Luận văn thạc sĩ: Nghiên cứu sản xuất vaccine bổ trợ keo phèn phòng bệnh phù đầu lợn do E. coli

Luận văn thạc sĩ nghiên cứu vnua nghiên cứu sản xuất vaccine bổ trợ keo phèn phòng bệnh phù đầu lợn do e coli dung huyết gây ra, đánh giá hiện trạng, phân tích vấn đề, đề xuất

• Tác giả: Hoàng Thị Thúy
• Người hướng dẫn: TS. Vũ Như Quán
• Trường học: Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Thú y
• Đề tài: Nghiên cứu sản xuất vaccine bổ trợ keo phèn phòng bệnh phù đầu lợn do E. coli dung huyết gây ra theo quy mô công nghiệp
• Loại tài liệu: Luận văn
• Năm xuất bản: 2018
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• 1. MỤC LỤC
• DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT
• DANH MỤC BẢNG
• DANH MỤC SƠ ĐỒ VÀ HÌNH ẢNH
• TRÍCH YẾU LUẬN VĂN
• 1. TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI
• 2. MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU
• 2.1. Mục tiêu tổng quát
• 2.2. Mục tiêu cụ thể
• 3. PHẠM VI NGHIÊN CỨU
• 4. THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI
• 5. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 5.1. MỘT SỐ HIỂU BIẾT VỀ VI KHUẨN E. COLI
• 5.1.1. Phân loại
• 5.1.2. Kháng nguyên
• 5.1.3. Các yếu tố gây bệnh

Tóm tắt

I. Tổng quan về nghiên cứu sản xuất vaccine phòng bệnh phù đầu lợn do E

Nghiên cứu sản xuất vaccine phòng bệnh phù đầu lợn do E. coli là một trong những vấn đề cấp thiết trong ngành chăn nuôi lợn hiện nay. Bệnh phù đầu lợn do vi khuẩn E. coli gây ra đã gây thiệt hại lớn cho người chăn nuôi, đặc biệt là trong giai đoạn lợn con trước và sau cai sữa. Việc phát triển vaccine hiệu quả không chỉ giúp bảo vệ sức khỏe đàn lợn mà còn đảm bảo an toàn thực phẩm cho người tiêu dùng. Nghiên cứu này nhằm đánh giá quy trình sản xuất vaccine vô hoạt có bổ trợ keo phèn, từ đó cung cấp giải pháp phòng bệnh hiệu quả cho ngành chăn nuôi.

1.1. Tình hình bệnh phù đầu lợn do E. coli tại Việt Nam

Bệnh phù đầu lợn do E. coli là một trong những bệnh phổ biến và nguy hiểm nhất trong chăn nuôi lợn. Tình hình dịch bệnh diễn ra phức tạp, với tỷ lệ mắc bệnh cao, đặc biệt là ở lợn con. Các triệu chứng điển hình bao gồm phù nề, thần kinh và tỷ lệ chết cao. Việc phát hiện sớm và áp dụng biện pháp phòng ngừa là rất cần thiết.

1.2. Vai trò của vaccine trong phòng bệnh phù đầu lợn

Vaccine đóng vai trò quan trọng trong việc phòng ngừa bệnh phù đầu lợn do E. coli. Việc sử dụng vaccine không chỉ giúp giảm tỷ lệ mắc bệnh mà còn tăng cường sức đề kháng cho đàn lợn. Nghiên cứu cho thấy vaccine vô hoạt có bổ trợ keo phèn có hiệu quả cao trong việc phòng ngừa bệnh này.

II. Vấn đề và thách thức trong sản xuất vaccine phòng bệnh phù đầu lợn

Mặc dù đã có nhiều nghiên cứu về vaccine phòng bệnh phù đầu lợn, nhưng vẫn còn nhiều thách thức trong quy trình sản xuất và kiểm nghiệm. Các vấn đề như chất lượng giống vi khuẩn, quy trình sản xuất và bảo quản vaccine cần được cải thiện để đảm bảo hiệu quả và an toàn cho người tiêu dùng.

2.1. Chất lượng giống vi khuẩn E. coli trong sản xuất vaccine

Chất lượng giống vi khuẩn E. coli là yếu tố quyết định đến hiệu quả của vaccine. Việc lựa chọn các chủng vi khuẩn có độc lực cao và khả năng sinh kháng nguyên tốt là rất quan trọng. Nghiên cứu đã chỉ ra rằng các chủng vi khuẩn được phân lập từ lợn mắc bệnh có khả năng sản xuất vaccine hiệu quả hơn.

2.2. Quy trình sản xuất vaccine và kiểm nghiệm

Quy trình sản xuất vaccine cần được thực hiện theo tiêu chuẩn nghiêm ngặt để đảm bảo an toàn và hiệu quả. Các bước từ nuôi cấy, bổ sung keo phèn, đến đóng chai và bảo quản vaccine đều cần được kiểm soát chặt chẽ. Việc kiểm nghiệm vaccine cũng cần được thực hiện để đánh giá tính an toàn và hiệu lực trước khi đưa vào sử dụng.

III. Phương pháp nghiên cứu sản xuất vaccine phòng bệnh phù đầu lợn

Nghiên cứu này áp dụng các phương pháp hiện đại trong sản xuất vaccine phòng bệnh phù đầu lợn do E. coli. Các phương pháp này bao gồm nuôi cấy vi khuẩn, kiểm nghiệm độc lực và sản xuất vaccine theo quy mô công nghiệp. Mục tiêu là tạo ra vaccine an toàn, hiệu quả và dễ dàng trong việc sử dụng.

3.1. Phương pháp nuôi cấy vi khuẩn E. coli

Việc nuôi cấy vi khuẩn E. coli được thực hiện trong môi trường thạch máu và môi trường lỏng. Các điều kiện nuôi cấy như nhiệt độ, pH và thời gian cần được tối ưu hóa để đạt được mật độ vi khuẩn cao nhất. Nghiên cứu đã chỉ ra rằng việc sử dụng môi trường thạch máu giúp tăng cường khả năng sinh trưởng của vi khuẩn.

3.2. Phương pháp kiểm nghiệm độc lực của vi khuẩn

Kiểm nghiệm độc lực của vi khuẩn E. coli được thực hiện trên chuột thí nghiệm. Các chỉ tiêu như tỷ lệ chết và thời gian sống sót được ghi nhận để đánh giá độc lực của các chủng vi khuẩn. Kết quả cho thấy các chủng vi khuẩn có độc lực cao đều có khả năng gây bệnh mạnh trên lợn.

IV. Kết quả nghiên cứu và ứng dụng thực tiễn của vaccine

Kết quả nghiên cứu cho thấy vaccine vô hoạt có bổ trợ keo phèn phòng bệnh phù đầu lợn do E. coli có hiệu quả cao trong việc phòng ngừa bệnh. Các thử nghiệm trên lợn cho thấy tỷ lệ an toàn và hiệu lực bảo vệ đạt yêu cầu. Vaccine đã được đưa vào sản xuất và sử dụng rộng rãi trong ngành chăn nuôi.

4.1. Kết quả kiểm nghiệm vaccine trên chuột thí nghiệm

Kết quả kiểm nghiệm cho thấy vaccine đạt tỷ lệ an toàn 100% trên chuột thí nghiệm với liều tiêm 0.5ml. Hiệu lực bảo vệ đạt từ 70-90%, cho thấy vaccine có khả năng phòng ngừa bệnh hiệu quả.

4.2. Ứng dụng vaccine trong chăn nuôi lợn

Vaccine đã được áp dụng trong thực tiễn chăn nuôi lợn tại nhiều địa phương. Việc sử dụng vaccine giúp giảm tỷ lệ mắc bệnh và thiệt hại kinh tế cho người chăn nuôi. Nghiên cứu cũng cho thấy vaccine có thể tạo miễn dịch lâu dài cho lợn.

V. Kết luận và triển vọng tương lai của nghiên cứu vaccine

Nghiên cứu sản xuất vaccine phòng bệnh phù đầu lợn do E. coli đã đạt được nhiều kết quả khả quan. Tuy nhiên, cần tiếp tục nghiên cứu để cải thiện quy trình sản xuất và nâng cao hiệu quả của vaccine. Tương lai, vaccine này có thể trở thành giải pháp chính trong việc phòng ngừa bệnh phù đầu lợn tại Việt Nam.

5.1. Định hướng nghiên cứu trong tương lai

Các nghiên cứu tiếp theo sẽ tập trung vào việc cải thiện quy trình sản xuất vaccine, nghiên cứu các chủng vi khuẩn mới và phát triển các loại vaccine kết hợp. Mục tiêu là tạo ra các sản phẩm vaccine an toàn và hiệu quả hơn cho ngành chăn nuôi.

5.2. Tầm quan trọng của vaccine trong ngành chăn nuôi

Vaccine không chỉ giúp bảo vệ sức khỏe đàn lợn mà còn đảm bảo an toàn thực phẩm cho người tiêu dùng. Việc phát triển vaccine hiệu quả sẽ góp phần nâng cao chất lượng sản phẩm chăn nuôi và tăng cường sức cạnh tranh của ngành chăn nuôi Việt Nam trên thị trường quốc tế.

Trích đoạn nội dung tài liệu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM HOÀNG THỊ THÚY NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT VACCINE BỔ TRỢ KEO PHÈN PHÒNG BÊNH PHÙ ĐẦU LỢN DO E.COLI DUNG HUYẾT GÂY RA THEO QUY MÔ CÔNG NGHIỆP Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01 Người hướng dẫn khoa học: TS. Vũ Như Quán NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2018 LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng được sử dụng để bảo vệ một học vị nào. Tôi cam đoan rằng, mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn này đã được cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn đều được chỉ rõ nguồn gốc.

Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Hoàng Thị Thúy i LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn, tôi đã nhận được sự hướng dẫn, chỉ bảo tận tình của các thầy cô giáo, sự giúp đỡ, động viên của bạn bè, đồng nghiệp và gia đình. Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tôi được bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc đến TS. Vũ Như Quán bộ môn Ngoại-Sản đã tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Ngoại-Sản, Khoa Thú y - Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã tận tình giúp đỡ tôi trong quá trình học tập, thực hiện đề tài và hoàn thành luận văn.

Tôi xin chân thành cảm ơn sâu sắc đến PGS. Cù Hữu Phú cùng toàn thể cán bộ công nhân viên tại Trung tâm nghiên cứu phát triển vacxin thuộc Công ty CP Đức Hạnh Marphavet đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài. Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp đã tạo mọi điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi về mọi mặt, động viên khuyến khích tôi hoàn thành luận văn. Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Hoàng Thị Thúy ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] MỤC LỤC Lời cam đoan.

ii Mục lục. iii Danh mục chữ viết tắt. vi Danh mục bảng. vii Danh mục sơ đồ hình ảnh.

viii Trích yếu luận văn………………………………………….ix Thesis abstract. Tính cấp thiết của đề tài. Mục tiêu nghiên cứu. Mục tiêu tổng quát.

Mục tiêu cụ thể. Phạm vi nghiên cứu. Thực tiễn của đề tài. Tổng quan tài liệu.

Một số hiểu biết về vi khuẩn E.2 Kháng nguyên .3 Các yếu tố gây bệnh. Đặc tính nuôi cấy, sinh vật, hoá học. Bệnh phù đầu do E. coli gây ra.

Phòng bệnh. Bệnh phù đầu ở lợn con. Các vacxin phòng bệnh phù đầu lợn. Các vacxin phòng bệnh phù đầu do E.

coli gây ra. Vacxin phòng bệnh do E. coli gây ra nhập khẩu. 13 iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.

Vật liệu và phương pháp nghiên cứu. Địa điểm nghiên cứu. Thời gian nghiên cứu. Nguyên liệu dùng cho nghiên cứu.

Vi khuẩn sử dụng chế tạo vaccine vô hoạt phòng bệnh Phù đầu lợn lưu giữ tại Trung tâm nghiên cứu phát triển vaccine. Môi trường, hóa chất dùng trong nghiên cứu, sản xuất vaccine vô hoạt phòng bệnh Phù đầu lợn. Máy móc, dụng cụ thí nghiệm. Nội dung nghiên cứu.

Phương pháp nghiên cứu. Phương pháp giám định vi khuẩn. Phương pháp giám định vi khuẩn. Phương pháp giám định vi khuẩn.

Phương pháp giám định vi khuẩn. Phương pháp giám định vi khuẩn. Phương pháp phân tích số liệu. Kết quả và thảo luận.

Kết quả kiểm định giống E. coli sản xuất vaccine. Kết quả kiểm tra một số đặc tính nuôi cấy. Kết quả kiểm tra một số đặc tính sinh hoá của vi khuẩn E.

Kết quả kiểm tra serotype kháng nguyên O của vi khuẩn E. Kết quả kiểm tra các gen quy định sinh tổng hợp các yếu tố gây bệnh của vi khuẩn E. Kết quả kiểm tra độc lực của các chủng vi khuẩn E. coli trên chuột bạch.

Quy trình sản xuất vaccine theo quy mô công nghiệp. Giống vi khuẩn E. coli để sản xuất vaccine. Nhân giống vi khuẩn E.

coli trên môi trường thạch máu. Nhân giống vi khuẩn E. coli trên môi trường lỏng. Bổ sung keo phèn vào canh trùng .5 Giai đoạn đóng chai, dán nhãn vaccine.

Quá trình bảo quản vaccine. 33 iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.3 Kết quả kiểm nghiệm vaccine sản xuất thử nghiệm. Kết quả kiểm tra một số chỉ tiêu các lô vaccine sản xuất theo quy mô công nghiệp. Kết quả kiểm tra thuần khiết của canh trùng sử dụng chế tạo vaccine.

Kết quả kiểm tra vô trùng của 3 lô vaccine sản xuất theo quy mô công nghiệp. Kết quả kiểm tra an toàn trên chuột nhắt trắng. Kết quả kiểm tra hiệu lực trên chuột nhăt trắng .6 Kết quả kiểm tra an toàn vaccine trên lợn. Kết quả thử hiệu lực vaccine trên lợn.

Kết quả xác định liều tiêm vaccine Phù đầu lợn. Kết quả xác định độ dài miễn dịch của vaccine Phù đầu lợn. Kết quả thử nghiệm vaccine trên diện rộng. Kết luận và kiến nghị.

45 Tài liệu tham khảo. 46 v LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Tên đầy đủ BHI : Brain Heart Infusion CFU : Colony Forming Unit Cs : Cộng sự DHL : Deoxycholate Hydrogen sulfide Lactose DNA : DeoxyriboNucleic Acid ETEC : EnteroToxigenic E. coli : Escherichia coli ELISA : Enzyme - linked Immuno sorbant assay GDP : Guanin DiPhosphate GTP : Guanin TriPhosphate IHA : Indirect Haemagglutination test InvA : Invasion A LPS : LipoPolySaccharide PCR : Polymerase Chain Reaction RR : Relative Risk TSA : Tryptic Soya Agar TCVN : Tiêu chuẩn Việt Nam VX : Vaccine vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC BẢNG Bảng 3. Các cặp mồi do công ty Fermentas cung cấp để xác định các yếu tố độc lực và bám dính của vi khuẩn E.

Một số đặc tính nuôi cấy của các chủng vi khuẩn E. Một số đặc tính sinh hoá của vi khuẩn E. Serotyp kháng nguyên O của các chủng vi khuẩn E. coli nghiên cứu.

Tỷ lệ các chủng vi khuẩn E. coli mang các gen quy định sinh tổng hợp các yếu tố gây bệnh. Độc lực của 10 chủng vi khuẩn E. coli trên chuột bạch.

Kết quả kiểm tra đậm độ các lô vaccine. Kết quả kiểm tra thuần khiết của 3 lô canh trùng sử dụng chế tạo vaccine. Kết quả kiểm tra vô trùng của vaccine chế tạo. Kết quả kiểm tra an toàn vaccine trên chuột nhắt trắng.

Kết quả kiểm hiệu lực vaccine trên chuột nhắt trắng. Kết quả kiểm tra an toàn vaccine trên lợn. Kết quả đánh giá hiệu lực vaccine trên lợn. Kết quả xác định kháng thể ở lợn tiêm vaccine với liều tiêm khác nhau.

Kết quả kiểm tra hàm lượng kháng thể trên lợn tiêm vaccine. 43 vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC SƠ ĐỒ VÀ HÌNH ẢNH Sơ đồ 4. Quy trình sản xuất vaccine vô hoạt phù đầu lợn có bổ trợ keo phèn. Hình thái vi khuẩn E.

coli mọc trên thạch máu. Hình thái vi khuẩn E. coli soi trên kính hiển vi quang học. Cấy nhân giống vi khuẩn E.

coli trên thạch máu. coli giống nhỡ được nuôi cấy trong tủ lắc. Máy lên men sục khí 15 lít SATORIUS của CHLB Đức. Máy lên men sục khí 120 lit SATORIUS của CHLB Đức.

Hệ thống ra chai tự động của Ý. Dây truyền dán nhãn tự động. 33 viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Hoàng Thị Thúy Tên luận văn: “Nghiên cứu sản xuất vaccine bổ trợ keo phèn phòng bệnh phù đầu lợn do E. coli dung huyết gây ra theo quy mô công nghiệp”.

Ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01 Tên cơ sở đào tạo: Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu: Đánh giá đươc quy trình sản xuất vaccine quy mô công nghiệp, quy trình kiểm nghiệm, sử dụng và bảo quản vaccine vô hoạt có bổ trợ keo phèn phòng bệnh Phù đầu lợn do vi khuẩn E. coli dung huyết gây ra. Phương pháp: Phương pháp giám định vi khuẩn Phương pháp xác định các yếu tố gây bệnh của vi khuẩn phân lập được bằng kỹ thuật PCR Phương pháp kiểm tra độc lực của vi khuẩn trên động vật thí nghiệm Phương pháp chế tạo vaccine phòng bệnh phù đầu lợn Phương pháp kiểm nghiệm vaccine phù đầu lợn. Kết quả chính và kết luận: 1.

5 chủng vi khuẩn E. coli phân lập được sử dụng để chế vaccine phòng bệnh phù đầu cho lợn là đại diện cho các chủng vi khuẩn gây bệnh phù đầu lợn con trước và sau cai sữa tại các tỉnh, sau khi bảo quản thời gian dài dưới dạng thạch lỏng và đông khô, vẫn mang đầy đủ các đặc điểm sau: + Mang đầy đủ các đặc tính hình thái, nuôi cấy, sinh hóa như chủng gây bệnh trong tự nhiên. + Mang các gen quy định sinh tổng hợp các yếu tố gây bệnh ổn định sau khi lưu giữ sau thời gian dài ở thạch lỏng Glycerin và đông khô. + Có độc lực mạnh, gây chết 100% chuột thí nghiệm trong vòng 24 giờ.

Các lô vaccine chế tạo trên quy mô công nghiệp đều đạt các chỉ tiêu về: + Phương pháp lên men sục khí canh trùng nuôi cấy đạt đậm độ vi khuẩn: từ 17 9 x 10 vi khuẩn/ml. + Vô trùng bằng Formol 0,5% đạt kết quả 100% vô trùng khi kiểm tra trên các môi trường thạch máu, nước thịt, môi trường yếm khí và thạch nấm. ix LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Các lô vaccine chế tạo trên quy mô công nghiệp đều đạt các chỉ tiêu sau: + Khi thử nghiệm trên chuột bạch, đạt chỉ tiêu an toàn 100% với liều tiêm 0.5ml/chuột với đường tiêm vào phúc xoang và hiệu lực bảo hộ đạt từ 70-90%.

+ Với liều tiêm gấp đôi và gấp ba liều tiêm miễn dịch: vaccine an toàn 100% với lợn từ 21 ngày tuổi. Vaccine khi được thử nghiệm trên diện rộng đạt chỉ tiêu an toàn cao với liều tiêm 1 ml/con và tạo được miễn dịch phòng hộ tốt. x LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] THESIS ABSTRACT Master candidate: Hoang Thi Thuy Thesis title: Study on the production of vaccine adjuvant alum against head edema of pigs caused by E.coli in industrial scale.