Luận văn xác định giá trị sử dụng của các phương pháp xét nghiệm vi sinh vật ứng dụng trong kiểm nghiệm thịt đông lạnh nhập khẩu

Luận văn phân tích giá trị sử dụng các phương pháp xét nghiệm vi sinh vật trong kiểm nghiệm thịt đông lạnh nhập khẩu, đảm bảo an toàn thực phẩm.

• Tác giả: Nguyễn Thị Hằng
• Người hướng dẫn: PGS. Phạm Hồng Ngân
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Thú y
• Đề tài: Giá Trị Sử Dụng Các Phương Pháp Xét Nghiệm Vi Sinh Vật Trong Kiểm Nghiệm Thịt Đông Lạnh Nhập Khẩu
• Loại tài liệu: luận văn
• Năm xuất bản: 2017
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• 1. MỤC LỤC
• 1.1. Lời cam đoan
• 1.2. Mục lục
• 1.3. Danh mục chữ viết tắt
• 1.4. Danh mục bảng
• 1.5. Danh mục hình
• 1.6. Trích yếu luận văn
• 1.7. Thesis abstract
• 1.8. Tính cấp thiết của đề tài
• 1.9. Mục tiêu nghiên cứu
• 1.10. Phạm vi nghiên cứu
• 1.11. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài
• 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 2.1. XÁC ĐỊNH GIÁ TRỊ SỬ DỤNG CỦA PHƯƠNG PHÁP
• 2.1.1. Một số khái niệm
• 2.1.2. Các thông số kỹ thuật cần xác định trong thẩm định phương pháp
• 3. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 3.1. Đối tượng, địa điểm nghiên cứu
• 3.1.1. Đối tượng nghiên cứu
• 3.1.2. Địa điểm nghiên cứu
• 3.2. Nội dung nghiên cứu
• 3.3. Xác định giá trị sử dụng của phương pháp. Ứng dụng kiểm nghiệm một số mẫu thịt đông lạnh nhập khẩu
• 3.3.1. Chủng chuẩn vi sinh vật
• 3.3.2. Các mẫu thịt đông lạnh
• 3.3.3. Các thiết bị trong phòng thí nghiệm
• 3.3.4. Môi trường chính nuôi cấy vi sinh vật
• 3.3.5. Phương pháp nghiên cứu
• 3.3.5.1. Phương pháp thẩm định tiêu chuẩn
• 3.3.5.2. Phương pháp kiểm nghiệm một số chỉ tiêu vi sinh vật trong thịt
• 3.3.5.3. Phương pháp phân tích số liệu
• 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 4.1. Kết quả thẩm định phương pháp
• 4.1.1. Kết quả đánh giá hiệu suất môi trường sử dụng trong thẩm định phương pháp
• 4.1.2. Kết quả kiểm tra nền mẫu đánh giá
• 4.1.3. Kết quả kiểm tra đặc tính sinh hóa, đặc tính nuôi cấy của chủng chuẩn
• 4.1.4. Kết quả xác định nồng độ vi khuẩn gây nhiễm
• 4.1.5. Kết quả thẩm định TCVN 9977:2013
• 4.1.6. Kết quả thẩm định TCVN 9975:2013
• 4.1.7. Kết quả xác nhận giá trị sử dụng của TCCS 03:2016/TYV2-CĐ
• 4.2. Kết quả kiểm nghiệm một số mẫu thịt đông lạnh nhập khẩu
• 4.2.1. Kết quả kiểm nghiệm mẫu thịt bò đông lạnh
• 4.2.2. Kết quả kiểm nghiệm mẫu đùi gà
• 4.2.3. Kết quả kiểm nghiệm trên mẫu thịt gà nguyên con
• 5. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng Quan Về Kiểm Nghiệm Vi Sinh Vật Thịt Đông Lạnh Nhập Khẩu

Trong bối cảnh hội nhập kinh tế quốc tế, việc kiểm nghiệm vi sinh vật thịt đông lạnh nhập khẩu trở nên vô cùng quan trọng. Việt Nam tham gia WTO và các hiệp định thương mại tự do (FTA) như TPP, tạo điều kiện cho hàng hóa từ nhiều quốc gia xâm nhập thị trường. Điều này đòi hỏi phải có các biện pháp kiểm soát chất lượng chặt chẽ để bảo vệ người tiêu dùng. Các phương pháp xét nghiệm vi sinh vật thực phẩm đóng vai trò then chốt trong việc đảm bảo an toàn thực phẩm, ngăn chặn các sản phẩm kém chất lượng, không an toàn xâm nhập vào thị trường Việt Nam. Việc phát triển và ứng dụng các phương pháp xét nghiệm mới, phù hợp với tiêu chuẩn quốc tế là một yêu cầu cấp thiết. Theo thông tư 54/2011/TT-BNNPTNT quy định các yêu cầu về năng lực cho các phòng thử nghiệm có khả năng phân tích các phép thử thuộc lĩnh vực sinh học, hóa học phục vụ cho công tác quản lý nhà nước về chất lượng an toàn thực phẩm.

1.1. Tầm quan trọng của an toàn thực phẩm thịt đông lạnh

Thịt đông lạnh nhập khẩu tiềm ẩn nhiều nguy cơ về các loại vi sinh vật gây bệnh trong thịt đông lạnh. Việc kiểm soát tiêu chuẩn vi sinh vật thịt đông lạnh nhập khẩu là yếu tố then chốt để bảo vệ sức khỏe cộng đồng. Các phương pháp kiểm tra chất lượng thịt đông lạnh cần đảm bảo phát hiện chính xác và kịp thời các tác nhân gây bệnh, từ đó ngăn chặn nguy cơ ngộ độc thực phẩm và các bệnh truyền nhiễm.

1.2. Vai trò của phòng thí nghiệm kiểm nghiệm vi sinh vật thực phẩm

Các phòng thí nghiệm kiểm nghiệm vi sinh vật thực phẩm đóng vai trò trung tâm trong việc thực hiện các quy trình kiểm nghiệm thịt đông lạnh. Việc lựa chọn phương pháp phân tích phù hợp, đảm bảo chất lượng và độ tin cậy của kết quả là vô cùng quan trọng. Các phòng thí nghiệm cần tuân thủ các tiêu chuẩn quốc gia và quốc tế như ISO 17025 để đảm bảo tính chính xác và khách quan của kết quả xét nghiệm.

II. Thách Thức Trong Kiểm Nghiệm Vi Sinh Vật Thịt Đông Lạnh Nhập Khẩu

Việc kiểm nghiệm vi sinh vật thịt đông lạnh nhập khẩu đối mặt với nhiều thách thức. Sự đa dạng của các loại vi sinh vật, sự phức tạp của quy trình kiểm nghiệm thịt đông lạnh, và yêu cầu về thời gian kiểm nghiệm nhanh chóng đặt ra áp lực lớn cho các phòng thí nghiệm. Bên cạnh đó, việc đảm bảo tính chính xác và độ tin cậy của kết quả xét nghiệm, đồng thời giảm thiểu chi phí cũng là một bài toán khó. Theo ISO 17052 các phương pháp trước khi đưa vào sử dụng cần phải được thẩm định (ISO 17025:2005). Tùy thuộc vào điều kiện vào điều kiện phòng thí nghiệm, mục đích, tính chất, đặc điểm cũng như lĩnh vực hoạt động, nghiên cứu mà lựa chọn các kiểu thẩm định phù hợp.

2.1. Rủi ro từ vi sinh vật chỉ thị trong thịt đông lạnh

Vi sinh vật chỉ thị trong thịt đông lạnh có thể là dấu hiệu của quá trình bảo quản không đúng cách hoặc ô nhiễm trong quá trình sản xuất. Việc phát hiện và định lượng các vi sinh vật này giúp đánh giá mức độ an toàn của sản phẩm. Các phương pháp phân tích rủi ro vi sinh vật trong thịt đông lạnh cần được áp dụng để xác định các điểm kiểm soát tới hạn (HACCP) và đưa ra các biện pháp phòng ngừa.

2.2. Yêu cầu về phương pháp phát hiện vi sinh vật trong thực phẩm

Các phương pháp phát hiện vi sinh vật trong thực phẩm cần có độ nhạy và độ đặc hiệu cao để đảm bảo phát hiện chính xác các tác nhân gây bệnh. Các phương pháp này cũng cần có khả năng định lượng vi sinh vật để đánh giá mức độ ô nhiễm. Việc áp dụng các phương pháp định lượng vi sinh vật trong thịt đông lạnh giúp đưa ra quyết định về việc chấp nhận hay loại bỏ lô hàng.

2.3. Áp lực về thời gian và chi phí xét nghiệm vi sinh vật thịt đông lạnh

Thời gian xét nghiệm vi sinh vật thịt đông lạnh cần được rút ngắn để đảm bảo quá trình thông quan hàng hóa diễn ra nhanh chóng. Đồng thời, chi phí xét nghiệm vi sinh vật thịt đông lạnh cần được tối ưu hóa để giảm gánh nặng cho doanh nghiệp. Việc áp dụng các phương pháp xét nghiệm nhanh và hiệu quả giúp giải quyết bài toán này.

III. Phương Pháp Xét Nghiệm Vi Sinh Vật Thịt Đông Lạnh Hướng Dẫn Chi Tiết

Có nhiều phương pháp xét nghiệm vi sinh vật thịt đông lạnh được sử dụng hiện nay, bao gồm các phương pháp truyền thống và các phương pháp hiện đại. Các phương pháp truyền thống thường dựa trên việc nuôi cấy vi sinh vật trên môi trường đặc hiệu, trong khi các phương pháp hiện đại sử dụng các kỹ thuật sinh học phân tử để phát hiện và định danh vi sinh vật. Việc lựa chọn phương pháp phù hợp phụ thuộc vào mục đích xét nghiệm, loại vi sinh vật cần phát hiện, và điều kiện của phòng thí nghiệm. Đối với các phương pháp mới lần đầu áp dụng, các phương pháp cơ sở do phòng thí nghiệm xây dựng cần phải tuân thủ việc đánh giá, thẩm định phương pháp thực hiện tại phòng thí nghiệm đồng thời phải nhận được sự công nhận từ các tổ chức đánh giá công nhận trước khi ứng dụng vào công tác xét nghiệm.

3.1. Phương pháp định lượng tổng số VSVHK Vi sinh vật hiếu khí

Phương pháp định lượng tổng số VSVHK là một trong những phương pháp cơ bản để đánh giá chất lượng thịt đông lạnh. Phương pháp này giúp xác định tổng số lượng vi sinh vật có khả năng phát triển trong điều kiện hiếu khí. Kết quả xét nghiệm giúp đánh giá mức độ ô nhiễm và thời gian bảo quản của sản phẩm. Theo TCVN 9977:2013, phương pháp này được thực hiện bằng cách nuôi cấy mẫu trên môi trường thạch và đếm số lượng khuẩn lạc.

3.2. Xét nghiệm Salmonella thịt đông lạnh Quy trình và đánh giá

Xét nghiệm Salmonella thịt đông lạnh là một xét nghiệm quan trọng để phát hiện vi khuẩn Salmonella, một trong những nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm phổ biến. Phương pháp này thường bao gồm các bước: làm giàu mẫu, phân lập vi khuẩn trên môi trường chọn lọc, và xác định bằng các xét nghiệm sinh hóa hoặc sinh học phân tử. Kết quả xét nghiệm giúp xác định xem sản phẩm có an toàn để tiêu thụ hay không.

3.3. Xét nghiệm E. coli thịt đông lạnh Phát hiện và phòng ngừa

Xét nghiệm E. coli thịt đông lạnh giúp phát hiện vi khuẩn E. coli, một số chủng có thể gây bệnh tiêu chảy và các vấn đề sức khỏe nghiêm trọng khác. Phương pháp này thường bao gồm việc nuôi cấy mẫu trên môi trường đặc hiệu cho E. coli và xác định bằng các xét nghiệm sinh hóa. Việc kiểm soát E. coli trong thịt đông lạnh là rất quan trọng để đảm bảo an toàn thực phẩm.

IV. Ứng Dụng Thực Tế Đánh Giá Kết Quả Xét Nghiệm Vi Sinh Vật Thịt

Việc đánh giá kết quả xét nghiệm vi sinh vật thịt đông lạnh là bước quan trọng để đưa ra quyết định về chất lượng và an toàn của sản phẩm. Kết quả xét nghiệm cần được so sánh với các quy định về kiểm nghiệm vi sinh vật thịt nhập khẩu và các tiêu chuẩn quốc gia, quốc tế. Nếu kết quả vượt quá giới hạn cho phép, sản phẩm cần được xử lý hoặc loại bỏ để đảm bảo an toàn cho người tiêu dùng. Năm 2016, phòng thí nghiệm vi sinh thực phẩm thuộc Trạm chẩn đoán xét nghiệm – Cơ quan thú y Vùng 2 xây dựng và ứng dụng mở rộng thêm nhiều phương pháp xét nghiệm mới vào công tác chẩn đoán cũng như công tác kiểm nghiệm thực phẩm.

4.1. Phân tích kết quả định lượng vi sinh vật trong thịt đông lạnh

Kết quả định lượng vi sinh vật trong thịt đông lạnh cần được phân tích kỹ lưỡng để đánh giá mức độ ô nhiễm. Các yếu tố như số lượng vi sinh vật, loại vi sinh vật, và nguồn gốc của vi sinh vật cần được xem xét. Việc phân tích kết quả giúp xác định nguyên nhân gây ô nhiễm và đưa ra các biện pháp khắc phục.

4.2. Đánh giá kết quả xét nghiệm Salmonella và E. coli

Kết quả xét nghiệm Salmonella và E. coli cần được đánh giá cẩn thận để xác định nguy cơ gây bệnh. Nếu phát hiện Salmonella hoặc E. coli gây bệnh, sản phẩm cần được loại bỏ ngay lập tức. Việc đánh giá kết quả cần dựa trên các tiêu chuẩn quốc gia và quốc tế về an toàn thực phẩm.

4.3. So sánh kết quả với tiêu chuẩn vi sinh vật thịt đông lạnh

Kết quả xét nghiệm cần được so sánh với các tiêu chuẩn vi sinh vật thịt đông lạnh để đánh giá xem sản phẩm có đáp ứng yêu cầu hay không. Các tiêu chuẩn này thường quy định giới hạn tối đa cho phép của các loại vi sinh vật trong thịt. Việc so sánh kết quả giúp đưa ra quyết định về việc chấp nhận hay loại bỏ lô hàng.

V. Kết Luận và Tương Lai Của Kiểm Nghiệm Vi Sinh Vật Thịt

Việc kiểm nghiệm vi sinh vật thịt đông lạnh nhập khẩu đóng vai trò quan trọng trong việc bảo vệ sức khỏe cộng đồng và đảm bảo an toàn thực phẩm. Các phương pháp xét nghiệm cần được liên tục cải tiến và cập nhật để đáp ứng yêu cầu ngày càng cao của thị trường. Việc áp dụng các công nghệ mới và các phương pháp xét nghiệm nhanh giúp nâng cao hiệu quả và giảm chi phí kiểm nghiệm. Với lượng mẫu thực phẩm nhập khẩu ngày càng nhiều, vấn đề đảm bảo an toàn vệ sinh thực phẩm đặt ra yêu cầu, thách thức trong công tác kiểm dịch. Trước sức ép phải đảm bảo thời gian trong công tác kiểm dịch, thời gian trả lời kết quả cho khách hàng, việc ưu tiên phát triển, ứng dụng các phương pháp mới với tiêu chí: Đảm bảo độ chính xác, tin cậy của kết quả thử nghiệm, rút ngắn được thời gian xét nghiệm, góp phần bảo vệ môi trường và đặc biệt là giảm chi phí cho các doanh nghiệp được đặt lên hàng đầu.

5.1. Tóm tắt giá trị sử dụng xét nghiệm vi sinh

Giá trị sử dụng xét nghiệm vi sinh trong kiểm nghiệm thịt đông lạnh là không thể phủ nhận. Các xét nghiệm này giúp phát hiện và định lượng các vi sinh vật gây bệnh, đánh giá mức độ ô nhiễm, và đảm bảo an toàn cho người tiêu dùng. Việc áp dụng các phương pháp xét nghiệm phù hợp giúp đưa ra quyết định về việc chấp nhận hay loại bỏ lô hàng.

5.2. Xu hướng phát triển phương pháp xét nghiệm vi sinh vật thực phẩm

Xu hướng phát triển phương pháp xét nghiệm vi sinh vật thực phẩm tập trung vào việc phát triển các phương pháp nhanh, chính xác, và hiệu quả. Các công nghệ mới như PCR, ELISA, và các cảm biến sinh học đang được ứng dụng rộng rãi trong lĩnh vực này. Việc áp dụng các công nghệ này giúp rút ngắn thời gian xét nghiệm và nâng cao độ tin cậy của kết quả.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Trong bối cảnh hội nhập kinh tế quốc tế sâu rộng thông qua các hiệp định thương mại tự do thế hệ mới, lượng thịt và sản phẩm thịt đông lạnh nhập khẩu vào thị trường Việt Nam ghi nhận sự gia tăng nhanh chóng. Thực trạng này đặt ra yêu cầu cấp thiết về việc kiểm soát an toàn vệ sinh thực phẩm nhằm bảo vệ sức khỏe cộng đồng và thiết lập hàng rào kỹ thuật hợp pháp. Theo các báo cáo dịch tễ học thực phẩm, vi khuẩn Salmonella là nguyên nhân gây ra khoảng 49% các vụ ngộ độc thực phẩm do thịt trên toàn cầu, trong khi Escherichia coli (E. coli) là chỉ số chỉ điểm vệ sinh quan trọng phản ánh tình trạng nhiễm bẩn phân và điều kiện giết mổ, bảo quản.

Vấn đề đặt ra là các phương pháp xét nghiệm vi sinh truyền thống theo Tiêu chuẩn Việt Nam (TCVN) và ISO thường đòi hỏi quy trình phức tạp kéo dài từ 72 đến 96 giờ, gây ách tắc hàng hóa tại các cửa khẩu và làm tăng đáng kể chi phí lưu kho bãi cho các doanh nghiệp nhập khẩu. Đề tài của tác giả Nguyễn Thị Hằng dưới sự hướng dẫn khoa học của PGS. TS. Phạm Hồng Ngân tại Học viện Nông nghiệp Việt Nam được thực hiện nhằm mục tiêu xác định giá trị sử dụng (thẩm định phương pháp) của các phương pháp xét nghiệm vi sinh vật nhanh và ứng dụng vào thực tiễn kiểm nghiệm thịt đông lạnh nhập khẩu.

Phạm vi nghiên cứu được triển khai từ tháng 8/2016 đến tháng 6/2017 tại Phòng Vi sinh thực phẩm thuộc Trạm Chẩn đoán xét nghiệm bệnh động vật - Cơ quan Thú y vùng 2. Đề tài mang ý nghĩa khoa học và thực tiễn sâu sắc: cung cấp bằng chứng khách quan phục vụ công tác công nhận phòng thử nghiệm theo chuẩn quốc tế ISO/IEC 17025, đồng thời giúp rút ngắn 35% đến 50% thời gian phân tích mẫu kiểm dịch tại cửa khẩu cảng biển.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu được xây dựng dựa trên khung pháp lý và tiêu chuẩn kỹ thuật nghiêm ngặt, bao gồm: Luật An toàn thực phẩm số 55/2010/QH12, Nghị định 132/2008/NĐ-CP, Thông tư 54/2011/TT-BNNPTNT và Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia QCVN 8-3:2012/BYT quy định giới hạn ô nhiễm vi sinh vật trong thực phẩm. Quy trình thẩm định phương pháp tuân thủ chặt chẽ các hướng dẫn quốc tế từ ISO 16140:2003, AOAC International, EURACHEM và TCVN 9332:2012.

Khung lý thuyết vận dụng các khái niệm kỹ thuật trọng tâm:

• Thẩm định phương pháp (Method Validation): Quá trình thực nghiệm chứng minh phương pháp phân tích đáp ứng đầy đủ các yêu cầu kỹ thuật và có độ tin cậy tương đương hoặc vượt trội so với phương pháp tham chiếu.
• Độ lặp lại ($S_r$) và Độ tái lặp ($S_R$): Các đại lượng đo lường sự phân tán của kết quả thử nghiệm trong điều kiện cố định hoặc thay đổi; giá trị chấp nhận theo tiêu chuẩn kiểm nghiệm vi sinh tương ứng là $S_r < 0,15$ và $S_R \le 0,25$.
• Độ không đảm bảo đo mở rộng ($U_e$): Khoảng giá trị chứa phần lớn phân bố của đại lượng đo với hệ số phủ $k = 2$ (độ tin cậy xấp xỉ 95%), yêu cầu kỹ thuật đối với phép thử vi sinh vật định lượng là $U_e < 0,5$.
• Giới hạn phát hiện (LOD), Độ nhạy ($S_e$), Độ đặc hiệu ($S_p$) và Độ chính xác ($A_c$): Các chỉ số đánh giá hiệu năng của phương pháp định tính vi sinh vật gây bệnh.

Phương pháp nghiên cứu

Nguồn dữ liệu và cỡ mẫu nghiên cứu bao gồm 865 mẫu thịt đông lạnh nhập khẩu thuộc 173 lô hàng thương mại thực tế, gồm: 470 mẫu thịt bò (94 lô), 320 mẫu đùi gà (64 lô) và 75 mẫu thịt gà nguyên con (15 lô). Phương pháp chọn mẫu áp dụng theo kế hoạch lấy mẫu ngẫu nhiên phân tầng $n = 5$ quy định tại QCVN 8-3:2012/BYT.

Thiết kế thực nghiệm thẩm định sử dụng các chủng chuẩn vi sinh vật từ hệ thống ATCC Hoa Kỳ: Salmonella Enteritidis ATCC 49223, Escherichia coli ATCC 11303, Vibrio parahaemolyticus ATCC 17802 và Staphylococcus aureus ATCC 29213. Đặc tính sinh hóa của các chủng chuẩn được kiểm tra lại trên hệ thống tự động Vitek 2 Compact, cho độ tương đồng sinh học đạt từ 98% đến 99%.

Lý do lựa chọn phương pháp phân tích:

• Định lượng tổng số vi sinh vật hiếu khí (TSVSVHK): Đánh giá phương pháp đĩa đông khô pha sẵn 3M Petrifilm Aerobic Count Plate (TCVN 9977:2013) thay thế phương pháp đổ đĩa thạch Plate Count Agar truyền thống (TCVN 4884-1:2015).
• Định lượng E. coli: Đánh giá đĩa đông khô 3M Petrifilm E. coli/Coliform Count Plate (TCVN 9975:2013) thay thế phương pháp đổ đĩa thạch TBX (TCVN 7924-2:2008).
• Phát hiện Salmonella: Đánh giá môi trường chọn lọc sinh màu Iris Salmonella Agar (TCCS 03:2016/TYV2-CĐ) thay thế quy trình nuôi cấy truyền thống 4 bước (TCVN 4829:2005 / ISO 6579:2002).

Việc lựa chọn các phương pháp thay thế này giúp loại bỏ triệt để hiện tượng sốc nhiệt của vi sinh vật khi đổ thạch nóng chảy ở nhiệt độ khoảng 45 độ C, đồng thời tối ưu hóa thao tác chuẩn bị môi trường và giảm thiểu tối đa sai số do người phân tích.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

Thứ nhất, đánh giá hiệu suất môi trường nuôi cấy ($PR$): Môi trường đĩa đếm đông khô 3M Petrifilm Aerobic đạt $PR = 0,95$; đĩa 3M Petrifilm E. coli đạt $PR = 0,94$ (vượt xa chuẩn quy định $PR > 0,7$ theo TCVN 8128:2015); môi trường Iris Salmonella agar đạt $PR = 0,89$ (vượt chuẩn $PR > 0,5$).

Thứ hai, kết quả thẩm định phương pháp định lượng:

• Phương pháp TCVN 9977:2013 định lượng TSVSVHK: Trên nền mẫu thịt bò, độ lặp lại $S_r = 0,047$ và độ tái lặp $S_R = 0,038$; trên nền mẫu thịt gà, $S_r = 0,045$ và $S_R = 0,033$. Độ không đảm bảo đo mở rộng $U_e = 0,126$. Các giá trị này đều nhỏ hơn so với phương pháp tham chiếu TCVN 4884-1:2015 ($S_r = 0,049 - 0,058$; $S_R = 0,043 - 0,056$).
• Phương pháp TCVN 9975:2013 định lượng E. coli: Đạt độ lặp lại $S_r = 0,029 - 0,033$, độ tái lặp $S_R = 0,032 - 0,039$ và độ không đảm bảo đo mở rộng $U_e = 0,098$, hoàn toàn đáp ứng các tiêu chuẩn kỹ thuật nghiêm ngặt.

Thứ ba, kết quả thẩm định phương pháp định tính Salmonella (TCCS 03:2016/TYV2-CĐ):

• Giới hạn phát hiện $LOD_{50}$ đạt mức 2 CFU/25g mẫu thịt.
• Độ nhạy ($S_e$) đạt 95,56%, độ đặc hiệu ($S_p$) đạt 100%, độ chính xác ($A_c$) đạt 97,33% và hệ số tương đồng Kappa ($K$) cho thấy sự phù hợp hoàn hảo với phương pháp tham chiếu TCVN 4829:2005.

Thứ tư, kết quả kiểm nghiệm thực tế trên 865 mẫu thịt đông lạnh nhập khẩu: 100% số mẫu phân tích đều đạt tiêu chuẩn vệ sinh an toàn thực phẩm theo QCVN 8-3:2012/BYT. Tỷ lệ nhiễm Salmonella và E. coli là 0%. Tổng số vi sinh vật hiếu khí trên các mẫu thịt bò dao động ở mức thấp (trung bình 65 CFU/g) và thịt gà xay đạt trung bình $7,2 \times 10^2$ CFU/g, hoàn toàn nằm trong giới hạn cho phép (dưới $5 \times 10^5$ CFU/g).

Thảo luận kết quả

Sự chênh lệch về độ lặp lại và độ tái lặp giữa phương pháp Petrifilm và phương pháp đổ đĩa truyền thống cho thấy phương pháp đông khô pha sẵn tạo ra kết quả có độ chụm cao hơn. Nguyên nhân chính là do quy trình Petrifilm chỉ cần cấy 1 ml dịch đồng nhất mẫu trực tiếp lên đĩa ở nhiệt độ phòng, loại bỏ hoàn toàn các tác động nhiệt tiêu cực lên tế bào vi khuẩn vốn dễ xảy ra khi đổ thạch nóng chảy ở 45 độ C.

Đối với chỉ tiêu Salmonella, môi trường Iris Salmonella agar tích hợp các yếu tố ức chế chọn lọc mạnh và hệ chất chỉ thị sinh màu đặc hiệu. Điều này cho phép phát hiện chính xác cả các biến chủng huyết thanh bất động (như Salmonella Gallinarum) hoặc các chủng có hoạt tính enzyme yếu. Quy trình mới rút ngắn số bước trung gian từ 4 bước xuống còn 2 bước, giúp giảm thời gian phân tích từ 72-96 giờ xuống chỉ còn 37 giờ (rút ngắn khoảng 50% đến 60% thời gian).

Dữ liệu phân tích thống kê so sánh giữa hai phương pháp có thể được trình bày thông qua biểu đồ phân tán phương sai và bảng tương liên chéo. Giá trị kiểm định thống kê $P\text{-value} = 0,3937$ trên nền mẫu thịt gà khẳng định không có sự sai khác mang ý nghĩa tiêu cực giữa hai phương pháp, chứng minh tính tương đương và khả năng thay thế hoàn toàn của phương pháp mới.

Đề xuất và khuyến nghị

1. Chuẩn hóa và mở rộng áp dụng phương pháp nhanh: Cục Thú y và các cơ quan kiểm dịch động vật cần chính thức ban hành văn bản cho phép áp dụng phương pháp Petrifilm (TCVN 9977:2013, TCVN 9975:2013) và môi trường sinh màu Iris Salmonella (TCCS 03:2016/TYV2-CĐ) tại tất cả các trạm kiểm nghiệm thú y vùng từ Vùng 1 đến Vùng 7. Mục tiêu là rút ngắn thời gian trả kết quả kiểm dịch từ 72-96 giờ xuống còn 37-48 giờ trong giai đoạn tới.
2. Nâng cấp trang thiết bị và kiểm soát chất lượng chủng chuẩn: Các phòng thử nghiệm vi sinh cần đầu tư đồng bộ hệ thống định danh tự động (như Vitek 2 Compact) và duy trì lưu trữ chủng chuẩn ATCC trong ống Microbank ở nhiệt độ âm 20 độ C. Thực hiện kiểm tra định kỳ đặc tính sinh hóa 6 tháng một lần nhằm bảo đảm độ thuần khiết và độ tin cậy sinh học đạt trên 99%.
3. Tăng cường giám sát nguy cơ tại cửa khẩu: Thiết lập cơ chế lấy mẫu ngẫu nhiên có trọng điểm, duy trì kiểm tra định kỳ tối thiểu 5 mẫu trên mỗi lô hàng thịt đông lạnh nhập khẩu theo đúng kế hoạch $n = 5$ của QCVN 8-3:2012/BYT, đặc biệt đối với các phụ phẩm thịt gia cầm và thịt xay có nguy cơ nhiễm khuẩn cao.
4. Số hóa liên thông quy trình kiểm dịch và hải quan: Xây dựng hệ thống dữ liệu điện tử liên thông kết quả xét nghiệm vi sinh giữa Cơ quan Thú y và cơ quan Hải quan tại các cảng biển lớn. Giải pháp này giúp giảm thời gian thông quan xuống dưới 48 giờ và tiết kiệm ước tính trên 30% chi phí lưu kho bãi, lưu container cho các doanh nghiệp xuất nhập khẩu thực phẩm.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

• Cán bộ phân tích và quản lý chất lượng phòng kiểm nghiệm (QA/QC): Cung cấp tài liệu hướng dẫn chi tiết về các bước thực nghiệm, cách tính toán độ lặp lại ($S_r$), độ tái lặp ($S_R$), độ không đảm bảo đo ($U_e$) và giới hạn phát hiện ($LOD$) phục vụ việc xây dựng hồ sơ mở rộng phạm vi công nhận phòng thử nghiệm theo tiêu chuẩn quốc tế ISO/IEC 17025.
• Doanh nghiệp xuất nhập khẩu và kinh doanh thịt đông lạnh: Giúp hiểu rõ các chỉ tiêu kỹ thuật vi sinh quy định tại QCVN 8-3:2012/BYT, từ đó chủ động xây dựng quy trình kiểm soát chuỗi cung ứng lạnh và tối ưu hóa kế hoạch thông quan hàng hóa tại cảng biển.
• Cơ quan quản lý nhà nước và thanh tra thú y, an toàn thực phẩm: Cung cấp cơ sở khoa học xác đáng để xây dựng và hoàn thiện các quy chuẩn kỹ thuật quốc gia, thiết lập hàng rào kỹ thuật kiểm dịch hợp pháp bảo vệ nền chăn nuôi trong nước và sức khỏe người tiêu dùng.
• Giảng viên, học viên cao học và sinh viên ngành Thú y, Công nghệ thực phẩm, Công nghệ sinh học: Nguồn tài liệu tham khảo học thuật giá trị về thiết kế thí nghiệm vi sinh vật, phương pháp gây nhiễm thực nghiệm trên nền mẫu thực phẩm và kỹ thuật xử lý số liệu thống kê sinh học.

Câu hỏi thường gặp

Tại sao phương pháp đĩa đếm Petrifilm lại có độ lặp lại và độ tái lặp tốt hơn phương pháp đổ đĩa truyền thống?
Phương pháp đĩa đông khô Petrifilm (TCVN 9977:2013) sử dụng môi trường pha sẵn với công thức chuẩn hóa, cấy mẫu trực tiếp ở nhiệt độ phòng. Quy trình này loại bỏ hoàn toàn nguy cơ sốc nhiệt gây chết vi sinh vật khi rót môi trường thạch nóng chảy ở 45 độ C như phương pháp PCA truyền thống, giúp kết quả đo có độ lặp lại $S_r = 0,045 - 0,047$ và độ tái lặp $S_R = 0,033 - 0,038$, đạt độ chụm cao hơn rõ rệt.

Giới hạn phát hiện LOD = 2 CFU/25g của phương pháp Iris Salmonella có ý nghĩa như thế nào?
Giới hạn phát hiện 2 CFU/25g chứng minh phương pháp có khả năng phát hiện vi khuẩn Salmonella ở mật độ cực thấp trong 25g mẫu thịt, vượt trội hơn quy định của AOAC (1 - 5 CFU/25g) và NordVal (0,1 - 10 CFU/25g). Kết hợp với độ đặc hiệu đạt 100%, phương pháp bảo đảm không xảy ra hiện tượng dương tính giả hoặc âm tính giả trong kiểm nghiệm thương mại.

Độ không đảm bảo đo mở rộng $U_e$ của các phương pháp định lượng trong luận văn đạt mức bao nhiêu?
Độ không đảm bảo đo mở rộng (với hệ số phủ $k = 2$, độ tin cậy 95%) của phương pháp định lượng TSVSVHK là $U_e = 0,126$ và phương pháp định lượng E. coli là $U_e = 0,098$. Cả hai giá trị này đều nằm sâu dưới ngưỡng giới hạn cho phép là 0,5 theo TCVN 9332:2012, khẳng định độ tin cậy rất cao của các kết quả phân tích.

Luận văn đã kiểm nghiệm trên bao nhiêu mẫu thịt nhập khẩu thực tế và kết quả an toàn thực phẩm ra sao?
Nghiên cứu đã xét nghiệm trên 865 mẫu thịt đông lạnh nhập khẩu thuộc 173 lô hàng (gồm 470 mẫu thịt bò, 320 mẫu đùi gà và 75 mẫu gà nguyên con). Kết quả 100% số mẫu đều đạt tiêu chuẩn vệ sinh theo QCVN 8-3:2012/BYT, không phát hiện vi khuẩn Salmonella và E. coli, tổng số vi sinh vật hiếu khí đều nằm trong ngưỡng an toàn dưới $5 \times 10^5$ CFU/g.

Việc áp dụng các phương pháp mới giúp tiết kiệm thời gian và chi phí cho doanh nghiệp như thế nào?
Phương pháp mới giúp rút ngắn thời gian định lượng vi sinh vật từ 72 giờ xuống 48 giờ và thời gian phát hiện Salmonella từ 72-96 giờ xuống còn 37 giờ. Việc rút ngắn gần 50% thời gian xét nghiệm giúp giảm thời gian lưu giữ container tại cảng, tiết kiệm ước tính khoảng 30% chi phí lưu kho bãi và đẩy nhanh tốc độ quay vòng vốn cho doanh nghiệp.

Kết luận

• Luận văn đã thẩm định thành công hai phương pháp định lượng vi sinh vật bằng đĩa đông khô Petrifilm (TCVN 9977:2013 và TCVN 9975:2013) với độ lặp lại $S_r \le 0,047$, độ tái lặp $S_R \le 0,039$ và độ không đảm bảo đo $U_e \le 0,126$, vượt trội hơn phương pháp tham chiếu truyền thống.
• Xác nhận giá trị sử dụng phương pháp định tính Salmonella trên môi trường Iris Salmonella (TCCS 03:2016/TYV2-CĐ) đạt giới hạn phát hiện $LOD = 2\text{ CFU/25g}$, độ nhạy $95,56%$, độ đặc hiệu $100%$ và độ chính xác $97,33%$.
• Kiểm nghiệm thực tế trên 865 mẫu thịt đông lạnh nhập khẩu (173 lô hàng) chứng minh 100% mẫu đạt chuẩn vệ sinh an toàn thực phẩm theo QCVN 8-3:2012/BYT với tỷ lệ nhiễm Salmonella và E. coli là 0%.
• Tối ưu hóa thời gian kiểm nghiệm từ 72-96 giờ xuống còn 37-48 giờ, hỗ trợ đắc lực cho công tác kiểm dịch thông quan hàng hóa và giảm đáng kể chi phí lưu kho bãi cho doanh nghiệp.
• Cung cấp nguồn tư liệu khoa học chuẩn mực phục vụ hoạt động công nhận phòng thử nghiệm theo ISO/IEC 17025 và xây dựng hàng rào kỹ thuật bảo vệ sức khỏe người tiêu dùng.

Các đơn vị kiểm nghiệm vi sinh và cơ quan quản lý thú y cần sớm đưa các phương pháp xét nghiệm nhanh đã được thẩm định vào quy trình thường quy nhằm nâng cao hiệu quả giám sát chất lượng thực phẩm nhập khẩu trên phạm vi toàn quốc.

Trích đoạn nội dung tài liệu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ HẰNG XÁC ĐỊNH GIÁ TRỊ SỬ DỤNG CỦA CÁC PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM VI SINH VẬT ỨNG DỤNG TRONG KIỂM NGHIỆM THỊT ĐÔNG LẠNH NHẬP KHẨU Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01 Người hướng dẫn khoa học: PGS. Phạm Hồng Ngân NHÀ XUẤT BẢN ĐẠO HỌC NÔNG NGHIỆP - 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các kết quả nghiên cứu được trình bày trong luận văn là trung thực, khách quan và chưa từng dùng để bảo vệ lấy bất kỳ học vị nào. Tôi cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn đã được cám ơn, các thông tin trích dẫn trong luận văn này đều được ghi rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Hằng i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn, tôi đã nhận được sự hướng dẫn, chỉ bảo tận tình của các thầy cô giáo, sự giúp đỡ, động viên của bạn bè, đồng nghiệp và gia đình.

Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tôi được bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới PGS. TS Phạm Hồng Ngân đã tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám Đốc, Ban quản lý đào tạo, Bộ môn Thú y Cộng đồng, Khoa Thú y- Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã tận tình giúp đỡ tôi trong quá trình học tập, thực hiện đề tài và hoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể ban lãnh đạo, cán bộ viên chức cơ quan Thú y vùng 2 đã giúp đỡ tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài.

Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp đã tạo mọi điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi về mọi mặt, động viên khuyến khích tôi hoàn thành luận văn. Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Hằng ii MỤC LỤC Lời cam đoan. ii Mục lục. iii Danh mục chữ viết tắt.

vi Danh mục bảng .vii Danh mục hình .viii Trích yếu luận văn. ix Thesis abstract. Tính cấp thiết của đề tài. Mục tiêu nghiên cứu.

Phạm vi nghiên cứu. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài. Tổng quan tài liệu. Xác định giá trị sử dụng của phương pháp.

Một số khái niệm. Các thông số kỹ thuật trong thẩm định, xác nhận giá trị sử dụng của phương pháp. Một số cách tiếp cận để xác định giá trị sử dụng của phương pháp từ các tổ chức có uy tín. Luật an toàn thực phẩm và các quy phạm pháp luật qui định giới hạn mức độ ô nhiễm vi sinh vật trong thịt, sản phẩm thịt.

Trên thế giới. Tại Việt Nam. Hệ vi sinh vật gây mất vệ sinh, an toàn trong thịt và các sản phẩm thịt. Tổng số Vi sinh vật hiếu khí.

Ngộ độc thức ăn do thịt nhiễm khuẩn. Ngộ độc và nhiễm bệnh do vi khuẩn. Ngộ độc do độc tính của vi khuẩn. Các phương pháp kiểm nghiệm vi sinh vật trong thịt và sản phẩm thịt.

Một số phương pháp định lượng tổng số VSVHK. Một số phương pháp định lượng E. Phương pháp phát hiện Salmonella. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu.

Đối tượng, địa điểm nghiên cứu. Đối tượng nghiên cứu. Địa điểm nghiên cứu. Nội dung nghiên cứu.

Xác định giá trị sử dụng của phương pháp. Ứng dụng Kiểm nghiệm một số mẫu thịt đông lạnh nhập khẩu. Chủng chuẩn vi sinh vật. Các mâũ thịt đông lạnh:.

Các thiết bị trong phòng thí nghiệm. Môi trường chính nuôi cấy vi sinh vật. Phương pháp nghiên cứu. Phương pháp thẩm định tiêu chuẩn.

Phương pháp kiểm nghiệm một số chỉ tiêu vi sinh vật trong thịt. Phương pháp phân tích số liệu. Kết quả và thảo luận. Kết quả thẩm định phương pháp.

Kết quả đánh giá hiệu suất môi trường sử dụng trong thẩm định phương pháp. Kết quả kiểm tra nền mẫu đánh giá. Kết quả kiểm tra đặc tính sinh hóa, đặc tính nuôi cấy của chủng chuẩn. Kết quả xác định nồng độ vi khuẩn gây nhiễm.

Kết quả thẩm định TCVN 9977:2013. Kết quả thẩm định TCVN 9975: 2013. Kết quả xác nhận giá trị sử dụng của TCCS 03: 2016/TYV2-CĐ. Kết quả kiểm nghiệm một số mẫu thịt đông lạnh nhập khẩu.

Kết quả kiểm nghiệm mẫu thịt bò đông lạnh. Kết quả kiểm nghiệm mẫu đùi gà. Kết quả kiểm nghiệm trên mẫu thịt gà nguyên con. Kết luận và kiến nghị.

51 Tài liệu tham khảo. 57 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt AOAC (Association of Official Analytical Chemists) : Hiệp hội phân tích hoá phân tích chính thức ATCC (American Type Culture Collection) : Hệ thống chủng chuẩn của Hoa Kỳ ATTP : An toàn thực phẩm BYT : Bộ Y Tế CFU (Colony Forming Unit) : Đơn vị hình thành khuẩn lạc E. coli : Escherichia coli FAO (Food and Agriculture Organization of the : Tổ chức nông lương quốc tế United Nations) FDA (The United States Food and Drug Administration) : Cục Thực phẩm và Dược Hoa Kỳ HACCP(Hazard Analysis and Critical Control Point) : Phân tích mối nguy và điểm kiểm soát tới hạn ICH (International Conference for Harmonization) : Hội thảo quốc tế về đồng bộ hoá ISO (International Organization for Standarlization) :Tổ chức tiêu chuẩn hóa quốc tế KĐBĐ : Không đảm bảo đo LOD ( Limit of Detection) : Giới hạn phát hiện NMKL (Nordisk metodikkomite for levnedsmidler) : Ủy ban phân tích thực phẩm Bắc Âu OIE (World Organisation for Animal Health) : Tổ chức Thú y thế giới QCVN : Quy chuẩn Việt Nam TCCS : Tiêu chuẩn cơ sở TCVN : Tiêu chuẩn Việt Nam TPP (Trans-Pacific Partnership Agreement) : Hiệp định đối tác xuyên Thái Bình Dương TSVSVHK : Tổng số vi sinh vật hiếu khí WHO (World Health Organization) : Tổ chức Y tế thế giới VSATTP : Vệ sinh an toàn thực phẩm WTO (World Trade Organization) : Tổ chức thương mại thế giới. vi DANH MỤC BẢNG Bảng 2.

Qui định chung của Châu âu (EC) số 2073/2005 về tiêu chuẩn vi sinh đối thịt và sản phẩm thịt. Giới hạn vi sinh vật trong thịt và sản phẩm thịt theo QCVN 8-3/BYT. Môi trường chính dùng để thẩm định phương pháp và phân tích các chỉ tiêu VSV. Kết quả đánh giá hiệu suất môi trường.

Kết quả xét nghiệm nền mẫu đánh giá. Kết quả kiểm tra, so sánh đặc tính sinh hóa của vi khuẩn. Kết quả dò nồng độ vi khuẩn E. Kết quả độ lặp lại, độ tái lặp TCVN 9977:2013, TCVN 4884-2:2015.

Kết quả tính độ không đảm bảo đo TCVN 9977:2013. Kết quả độ lặp lại, độ tái lặp TCVN 9975:2013, TCVN 7429-2:2008. Kết quả xác định độ không đảm bảo đo TCVN 9975:2013. Kết quả xác định nồng độ gây nhiễm.

Kết quả Tỉ lệ Salmonella dương tính. Kết quả xác định giới hạn phát hiện của phương pháp. Kết quả phát hiện Salmonella. Kết quả so sánh sự tương đồng TCCS03:2016; TCVN 4884:2005.

Kết quả thực hiện thử nghiệm thành thạo. 44 vii DANH MỤC HÌNH Hình 4. Khuẩn lạc vi khuẩn trên các môi trường chọn lọc đặc trưng. Tỉ lệ % các lô mẫu kiểm nghiệm,.

Kết quả định lượng tổng số VSVHK trong các mẫu thịt bò. Kết quả định lượng tổng số VSVHK trong các lô mẫu đùi gà. Kết quả định lượng tổng số VSVHK trong các lô gà nguyên con. Tỉ lệ nhiễm tổng số VSVHK trên các mẫu kiểm nghiệm.

49 viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Nguyễn Thị Hằng Tên luận văn: “ Xác định giá trị sử dụng của các phương pháp xét nghiệm vi sinh vật ứng dụng trong kiểm nghiệm thịt đông lạnh nhập khẩu”. Ngành: Thú Y Mã số: 60 64 01 01 Cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu - Đảm bảo các kết quả thử nghiệm - Cung cấp số liệu cho hoạt động đánh giá công nhận phép thử. - Ứng dụng kiểm nghiệm, xét nghiệm mẫu thịt đông lạnh. Phương pháp nghiên cứu Phương pháp thẩm định Thẩm định phương pháp theo Trần Cao Sơn 2010, Tiêu chuẩn Việt nam 9332:2012.

Phương pháp kiểm nghiệm mẫu thịt + Định lượng tổng số VSVHK theo TCVN 9977:2013 + Định lượng E.coli theo TCVN 9975:2013 + Định tính Salmonella theo TCCS 03-2016/TYV2-CĐ Kết quả chính và kết luận Kết quả thẩm định phương pháp định lượng Tổng số VSVHK theo TCVN 9977:2013: Các thông số: Độ lặp lại Sr: có giá trị 0,045-0,047 , Độ tái lặp S R có giá trị 0,033-0,038, giá trị độ không đảm bảo đo của phương pháp Ue : 0,126. Kết quả thẩm định phương pháp định lượng E.coli theo TCVN 9975: 2013 Các thông số đạt được độ lặp lại Sr nằm trong khoảng 0,029-0,033, Độ tái lặp S R có giá trị 0,032- 0,039, giá trị độ không đảm bảo đo của phương pháp Ue: 0,098. Kết quả xác nhận giá trị sử dụng phương pháp phát hiên Salmonella :các thông số giới hạn phát hiện LOD: 2CFU/25g, độ nhạy Se: 95,56%, độ đặc hiệu Sp: 100%, độ chính xác Ac: 97,33%). Kết quả kiểm nghiệm mẫu thịt 94 lô (470) mẫu thịt bò, 64 lô (320 mẫu) thịt đùi gà, 15 lô (75 mẫu) thịt gà nguyên con đông lạnh nhập khẩu được xét nghiệm 3 chỉ tiêu Tổng số vi sinh vật hiếu ix khí, E.

100% mẫu đạt vệ sinh ATTP, không phát hiện Salmonella và E.coli trong các mẫu xét nghiệm, tổng số VSVHK nằm trong giới hạn cho phép. Kết luận Độ lặp lại, độ tái lặp và độ không đảm bảo đo ở phương pháp thay thế TCVN 9977:2013 và TCVN 9975:2013 có giá trị nhỏ hơn so với phương pháp tham chiếu. Phương pháp thay thế định tính salmonella theo TCCS 03:2016/TYV2 hoàn toàn tương đồng với TCVN4829:2005. 100% mẫu đạt vệ sinh ATTP, các mẫu xét nghiệm không phát hiện Salmonella và E.coli, tổng số VSVHK nằm trong giới hạn cho phép.

x THESIS ABSTRACT Master candidate: Nguyen Thi Hang Thesis title: “Validation of microbiological methods, used for testing imported frozen meat samples” Major: Veterinary Code: 60.01 Education organization: Vietnam National University of Agriculture (VNUA) 1. Research Objective: The objective of the studying is the requirement to ensure laboratory test results, Provide an in-service staff for the laboratory's conformity assessment accreditation. Use approved methods to test imported frozen meats. Meterial and Methods: - Meterial: The studying use some positive bacterial from American Type Culture Collection: - Salmonella enterica subsp.

enterica serovar Enteritidis ATCC® 49223™*, - Escherichia coli ATCC® 11303™ - Vibrio parahaemolyticus ATCC®. 17802TM - Staphylococus aureus subsp aureus ATCC®. 29213TM - Samples fzoren meat export: Beefs and chickens. Methods: - Validation method accoding to Tran Cao Son 2010.