ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƢỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP - TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG POLYSACCHARIDES VÀ TRITERPEN TRONG CÁC TIẾN TRÌNH NHÂN SINH KHỐI NẤM THƢỢNG HOÀNG Phellinus linteus LƢ THANH HIỀN AN GIANG, THÁNG 5 NĂM 2022 ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƢỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP - TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG POLYSACCHARIDES VÀ TRITERPEN TRONG CÁC TIẾN TRÌNH NHÂN SINH KHỐI NẤM THƢỢNG HOÀNG Phellinus linteus LƢ THANH HIỀN MÃ SỐ SV: DSH182628 CÁN BỘ HƢỚNG DẪN TS. HỒ THỊ THU BA AN GIANG, THÁNG 5 NĂM 2022 CHẤP NHẬN CỦA HỘI ĐỒNG Đề cƣơng khóa luận “ Xác định hàm lƣợng polysaccharides và triterpen trong các tiến trình nhân sinh khối nấm thƣợng hoàng Phellinus linteus”, do sinh viên Lƣ Thanh Hiền thực hiện dƣới sự hƣớng dẫn của TS. Hồ Thị Thu Ba. Tác giả đã báo cáo đề cƣơng nghiên cứu và đƣợc Hội đồng khoa học và Đào tạo thông qua ngày……………………………………………………….
Phản biên 1 Phản biện 2 TS. Đoàn Thị Minh Nguyệt ThS. Văn Viễn Lƣơng Cán bộ hƣớng dẫn TS. Hồ Thị Thu Ba i LỜI CẢM TẠ Trong suốt quá trình học tập, em cảm thấy rất tự hào và vinh hạnh vì là một sinh viên thuộc ngành Công nghệ Sinh học thuộc khoa Nông nghiệp – Tài nguyên – Thiên nhiên của trƣờng đại học An giang đã tạo điều kiện cho tôi hoàn thành tốt khóa luận tốt nghiệp.
Trƣớc tiên cho tôi chân thành cảm ơn Ban giám hiệu Trƣờng đại học An Giang và các giảng viên bộ môn ngành Công nghệ Sinh học đã dạy dỗ giúp đỡ em trong quá trình học tập 4 năm vừa qua. Tiếp theo em xin cảm ơn sâu sắc đến cô TS. Hồ Thị Thu Ba, ngƣời đã hƣớng đẫn em trong suốt quá trình thực hiện khóa luận, cô rất quan tâm, tận tình hƣớng đẫn giúp trao dồi thêm nhiều kiến thức. Tôi cảm ơn cô rất nhiều, tôi chúc cô dòi dào sức khỏe và thành công trên con đƣờng giảng dạy.
Cuối cùng tôi xin gửi lời cảm ơn đến các bạn tập thể lớp DH19SH, đã giúp đỡ em trong suốt 4 năm học vừa qua.Cùng trải qua những buổi học căng thăng, hay vui đùa. Cùng trải qua những kỉ niệm đẹp chuyến đi thực tế. Chúc các bạn tập thể DH19SH luôn khỏe mạnh và thành công trên con đƣờng sự nghiệp trong tƣơng lai.năm 2022 Ngƣời thực hiện Lƣ Thanh Hiền ii LỜI CAM KẾT Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu trong công trình nghiên cứu này có xuất xứ rõ ràng.
Những kết luận mới về khoa học của công trình nghiên cứu này chƣa đƣợc công bố trong bất kỳ nghiên cứu khác ………,ngày….tháng……năm 2022 Ngƣời thực hiện Lƣ Thanh Hiền iii TÓM TẮT Nghiên cứu “Xác định hàm lƣợng polysaccharides và triterpen trong các quá trình nhân sinh khối nấm thƣợng hoàng Phellinus linteus”. đƣợc thực hiện nhằm khảo sát sự sinh trƣởng và phát triển của tơ nấm thƣợng hoàng (Phenllinus linteus) cũng nhƣ sự hiện diện polysaccharide và triterpen trong tơ nấm qua các giai đoạn nhân giống. Kết quả nghiên cứu cho thấy, tơ nấm lan nhanh nhất trên môi trƣờng phân lập Rapper (4,15 cm) sau 7 ngày cấy nấm. Đối với môi trƣờng hạt sau 7 ngày cấy nấm, sử dung hạt lúa (6,01 cm) để cấy sang môi trƣờng nuôi trồng.
Tơ nấm lan đầy bịch phôi với thời gian ngắn nhất đối với cơ chất trồng mạt cƣa cao su 90% + 5% cám gạo + 5% bắp xây ( 33 ngày). Trong quá trình định tính triterpen khi nhỏ thuốc thử vào cho sản phẩm màu vàng cam cho thấy sự hiện diện triterpen trong tơ nấm, còn trong quá trình định lƣợng polysaccharide thì hàm lƣợng polysaccharide cao ở MT cấp I là môi trƣờng Rapper với hàm lƣợng là 0,78%, ở MT cấp II là môi trƣờng hạt gạo lứt với hàm lƣợng là 0,74%, còn MT nuôi trồng mạt cƣa cao su 90% bổ sung 5% cám gạo và 5% cám bắp hàm lƣợng cao nhất là 0,84%. iv MỤC LỤC CHẤP NHẬN CỦA HỘI ĐỒNG. i LỜI CẢM TẠ.
ii LỜI CAM KẾT. iv MỤC LỤC. v DANH SÁCH BẢNG. viii DANH SÁCH HÌNH.
ix DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT. x CHƢƠNG 1 GIỚI THIỆU.1 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI .2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU .3 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU .4 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU .5 NHỮNG ĐÓNG GÓP CỦA ĐỀ TÀI. 2 CHƢƠNG 2 TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU .1 SƠ LƢỢC NẤM THƢỢNG HOÀNG .3 Đặc điểm hình thái .2 THÀNH PHẦN DINH DƢỠNG VÀ DƢỢC CHẤT NẤM THƢỢNG HOÀNG (Plellinus linteus) .1 Thành phần dinh dƣỡng của nấm thƣợng hoàng .2 Dƣợc chất trong nấm .3 HOẠT ĐỘNG SINH HỌC .1 Hoạt động chống viêm .3 Hoạt động kháng vi khuẩn và chống virus .4 ỨNG DỤNG DƢỢC LÝ .1 Chống ung thƣ .2 Tác dụng chống ung thƣ .3 Hạ đƣờng huyết.4 Bảo vệ thần kinh .5 Bảo vệ gan .5 MỘT SỐ THÀNH PHẦN TRONG MÔI TRƢỜNG NUÔI TRỒNG NẤM .6 CÁC NGHIÊN CỨU LIÊN QUAN .1 Nghiên cứu trong nƣớc .2 Nghiên cứu ngoài nƣớc. 21 CHƢƠNG 3 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU .1 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU .1 Thời gian thực hiện .2 Địa điểm thực hiện .3 Vật liệu nghiên cứu .2 PHƢƠNG PHÁP TIẾN HÀNH.1 Nội dung 1: Nghiên cứu xác định hàm lƣợng polysaccharide và triterpen và ảnh hƣởng của môi trƣờng đến sự nhân giống cấp 1 của nấm thƣợng hoàng (Phellinus linteus) .2 Nội dung 2: Nghiên cứu xác định hàm lƣợng polysaccharide và triterpen và ảnh hƣởng của môi trƣờng đến sự nhân giống cấp 2 của nấm thƣợng hoàng (Phellinus linteus) .3 Nôi dung 3 Nghiên cứu xác định hàm lƣợng polysaccharide và triterpen và ảnh hƣởng của môi trƣờng trồng nấm thƣợng hoàng (Phellinus linteus) .3 PHÂN TÍCH DỮ LIỆU.
32 CHƢƠNG 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN.1 PHÂN TÍCH CHỈ TIÊU ẢNH HƢỞNG CỦA MÔI TRƢỜNG NHÂN GIỐNG CẤP 1 ĐẾN SỰ PHÁT TRIỂN TƠ NẤM THƢỢNG HOÀNG.2 PHÂN TÍCH TRITERPEN TRONG TƠ NẤM NHÂN GIỐNG CẤP I .3 KẾT QUẢ ĐỊNH LƢỢNG POLYSACCHARIDE CỦA NẤM THƢỢNG HOÀNG TRÊN MÔI TRƢỜNG CẤP I .4 PHÂN TÍCH CHỈ TIÊU ẢNH HƢỞNG CỦA MÔI TRƢỜNG NHÂN GIỐNG CẤP II ĐẾN SỰ PHÁT TRIỂN TƠ NẤM THƢỢNG HOÀNG .5 PHÂN TÍCH TRITERPEN TRONG TƠ NẤM NHÂN GIỐNG CẤP II .6 ĐỊNH LƢỢNG POLYSACCHARIDE CỦA NẤM THƢỢNG HOÀNG TRÊN MÔI TRƢỜNG CẤP II .7 PHÂN TÍCH CHỈ TIÊU ẢNH HƢỞNG CỦA MÔI TRƢỜNG NUÔI TRỒNG ĐẾN SỰ PHÁT TRIỂN TƠ NẤM THƢỢNG HOÀNG .8 PHÂN TÍCH TRITERPEN TRONG TƠ NẤM TRONG MÔI TRƢỜNG NUÔI TRỒNG .9 ĐỊNH LƢỢNG POLYSACCHARIDE CỦA NẤM THƢỢNG HOÀNG TRÊN MÔI TRƢỜNG NUÔI TRỒNG. 51 CHƢƠNG 5 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ. 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO. 58 PHỤ CHƢƠNG.
58 vii DANH SÁCH BẢNG Bảng 1 Thành phần dinh dƣỡng của quả thể nấm thƣợng hoàng P. 6 Bảng 2 Thành phần khoáng chất trong nấm thƣợng hoàng cho mg/100g nấm khô. 7 Bảng 3 Hàm lƣợng acid amin tự do trong nấm thƣợng hoàng cho mg/100g nấm khô. 8 Bảng 4 Thành phần monosaccharide của PPC chiết xuất từ P.
13 Bảng 5 Các nghiệm thức sử dụng trong thí nghiệm 1. 24 Bảng 6 Thành phần dung dịch dùng để dựng đƣờng chuẩn glucose. 28 Bảng 7 Các nghiệm thức sử dụng trong thí nghiệm 4. 29 Bảng 8 Các nghiệm thức sử dụng trong thí nghiệm 7.
31 Bảng 9 Bán kính trung bình tơ nấm sau 3, 5, 7 ngày sau cấy nấm. 33 Bảng 10 Hàm lƣợng polysaccharide ở môi trƣờng cấp I. 40 Bảng 11 Sự lan tơ trung bình trên môi trƣờng hạt. 41 Bảng 12 Hàm lƣợng polysaccharide trên môi trƣờng cấp II.
46 Bảng 13 Tốc độ trung bình số ngày lan tơ trên môi trƣờng nuôi trồng. 47 Bảng 14 Hàm lƣợng polysaccharide ở môi trƣờng nuôi trồng. 53 Bảng 15: Độ lan tơ sau 3 ngày theo dõi của từng loại môi trƣờng nhân giống cấp 1 của nấm thƣợng hoàng (cm). 63 Bảng 16 ANOVA so sánh tốc độ lan tơ ngày 3 trên môi trƣờng cấp I.
63 Bảng 17 Độ lan tơ sau 5 ngày theo dõi của từng loại môi trƣờng nhân giống cấp 1 của nấm thƣợng hoàng (cm). 64 Bảng 18 ANOVA so sánh tốc độ lan tơ ngày 5 trên môi trƣờng cấp I. 64 Bảng 19 Độ lan tơ sau 7 ngày theo dõi của từng loại môi trƣờng nhân giống cấp 1 của nấm thƣợng hoàng (cm). 65 Bảng 20 ANOVA so sánh tốc độ lan tơ ngày 7 trên môi trƣờng cấp I.
65 Bảng 21 Độ lan tơ sau 3 ngày theo dõi của từng loại môi trƣờng nhân giống cấp II của nấm thƣợng hoàng (cm). 66 Bảng 22 ANOVA so sánh tốc độ lan tơ ngày 3 trên môi trƣờng cấp II. 66 Bảng 23 Độ lan tơ sau 5 ngày theo dõi của từng loại môi trƣờng nhân giống cấp II của nấm thƣợng hoàng (cm). 67 Bảng 24 ANOVA so sánh tốc độ lan tơ ngày 5 trên môi trƣờng cấp II.
67 Bảng 25 Độ lan tơ sau 7 ngày theo dõi của từng loại môi trƣờng nhân giống cấp II của nấm thƣợng hoàng (cm). 68 Bảng 26 ANOVA so sánh tốc độ lan tơ ngày 7 trên môi trƣờng cấp II. 68 Bảng 27 Độ lan tơ nấm thƣợng hoàng đạt 50% bịch phôi (ngày). 69 Bảng 28 ANOVA so sánh tốc độ lan tơ 50% trên môi trƣờng trồng.
69 Bảng 29 Độ lan tơ nấm thƣợng hoàng đạt 100% bịch phôi (ngày). 70 Bảng 30 ANOVA Về chỉ tiêu tốc độ lan tơ 100% trên môi trƣờng trồng. 70 viii DANH SÁCH HÌNH Hình 1 Nấm ký sinh trên cây. 4 Hình 2 Quả thể nấm Phellinus linteus.
4 Hình 3 a) Cấu trúc hóa học của các thành phần hoạt tính sinh học từ nấm P. 10 Hình 3 b) Cấu trúc hóa học của các thành phần hoạt tính sinh học từ nấm P. 11 Hình 4 Các lanostane-triterpenoid đƣợc phân lập từ nấm. 14 Hình 5 Bốn loại triterpen loại lanostanol từ thể quả nấm.
14 Hình 6 Cấu trúc của Phellinuslins A – C (1-3). 16 Hình 7 Cấu trúc của Hispolon. 16 Hình 8 Tốc độ lan tơ nấm thƣợng hoàng sau 3 ngày cấy nấm. 34 Hình 9 Tốc độ lan tơ nấm thƣợng hoàng sau 5 ngày cấy nấm.
35 Hình 10 Tốc độ lan tơ nấm thƣợng hoàng sau 7 ngày cấy nấm. 36 Hình 11 Định tính triterpen bằng phản ứng Liebermann – Burchard trên môi trƣơng cấp I. 38 Hình 12 Đồ thị biểu đồ tuyến tính giữa nồng độ chất chuẩn D – Glucose và độ hấp thụ ở môi trƣờng cấp I. 39 Hình 13 Tơ nấm thƣợng hoàng trên môi trƣờng hạt sau khi cấy 3 ngày.
41 Hình 14 Tơ nấm thƣợng hoàng trên môi trƣờng hạt sau khi cấy 5 ngày .