguyên virus Dịch tả lợn Châu Phi được phát hiện ở hầu hết các cơ quan của lợn mắc bệnh. Trong đó kháng nguyên được phát hiện ở các tế bào đại thực bào, tế bào đơn nhân ở nhiều cơ quan khác nhau, tế bào gan và tế bào biểu mô ống thận. Sự phân bố kháng nguyên virus DTLCP tập trung nhiều ở các cơ quan như hạch và lách.
Các cơ quan phổi, thận và gan mức độ phân bố kháng nguyên đạt trung bình và kháng nguyên phân bố ít ở các cơ quan như não, tim, ruột và dạ dày Kết quả nghiên cứu sẽ cung cấp thông tin về triệu chứng lâm sàng, bệnh tích đại thể và vi thể chủ yếu của lợn mắc bệnh DTLCP là những thông tin quan trọng giúp cán bộ thú y hay người chăn nuôi thực hiện sàng lọc và tiếp tục khẳng định lợn bị mắc bệnh bằng các chẩn đoán phòng thí nghiệm. Xác định được sự phân bố kháng nguyên virus DTLCP tại các cơ quan nội tạng của lợn mắc bệnh có ý nghĩa vô cùng quan trọng cho việc lựa chọn mẫu bệnh phẩm phục vụ cho công tác phân lập virus để sản xuất vắc xin phòng và khống chế dịch bệnh nhằm giảm thiệt hại kinh tế cho người chăn nuôi lợn. ix c THESIS ABSTRACT Master candidate: Hoang Thi Thu Hien Thesis title: Research on the main pathological characteristics in swine infected with African swine fever in some provinces of the North of Vietnam. Major: Veterinary Code: 8.01 Educational organization: Vietnam National University of Agriculture (VNUA) Research Objectives - To identify clinical symptoms, gross and microscopic lesions of pigs infected with African swine fever in some provinces of the North of Vietnam.
- To determine the distribution of ASF viruses in the internal organs of pigs infected with African swine fever. Materials and Methods - Method of observation and description; - Method of observation of gross lesions; - Method of sampling and processing samples; - Method of determine of microscopic lesion - PCR, Realtime PCR and RT-PCR methods; - Immunohistochemistry; - Data analysis.