Khóa luận tốt nghiệp công nghệ sinh học ứng dụng bức xạ gamma co 60 tạo oligochitosan tan nước và đánh giá hiệu quả tăng trưởng trên cây hoa lan dendrobium in vitro

Khóa luận nghiên cứu ứng dụng bức xạ gamma Co-60 trong sản xuất oligochitosan tan nước và hiệu quả tăng trưởng cây hoa lan dendrobium in vitro.

• Tác giả: Võ Ngọc Kim Ngân
• Người hướng dẫn: PGS. Lê Quang Luân
• Trường học: Trường Đại Học Nông Lâm
• Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học
• Đề tài: Nghiên Cứu Ứng Dụng Bức Xạ Gamma Co-60 Trong Sản Xuất Oligochitosan Tan Nước Và Tác Động Đến Sự Phát Triển Của Cây Hoa Lan Dendrobium
• Loại tài liệu: khóa luận tốt nghiệp
• Năm xuất bản: 2018 - 2022
• Địa điểm: Thủ Đức

Mục lục chi tiết

• LỜI CẢM ƠN
• XÁC NHẬN VÀ CAM ĐOAN
• TÓM TẮT
• ABSTRACT
• 1. CHƯƠNG 1: MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI
• 1.1. Mục tiêu của đề tài
• 1.2. Nội dung thực hiện
• 2. CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 2.1. Giới thiệu về oligochitosan
• 2.2. Cấu trúc và nguồn thu nhận
• 2.3. Hoạt tính sinh học
• 2.4. Hoạt tính kích thích tăng trưởng
• 3. CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
• 3.1. Thời gian và địa điểm nghiên cứu
• 3.2. Sơ đồ tổng thể nội dung nghiên cứu
• 4. CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 4.1. Chế tạo oligochitosan tan nước bằng phương pháp chiếu xạ
• 4.2. Xác định đặc trưng cấu trúc của oligochitosan tan nước chế tạo được
• 4.2.1. Quang phổ tử ngoại khả kiến UV-Vis
• 4.2.2. Quang phổ hồng ngoại FTIR (Fourier-transform infrared spectroscopy)
• 4.2.3. Phổ nhiễu xạ tia X (XRD)
• 4.3. Sự suy giảm khối lượng phân tử của chitosan sau chiếu xạ
• 4.4. Đánh giá hiệu quả tăng cường sinh trưởng của chế phẩm oligochitosan tan nước trên hoa lan Dendrobium nuôi cây mô
• KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO
• DANH SÁCH CHỮ VIẾT TẮT
• DANH SÁCH CÁC BẢNG
• DANH SÁCH CÁC HÌNH

Tóm tắt

I. Tổng quan về ứng dụng bức xạ gamma Co 60 trong oligochitosan

Bức xạ gamma Co-60 đã được nghiên cứu và ứng dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực, đặc biệt là trong sản xuất oligochitosan (OCTS) tan nước. Oligochitosan là một sản phẩm có nguồn gốc từ chitosan, có khả năng hòa tan tốt và có nhiều ứng dụng trong nông nghiệp, đặc biệt là trong nuôi cấy mô tế bào thực vật. Nghiên cứu này nhằm mục đích tìm hiểu hiệu quả của bức xạ gamma Co-60 trong việc tạo ra oligochitosan và tác động của nó đến sự phát triển của cây hoa lan Dendrobium.

1.1. Bức xạ gamma Co 60 và ứng dụng trong nông nghiệp

Bức xạ gamma Co-60 được sử dụng để cắt mạch chitosan, tạo ra oligochitosan có khối lượng phân tử thấp hơn. Điều này giúp tăng cường khả năng hòa tan và hoạt tính sinh học của sản phẩm, từ đó nâng cao hiệu quả trong nuôi cấy mô thực vật.

1.2. Oligochitosan và vai trò trong phát triển thực vật

Oligochitosan có khả năng kích thích sự phát triển của thực vật, giúp tăng cường khả năng sinh trưởng và kháng bệnh. Nghiên cứu cho thấy oligochitosan có thể thúc đẩy sự phát triển của cây hoa lan Dendrobium, một trong những loại hoa lan được ưa chuộng.

II. Thách thức trong sản xuất oligochitosan từ chitosan

Mặc dù chitosan là một nguyên liệu quý giá, nhưng việc sản xuất oligochitosan từ chitosan gặp nhiều thách thức. Các phương pháp truyền thống thường gây ô nhiễm môi trường và có hiệu suất thu nhận thấp. Do đó, cần tìm kiếm các phương pháp hiệu quả hơn để sản xuất oligochitosan.

2.1. Các phương pháp cắt mạch chitosan hiện tại

Có nhiều phương pháp cắt mạch chitosan như hóa học, vật lý và sinh học. Tuy nhiên, phương pháp hóa học thường gây ô nhiễm và phương pháp sinh học gặp khó khăn trong việc kiểm soát khối lượng phân tử.

2.2. Tác động của bức xạ gamma đến chất lượng oligochitosan

Bức xạ gamma Co-60 có thể cắt mạch chitosan một cách hiệu quả mà không làm giảm hoạt tính sinh học của sản phẩm. Điều này giúp nâng cao hiệu suất thu nhận oligochitosan và giảm thiểu ô nhiễm môi trường.

III. Phương pháp chiếu xạ gamma Co 60 trong sản xuất oligochitosan

Phương pháp chiếu xạ gamma Co-60 được áp dụng để tạo ra oligochitosan tan nước. Nghiên cứu đã chỉ ra rằng việc sử dụng bức xạ gamma kết hợp với H2O2 có thể tối ưu hóa quá trình cắt mạch chitosan, từ đó nâng cao hiệu suất thu nhận oligochitosan.

3.1. Quy trình chiếu xạ chitosan

Quy trình chiếu xạ chitosan bao gồm việc ngâm chitosan trong dung dịch H2O2 và chiếu xạ bằng bức xạ gamma Co-60. Các điều kiện chiếu xạ được tối ưu hóa để đạt được hiệu suất cao nhất.

3.2. Đặc trưng cấu trúc của oligochitosan

Các mẫu oligochitosan sau khi chiếu xạ được phân tích bằng các phương pháp như UV-Vis, FTIR và XRD để xác định đặc trưng cấu trúc. Kết quả cho thấy oligochitosan có cấu trúc tương tự như chitosan nhưng có khối lượng phân tử thấp hơn.

IV. Tác động của oligochitosan đến sự phát triển của cây hoa lan Dendrobium

Nghiên cứu đã chỉ ra rằng oligochitosan tan nước có tác dụng tích cực đến sự phát triển của cây hoa lan Dendrobium. Việc bổ sung oligochitosan vào môi trường nuôi cấy giúp tăng cường hệ số nhân chồi và sinh khối của cây.

4.1. Đánh giá hiệu quả tăng trưởng trên cây Dendrobium

Kết quả nghiên cứu cho thấy nồng độ oligochitosan 90 ppm mang lại hiệu quả tốt nhất, với hệ số nhân chồi lên đến 13,16 chồi/mẫu. Điều này chứng tỏ oligochitosan có khả năng thúc đẩy sự phát triển của cây hoa lan.

4.2. Ảnh hưởng đến sinh khối tươi và khô

Oligochitosan không chỉ tăng cường hệ số nhân chồi mà còn làm tăng sinh khối tươi và khô của cây Dendrobium. Sinh khối tươi đạt 548,60 mg/mẫu và sinh khối khô đạt 43,20 mg/mẫu.

V. Kết luận và triển vọng nghiên cứu trong tương lai

Nghiên cứu về ứng dụng bức xạ gamma Co-60 trong sản xuất oligochitosan tan nước đã mở ra nhiều triển vọng mới trong lĩnh vực nông nghiệp. Oligochitosan không chỉ có khả năng thúc đẩy sự phát triển của cây hoa lan Dendrobium mà còn có thể được áp dụng cho nhiều loại cây trồng khác.

5.1. Tương lai của oligochitosan trong nông nghiệp

Oligochitosan có tiềm năng lớn trong việc phát triển các sản phẩm sinh học an toàn, giúp nâng cao năng suất cây trồng và giảm thiểu ô nhiễm môi trường. Nghiên cứu tiếp theo cần tập trung vào việc mở rộng ứng dụng của oligochitosan trong các loại cây trồng khác.

5.2. Đề xuất nghiên cứu tiếp theo

Cần thực hiện thêm các nghiên cứu để xác định nồng độ tối ưu của oligochitosan cho từng loại cây trồng khác nhau. Đồng thời, nghiên cứu cũng nên xem xét các phương pháp sản xuất oligochitosan hiệu quả hơn để đáp ứng nhu cầu ngày càng cao trong nông nghiệp.

Nội dung chính

Bối cảnh và vấn đề nghiên cứu

Chitosan (CTS) là một polymer tự nhiên mạch thẳng được cấu tạo từ các phân tử D-glucosamine liên kết với nhau qua cầu nối $\beta$-(1,4)-glycoside, thường được điều chế bằng phản ứng khử acetyl từ chitin có trong nguồn phụ phẩm vỏ giáp xác như tôm, cua. Mặc dù sở hữu những đặc tính sinh học ưu việt như tính tương thích sinh học cao, khả năng tự phân hủy, không gây độc và có hoạt tính kháng khuẩn tự nhiên, chitosan thương mại thường có khối lượng phân tử ($M_w$) rất lớn (khoảng 100–1200 kDa), dẫn đến độ nhớt cao và tính không tan trong nước ở môi trường trung tính (chỉ tan trong dung dịch acid loãng). Nhược điểm này hạn chế đáng kể sự hấp thu của tế bào và cản trở việc ứng dụng trực tiếp chitosan trong kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật.

Khi chitosan được cắt mạch chọn lọc thành các oligomer ngắn—gọi là oligochitosan (OCTS)—hợp chất mới hình thành có khả năng tan hoàn toàn trong nước, đồng thời bộc lộ hoạt tính sinh học vượt trội trong việc kích thích sinh trưởng và kích hoạt hệ thống tự vệ (phytoalexin) của thực vật. Các phương pháp cắt mạch truyền thống đều tồn tại những rào cản kỹ thuật riêng: phương pháp hóa học dùng acid vô cơ dễ gây ô nhiễm môi trường và hiệu suất thấp; phương pháp sinh học dùng enzyme chitosanase đặc hiệu có giá thành rất cao và khó kiểm soát khối lượng phân tử đồng nhất. Trong khi đó, việc ứng dụng bức xạ ion hóa gamma Co-60 để cắt mạch chitosan dạng bột khô đòi hỏi liều xạ rất cao (lên tới 700 kGy), dễ làm đứt gãy vòng glucopyranose và phá hủy nhóm amin chức năng. Do đó, việc ứng dụng hiệu ứng đồng vận giữa bức xạ gamma Co-60 và tác nhân oxy hóa nhẹ ($H_2O_2$ 3%) ở trạng thái ngâm trương dị thể là giải pháp tối ưu nhằm giảm liều chiếu xạ, nâng cao hiệu suất thu nhận oligochitosan tan nước mà không làm tổn hại cấu trúc phân tử.

Tại Việt Nam, hoa lan Dendrobium là một trong hai loài phong lan thương mại được xuất khẩu và tiêu thụ mạnh nhất. Tuy nhiên, phong lan nói chung và giống Dendrobium nói riêng có tốc độ sinh trưởng và nhân giống chậm trong điều kiện in vitro. Việc bổ sung các chế phẩm sinh học tự nhiên, an toàn để thay thế các chất điều hòa sinh trưởng hóa học tổng hợp, qua đó gia tăng hệ số nhân chồi và chất lượng cây giống trước khi chuyển ra vườn ươm, là nhu cầu cấp thiết của ngành công nghệ sinh học nông nghiệp.

Khóa luận được thực hiện nhằm giải quyết các mục tiêu và nhiệm vụ cụ thể:

• Mục tiêu của đề tài: Chế tạo được chế phẩm oligochitosan có tác dụng tăng trưởng thực vật bằng phương pháp chiếu xạ kết hợp xử lý $H_2O_2$ ứng dụng trong nuôi cấy mô tế bào thực vật.
• Các nội dung nghiên cứu (được đánh số theo văn bản):
  1. Nội dung 1: Chế tạo oligochitosan tan nước bằng phương pháp chiếu xạ.
  2. Nội dung 2: Xác định đặc trưng cấu trúc của oligochitosan tan nước chế tạo được.
  3. Nội dung 3: Đánh giá hiệu quả tăng cường sinh trưởng của chế phẩm oligochitosan tan nước trên hoa lan Dendrobium nuôi cấy mô.

Đối tượng và phạm vi nghiên cứu:

• Đối tượng nghiên cứu: Chitosan ban đầu ($M_w \approx 608,5\text{ kDa}$), chế phẩm oligochitosan tan nước sau chiếu xạ, và cụm chồi hoa lan Dendrobium giai đoạn in vitro ($1 \times 1\text{ cm}$).
• Phạm vi thời gian: Nghiên cứu được thực hiện từ tháng 8/2022 đến tháng 12/2022.
• Phạm vi không gian: Phòng Công nghệ Sinh học Vật liệu và Nano, Trung tâm Công nghệ Sinh học Thành phố Hồ Chí Minh (2374 Quốc Lộ 1A, phường Trung Mỹ Tây, Quận 12, TP. Hồ Chí Minh).

Cơ sở lý thuyết và phương pháp

Khung lý thuyết và cơ chế phản ứng

Cơ sở khoa học của đề tài dựa trên phản ứng phân ly bức xạ và hiệu ứng đồng vận (synergistic degradation) giữa bức xạ gamma ion hóa phát ra từ đồng vị Co-60 và dung dịch hydroperoxide ($H_2O_2$). Dưới tác dụng của tia gamma, nước và $H_2O_2$ bị phân ly tạo ra các electron solvat hóa ($e_{aq}^-$) cùng các gốc tự do hydroxyl ($\cdot\text{OH}$) có tính oxy hóa cực mạnh theo các phản ứng: $$H_2O \xrightarrow{\gamma} H_2, H_2O_2, H^\cdot, \cdot\text{OH}, e_{aq}^-, H_3O^+$$ $$e_{aq}^- + H_2O_2 \rightarrow \cdot\text{OH} + OH^-$$ $$H^\cdot + H_2O_2 \rightarrow H_2O + \cdot\text{OH}$$

Các gốc tự do $\cdot\text{OH}$ nhanh chóng tấn công, bứt nguyên tử hydro tại các liên kết C-H trên mạch phân tử chitosan, hình thành các gốc tự do carbohydrate trung gian. Sự chuyển vị tiếp theo của các gốc tự do này dẫn đến việc bẻ gãy có chọn lọc liên kết $\beta$-(1,4)-glycoside mà không phá hủy cấu trúc khung vòng glucopyranose hay nhóm amin (-$NH_2$). Về mặt sinh học, oligochitosan tan nước đóng vai trò như một phân tử kích kháng thực vật (oligosaccharin), kích hoạt biểu hiện các nhóm gen đề kháng và các enzyme chuyển hóa nội sinh (chitinase, chitosanase, glucanase, phenylalanine ammonia lyase), từ đó thúc đẩy phân chia tế bào và gia tăng sinh khối chồi.

Phương pháp nghiên cứu thực nghiệm và nguồn dữ liệu

• Phương pháp chế tạo OCTS tan nước: Sử dụng 500 g bột CTS ban đầu ($M_w \approx 608,5\text{ kDa}$) ngâm trương hoàn toàn trong 3000 mL dung dịch $H_2O_2$ 3% trong 8 giờ. Mẫu sau ngâm trương được chiếu xạ bằng nguồn gamma Co-60 GC 5000 (BRIT, Ấn Độ) ở các dải liều 50, 75 và 100 kGy. Song song đó, 500 g CTS ngâm trong 3000 mL nước cất được chiếu xạ ở trạng thái bột với liều cao 700 kGy để làm đối chứng so sánh hiệu quả đồng vận. Hỗn hợp sau chiếu xạ được ly tâm ở tốc độ 9000 vòng/phút trong 30 phút tại 4°C để tách dịch tan, sau đó làm khô trên máy đông khô công suất lớn (Đức), nghiền mịn và xác định hiệu suất thu nhận theo công thức $H(%) = (M_1 / M_0) \times 100%$.
• Phương pháp xác định đặc trưng cấu trúc:
  • Quang phổ tử ngoại khả kiến (UV-Vis): Đo phổ dung dịch OCTS pha loãng 0,05% (w/v) trong nước khử ion trên máy Genesys 10S UV-Vis (Thermo, Mỹ) ở bước sóng 200–500 nm.
  • Quang phổ hồng ngoại biến đổi Fourier (FTIR): Phân tích các liên kết chức năng trên máy FTIR-4700 (Jasco, Nhật Bản) với mẫu ép viên nén KBr 1% trong dải số sóng 4000–500 $\text{cm}^{-1}$.
  • Nhiễu xạ tia X (XRD): Đánh giá độ tinh thể trên hệ thống Bruker D8 Advance ECO (Đức) dùng bức xạ $CuK\alpha$ ($\lambda = 1,5406\text{ \AA}$, 40 kV, 25 mA), góc quét $2\theta$ từ 20° đến 80° với bước nhảy 0,05°.
  • Sắc ký gel thấm qua (GPC): Xác định khối lượng phân tử trung bình ($M_w$) trên hệ thống Agilent e2965 (Waters Ultrahydrogel columns 250 & 500, đầu dò RID W410), dung môi rửa giải đệm acetic/acetate 0,25 M, chuẩn ngoại Pullulan.
• Phương pháp khảo nghiệm sinh học in vitro trên lan Dendrobium:
  • Bố trí thí nghiệm hoàn toàn ngẫu nhiên (CRD) gồm 7 nghiệm thức nồng độ OCTS tan nước ($M_w \sim 10\text{ kDa}$): 0 ppm (đối chứng), 15, 30, 45, 60, 75 và 90 ppm.
  • Môi trường cơ bản: Môi trường MS (Murashige and Skoog, 1962) bổ sung 1 ppm chất điều hòa sinh trưởng 6-Benzylaminopurine (BA). Mỗi nghiệm thức gồm 3 bình nuôi cấy, 5 mẫu cụm chồi kích thước $1 \times 1\text{ cm}$/bình, lặp lại 3 lần. Nuôi cấy theo dõi trong 7 tuần.
• Xử lý số liệu: Thu thập và tính toán số liệu trên Microsoft Excel; phân tích phương sai ANOVA một yếu tố và kiểm tra sự khác biệt giữa các nghiệm thức bằng phép thử Duncan ở mức ý nghĩa $p < 0,05$ qua phần mềm SPSS 20.0.

Nội dung chính theo từng chương

CHƯƠNG 1. MỞ ĐẦU

Chương này nêu bật tính cấp thiết của việc tìm kiếm các chế phẩm sinh học kích thích tăng trưởng có nguồn gốc tự nhiên thay thế hóa chất trong nhân giống in vitro hoa lan Dendrobium. Tác giả xác lập rõ mục tiêu chế tạo oligochitosan tan nước bằng phương pháp chiếu xạ gamma Co-60 phối hợp $H_2O_2$ và phân định rõ 3 nội dung nghiên cứu thực nghiệm cần giải quyết.

CHƯƠNG 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU

Chương tổng quan tập trung hệ thống hóa cơ sở dữ liệu học thuật gồm 3 mảng kiến thức:

1. Tổng quan về Chitosan và Oligochitosan: Nguồn gốc chiết xuất từ vỏ giáp xác, cấu trúc phân tử, khối lượng phân tử, độ deacetyl hóa (DDA), tính chất vật lý và phổ hoạt tính sinh học đa dạng (kích thích sinh trưởng thực vật, kích kháng phytoalexin, ức chế vi nấm gây bệnh như Colletotrichum capsici, kháng vi khuẩn E. coli, S. aureus, chống oxy hóa gốc tự do ABTS, chống khối u S180).
2. Các phương pháp cắt mạch chitosan: Đánh giá ưu nhược điểm của phương pháp hóa học, sinh học và vật lý; phân tích sâu cơ chế phân ly bức xạ và hiệu ứng đồng vận của tia gamma Co-60 khi có mặt $H_2O_2$ trong việc hạ thấp liều chiếu và bảo vệ nhóm chức.
3. Đặc điểm sinh học hoa lan Dendrobium và tình hình nghiên cứu: Đặc điểm thực vật học, sinh thái của giống lan Dendrobium; tổng hợp các công bố trong và ngoài nước về hiệu quả của OCTS trên cây khoai lang, cà phê, cà chua, ớt, khoai tây và một số loài hoa lan (Dendrobium lindleyi).

CHƯƠNG 3. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP

Trình bày chi tiết nguồn gốc hóa chất (CTS ban đầu $M_w \approx 608,5\text{ kDa}$, $H_2O_2$ của hãng Scharlau), chủng giống lan Dendrobium do Phòng Công nghệ Sinh học Vật liệu và Nano cung cấp, cùng hệ thống máy móc phân tích chuyên sâu (nguồn chiếu xạ gamma GC 5000, máy GPC Agilent e2965, UV-Vis Genesys 10S, FTIR-4700 Jasco, XRD Bruker). Thiết lập sơ đồ quy trình tổng thể từ khâu ngâm trương, chiếu xạ, ly tâm tách dịch, đông khô thành phẩm đến các quy trình chuẩn bị mẫu đo phổ và quy cách bố trí thí nghiệm in vitro (7 nghiệm thức nồng độ, 3 lần lặp lại, thời gian theo dõi 7 tuần).

CHƯƠNG 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Tác giả trình bày và thảo luận toàn bộ các dữ liệu thực nghiệm thu được qua 4 phần chính:

• Chế tạo OCTS tan nước: Sự biến đổi màu sắc mẫu trước và sau chiếu xạ; xác định hiệu suất thu nhận sản phẩm tan nước ở các điều kiện chiếu xạ khác nhau.
• Xác định đặc trưng cấu trúc: Phân tích phổ UV-Vis ghi nhận đỉnh hấp thụ mới tại bước sóng 273 nm do cắt liên kết glycoside; phổ FTIR khẳng định các đỉnh dao động đặc trưng của khung phân tử chitosan được duy trì nguyên vẹn ở cả mẫu chiếu xạ dung dịch và dạng bột; giản đồ XRD chứng minh cấu trúc kết tinh của chitosan không bị xáo trộn khi xuất hiện đỉnh đặc trưng tại $2\theta \approx 19,8^\circ$.
• Sự suy giảm khối lượng phân tử ($M_w$): Dữ liệu GPC chỉ ra sự sụt giảm phân tử lượng từ 608,5 kDa xuống dưới 20 kDa ở toàn bộ các nghiệm thức chiếu xạ; mẫu chiếu xạ 50 kGy kết hợp 3% $H_2O_2$ đạt $M_w \approx 10\text{ kDa}$.
• Khảo nghiệm sinh học trên lan Dendrobium: Đánh giá tác động của chế phẩm OCTS 10 kDa ở các mức nồng độ từ 0 đến 90 ppm lên 3 chỉ tiêu: hệ số nhân chồi, khối lượng sinh khối tươi và khối lượng sinh khối khô sau 7 tuần nuôi cấy in vitro.

CHƯƠNG 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ

Tổng kết các kết quả định lượng về hiệu suất thu hồi sản phẩm tan nước, đặc trưng cấu trúc hóa lý và nồng độ tối ưu bổ sung vào môi trường nuôi cấy mô lan Dendrobium; đồng thời đưa ra 2 kiến nghị cụ thể cho các hướng phát triển tiếp theo.

Kết quả và đóng góp

Dữ liệu thực nghiệm chính

Quá trình chiếu xạ đồng vận đã chứng minh tính ưu việt rõ rệt so với phương pháp chiếu xạ dạng bột khô truyền thống. Dưới tác dụng kết hợp của tia gamma Co-60 và $H_2O_2$ 3%, hiệu suất thu hồi oligochitosan tan nước tăng dần theo liều chiếu xạ, đồng thời khối lượng phân tử giảm mạnh từ giá trị ban đầu 608,5 kDa xuống dưới 10 kDa.

Điều kiện xử lý	Liều xạ (kGy)	Hiệu suất thu nhận (%)	Khối lượng phân tử $M_w$ (kDa)
Dạng bột (ngâm $H_2O$)	700	$22,84 \pm 0,14^c$	9,11
Trương bão hòa 3% $H_2O_2$	50	$21,80 \pm 0,21^d$	10,00
Trương bão hòa 3% $H_2O_2$	75	$24,07 \pm 0,09^b$	8,80
Trương bão hòa 3% $H_2O_2$	100	$27,94 \pm 0,19^a$	6,70

Ghi chú: Các ký tự chữ cái khác nhau trong cùng một cột biểu thị sự khác biệt có ý nghĩa thống kê ($p < 0,05$).

Các phép phân tích hóa lý xác nhận:

• Phổ UV-Vis của OCTS tan nước hình thành một đỉnh hấp thụ mới tại $\lambda = 273\text{ nm}$, là bằng chứng cho việc cắt đứt liên kết $\beta$-(1,4)-glycoside.
• Phổ FTIR duy trì toàn vẹn các dải hấp thụ: $3343\text{ cm}^{-1}$ (kéo dài O-H và N-H), $2927 - 2876\text{ cm}^{-1}$ (C-H), $1645\text{ cm}^{-1}$ (C=O amide I), $1543\text{ cm}^{-1}$ (N-H amide II), $1153\text{ cm}^{-1}$ (liên kết cầu C-O-C) và $1028\text{ cm}^{-1}$ (dao động kéo dài C-O). Không xuất hiện nhóm chức lạ, chứng minh phương pháp không làm phá hủy cấu trúc cơ bản của chitosan.
• Giản đồ XRD giữ nguyên đỉnh kết tinh ở góc $2\theta \approx 19,8^\circ$, khẳng định dạng hình học tinh thể được bảo toàn.

Trong khảo nghiệm sinh học, chế phẩm OCTS tan nước ($M_w \approx 10\text{ kDa}$, tạo ra từ liều 50 kGy kết hợp 3% $H_2O_2$) cho thấy ảnh hưởng tích cực rõ rệt lên sự phát triển cụm chồi lan Dendrobium in vitro sau 7 tuần nuôi cấy:

Nồng độ OCTS (ppm)	Hệ số nhân chồi (chồi/mẫu)	Tăng so với ĐC (%)	Sinh khối tươi (mg/mẫu)	Tăng so với ĐC (%)	Sinh khối khô (mg/mẫu)	Tăng so với ĐC (%)
0 (ĐC)	$8,03 \pm 0,32^c$	—	$437,40 \pm 24,40^c$	—	$32,17 \pm 3,31^c$	—
15	$8,41 \pm 0,22^c$	+4,7%	$422,80 \pm 9,26^d$	-3,3%	$36,97 \pm 1,17^{bc}$	+14,9%
30	$8,05 \pm 0,52^c$	+0,2%	$489,70 \pm 2,86^b$	+11,9%	$38,03 \pm 0,87^{bc}$	+18,2%
45	$8,51 \pm 0,18^c$	+6,0%	$477,40 \pm 8,50^{bc}$	+9,1%	$39,00 \pm 1,65^{ab}$	+21,2%
60	$8,25 \pm 0,93^c$	+2,7%	$449,10 \pm 14,80^{cd}$	+2,7%	$37,27 \pm 0,48^{bc}$	+15,9%
75	$11,47 \pm 0,68^b$	+42,8%	$452,00 \pm 15,30^{bcd}$	+3,3%	$38,37 \pm 1,39^{bc}$	+19,3%
90	$13,16 \pm 0,34^a$	+63,9%	$548,60 \pm 7,50^a$	+25,4%	$43,23 \pm 0,59^a$	+34,4%

Ghi chú: Các ký tự chữ cái trong cùng cột thể hiện sự khác biệt có ý nghĩa thống kê ($p < 0,05$).

Đóng góp học thuật và giải pháp đề xuất

• Về mặt công nghệ: Khóa luận chứng minh tính khả thi của việc ứng dụng hiệu ứng đồng vận gamma Co-60/ $H_2O_2$ 3% để cắt mạch chitosan. Chỉ cần liều xạ 50 kGy (thấp hơn 14 lần so với mức 700 kGy khi chiếu dạng bột), hiệu suất thu hồi sản phẩm tan nước đã đạt 21,80% và phân tử lượng giảm về khoảng 10 kDa, giúp tiết kiệm thời gian, chi phí năng lượng và bảo toàn hoạt tính sinh học của chế phẩm.
• Về mặt ứng dụng thực tiễn: Đề xuất bổ sung oligochitosan tan nước ($M_w \approx 10\text{ kDa}$) ở nồng độ tối ưu 90 ppm vào môi trường MS (có 1 ppm BA) nhằm thúc đẩy tối đa khả năng nhân chồi (đạt 13,16 chồi/mẫu, tăng 63,9%) và tăng tích lũy sinh khối trên giống lan Dendrobium. Cụm chồi phát triển khỏe mạnh, không xuất hiện hiện tượng mọng nước, cung cấp nguồn cây con đạt tiêu chuẩn sinh lý cao cho các giai đoạn tiếp theo.

Hạn chế và hướng nghiên cứu tiếp

Khóa luận được thực hiện nghiêm túc nhưng tác giả cũng chỉ rõ những giới hạn nghiên cứu trong khuôn khổ thời gian thực nghiệm:

• Hạn chế: Nghiên cứu mới chỉ tập trung đánh giá hiệu ứng tăng trưởng (nhân chồi và sinh khối) của mẫu OCTS $M_w \sim 10\text{ kDa}$ trên đối tượng duy nhất là cụm chồi hoa lan Dendrobium in vitro; chưa tiến hành khảo sát hoạt tính kích kháng bệnh thực tế trên cây mô lan trước các chủng vi sinh vật gây hại, đồng thời chưa mở rộng khảo nghiệm trên các loài cây trồng khác.
• Đề nghị/Hướng nghiên cứu tiếp (theo nguyên văn của tác giả):
  1. Cần tiếp tục khảo sát khả năng tăng cường hiệu ứng kích kháng bệnh của OCTS chế tạo được trên mẫu lan Dendrobium nuôi cấy in vitro.
  2. Khảo sát hiệu ứng tăng trưởng của OCTS tan nước đối với các loại cây khác trong điều kiện in vitro.

Giá trị tham khảo

Tài liệu khóa luận mang lại giá trị tham khảo thiết thực cho các nhóm đối tượng:

• Sinh viên và học viên cao học ngành Công nghệ Sinh học, Hóa sinh và Khoa học Cây trồng: Tài liệu cung cấp quy trình thực nghiệm hoàn chỉnh về kỹ thuật biến tính bức xạ polymer tự nhiên kết hợp phương pháp hóa học nhẹ nhàng, cùng hệ thống phương pháp phân tích vật liệu sinh học đa dạng (UV-Vis, FTIR, XRD, GPC).
• Các phòng thí nghiệm và cơ sở nuôi cấy mô tế bào thực vật (đặc biệt là vi nhân giống hoa lan): Khóa luận cung cấp thông số kỹ thuật chi tiết về công thức môi trường bổ sung OCTS (90 ppm kết hợp 1 ppm BA) giúp tối ưu hóa hệ số nhân chồi và sinh khối cho lan Dendrobium, mở ra hướng thay thế hoặc giảm thiểu các hóa chất điều hòa sinh trưởng tổng hợp ngoại sinh.
• Các phần đáng tham khảo nhất trong văn bản: Chương 3 (quy trình ngâm trương và điều kiện ly tâm - đông khô thu hồi sản phẩm tan nước) và Chương 4 (các bảng số liệu phân tích thống kê Duncan về sinh khối tươi, sinh khối khô và hệ số nhân chồi).

Câu hỏi thường gặp

1. Tại sao cần kết hợp dung dịch $H_2O_2$ 3% với bức xạ gamma Co-60 thay vì chiếu xạ chitosan ở dạng bột khô đơn thuần?

Chiếu xạ chitosan ở dạng bột khô đòi hỏi liều xạ rất cao (lên đến 700 kGy) để đạt được độ tan trong nước, nhưng hiệu suất thu nhận chỉ đạt 22,84% và dễ gây biến tính sâu sắc mạch polymer (phá vỡ vòng glucopyranose, mất nhóm amin). Khi ngâm trương trong dung dịch $H_2O_2$ 3%, hiệu ứng đồng vận sinh ra lượng lớn gốc tự do $\cdot\text{OH}$ giúp cắt mạch nhanh chóng liên kết $\beta$-(1,4)-glycoside ở liều chiếu xạ thấp hơn rất nhiều (50–100 kGy), đạt hiệu suất thu nhận từ 21,80% đến 27,94% mà không làm thay đổi cấu trúc hóa học cơ bản của chitosan.

2. Cấu trúc hóa học và độ kết tinh của chitosan có bị biến đổi sau quá trình chiếu xạ cắt mạch hay không?

Dữ liệu phân tích cấu trúc khẳng định cấu trúc của chitosan không bị phá hủy. Phổ FTIR của các mẫu OCTS sau chiếu xạ ở liều 50–100 kGy kết hợp 3% $H_2O_2$ vẫn bảo tồn nguyên vẹn các đỉnh dao động đặc trưng của khung phân tử chitosan ($3343\text{ cm}^{-1}$, $2927 - 2876\text{ cm}^{-1}$, $1645\text{ cm}^{-1}$, $1543\text{ cm}^{-1}$, $1153\text{ cm}^{-1}$, $1028\text{ cm}^{-1}$) và hoàn toàn tương đồng với mẫu đối chứng 0 kGy. Phổ XRD của tất cả các mẫu đều giữ nguyên đỉnh kết tinh tại góc $2\theta \approx 19,8^\circ$, chứng tỏ trật tự tinh thể không bị biến tính.

3. Khối lượng phân tử ($M_w$) của chitosan biến đổi như thế nào sau khi chiếu xạ?

Chitosan nguyên liệu ban đầu có khối lượng phân tử rất lớn, đạt khoảng 608,5 kDa. Sau khi chiếu xạ trong điều kiện trương 3% $H_2O_2$, phân tử lượng giảm mạnh về dưới 20 kDa ở tất cả các mẫu: liều 50 kGy đạt $M_w \approx 10,0\text{ kDa}$; liều 75 kGy đạt $8,8\text{ kDa}$; và liều 100 kGy giảm còn $6,7\text{ kDa}$. Trong khi đó, mẫu chiếu xạ bột khô ở liều cực cao 700 kGy ghi nhận $M_w$ là $9,11\text{ kDa}$.

4. Nồng độ oligochitosan nào mang lại hiệu quả sinh trưởng tối ưu nhất trên hoa lan Dendrobium in vitro?

Nồng độ bổ sung tối ưu được xác định là 90 ppm (sử dụng mẫu OCTS $M_w \approx 10\text{ kDa}$). Tại nồng độ này, sau 7 tuần nuôi cấy, các chỉ tiêu phát triển của cụm chồi Dendrobium đều đạt mức cao nhất và có sự khác biệt mang ý nghĩa thống kê so với đối chứng: hệ số nhân chồi đạt $13,16 \pm 0,34$ chồi/mẫu (tăng 63,9%), sinh khối tươi đạt $548,60 \pm 7,50\text{ mg/mẫu}$ (tăng 25,4%), và sinh khối khô đạt $43,23 \pm 0,59\text{ mg/mẫu}$ (tăng 34,4%).

5. Thí nghiệm in vitro trên hoa lan Dendrobium được bố trí theo quy cách và tiêu chuẩn nào?

Thí nghiệm được thiết kế theo phương pháp hoàn toàn ngẫu nhiên (CRD) gồm 7 nghiệm thức nồng độ OCTS (0, 15, 30, 45, 60, 75, 90 ppm) trên nền môi trường MS bổ sung 1 ppm BA. Kích thước mẫu cấy ban đầu là các cụm chồi $1 \times 1\text{ cm}$. Mỗi nghiệm thức được bố trí 3 bình nuôi cấy, mỗi bình chứa 5 cụm chồi, lặp lại 3 lần và được nuôi cấy theo dõi liên tục trong thời gian 7 tuần trước khi tiến hành thu thập chỉ tiêu.

Kết luận

Khóa luận tốt nghiệp của tác giả Võ Ngọc Kim Ngân đã chế tạo thành công chế phẩm oligochitosan tan nước có khối lượng phân tử dưới 20 kDa thông qua kỹ thuật chiếu xạ gamma Co-60 (50–100 kGy) kết hợp xử lý đồng vận trong dung dịch $H_2O_2$ 3%, đạt hiệu suất thu nhận từ 21,80% đến 27,94%. Các phân tích quang phổ và nhiễu xạ tia X chứng minh chế phẩm bảo toàn được cấu trúc hóa học nguyên bản và hình thái tinh thể của chitosan, đồng thời tạo ra đỉnh hấp thụ đặc trưng tại 273 nm do sự cắt đứt liên kết $\beta$-(1,4)-glycoside. Khảo nghiệm sinh học in vitro đã xác định nồng độ bổ sung 90 ppm chế phẩm OCTS ($M_w \approx 10\text{ kDa}$) là tối ưu nhất, giúp gia tăng 63,9% hệ số nhân chồi, 25,4% sinh khối tươi và 34,4% sinh khối khô của lan Dendrobium so với đối chứng. Kết quả thực nghiệm khẳng định triển vọng ứng dụng thực tiễn của oligochitosan như một hoạt chất sinh học tự nhiên, an toàn và hiệu quả cao trong công nghệ vi nhân giống hoa lan thương phẩm.

Trích đoạn nội dung tài liệu

BỘ GIÁO DUC VÀ ĐÀO TẠO. TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHÓ HÒ CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC ỨNG DỤNG BỨC XẠ GAMMA Co-60 TẠO OLIGOCHITOSAN TAN NƯỚC VÀ ĐÁNH GIÁ HIỆU QUÁ TĂNG TRƯỞNG TRÊN CAY HOA LAN Dendrobium in vitro Nganh hoc : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực hiện : VÕ NGỌC KIM NGÂN Mã sô sinh viên : 18126104 Niên khóa : 2018 - 2022 TP. Thủ Đức, 03/2023 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO. TRUONG ĐẠI HỌC NÔNG LAM THÀNH PHO HO CHÍ MINH KHOA KHOA HỌC SINH HỌC KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP ỨNG DỤNG BỨC XẠ GAMMA Co-60 TẠO OLIGOCHITOSAN TAN NƯỚC VA ĐÁNH GIÁ HIỆU QUA TANG TRUONG TREN CAY HOA LAN Dendrobium in vitro Hướng dẫn khoa học Sinh viên thực hiện PGS.

LE QUANG LUAN Võ Ngọc Kim Ngân TP. Thu Đức, 03/2023 LỜI CẢM ƠN Đề có thé hoàn thành khóa luận này, với tat cả lòng biết ơn, tôi kính gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy PGS. Lê Quang Luân đã hướng dẫn tôi làm dé tài này. Thay đã tận tình định hướng mục tiêu đề tài, góp ý về các thí nghiệm cần được thực hiện và giúp đỡ tôi hoàn thành nghiên cứu này.

Một lần nữa tôi chân thành cảm ơn thầy và chúc thầy nhiều sức khoẻ. Con cảm ơn Ba Mẹ luôn tin tưởng và tạo điều kiện dé con có thé được tiếp tục học tập và luôn là chỗ dựa vững chắc phía sau, luôn động viên, ủng hộ và bên cạnh con những lúc con gục ngã và mệt mỏi nhất. Con cảm ơn Ba Mẹ rất nhiều. Tôi xin gửi lời cảm ơn đến Ban Giám đốc Trung tâm Công nghệ Sinh học Tp.

Hồ Chí Minh và phòng CNSH Vật liệu va Nano đã cấp kinh phí, cơ sở vật chất và tạo điều kiện dé tôi thực hiện luận văn này một cách tốt nhất. Tôi xin cảm ơn rất nhiều đến các anh chị đang làm việc tại phòng Công nghệ Sinh học Vật liệu và Nano đã giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện khóa luận. Đặc biệt, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành và sâu sắc nhất đến ThS. Phan Lê Trâm Anh và KS.

Nguyễn Văn Linh, người đã luôn đồng hành cùng tôi trong những ngày đầu thực hiện khóa luận đến lúc kết thúc. Anh, chị luôn quan tâm giúp đỡ, giải đáp thắc mắc, truyền đạt lại những kinh nghiệm và cả những kiến thức khoa học của mình cũng như luôn theo sát và luôn đôn đốc dé tôi có thé hoàn thành đúng thời hạn đề tai nay. Tôi cũng gởi lời cảm ơn các bạn sinh viên thực hiện đề tài tại đây đã giúp đỡ tôi về mặt tinh thần lẫn vật chất, luôn ủng hộ và động viên tôi trong lúc thí nghiệm gặp sai sót để tôi có thé một lần nữa hoàn thành các thí nghiệm một cách chin chu nhất. Cuối cùng, tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu Trường Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh nói chung và quý thầy cô Khoa Khoa học Sinh học nói riêng trong 4 năm vừa qua đã dạy cho tôi những kiến thức bổ ích không những giúp tôi trong quá trình thực hiện dé tai mà còn trong cả cuộc sông.

XÁC NHAN VA CAM DOAN Tôi tên Võ Ngoc Kim Ngân, MSSV: 18126104, Lớp: DH18SHB thuộc ngành Công nghệ Sinh học Trường Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh, xin cam đoan: kết quả đạt được trong khóa luận là do bản thân tôi trực tiếp thực hiện dưới sự hướng dẫn khoa học của PGS. Lê Quang Luân, các số liệu và thông tin trong nghiên cứu là hoàn toàn trung thực và khách quan. Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm trước hội đồng về những cam kết này.

Thủ Đức, ngày thang nam 2023 Người viết cam đoan (Ký và ghi rõ họ tên) Võ Ngọc Kim Ngan i TÓM TẮT Nghiên cứu được tiến hành dé tạo ra chế phẩm oligochitosan (OCTS) tan nước có tác dụng tăng trưởng thực vật ứng dụng trong nuôi cấy mô tế bào thực vật. Dé chế tạo OCTS tan nước, chitosan (CTS) ban đầu được cắt mạch di thé bằng cách ngâm trương trong 3% H;O; ở các liều xạ 50, 75 và 100 kGy. Đồng thời, CTS cũng được cắt mạch 6 dang bột với liều xạ 700 kGy và xác định liều xạ tối ưu dé tạo OCTS tan nước. Kết quả hiệu suất thu nhận OCTS tan nước sau chiếu xạ là 21,80; 24,07 và 27,94% tương ứng với các liều xạ 50; 75 va 100 kGy ở điều kiện trương trong 3% H2O> và đạt 22,84% ở liều xạ 700 kGy.

Các mau CTS sau chiếu xạ được xác định các đặc trưng cấu trúc bằng phổ UV-Vis, FTIR và XRD. Phổ UV-Vis của các mẫu OCTS tan nước đều xuất hiện đỉnh hấp thụ cực đại tại bước sóng 273 nm. Phố FTIR cho thay không có sự khác biệt về cấu trúc khi cắt mach CTS dạng bột và di thể so với CTS ban đầu. Thêm vào đó, kết qua phân tích giản đồ XRD của các mau CTS ở các điều kiện cắt mạch khác nhau nhau đều xuất hiện đỉnh tinh thé ở khoảng 20 giá trị 19,8°.

Kết quả phân tích Mw bang GPC của các mẫu OCTS sau chế tạo đều nhỏ hơn 20 kDa. Ảnh hưởng của OCTS tan nước đến sự phát triển chồi Dendrobium được đánh giá qua hệ số nhân chồi, sinh khối tươi và sinh khối khô. Kết quả nhận được cho thay OCTS tan nước sau chế tạo có khả năng thúc đây cụm chỗi lan Dendrobium in vitro phát triển tốt nhất trên môi trường nuôi cấy bổ sung OCTS tan nước ở nồng độ 90 ppm với hệ số nhân chồi lên đến 13,16 chồi/mẫu đồng thời, sinh khối tươi và sinh khối khô lần lượt đạt 548,60 và 43,20 mg/mau. Do đó, OCTS tan nước có hoạt tính thúc day tăng trưởng đối với cum choi hoa lan Dendrobium trong điêu kiện in vitro.

Từ khóa: gamma Co-60, Dendrobium, oligochitosan, tang trưởng. 1H ABSTRACT The research was conducted to prepared water-soluble oligochitosan (OCTS) products with a growth promation effect on plants for application in plant tissue culture. For preparation of water-soluble OCTS, the invitial chitosan (CTS) was degradated in 3% HaO2¿ at doses of 50, 75 and 100 kGy. CTS was also irradiated in powder at 700 kGy for inducing water- soluble OCTS.

The results showed that the contents the contents of water-soluble OCTS were about 21,8; 24,07 and 27,94% in samples irradiated at 50,75 and 100 kGy in the present of 3% HO, respectively. While the water-soluble OCTS content was only 22,4% in CTS sample irradiated in powder state at 700 kGy. The structural irradiated samples were characterized by UV-Vis, FTIR and XRD. The UV-Vis spectra of water-soluble OCTS appeared new peak at 273 nm, while the FTIR showed no differences in irradiated samples (in HaO¿ and in poweter form) compared to that of unirradiated CTS.

In addition, the XRD diagrams of all irradiated CTS showed the same crystalline peak at 19,8° (28). The results by GPC analysis also indicated that all My of water-soluble OCTS were below 20 kDa. On the other hand, the effect of water-soluble OCTS on Dendrobium shoot growth was evaluated through shoot multiplication, fresh biomass and dried biomass. The results showed that the water-soluble OCTS to promoted the best growth of Dendrobium in vitro shoots cultured on medium supplemented with water-soluble OCTS samples concentration at 90 ppm with shoot multiplication up to 13,16 shoots/sample, fresh biomass and dried biomass were 548,60 and 43,20 mg/sample, respectively.

Therefore, water-soluble OCTS prepared by gamma Co-60 irradiation in present of 3% H2O2 has potential to promote the growth of Dendrobium shoot in vitro. Keywords: gamma Co-60, Dendrobium, oligochitosan, growth. IV Trang II EE NET saecgentieooakohodgdhdigtgiElGiGgtLNGi0G0030/001831681/ 30) i XÁC NHAN VA CAM DOAN W.eesssesssseesesseseessesscsesscsecsvcseceesecsscsessesessessessessesesseteeeeessseeess ii CO es iii n0:. iv DANH SÁCH CHỮ VIET TAT .scsssessssssesssssseeesssseesssneesesneeesssneeesssnessssneesessnesessnness Vii ISINH ALS NG ccs cng cgi seam cmccsee viii TRI BAS GC ENTueeeaeeeasentniosntbinsgtDtsohgttutosl0gts68005890S0003030080008800500) ix RTI A is icacmonenervemetnistvsibensansuesseeanvunssiseseniteestboutnnrniin | 1.

Mục tiêu của đỀ tài. NGL tưng (hue Wet sa eaeagnderetrgreieoagtieI0SIS401GG1GG.HSEGTIRGIGIGPISSGG000 2 CHƯƠNG 2. TONG QUAN TALI LIỆU.-2-222222222EE2EE2EE2EE22E22E22EE22E22E22222222222222 3 PRG ge occ| eer 2 2. Cau trúc và nguồn thu han.

Hoat tinh sinh 0: 2⁄44. Một số thông số quan trong của oligochitosan. Các phương pháp cắt mach chitosan. ụ To: PURO rhấp ON TP caagaanaceiiiibiigiasoidtigagediootiiBii8tsãtpssoiigg82bi310300430:60801004080000800g4 0080: 9 nêu: F HƯƠNG PRED Vật Tý sccssenncscscmmumneenrn mma 9 Ee aa 12 BAT.ẽốốố ẽố ốc 12 2.

Nguồn gốc và phân bỐ. - 2 2 2 +S+SS+SE£SE2EE2E2192122122121121121221221211211211111 212 Xe2 12 BAD Wee di mai KH sveseensuiegriereaGtiuoigioiaiotpiiisoiogfiGgtgiBRdhiifS601G1601010008n0ug00/0 2380 13 fos 1 1Ù tình nghiện cửu trortg và rig0ÃÏ HƯỜỔ cá saaaeesoadeaudgbostuiisilagi2i3g.n0758800468458965E 13 Bete LUNE: AUR (Giữ DAIS, TÚ Ốc uesesasnarsnssnsacesscanssncsam seunssnasuseensxaenmemusaenuumcasesn os ie Vv Poets Ab FL Eee (MT 1 THNT naamusssssennvnnnnistrostgtdrNtGE03800310DIUENBRS-SUNME21750120040002003038 14 CHƯƠNG 3. VAT LIEU VA PHƯƠNG PHAP. Thời gian và địa điểm nghiên COU oo.

Vật Liệu va PONS pháp nghi CUM iscsssissncrsencresasanermeanver 1660186140401A3484,80040380/G01490000g9 6 16 3. Sơ đồ tổng thé nội dung nghiên cứu. Chế tạo oligochitosan tan nước bằng phương pháp chiếu xạ. Xác định các đặc trưng cấu trúc của.

Đánh giá hiệu quả tăng cường sinh trưởng của chế phẩm oligochitosan tan nước trên hoa lan Dendrobium nuôi cấy mô. 18 Le se 19 CHƯƠNG 4. KET QUA VÀ THẢO LUẬN.--©22©52+S2+EE+EE2EE2EE22E22E1221221223 2x 20 4. Chế tao oligochitosan tan nước bằng phương pháp chiếu xạ.

Xác định đặc trưng cấu trúc của oligochitosan tan nước chế tạo bằng phương pháp ChiẾU X. Quang phổ tử ngoại khả kiến UV-Vis. Quang phổ hồng ngoại FTIR (Fourier - transform infrared spectroscopy). Phổ nhiễu xa tia Xoo ecccceccececccscesesscsesecsesscsesecsesecsessssessesessesessssessesssesnssesessesatsessees 24 4.

Sự suy giảm khối lượng phân tử của chitosan sau chiếu xạ. Đánh giá hiệu quả tăng cường sinh trưởng của chế phẩm oligochitosan tan nước trên hoa lan Dendrobium nuôi Cay mô. KET LUẬN VA DE NGHIooo ceccececscsscsssesescscsesececsesssecsvsesececsesecevsveveeseeseees 30 eean 30 30 TÀI LIEU THAM KHAO 0.ooecccccscscssessessessessesvesessessessessesecsesseessssseesessessesesssesseeetseseesees 31 CO es 41 vi DANH SÁCH CHỮ VIET TAT BA 6 - Benzylaminopurine Co-60 Đồng vị cobalt 60 CTS Chitosan ctv Cộng tác viên DDA Độ deacetyl FTIR Quang phố hồng ngoại (Fourier Transform Infrared Spectrophotometter) GPC Sac ki gel tham qua (Gel Permeation Chromatography) MS Murashige and Skoog Mw Khối lượng phan tử NT Nghiệm thức OCTS Oligochitosan PLBs Protocorm like bodies UV-Vis Quang phổ tử ngoại khả kiến (Ultra violet — Visible Spectroscopy) XRD Nhiễu xa tia X (X - Ray diffraction) Vii DANH SÁCH CAC BANG Trang Bảng 3. Bồ trí thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng của chế phẩm OCTS tan nước đến khả năng tăng trưởng của cây hoa lan Dendrobium in vitro ở các nồng độ khác nhau.

Hiệu suất thu nhận OCTS tan nước sau chiếu xạ ở các điều kiện khác nhau. Ảnh hưởng của nồng độ OCTS tan nước lên hệ số nhân chỗồi của cụm chồi Dendrobium sau 7 tuần nuôi cấy. Ảnh hưởng của nồng độ OCTS tan nước lên sinh khối tươi của cụm chồi Dendrobium sau 7 tuần nuôi cấy. Ảnh hưởng của nồng độ OCTS tan nước lên sinh khối khô của cụm chồi Dendrobium sau 7 tuần nuôi cấy.

20 vill DANH SÁCH CÁC HÌNH Trang Hình 2. Cấu trúc hóa học của QC TS.- ¿2+ 2+S22E22E2EEEE2E1211211212121121121121 2111 Xe 3 Hình 2. Cơ chế cắt mạch bằng hiệu ứng đồng vận. DeNGrODiIUM COCSOP NA NGÀAAớợỹốớ.

Sơ đồ tông thé các nội dung nghiên cứu. CTS trước (a) và sau khi trương bão hòa (b) trong H202 3%.