KH & CN VDTNN VDTNN Bé n«ng nghiÖp vµ ph¸t triÓn n«ng th«n ViÖn Di truyÒn N«ng nghiÖp §−êng Ph¹m V¨n §ång – Tõ Liªm – Hµ Néi B¸o c¸o tæng kÕt khoa häc vµ kü thuËt §Ò tµi: “Nghiªn cøu ¸p dông tin sinh häc ®Ó qu¶n lý an toµn sinh häc sinh vËt biÕn ®æi gen vµ s¶n phÈm cña chóng” TS. §Æng Träng L−¬ng 6817 24/4/2008 Hµ Néi, 2007 B¶n quyÒn 2007 thuéc ViÖn DTNN §¬n xin sao chÐp toµn bé hoÆc tõng phÇn tµi liÖu nµy ph¶i göi ®Õn ViÖn tr−ëng ViÖn Di truyÒn N«ng nghiÖp, trõ tr−êng hîp sö dông víi môc ®Ých nghiªn cøu. Bé Khoa häc vµ C«ng nghÖ ViÖn Di truyÒn N«ng nghiÖp §−êng Ph¹m V¨n §ång – Tõ Liªm – Hµ Néi B¸o c¸o tæng kÕt khoa häc vµ kü thuËt §Ò tµi: “Nghiªn cøu ¸p dông tin sinh häc ®Ó qu¶n lý an toµn sinh häc sinh vËt biÕn ®æi gen vµ s¶n phÈm cña chóng” TS. §Æng Träng L−¬ng Hµ Néi, 2007 Tµi liÖu nµy ®−îc chuÈn bÞ trªn c¬ së kÕt qu¶ thùc hiÖn §Ò tµi cÊp Nhµ n−íc, m· sè KC.04-34 2 Danh s¸ch t¸c gi¶ cña §Ò tµi KH & CN cÊp nhµ n−íc (Danh s¸ch nh÷ng c¸ nh©n ®· ®ãng gãp s¸ng t¹o chñ yÕu cho §Ò tµi) 1.
Tªn ®Ò tµi: Nghiªn cøu ¸p dông tin sinh häc ®Ó qu¶n lý an toµn sinh häc sinh vËt biÕn ®æi gen vµ s¶n phÈm cña chóng 2. Thuéc ch−¬ng tr×nh: Nghiªn cøu khoa häc vµ ph¸t triÓn C«ng nghÖ Sinh häc 3. Thêi gian thùc hiÖn: tõ 1/2005 ®Õn 6/2007 4. C¬ quan chñ tr×: ViÖn Di truyÒn N«ng nghiÖp Bé N«ng nghiÖp vµ Ph¸t triÓn N«ng th«n 5.
Bé chñ qu¶n: Bé Khoa häc vµ C«ng nghÖ 6. Danh s¸ch ®éi ngò c¸n bé tham gia thùc hiÖn ®Ò tµi: Sè th¸ng Hä vµ tªn C¬ quan c«ng t¸c lµm viÖc cho ®Ò tµi A. Chñ nhiÖm ®Ò tµi: TS. §Æng Träng L−¬ng ViÖn Di truyÒn N«ng nghiÖp 30 th¸ng B.
TS Vò §øc Quang ViÖn DTNN 18 th¸ng 2. NguyÔn Duy B×nh PV KhÝ t−îng TV vµ MT 12 th¸ng 3. L· TuÊn NghÜa ViÖn DTNN 18 th¸ng 4. NguyÔn TrÞnh Toµn ViÖn DTNN 18 th¸ng 5.
Minh Quyªn TT C«ng NghÖ SH - §HQG 18 th¸ng 6. Lª Nh− KiÓu ViÖn DTNN 9 th¸ng 7.S KhuÊt H÷u Trung ViÖn DTNN 18 th¸ng 8.S NguyÔn Ph−¬ng §oµi ViÖn DTNN 18 th¸ng 9.S NguyÔn Thóy §iÖp ViÖn DTNN 18 th¸ng 10. NguyÔn Tr−êng Khoa ViÖn DTNN 18 th¸ng 11. Lª Thanh Loan ViÖn DTNN 18 th¸ng 12.
KiÒu ThÞ Dung ViÖn DTNN 18 th¸ng 11. TrÇn ThÞ Cóc Hoµ ViÖn Lóa §B S«ng Cöu Long 18 th¸ng 12.S TrÇn Nh− Long C«ng ty §Çu t− PT C«ng nghÖ 12 th¸ng tin häc (TECKEY JSC) 3 Bµi tãm t¾t Môc tiªu cña ®Ò tµi: “Nghiªn cøu ¸p dông tin sinh häc ®Ó qu¶n lý an toµn sinh häc sinh vËt biÕn ®æi gen vµ s¶n phÈm cña chóng ” lµ thu thËp th«ng tin vµ nhËn biÕt sinh vËt biÕn ®æi gen (GMOs) vµ s¶n phÈm cña chóng. Tõ ®ã x©y dùng c¬ së d÷ liÖu vÒ GMOs, thiÕt kÕ x©y dùng trang Website. X©y dùng vµ ®Ò xuÊt ®−îc gi¶i ph¸p qu¶n lý vÒ GMOs vµ s¶n phÈm cña chóng vµ biÖn ph¸p thùc hiÖn, c¶nh b¸o vÒ tiÒm Èn rñi ro (nÕu cã).
§Ò tµi còng øng dông tin sinh häc ®Ó phôc vô c«ng t¸c thu thËp vµ x©y dùng b¶n ®å chØ thÞ ph©n tö c¸c gen cã liªn quan ®Õn tÝnh tr¹ng quan träng cña c©y lóa. Ph−¬ng ph¸p nghiªn cøu: Chóng t«i ®· øng dông c«ng nghÖ th«ng tin, tin häc, c«ng nghÖ sinh häc, sinh häc ph©n tö, c¸c ph−¬ng ph¸p lai gièng truyÒn thèng,… trong qu¸ tr×nh nghiªn cøu ®Ó thùc hiÖn ®Ò tµi. §èi t−îng nghiªn cøu cña ®Ò tµi lµ c¸c sinh vËt biÕn ®æi gen (bao gåm: thùc vËt, ®éng vËt, vi sinh vËt vµ s¶n phÈm h¹t, thøc ¨n ch¨n nu«i), c¸c gièng lóa dù chiªm vµ LC93-1. KÕt qu¶ næi bËt vµ tÝnh míi cña ®Ò tµi: 1.
Thu thËp ®−îc c¸c th«ng tin vÒ c¸c c©y trång, vËt nu«i, vi sinh vËt biÕn ®æi gen vµ thøc ¨n gia sóc cã chøa GMOs. §· thu thËp ®−îc c¸c d÷ liÖu liªn quan ®Õn cÊu tróc gen ®· ®−îc chuyÓn vµo trong c¸c sinh vËt biÕn ®æi gen. X©y dùng ®−îc phÇn mÒm qu¶n lý c©y trång, vËt nu«i, vi sinh vËt biÕn ®æi gen vµ s¶n phÈm cña chóng. Tõ ®ã x©y dùng website: http://www.vn chøa ®ùng th«ng tin liªn quan ®Õn sinh vËt biÕn ®æi gen.
Tèi −u ho¸ ®−îc ba ph−¬ng ph¸p ®Ó nhËn biÕt GMOs (PCR, lai ADN, que thö ELISA). X¸c ®Þnh ®−îc c¸c tr×nh tù måi ®Æc tr−ng cña PCR ph¸t hiÖn ®o¹n CaMV 35S, T-NOS, gen Bt; còng nh− mÉu dß vµ bé kit ®Ó nhËn biÕt c©y trång biÕn ®æi gen. Ph¸t hiÖn ®−îc mét sè d¹ng thøc ¨n gia sóc hiÖn ®ang l−u hµnh trªn thÞ tr−êng cã chøa s¶n phÈm cña c©y trång biÕn ®æi gen. X©y dùng b¶n ®å chØ thÞ ph©n tö c¸c gen liªn quan ®Õn bÖnh ®¹o «n ë lóa dù chiªm vµ gen chÞu h¹n ë lóa LC93-1.
§· ®Ò xuÊt ®−îc biÖn ph¸p qu¶n lý mét sè ®èi t−îng c©y trång, vËt nu«i, vi sinh vËt biÕn ®æi gen. §µo t¹o 1 cö nh©n C«ng nghÖ sinh häc vµ ®· xuÊt b¶n ®−îc 3 bµi b¸o. 4 Lêi c¶m ¬n Víi sù nç lùc, s¸ng t¹o trong nghiªn cøu cña Chñ nhiÖm ®Ò tµi vµ c¸c c¸n bé tham gia ®Ò tµi, §Ò tµi KC.04-34 ®· hoµn thµnh ®óng tiÕn ®é cña thuyÕt minh ban ®Çu. Ngoµi ra, kh«ng thÓ kh«ng kÓ ®Õn sù quan t©m, gióp ®ì, t¹o ®iÒu kiÖn cña c¸c c¬ quan, tæ chøc, c¸c viÖn nghiªn cøu, c¸c tr−êng ®¹i häc vµ c¸c nhµ khoa häc ViÖt Nam.
V× vËy chóng t«i, xin ch©n thµnh c¶m ¬n Bé Khoa häc vµ C«ng nghÖ, Bé N«ng nghiÖp vµ PTNT, Ban Chñ nhiÖm Ch−¬ng tr×nh KC.04 ®· t¹o ®iÒu kiÖn gióp ®ì Ban thùc hiÖn ®Ò tµi KC.04-34 vÒ mÆt chØ ®¹o, qu¶n lý, ng©n s¸ch. Chóng t«i còng xin tr©n träng c¶m ¬n: - ViÖn Di truyÒn N«ng nghiÖp. - ViÖn Lóa §ång B»ng S«ng Cöu Long. - Ph©n ViÖn KhÝ t−îng Thuû v¨n vµ M«i tr−êng, TP.
- C«ng ty Cæ phÇn ®Çu t− vµ ph¸t triÓn C«ng nghÖ (TECKEY JSC). Cïng víi c¸c ®¬n vÞ nh−: ViÖn Ch¨n nu«i, ViÖn C«ng nghÖ Sinh häc, Trung t©m Quan Tr¾c vµ D÷ liÖu M«i tr−êng, Côc b¶o vÖ M«i tr−êng, Trung t©m C«ng nghÖ Sinh häc - §H Quèc gia Hµ Néi, Tr−êng §H N«ng nghiÖp I, …. ®· gióp ®ì, t¹o ®iÒu kiÖn thuËn lîi cho chóng t«i trong nghiªn cøu khoa häc, c«ng nghÖ vµ cËp nhËt c¸c kÕt qu¶ khoa häc hiÖn cã t¹i ViÖt Nam. 5 Danh môc c¸c ký hiÖu vµ c¸c ch÷ viÕt t¾t aad: aldehyde alcohol dehydrogenase ADN: axÝt deoxyribonucleic cADN: axÝt deoxyribonucleic bæ trî ALS: Enzym Acetolactate synthase ARN: axÝt Ribonucleic bla: beta-galactosidase Bt: Bacillus thuringensis CaMV: Virót kh¶m sóp l¬ (Cauliflower mosaic virus) CDPK: Calcium-dependent protein kinase cM: Centimorgan CP4 EPSPS: 5-Enolpyruvylshokimate-3-phosphate synthase CS: Céng sù CSDL: C¬ së d÷ liÖu ECB: European Corn Borer (S©u ®ôc th©n ng« Ch©u ¢u) ELISA: Enzyme linked immunosorbant assay (Ph©n tÝch chÊt hÊp phô miÔn dÞch g¾n kÕt enzym) FDA: C¬ quan qu¶n lý thuèc vµ thùc phÈm Mü GM: BiÕn ®æi di truyÒn (BiÕn ®æi gen) GMCs: C©y trång biÕn ®æi gen (Genetically Modified Crops) GMMs: Vi sinh vËt biÕn ®æi gen (Genetically Modified Microorganisms) GMOs: Sinh vËt biÕn ®æi gen (Genetically Modified Organisms) GmFad 2-1: delta-12 Desaturase gox: Glyphosate oxidoreductase GS: Gen Glutamine synthetase GUS: β-D-Glucuronidase HPLC: S¾c ký láng cao ¸p NIR: Phæ hång ngo¹i gÇn (Near infrared spectroscopy) T-NOS: Terrminator Nopaline synthase nptII: Neomycin phosphotransferase mARN: ARN th«ng tin 6 PAT hay bar: phosphinothricin-N-acetyltransferase PCR: Ph¶n øng trïng hîp (Polymerase Chain Reaction) PCB: Chlorinated polychlorinated biphenyls pmi: Phosphomanose isomerase QC-PCR: Quantitative competitive Polymerase Chain Reaction (PCR c¹nh tranh ®Þnh l−îng) QTL: Quantitative trait loci rBGH: Hoocmon sinh tr−ëng SQL: Structured Query Language (Ng«n ng÷ vÊn ®¸p do IBM so¹n th¶o ®−îc sö dông réng r·i trong hÖ thèng m¸y tÝnh) SSR: Simple Sequence Repeat TCE: Trichloroethylene 7 Môc lôc Më ®Çu ………………………………………………………………….
1 Ch−¬ng 1: tæng quan tµi liÖu. Kh¸i niÖm vÒ GMO. T×nh h×nh th−¬ng m¹i ho¸ sinh vËt biÕn ®æi gen. T×nh h×nh nghiªn cøu vµ th−¬ng m¹i ho¸ c©y trång biÕn ®æi gen.
Thùc tr¹ng nghiªn cøu ®éng vËt biÕn ®æi gen …………………………. Thùc tr¹ng nghiªn cøu vi sinh vËt biÕn ®æi gen ………………………. VÊn ®Ò an toµn vµ rñi ro cña sinh vËt biÕn ®æi gen. C¸c ph−¬ng ph¸p x¸c ®Þnh GMOs ………………………….
Ph−¬ng ph¸p x¸c ®Þnh dùa trªn c¬ së ADN …………………………… 19 1. Kü thuËt PCR ®Þnh tÝnh. PCR ®iÓm cuèi ®Þnh l−îng (Quantitative End-point PCR) …………. PCR ®Þnh l−îng xö lý sè liÖu th«ng qua m¸y tÝnh (Quantitative Real-time PCR) ………………………….
Kü thuËt Southern Blot ……………………………………………. Kü thuËt nhËn biÕt GMOs dùa trªn c¬ së protein ……………………. Kü thuËt ph©n tÝch ELISA …………………………………………. Kü thuËt d¶i ch¶y bªn ………………………………………….
Kü thuËt Western blot …………………………………………. NhËn biÕt GMOs theo tû lÖ nhá …………………………………. Tæng quan vÒ thiÕt kÕ måi, mÉu dß ®Ó nhËn biÕt GMOs. X©y dùng c¬ së d÷ liÖu vµ thiÕt kÕ phÇn mÒm ………… 29 1.
Ph©n lo¹i c¬ së d÷ liÖu ………………………………………………… 29 1. Tæng quan vÒ vÊn ®Ò x©y dùng c¬ së d÷ liÖu vµ thiÕt kÕ phÇn mÒm …… 30 1. Tæng quan vÒ nghiªn cøu vµ sù ph¸t triÓn cña m¹ng Web vµ CSDL. øng dông tin sinh häc ®Ó gi¶i tr×nh tù gen.
tæng quan vÒ lËp b¶n ®å gen lóa ………. Sö dông SSR trong lËp b¶n ®å gen lóa ………. T×nh h×nh nghiªn cøu lËp b¶n ®å gen kh¸ng ®¹o «n. T×nh h×nh nghiªn cøu lËp b¶n ®å gen chÞu h¹n.
37 8 Ch−¬ng 2: vËt liÖu vµ ph−¬ng ph¸p nghiªn cøu ……………. vËt liÖu nghiªn cøu ……………………………………………. C¸c dßng, gièng sö dông trong nghiªn cøu ……………………. C¸c gen sö dông trong thiÕt kÕ c¸c cÆp måi vµ mÉu dß ……………….
C¸c cÆp måi sö dông trong ph¶n øng PCR vµ c¸c bé kit nhËn biÕt GMOs 40 2. C¸c phÇn mÒm sö dông trong nghiªn cøu vµ x©y dùng Web …………. Ph−¬ng ph¸p nghiªn cøu ………………………………………. X©y dùng c¬ së d÷ liÖu vµ thiÕt kÕ phÇn mÒm ……………………….
ThiÕt kÕ måi PCR, thiÕt kÕ mÉu dß cho viÖc ph¸t hiÖn mét sè gen phæ biÕn ®−îc chuyÓn vµo c©y trång ……………………………………………. ThiÕt kÕ vµ kiÓm tra måi ……………………………………………. Ph−¬ng ph¸p ph¸t hiÖn GMOs …………………………………………. Ph−¬ng ph¸p t¸ch chiÕt ADN ……………………………………….
Ph¶n øng PCR ………………………………………………………. X¸c ®Þnh GMOs b»ng que thö miÔn dÞch ELISA …………………… 53 2. X¸c ®Þnh GMOs nhê kü thuËt lai ph©n tö ADN (Southern blot) …… 54 2. Gi¶i tr×nh tù mét sè gen ®· ®−îc sö dông trong biÕn n¹p GMOs …….
øng dông tin sinh häc ®Ó lËp b¶n ®å chØ thÞ ph©n tö c¸c gen cã liªn quan ®Õn bÖnh ®¹o «n ë lóa Dù chiªm vµ tÝnh tr¹ng kh¸ng h¹n ë lóa LC93-1 ……. LËp b¶n ®å gen kh¸ng bÖnh ®¹o «n ë lóa Dù chiªm. LËp b¶n ®å gen chÞu h¹n ë lóa LC93-1. 57 Ch−¬ng 3: kÕt qu¶ vµ th¶o luËn ……………………………….
kÕt qu¶ thu thËp th«ng tin vÒ sinh vËt biÕn ®æi gen … 59 3. Th«ng tin vÒ mét sè c©y trång biÕn ®æi gen …………………………. §Ëu t−¬ng biÕn ®æi gen ……………………………………………. C¸c dßng ng« biÕn ®æi gen ………………………………………….