Luận văn tốt nghiệp nghiên cứu chiết tách xác định thành phần và hoạt tính sinh học dịch chiết n hexane và ethyl acetate hoa đu đủ đực carica papaya l thu hái tại quảng nam đà nẵng

Nghiên cứu chiết tách và xác định hoạt tính sinh học từ dịch chiết hoa đu đủ đực tại Quảng Nam - Đà Nẵng. Kết quả và ứng dụng tiềm năng.

• Tác giả: Mai Thị Hoàng Yến
• Người hướng dẫn: ThS. Đỗ Thị Thúy Vân
• Trường học: Đại học Đà Nẵng
• Chuyên ngành: Hóa hữu cơ
• Đề tài: Nghiên Cứu Chiết Tách Và Hoạt Tính Sinh Học Từ Hoa Đu Đủ Đực Tại Quảng Nam - Đà Nẵng
• Loại tài liệu: luận văn
• Năm xuất bản: 2018
• Địa điểm: Đà Nẵng

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• 1. CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 1.1. GIỚI THIỆU VỀ CÂY ĐU ĐỦ
• 1.2. CÁC NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA HOA ĐU ĐỦ TRONG NƯỚC
• 1.3. NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA HOA ĐU ĐỦ NGOÀI NƯỚC
• 1.4. NHỮNG NGHIÊN CỨU VỀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA HOA ĐU ĐỦ
• 1.4.1. Tác dụng chống ung thư
• 1.4.2. Tác dụng chống oxy hóa
• 1.4.3. Công dụng trong dân gian
• 1.5. CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO
• 1.5.1. Phương pháp MTT
• 1.5.2. Phương pháp SRB
• 2. CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.1. NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT, THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU
• 2.1.1. Nguyên liệu
• 2.1.2. Hóa chất và thiết bị nghiên cứu
• 2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.2.1. Xác định chỉ số vật lí
• 2.2.1.1. Độ ẩm
• 2.2.1.2. Hàm lượng tro

Tóm tắt

I. Giới thiệu về hoa đu đủ đực

Hoa đu đủ đực (Carica papaya L.) là một trong những bộ phận của cây đu đủ, có nguồn gốc từ vùng nhiệt đới châu Mỹ. Cây đu đủ được trồng rộng rãi tại Việt Nam, đặc biệt là ở các tỉnh Quảng Nam và Đà Nẵng. Hoa đu đủ đực không chỉ có giá trị dinh dưỡng mà còn được sử dụng trong y học cổ truyền để điều trị nhiều loại bệnh. Nghiên cứu về chiết tách hoa đu đủ đã chỉ ra rằng hoa chứa nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học, bao gồm flavonoid, saponin và alkaloid. Những hợp chất này có khả năng chống oxy hóa và kháng viêm, góp phần vào việc điều trị các bệnh lý như ung thư và các bệnh về đường hô hấp. Việc nghiên cứu hoạt tính sinh học của hoa đu đủ đực không chỉ giúp khẳng định giá trị của nó trong y học mà còn mở ra hướng đi mới cho việc phát triển các sản phẩm từ thiên nhiên.

II. Nghiên cứu thành phần hóa học

Nghiên cứu về thành phần hóa học của hoa đu đủ đực đã được thực hiện qua nhiều công trình khác nhau. Các nghiên cứu cho thấy hoa đu đủ đực chứa nhiều hợp chất có giá trị như kaempferol, β-sitosterol glucoside và các acid béo. Phân tích bằng phương pháp GC-MS đã xác định được các hợp chất này trong dịch chiết n-hexane và ethyl acetate. Những hợp chất này không chỉ có giá trị dinh dưỡng mà còn có khả năng chống ung thư. Việc xác định thành phần hóa học của hoa đu đủ đực là rất quan trọng, giúp cung cấp cơ sở khoa học cho việc sử dụng hoa trong y học. Các hợp chất này có thể được chiết xuất và ứng dụng trong sản xuất thực phẩm chức năng, mang lại lợi ích cho sức khỏe con người.

III. Hoạt tính sinh học của dịch chiết

Hoạt tính sinh học của dịch chiết hoa đu đủ đực đã được thử nghiệm trên nhiều dòng tế bào ung thư như MCF-7, A549 và Hep3B. Kết quả cho thấy dịch chiết từ hoa đu đủ đực có khả năng ức chế sự phát triển của tế bào ung thư, đặc biệt là ở nồng độ cao. Phương pháp thử nghiệm hoạt tính sinh học như MTT và SRB đã được áp dụng để đánh giá hiệu quả của dịch chiết. Những kết quả này không chỉ khẳng định giá trị của hoa đu đủ đực trong việc hỗ trợ điều trị ung thư mà còn mở ra cơ hội cho việc phát triển các sản phẩm từ thiên nhiên có tác dụng tương tự. Việc nghiên cứu tác dụng dược lý của hoa đu đủ đực có thể dẫn đến những ứng dụng thực tiễn trong y học hiện đại.

IV. Ứng dụng thực tiễn và giá trị khoa học

Nghiên cứu về hoa đu đủ đực không chỉ mang lại giá trị khoa học mà còn có ứng dụng thực tiễn cao. Các hợp chất chiết xuất từ hoa có thể được sử dụng trong sản xuất thực phẩm chức năng, dược phẩm và mỹ phẩm. Việc sử dụng hoa đu đủ đực trong điều trị các bệnh lý như ung thư, viêm nhiễm và các bệnh về đường hô hấp đã được chứng minh qua nhiều nghiên cứu. Hơn nữa, việc bảo tồn đa dạng sinh học và phát triển bền vững các nguồn tài nguyên thiên nhiên là rất cần thiết. Nghiên cứu này góp phần vào việc bảo tồn và phát huy giá trị của cây đu đủ, đồng thời nâng cao nhận thức về việc sử dụng các sản phẩm từ thiên nhiên trong chăm sóc sức khỏe.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Cây Đu đủ (Carica papaya L.) là một loại cây nhiệt đới có giá trị kinh tế và y học cao, được trồng phổ biến tại Việt Nam với diện tích khoảng 10.000-17.000 ha và sản lượng ước tính 200-350 nghìn tấn quả mỗi năm. Ngoài quả, các bộ phận khác của cây như lá, hoa cũng được sử dụng trong y học dân gian để điều trị nhiều bệnh lý, đặc biệt là các bệnh ung thư và các bệnh về đường hô hấp, bài tiết. Hoa Đu đủ đực được người dân Quảng Nam - Đà Nẵng sử dụng để chữa các bệnh như viêm họng, sỏi thận và hỗ trợ điều trị ung thư phổi, ung thư vú, ung thư gan. Tuy nhiên, các nghiên cứu khoa học về thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của hoa Đu đủ đực còn hạn chế, đặc biệt là các nghiên cứu chi tiết về dịch chiết bằng dung môi n-hexane và ethyl acetate.

Mục tiêu của nghiên cứu là xác định các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình chiết tách các hợp chất hóa học trong hoa Đu đủ đực, khảo sát thành phần hóa học và đánh giá hoạt tính sinh học của dịch chiết n-hexane và ethyl acetate thu hái tại Quảng Nam - Đà Nẵng. Nghiên cứu được thực hiện trên mẫu hoa Đu đủ đực thu hái vào tháng 01 năm 2017, với phạm vi phân tích bao gồm các phương pháp chiết ngâm dầm, Soxhlet và siêu âm, cùng với đánh giá hoạt tính gây độc tế bào trên các dòng ung thư phổi, gan và vú. Kết quả nghiên cứu góp phần làm rõ cơ sở khoa học cho việc sử dụng hoa Đu đủ đực trong y học và nâng cao giá trị ứng dụng của loài thực vật này.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu dựa trên các lý thuyết và mô hình về chiết tách hợp chất từ thực vật, đặc biệt là các phương pháp chiết rắn-lỏng truyền thống và hiện đại. Các khái niệm chính bao gồm:

• Chiết ngâm dầm (Maceration): Phương pháp chiết bằng cách ngâm mẫu thực vật trong dung môi trong thời gian dài để hòa tan các hợp chất.
• Chiết Soxhlet: Phương pháp chiết liên tục sử dụng thiết bị Soxhlet, giúp tăng hiệu quả chiết trong thời gian ngắn hơn.
• Chiết siêu âm: Sử dụng sóng siêu âm để phá vỡ cấu trúc tế bào, tăng khả năng hòa tan các hợp chất trong dung môi.
• Phương pháp GC-MS (Sắc ký khí - khối phổ): Kỹ thuật phân tích định tính và định lượng các hợp chất hóa học trong dịch chiết.
• Phương pháp thử độc tế bào SRB và MTT: Đánh giá hoạt tính sinh học của dịch chiết thông qua khả năng ức chế sự phát triển tế bào ung thư in vitro.

Phương pháp nghiên cứu

Nguồn dữ liệu chính là mẫu hoa Đu đủ đực thu hái tại Quảng Nam - Đà Nẵng tháng 01/2017. Mẫu được xử lý, sấy khô và xay nhỏ để chuẩn bị cho các phương pháp chiết. Nghiên cứu khảo sát các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình chiết như tỉ lệ rắn/lỏng, thời gian, nhiệt độ với dung môi n-hexane và ethyl acetate qua ba phương pháp: ngâm dầm, Soxhlet và siêu âm.

Cỡ mẫu cho mỗi thí nghiệm chiết là 10g bột hoa, dung môi sử dụng từ 100 đến 300 mL tùy khảo sát. Thời gian chiết dao động từ 1 đến 5 ngày với ngâm dầm, 2 đến 10 giờ với Soxhlet, và 30 đến 150 phút với siêu âm. Nhiệt độ chiết siêu âm được khảo sát từ 30 đến 70°C.

Sau khi chiết, dịch chiết được cô đuổi dung môi đến khối lượng không đổi để cân và xác định hàm lượng cao chiết. Thành phần hóa học được phân tích bằng GC-MS để định danh các hợp chất chính. Hoạt tính sinh học được đánh giá bằng phương pháp SRB trên các dòng tế bào ung thư phổi (A549), gan (Hep3B) và vú (MCF-7). Phân tích số liệu được thực hiện bằng các phương pháp toán học phù hợp.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

1. Chỉ tiêu vật lý của hoa Đu đủ đực: Độ ẩm trung bình là 22,58%, hàm lượng tro trung bình 15,95%, hàm lượng hữu cơ khoảng 84,05%. Hàm lượng kim loại nặng như Pb, Cd, Hg, As đều dưới mức quy định an toàn theo QCVN 8-2:2011/BYT.

2. Yếu tố ảnh hưởng đến chiết tách:

   • Tỉ lệ rắn/lỏng tối ưu là 1/20 (10g mẫu/200mL dung môi) cho cả n-hexane và ethyl acetate.
   • Thời gian chiết ngâm dầm tối ưu là 3 ngày, chiết Soxhlet là 8 giờ, chiết siêu âm là 90 phút.
   • Nhiệt độ chiết siêu âm tối ưu là 50°C cho cả hai dung môi.
   • Phương pháp siêu âm cho hàm lượng cao chiết thấp hơn ngâm dầm nhưng thời gian chiết ngắn nhất, phù hợp cho chiết tách nhanh.

3. Thành phần hóa học chính trong dịch chiết:

   • Dịch chiết n-hexane chứa các hợp chất chính như β-sitosterol (29,96%), 9,12-Octadecadienoic acid (15,21%), n-Hexadecanoic acid (12,71%).
   • Dịch chiết ethyl acetate có β-sitosterol (34,83%), 9,12-Octadecadienoic acid (14,33%), n-Hexadecanoic acid (15,53%).
   • Các hợp chất này có vai trò quan trọng trong hoạt tính sinh học, đặc biệt là tác dụng chống ung thư và chống oxy hóa.

4. Hoạt tính sinh học:

   • Tất cả các phân đoạn dịch chiết n-hexane và ethyl acetate đều có khả năng ức chế tế bào ung thư.
   • Phân đoạn n-hexane từ cao tổng methanol có hoạt tính mạnh nhất trên tế bào ung thư phổi A549 với tỉ lệ tế bào sống sót chỉ còn 29,69% ở nồng độ 100 µg/mL.
   • Các phân đoạn khác cũng cho thấy khả năng ức chế tế bào ung thư gan và vú với tỉ lệ tế bào sống sót dao động từ 50-70%.

Thảo luận kết quả

Kết quả cho thấy phương pháp chiết siêu âm là lựa chọn tối ưu về thời gian và hiệu quả chiết tách các hợp chất hoạt tính từ hoa Đu đủ đực. Hàm lượng các hợp chất phytosterol như β-sitosterol cao trong cả hai dịch chiết, phù hợp với các nghiên cứu trước đây về tác dụng chống ung thư và giảm cholesterol của hợp chất này. Sự hiện diện của acid béo không no 9,12-Octadecadienoic acid góp phần vào hoạt tính chống oxy hóa và bảo vệ mạch máu.

Hoạt tính sinh học mạnh mẽ của phân đoạn n-hexane trên tế bào ung thư phổi A549 cho thấy tiềm năng phát triển các sản phẩm dược liệu từ hoa Đu đủ đực. So sánh với các nghiên cứu trong nước và quốc tế, kết quả phù hợp với báo cáo về khả năng ức chế tế bào ung thư của dịch chiết ethanol và chloroform từ hoa Đu đủ đực. Dữ liệu có thể được trình bày qua biểu đồ so sánh tỉ lệ tế bào sống sót giữa các phân đoạn dịch chiết và dòng tế bào ung thư khác nhau, giúp minh họa rõ ràng hiệu quả sinh học.

Đề xuất và khuyến nghị

1. Ứng dụng phương pháp chiết siêu âm trong sản xuất dược liệu: Khuyến nghị sử dụng chiết siêu âm với dung môi n-hexane và ethyl acetate ở 50°C trong 90 phút để chiết tách hiệu quả các hợp chất hoạt tính từ hoa Đu đủ đực, giúp rút ngắn thời gian và tiết kiệm chi phí sản xuất.

2. Phát triển sản phẩm hỗ trợ điều trị ung thư: Khuyến khích nghiên cứu sâu hơn về phân đoạn n-hexane từ cao tổng methanol để phát triển các chế phẩm hỗ trợ điều trị ung thư phổi, gan và vú, với mục tiêu giảm tỉ lệ tế bào ung thư sống sót dưới 30% trong vòng 1-2 năm.

3. Nâng cao chất lượng nguyên liệu: Đề xuất xây dựng quy trình thu hái, bảo quản hoa Đu đủ đực nhằm kiểm soát độ ẩm khoảng 22,5% và hạn chế ô nhiễm kim loại nặng, đảm bảo an toàn và chất lượng nguyên liệu đầu vào cho sản xuất.

4. Mở rộng nghiên cứu thành phần hóa học: Khuyến nghị tiếp tục phân tích định lượng các hợp chất hoạt tính khác trong hoa Đu đủ đực, đặc biệt là các flavonoid, saponin và polyphenol, nhằm khai thác tối đa tiềm năng dược liệu trong vòng 3 năm tới.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

1. Nhà nghiên cứu dược liệu và hóa học hữu cơ: Luận văn cung cấp dữ liệu chi tiết về thành phần hóa học và phương pháp chiết tách, hỗ trợ nghiên cứu phát triển các sản phẩm từ thực vật.

2. Doanh nghiệp sản xuất dược phẩm và thực phẩm chức năng: Thông tin về hoạt tính sinh học và quy trình chiết tách giúp doanh nghiệp tối ưu hóa công nghệ sản xuất các sản phẩm hỗ trợ điều trị ung thư và tăng cường sức khỏe.

3. Bác sĩ và chuyên gia y học cổ truyền: Cung cấp cơ sở khoa học cho việc sử dụng hoa Đu đủ đực trong điều trị các bệnh lý, đặc biệt là ung thư và các bệnh đường hô hấp, giúp nâng cao hiệu quả điều trị.

4. Sinh viên và giảng viên ngành Hóa học, Dược học: Tài liệu tham khảo quý giá cho các đề tài nghiên cứu, luận văn và bài giảng về chiết tách hợp chất thiên nhiên và đánh giá hoạt tính sinh học.

Câu hỏi thường gặp

1. Tại sao chọn dung môi n-hexane và ethyl acetate để chiết tách?
   Hai dung môi này có tính chất phân cực khác nhau, giúp chiết tách đa dạng các hợp chất từ không phân cực đến phân cực trung bình, tối ưu hóa thu nhận các thành phần hoạt tính trong hoa Đu đủ đực.

2. **Phương pháp chiết siêu âm

Trích đoạn nội dung tài liệu

CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1. GIỚI THIỆU VỀ CÂY ĐU ĐỦ Đu đủ (Carica Papaya L. Nguồn gốc Châu Mỹ được trồng khắp nơi ở nước ta.

Phân bố ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới. Ở nước ta có một chi và một loài [1]. Cây Đu đủ có tên khoa học là Carica papaya Linn. Cây nhỏ hoặc nhỡ, cao từ 2-4 mét, thân thẳng, không phân nhánh.

Lá to, mọc so le, tập trung ở ngọn. Cuống lá rất dài, xẻ 5-7 thùy sâu, gốc hình tim, đầu nhọn, mỗi thùy lại chia tiếp thành nhiều thùy nhỏ không đều, gân lá hình chân vịt, hai mặt nhẵn [1]. Cây Đu đủ còn được gọi Thù đủ, Phiên mộc, Cà lào, Phiên qua, Phan qua thụ, Lô hong phlê (Campuchia), Mắc hung (Lào), Má hống (Thái). Đu đủ thường là cây đồng chu, nhưng Đu đủ có thể xếp thành 3 loại trên phương diện giới tính: cây đực, cây lưỡng tính và cây cái.

Vài cây Đu đủ cũng có thể thuộc cả ba loại nói trên. Ngoài ra cũng có cây ra hoa không hẳn hoàn toàn đực, cái hay lưỡng tính mà lại pha lẫn nhiều ít đặc tính của ba loại hoa (Hình 1. Khuynh hướng thay đổi giới tính phần lớn do thời tiết gây ra như khô hạn và thay đổi nhiệt độ [6]. A: hoa cái B: hoa lưỡng tính C: hoa đực D: trái của cây cái E: trái lưỡng tính F: cây đực Hình 1.

Hình ảnh Đu đủ SVTH: Mai Thị Hoàng Yến - 14CHD 4 Luan van Luận văn tốt nghiệp GVHD:ThS. Đỗ Thị Thúy Vân 1. CÁC NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA HOA ĐU ĐỦ TRONG NƯỚC Năm 2015, Giang Thị Kim Liên và Đỗ Thị Lệ Uyên khảo sát thành phần hóa học của hoa Đu đủ đực. Kết quả cho thấy sự có mặt của alcaloid, este, acid béo, một số sterol trong hoa Đu đủ đực thu hái tại Đà Nẵng [5].

Năm 2016, Trần Thanh Hải đã phân lập được 2 hợp chất Kaempferol và Kaempferol-3-O-β-glucopyranosid từ phân đoạn ethyl acetatee trong hoa Đu đủ đực thu hái trên địa bàn tỉnh Quảng Nam [4]. Năm 2017, Lê Thị Thanh Phương đã phân lập được 2 hợp chất Kaempferol và β- sitosterol glucoside từ phân đoạn chloroform trong hoa Đu đủ đực thu hái trên địa bàn Quảng Nam - Đà Nẵng [12]. NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA HOA ĐU ĐỦ NGOÀI NƯỚC Năm 2015, Stephen Chinwendu và cộng sự công bố thành phần hóa học của hoa Đu đủ ở Nigeria. Cho kết quả trong hoa chứa saponin (0,07%), alcaloid (0,05%), tannin (0,002%) và flavonoid (2,8%).

Ngoài ra còn chứa các nguyên tố vô cơ Na, Ca, Mg, P và các vitamin như B1, B2, B3, C [11]. Cũng trong năm 2015, Marline Nainggolan và Kasmirul công bố kết quả trong hoa Đu đủ đực có chứa các thành phần gồm triterpenoid, steroid, flavonoid, tannin, glycoside và saponin [14]. Tóm lại đã phân lập được Kaempferol, Kaempferol-3-O-β-glucopyranosid (Glucosinolate), β-sitosterol glucoside (Sterol) trong hoa Đu đủ đực. Như vậy, thành phần hóa học hoa Đu đủ đực đã được nghiên cứu.

Tuy nhiên các công trình nghiên cứu còn khá ít. NHỮNG NGHIÊN CỨU VỀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA HOA ĐU ĐỦ  Tác dụng chống ung thư SVTH: Mai Thị Hoàng Yến - 14CHD 5 Luan van Luận văn tốt nghiệp GVHD:ThS. Đỗ Thị Thúy Vân Năm 2015, Marline Nainggolan và Kasmirul công bố nghiên cứu dịch chiết ethanol của hoa Đu đủ đực có tác dụng gây độc tế bào trên MCF-7 dòng tế bào ung thư vú [14]. Năm 2017, Đỗ Thị Thúy Vân và Giang Thị Kim Liên đã công bố kết quả sàng lọc thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư của một số dịch chiết từ hoa Đu đủ đực thu hái ở Quảng Nam-Đà Nẵng.

Kết quả cho thấy phân đoạn dịch chiết chloroform có hoạt tính gây độc tế bào tốt trên 3 dòng ung thư phổi A549, ung thư gan Hep3B và ung thư vú MCF-7 ở hai nồng độ thử nghiệm 30 µg/mL và 100 µg/mL.  Tác dụng chống oxy hóa Gốc tự do là một trong những nguyên nhân chủ yếu gây ra nhiều loại bệnh trong cơ thể, trong đó có ung thư. Gốc tự do được tạo ra trong cơ thể bởi nhiều cách khác nhau như: ô nhiễm môi trường, chất phóng xạ, thuốc-hóa chất, căng thẳng thần kinh,.  Công dụng trong dân gian Trong dân gian hoa Đu đủ đực tươi hoặc phơi khô hấp với đường phèn dùng chữa bệnh ho, viêm cuống phổi, khàn tiếng hoặc mất tiếng ở người lớn, nhất là ở trẻ em.

Ngoài ra hoa Đu đủ đực được dùng để chữa sỏi thận hiệu quả [6,11]. CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH GÂY ĐỘC TẾ BÀO Hoạt tính gây độc tế bào được thử theo phương pháp của Scudiero D. và cộng sự [18]. Đây là phương pháp thử độ độc tế bào in vitro được viện Ung thư Quốc gia (NIC) Maryland, Hoa Kỳ xác nhận là phép thử độ độc tế bào chuẩn, nhằm sàng lọc, phát hiện các chất có khả năng kìm hãm sự phát triển hoặc diệt tế bào ung thư ở điều kiện in vitro.

Trong những năm gần đây, một số phương pháp so màu nhanh đã được miêu tả trong thử nghiệm trên các dòng tế bào ung thư ở mức độ in vitro, hiện nay hai phương pháp thường được sử dụng là: phương pháp MTT và phương pháp SRB. Phương pháp MTT Phương pháp này lần đầu tiên được miêu tả bởi Tim Mosmann trên tạp chí Immunological Methods năm 1983 [9]. Theo tác giả, muối tetrazolium được dùng để triển khai phép thử so màu, qua đó đánh giá về sự sống sót và khả năng phát triển của tế bào động vật. Nguyên lý của phép thử là vòng tetrazolium bám chặt vào ti thể của tế bào SVTH: Mai Thị Hoàng Yến - 14CHD 6 Luan van Luận văn tốt nghiệp GVHD:ThS.

Đỗ Thị Thúy Vân hoạt động, dưới tác dụng của enzym dehydrogenase, màu vàng của MTT biến đổi thành màu tím formazan. Kết quả đọc trên máy quang phổ và có độ chính xác cao. Phương pháp được dùng để đo độ độc của chất nghiên cứu, khả năng phát triển và hoạt động của tế bào. Phương pháp SRB Phép thử SRB được phát triển bởi Philip Skehan và cộng sự năm 1990 để đánh giá độc tính của chất nghiên cứu và khả năng phát triển của tế bào trong ứng dụng sàng lọc thuốc ở qui mô lớn.

Nguyên tắc của phép thử là khả năng nhuộm màu của SRB lên protein SRB nhuộm bằng cách phá vỡ màng tế bào, những mảnh vỡ tế bào không bị nhuộm, do đó không ảnh hưởng đến số liệu thực nghiệm. Phương pháp SRB dựa trên khả năng liên kết tĩnh điện và sự phụ thuộc vào pH của các dư lượng amino acid của các protein. Dưới các điều kiện môi trường acid nhẹ, SRB liên kết với các dư lượng amino acid trên các protein của các tế bào đã được cố định bằng trichloroacetic acid (TCA) và sử dụng bazơ yếu như Tris-base để hòa tan và đo mật độ quang của dịch chiết từ tế bào một cách định lượng. SVTH: Mai Thị Hoàng Yến - 14CHD 7 Luan van Luận văn tốt nghiệp GVHD:ThS.

Đỗ Thị Thúy Vân CHƯƠNG 2. NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2. NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT, THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 2. Nguyên liệu Nguyên liệu hoa của cây Đu đủ đực được thu hái tại.

Quảng Nam- Đà Nẵng vào tháng 01 năm 2017. Hoa Đu đủ đực – đã được định danh, sau khi được thu hái sẽ được rửa sạch, phơi, sấy khô và xay nhỏ thành bột để sử dụng cho nghiên cứu. Cây Đu đủ đực được chọn lấy hoa cao khoảng 1,5 m – 2,0 m có nhiều lá và hoa. Hoa Đu đủ đực nở theo chùm, màu trắng, hoa nở nhiều, còn nhiều nụ, không bị sâu.

Cuống hoa hình trụ, màu xanh lục, thân xốp. Bột hoa Đu đủ đực hơi thô, màu vàng nhạt, được bảo quản trong bình hút ẩm. Hoa Đu đủ đực và Bột hoa Đu đủ đực 2. Hóa chất và thiết bị nghiên cứu Dung môi chiết n-hexane, ethyl acetate, chloroform, methanol, ethanol và nước cất.

Một số hóa chất khác cũng được sử dụng. Các thiết bị xác định cấu trúc chất: Phổ khối GC-MS. Ngoài ra còn dùng một số trang thiết bị khác như máy quay cất chân không, tủ sấy, tủ nung, máy siêu âm, cân phân tích, cốc thủy tinh, bình tam giác, các loại pipet, bình định mức, giấy lọc,… 2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.

Xác định chỉ số vật lí  Độ ẩm SVTH: Mai Thị Hoàng Yến - 14CHD 8 Luan van Luận văn tốt nghiệp GVHD:ThS. Đỗ Thị Thúy Vân Tiến hành: Chuẩn bị các cốc được rửa sạch, được đánh số thứ tự, và được sấy khô trong tủ sấy đến khối lương không đổi m0. Sấy xong bỏ vào bình hút ẩm cho đến khi đạt nhiệt độ phòng thì cân khối lượng các cốc sứ. Mẫu để xác định độ ẩm là mẫu hoa Đu đủ đực, cân lấy khối lượng chính xác m1 trên cân phân tích, cho vào cốc sứ chuẩn bị sẵn và đem đi sấy ở nhiệt độ 1000C.

Cứ sau 2 giờ lấy ra để trong bình hút ẩm cho nguội đến nhiệt độ phòng rồi cân đến khối lượng mẫu không đổi m2. Cách tính độ ẩm: Độ ẩm của mỗi mẫu là hiệu số khối lượng giữa khối lượng mẫu trước và sau khi cân. Suy ra độ ẩm trung bình của 5 mẫu. Độ ẩm được tính theo công thức sau Trong đó: m0: Khối lượng cốc sứ (g) m1: Mẫu bột hoa Đu đủ đực (g) m2: Cốc sứ chứa bột hoa đu đủ sau khi sấy (g) W: Độ ẩm của mẫu (%) Độ ẩm chung là độ ẩm trung bình của 5 mẫu.

 Hàm lượng tro Tro toàn phần: Là khối lượng cặn còn lại sau khi nung cháy hoàn toàn một mẫu thử trong điều kiện nhất định. Tiến hành: Cân 5 mẫu hoa Đu đủ đực sấy khô ở trên với khối lượng m1 đem than hóa sơ bộ trên bếp điện rồi cho vào lò nung ở 400-4500C trong thời gian từ 4 đến 6 tiếng, cho đến khi thu được tro trắng. Lấy mẫu ra làm nguội đến nhiệt độ phòng trong bình hút ẩm, cân lại mẫu. SVTH: Mai Thị Hoàng Yến - 14CHD 9 Luan van Luận văn tốt nghiệp GVHD:ThS.

Đỗ Thị Thúy Vân Sau đó cho vào nung 2 tiếng lấy mẫu ra làm nguội đến nhiệt độ phòng trong bình hút ẩm, cân lại mẫu đến khối lượng m2 không đổi. Khối lượng các chất hữu cơ tổng được tính là tổng chất hữu cơ bị đốt cháy, là hiệu số giữa khối lượng mẫu ban đầu và khối lượng tro sau khi nung. Cách tính kết quả: Hàm lượng tro được tính bằng công thức: Trong đó: m0: Khối lượng cốc sứ m1: Mẫu hoa Đu đủ đực sau khi sấy khô (g) m2: Khối lượng của cốc sứ và hoa Đu đủ đực sau khi tro hóa (g) Hàm lượng tro được lấy trung bình từ các mẫu trên.