Đ¾I HàC QUàC GIA HÀ NàI TR¯àNG Đ¾I HàC Y D¯þC NGUYÄN THUỲ DUYÊN NGHIÊN CĀU CHUYÂN D¾NG BàT SÂY PHUN TĂ TINH DÄU LÁ CÂY MÀNG TANG (Litsea cubeba (Lour.) Pers) KHÓA LUÀN TÞT NGHIÆP Đ¾I HàC NGÀNH D¯þC HàC Hà Nái – 2023 Đ¾I HàC QUàC GIA HÀ NàI TR¯àNG Đ¾I HàC Y D¯þC Ng°ái thực hiÇn: NGUYÄN THUỲ DUYÊN NGHIÊN CĀU CHUYÂN D¾NG BàT SÂY PHUN TĂ TINH DÄU LÁ CÂY MÀNG TANG (Litsea cubeba (Lour.) Pers) KHÓA LUÀN TÞT NGHIÆP Đ¾I HàC (NGÀNH D¯þC HàC) Khóa : QH.Y Ng°ái h°ßng d¿n : PGS. NguyÅn Minh Khãi TS. Hoàng Lê S¢n Hà Nái – 2023 LàI CÀM ¡N Lời đầu tiên, em xin trân tráng bày tß lòng biết ơn tới PGS.TS NguyÅn Minh Khãi và TS. Hoàng Lê S¢n – Gi¿ng viên Trường Đ¿i hác Y Dược, Đ¿i hác Quác gia Hà Nái đã tận tâm chỉ b¿o và t¿o điều kiện tát nhÁt giúp em hoàn thành đề tài Khóa luận cÿa mình.
Các thầy không chỉ truyền đ¿t kiến thāc hác thuật cho em mà còn cung cÁp, trang bß thêm cho em thêm rÁt nhiều kĩ năng quan tráng khác trong cuác sáng. Em xin gửi lời c¿m ơn anh Đào Anh Hoàng và anh Nguyễn Tiến Hoàng và các Quý thầy, cô, các anh chß trong Khoa Bào chế cÿa Viện Dược liệu đã chỉ dẫn cho em trong quá trình thực hiện Khóa luận. Em xin c¿m ơn Quý thầy cô bá môn Dược liệu và Dược hác cổ truyền – Trường Đ¿i hác Y dược – Đ¿i hác Quác gia Hà Nái đã hướng dẫn và t¿o điều kiện cho em được thực hành ở bá môn. Em cũng xin gửi lời c¿m ơn đến các Quý thầy cô trong Ban Giám hiệu Trường Đ¿i hác Y Dược, Đ¿i hác Quác gia Hà Nái cũng như các cán bá, gi¿ng viên trực thuác Trường Đ¿i hác Y Dược đã tận tình chỉ d¿y, giúp đỡ cho em trong suát 5 năm hác tập và nghiên cāu chuyên ngành Dược hác t¿i nơi đây.
Trong thời gian thực hiện Khóa luận, dưới sự hướng dẫn tận tình cÿa các thầy cô, em luôn nß lực hác tập, nghiên cāu để hoàn thành Khóa luận này. Tuy nhiên do kiến thāc còn h¿n hẹp, thời gian nghiên cāu chưa được nhiều nên Khóa luận cÿa em không thể tránh khßi được những thiết sót. Em rÁt mong nhận được những lời nhận xét, góp ý cÿa Quý thầy cô để Khoá luận tát nghiệp Dược sĩ cÿa em được hoàn thiện hơn. Lời cuái, em xin phép kính chúc các Quý thầy, cô và mái người luôn h¿nh phúc, khße m¿nh và thành công hơn nữa trong cuác sáng! Em xin chân thành c¿m ơn! Hà Nái, ngày tháng năm Sinh viên Nguyễn Thuỳ Duyên DANH MĀC CÁC KÝ HIÆU VÀ CHĀ VI¾T TÂT Tă vi¿t tÃt Nghĩa ti¿ng Anh Nghĩa ti¿ng ViÇt AchE Acetylcholinesterase ANOVA Analysis of Variance Phân tích phương sai Aspirator Lưu lượng gió vào Carr Compressibility Index Chỉ sá nén Carr Index Flow control Áp suÁt khí nén GA Gôm Arabic GC-MS Gas Chromatography Mass Spectometry Sắc ký khí ghép phái phổ Hausner Ratio Tỷ sá Hausner Inlet actual Nhiệt đá thực tế Inlet preset Nhiệt đá đầu vào Lack of fit Thiếu phù hợp MD Maltodextrin Mixture Hßn hợp Model Mô hình MS Modified starch Tinh bát biến tính Not sig Not significant Không ý nghĩa Outlet tempurature Nhiệt đá đầu ra Pump Tác đá cÁp dßch Sig Significant Có ý nghĩa DANH MĀC CÁC BÀNG BÁng 2.1: Các nguyên phụ liệu sử dụng trong nghiên cāu .2: Các thiết bß sử dụng trong nghiên cāu .3: Các phần mềm, công cụ dùng trong nghiên cāu .4: Thiết kế thí nghiệm hßn hợp để sÁy phun với các công thāc tá dược khác nhau .1: Thành phần hoá hác trong tinh dầu lá màng tang phân tích bằng GC-MS.2: Các protein dùng trong ch¿y Docking .3: Kết qu¿ giá trß Docking cÿa các ho¿t chÁt màng tang với protein tương āng .4: Bá trí thí nghiệm theo và kết qu¿ thực nghiệm tái ưu hoá theo thiết kế hßn hợp .5: Kết qu¿ đánh giá mô hình bằng ANOVA dựa trên hai giá trß sig và not sig 32 DANH MĀC HÌNH ÀNH Hình 1.1: Hình ¿nh cây màng tang [3].2: Hình vẽ mô t¿ các bá phận cÿa cây màng tang gồm cành cây có hoa (1), tán hoa (2), bá phận sinh s¿n cÿa hoa (3), nhß hoa (4), cành cây có qu¿ (5) [5].3: Phân bá cây màng tang trên thế giới [6].4: Công thāc hoá hác mát sá hợp chÁt trong tinh dầu màng tang gồm pinene (1), sabinene (2), citral (3), neral (4), limonene (5), linalool (6).5: Nguyên lý ho¿t đáng cÿa máy sÁy phun thông thường gồm bá phận phun dßch (1,2), khí nóng đưa vào (3), buồng sÁy (4), bát (5), thu bát bằng công nghệ lác xoáy (6), các h¿t không đ¿t (7), khí sÁy khô (8) [25].1: Hình ¿nh tiêu b¿n cây màng tang .1: Hình ¿nh vi phẫu lá màng tang được chụp ở kính hiển vi khẩu đá 10x với các đặc trưng gồm lông che chở (1), bó libe gß (2), mô mềm (3), mô dày (4), biểu bì (5).2: Hình ¿nh các đặc điểm bát cÿa lá màng tang được chụp ở kính hiển vi khẩu đá 40x gồm m¿nh m¿ch xoắn (1), m¿nh m¿ch chāa h¿t tinh dầu (2), m¿nh m¿ch m¿ng (3), lông che chở (4), h¿t tinh dầu (5), tinh thể calci oxalate hình cầu gai (6).3: Sắc ký đồ phân tích tinh dầu lá màng tang bằng phương pháp GC-MS.4: Bát thu được sau khi sÁy phun với thông sá máy là lưu lượng gió vào 100%, nhiệt đá đầu vào 1400C, Nhiệt đá thực 139-1410C, Nhiệt đá đầu ra 84-900C, Tác đá cÁp dßch 30%, Áp suÁt khí nén kho¿ng 600 L/h.5: Kết qu¿ thí nghiệm mái liên hệ cÿa các yếu tá ¿nh hưởng GA (X1), MD (X2), MS (X3) và các đáp āng gồm Hiệu suÁt sÁy phun (Y1), Kích thước tiểu phân trung bình bát ướt (Y3), Tỷ sá Hausner (Y4), Chỉ sá nén Carr Index (Y5) theo thiết kế hßn hợp.6: Các tiểu phân bát sÁy phun khô được chụp dưới kính hiển vi khẩu đá 40x và xử lý kích thước bằng phần mềm INFINITY ANALYZE 6.7: Các tiểu phân bát sÁy phun ướt được chụp dưới kính hiển vi khẩu đá 40x và xử lý kích thước bằng phần mềm INFINITY ANALYZE 6.
35 MĀC LĀC Mâ ĐÄU Ch°¢ng 1 - TàNG QUAN. Táng quan vÁ cây màng tang. Vß trí phân lo¿i. Đặc điểm thực vật.
Phân bá và trồng trát. Thu hái và chế biến. Tinh dÅu màng tang. Thành phần hóa hác cÿa tinh dầu màng tang.
Tác dụng sinh hác và công dụng. Sàng lác tiÁm năng sinh hác bằng ph°¢ng pháp Docking. Ph°¢ng pháp sÃy phun. Táng quan vÁ vi nang.
Lựa chán tá d°ÿc dùng trong sÃy phun. 12 Ch°¢ng 2 - ĐÞI T¯þNG VÀ PH¯¡NG PHÁP NGHIÊN CĀU. Nguyên liÇu và trang thi¿t bß. Trang thiết bß nghiên cāu.
Các phần mềm, công cụ. Ph°¢ng pháp, nái dung nghiên cāu. Phương pháp làm tiêu b¿n vi hác thực vật và soi bát dược liệu. Nghiên cāu thành phần hoá hác trong tinh dầu lá màng tang bằng phương pháp GC-MS.
Đánh giá tiềm năng sinh hác cÿa tinh dầu lá màng tang bằng phương pháp Docking. Thiết kế thí nghiệm bằng phần mềm Design – Expert 11. Bào chế d¿ng bát sÁy phun từ tinh dầu lá màng tang. Các phương pháp xử lý sá liệu.
19 Ch°¢ng 3 - K¾T QUÀ. Tiêu bÁn vi ph¿u lá màng tang và soi bát lá màng tang khô. Quan sát tiêu b¿n vi phẫu lá màng tang dưới kính hiển vi. Đánh giá đặc điểm bát dược liệu.
Xác đßnh thành phÅn hoá hác trong tinh dÅu lá màng tang bằng ph°¢ng pháp GC-MS. Đánh giá tiÁm năng sinh hác cÿa tinh dÅu lá màng tang bằng ph°¢ng pháp Docking. Nghiên cāu chuyÃn d¿ng bát cÿa tinh dÅu màng tang bằng ph°¢ng pháp sÃy phun. Xây dựng quy trình bào chế bát sÁy phun từ tinh dầu lá màng tang.
Thiết kế hßn hợp. Dự đoán tái ưu hoá bằng hàm tham váng. 36 Ch°¢ng 4 - BÀN LUÀN. 37 K¾T LUÀN VÀ ĐÀ XUÂT.
39 TÀI LIÆU THAM KHÀO Mâ ĐÄU Màng tang (Litsea cubeba (Lour.) thuác há Long não (Lauraceae) là cây thân gß phân bá chÿ yếu t¿i Đông – Nam châu Á. Theo Y hác cổ truyền, màng tang là vß thuác có vß cay đắng, tính Ám với công dụng tán phong hàn, ôn trung h¿ khí, trừ thÁp gi¿m đau. Cao chiết từ màng tang đã được chāng minh có tác dụng kháng khuẩn, cháng oxy hoá, āc chế phát triển tế bào ung thư, cháng viêm, h¿ đường huyết và cháng côn trùng. Các ho¿t chÁt trong màng tang đã được phân lập và xác đßnh cÁu trúc phân vào mát sá nhóm gồm terpene, flavonoid, amide, lignan và các acid béo.
Tinh dầu từ qu¿ màng tang từ lâu được các nhà khoa hác quan tâm do có kh¿ năng an thần, gi¿m lo âu và giúp dập sóng α- giúp dễ đi vào giÁc ngÿ. Từ kết qu¿ gần đây cÿa nhóm chưa được công bá cho thÁy tinh dầu từ lá màng tang cũng có kh¿ năng gi¿m lo âu trên mô hình in vivo và in silico như tinh dầu qu¿. Tuy nhiên, tinh dầu lá có nhược điểm dễ bay hơi, dễ hßng t¿i điều kiện thường vì vậy cần thiết nghiên cāu chuyển d¿ng lßng sang rắn cÿa tinh dầu lá. Hiện t¿i, nhiều kỹ thuật bào chế chuyển d¿ng cho tinh dầu như sÁy phun, đông khô nhưng nghiên cāu này lựa chán phương pháp sÁy phun do ưu điểm dễ dàng nâng cÁp ở quy mô công nghiệp, quy trình có thể giám sát và s¿n phẩm cuái đ¿t tiêu chuẩn dược dụng.
Do đó, đề tài <Nghiên cāu chuyÃn d¿ng bát sÃy phun tă tinh dÅu lá cây màng tang (Litsea cubeba (Lour.)= được thực hiện với các mục tiêu: 1. Xác đßnh được thành phần hoá hác từ tinh dầu lá màng tang bằng phương pháp GC-MS. Đánh giá thêm tiềm năng sinh hác cÿa tinh dầu lá màng tang bằng phương pháp Molecular Docking. Xây dựng được công thāc bào chế bát sÁy phun từ tinh dầu lá cây màng tang.
1 Ch°¢ng 1 - TàNG QUAN 1. Táng quan vÁ cây màng tang 1. Vß trí phân lo¿i Còn gái là tÁt trừng già. Tên khoa hác là Litsea cubeba (Lour.
Thuác há Long não Lauraceae [1] Theo hệ tháng phân lo¿i Takhtajan (1987) Giới thực vật: Plantae Ngành Ngác lan: Magnoliophyta Lớp Ngác lan: Magnoliopsida Bá Long não: Laurales Há Long não: Lauraceae Chi Bời lời : Litsea Loài: Litsea cubeba [2] Hình 1.1: Hình ¿nh cây màng tang [3]. Đặc điÃm thực vÁt Màng tang là mát cây nhß cao 5 – 8 m, đường kính 5 – 6 cm, phân cành nhiều. Vß cây lúc còn non xanh mượt, nhiều chÁm trắng nhß, khi già ng¿ mẫu nâu tím. Lá mác cách, mép nguyên, mặt trên xanh sẫm, mặt dưới trắng xám, hình ngán giáo thót l¿i ở gác, có gân hơi rõ, và có mùi thơm mát.
Cuáng lá hơi có cánh.