Luận văn thạc sĩ vnua xác định giá trị sử dụng của các phương pháp xét nghiệm vi sinh vật ứng dụng trong kiểm nghiệm thịt đông lạnh nhập khẩu

Luận văn thạc sĩ nghiên cứu vnua xác định giá trị sử dụng của các phương pháp xét nghiệm vi sinh vật ứng dụng trong kiểm nghiệm, khảo sát thực trạng, phân tích nguyên nhân, đề

• Tác giả: Nguyễn Thị Hằng
• Người hướng dẫn: PGS. Phạm Hồng Ngân
• Trường học: Học Viện Nông Nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Thú y
• Đề tài: Xác định giá trị sử dụng của các phương pháp xét nghiệm vi sinh vật ứng dụng trong kiểm nghiệm thịt đông lạnh nhập khẩu
• Loại tài liệu: Luận văn
• Năm xuất bản: 2017
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• 1. MỤC LỤC
• 1.1. Lời cam đoan
• 1.2. Mục lục
• 1.3. Danh mục chữ viết tắt
• 1.4. Danh mục bảng
• 1.5. Danh mục hình
• 1.6. Trích yếu luận văn
• 1.7. Thesis abstract
• 1.8. Tính cấp thiết của đề tài
• 1.9. Mục tiêu nghiên cứu
• 1.10. Phạm vi nghiên cứu
• 1.11. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài
• 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 2.1. XÁC ĐỊNH GIÁ TRỊ SỬ DỤNG CỦA PHƯƠNG PHÁP
• 2.1.1. Một số khái niệm
• 2.1.2. Các thông số kỹ thuật cần xác định trong thẩm định phương pháp
• Tài liệu tham khảo

Tóm tắt

I. Tổng quan về giá trị sử dụng phương pháp xét nghiệm vi sinh vật

Phương pháp xét nghiệm vi sinh vật đóng vai trò quan trọng trong việc đảm bảo an toàn thực phẩm, đặc biệt là trong kiểm nghiệm thịt đông lạnh. Việc xác định giá trị sử dụng của các phương pháp này không chỉ giúp nâng cao chất lượng sản phẩm mà còn bảo vệ sức khỏe người tiêu dùng. Các phương pháp này cần được thẩm định kỹ lưỡng để đảm bảo tính chính xác và độ tin cậy của kết quả.

1.1. Tầm quan trọng của kiểm nghiệm vi sinh vật trong thực phẩm

Kiểm nghiệm vi sinh vật là một phần không thể thiếu trong quy trình đảm bảo an toàn thực phẩm. Nó giúp phát hiện các mầm bệnh tiềm ẩn, từ đó ngăn chặn nguy cơ ngộ độc thực phẩm. Các phương pháp xét nghiệm hiện nay được áp dụng rộng rãi và cần thiết để bảo vệ sức khỏe cộng đồng.

1.2. Các tiêu chuẩn quốc tế trong kiểm nghiệm vi sinh vật

Việc áp dụng các tiêu chuẩn quốc tế như ISO, AOAC trong kiểm nghiệm vi sinh vật giúp đảm bảo tính đồng nhất và độ tin cậy của kết quả. Các tiêu chuẩn này cung cấp hướng dẫn chi tiết về quy trình và phương pháp thực hiện, từ đó nâng cao chất lượng kiểm nghiệm.

II. Vấn đề và thách thức trong kiểm nghiệm thịt đông lạnh

Kiểm nghiệm thịt đông lạnh gặp nhiều thách thức do sự đa dạng của các loại vi sinh vật có thể gây ô nhiễm. Các phương pháp xét nghiệm cần phải được cải tiến liên tục để đáp ứng yêu cầu ngày càng cao về an toàn thực phẩm. Việc phát hiện nhanh chóng và chính xác các vi sinh vật gây hại là rất cần thiết.

2.1. Các loại vi sinh vật thường gặp trong thịt đông lạnh

Thịt đông lạnh có thể bị ô nhiễm bởi nhiều loại vi sinh vật như Salmonella, E. coli, và Listeria. Những vi sinh vật này không chỉ gây hại cho sức khỏe mà còn ảnh hưởng đến chất lượng sản phẩm. Việc nhận diện và kiểm soát chúng là rất quan trọng.

2.2. Thách thức trong việc phát hiện vi sinh vật

Một trong những thách thức lớn nhất trong kiểm nghiệm vi sinh vật là thời gian và độ chính xác của các phương pháp hiện tại. Nhiều phương pháp truyền thống mất nhiều thời gian và không đảm bảo độ nhạy cao, điều này đòi hỏi sự phát triển các phương pháp mới hiệu quả hơn.

III. Phương pháp kiểm nghiệm vi sinh vật hiệu quả trong thịt đông lạnh

Để đảm bảo an toàn thực phẩm, việc áp dụng các phương pháp kiểm nghiệm vi sinh vật hiệu quả là rất cần thiết. Các phương pháp này không chỉ giúp phát hiện nhanh chóng các vi sinh vật gây hại mà còn đảm bảo độ chính xác cao trong kết quả.

3.1. Phương pháp định lượng tổng số vi sinh vật hiếu khí

Phương pháp định lượng tổng số vi sinh vật hiếu khí theo TCVN 9977:2013 là một trong những phương pháp phổ biến. Phương pháp này giúp xác định số lượng vi sinh vật có trong mẫu thịt, từ đó đánh giá mức độ ô nhiễm.

3.2. Phương pháp phát hiện Salmonella trong thịt

Phương pháp phát hiện Salmonella theo TCCS 03:2016/TYV2-CĐ cho phép phát hiện nhanh chóng và chính xác sự hiện diện của vi sinh vật này trong mẫu thịt. Độ nhạy và độ đặc hiệu của phương pháp này đã được chứng minh qua nhiều nghiên cứu.

IV. Ứng dụng thực tiễn và kết quả nghiên cứu trong kiểm nghiệm

Kết quả nghiên cứu cho thấy các phương pháp xét nghiệm vi sinh vật hiện tại đã đạt được hiệu quả cao trong việc kiểm nghiệm thịt đông lạnh. Việc áp dụng các phương pháp này không chỉ giúp đảm bảo an toàn thực phẩm mà còn nâng cao chất lượng sản phẩm trên thị trường.

4.1. Kết quả kiểm nghiệm mẫu thịt đông lạnh nhập khẩu

Kết quả kiểm nghiệm cho thấy 100% mẫu thịt đông lạnh nhập khẩu đạt tiêu chuẩn an toàn thực phẩm. Không phát hiện Salmonella và E. coli trong các mẫu xét nghiệm, cho thấy hiệu quả của các phương pháp kiểm nghiệm đã được áp dụng.

4.2. Ứng dụng các phương pháp mới trong kiểm nghiệm

Việc ứng dụng các phương pháp mới trong kiểm nghiệm vi sinh vật đã giúp rút ngắn thời gian xét nghiệm và nâng cao độ chính xác. Điều này không chỉ giúp bảo vệ sức khỏe người tiêu dùng mà còn tạo điều kiện thuận lợi cho hoạt động thương mại.

V. Kết luận và tương lai của kiểm nghiệm vi sinh vật

Tương lai của kiểm nghiệm vi sinh vật trong thịt đông lạnh sẽ tiếp tục phát triển với sự cải tiến của các phương pháp xét nghiệm. Việc áp dụng công nghệ mới và tiêu chuẩn quốc tế sẽ giúp nâng cao chất lượng kiểm nghiệm và đảm bảo an toàn thực phẩm cho người tiêu dùng.

5.1. Xu hướng phát triển các phương pháp mới

Xu hướng phát triển các phương pháp mới trong kiểm nghiệm vi sinh vật sẽ tập trung vào việc nâng cao độ nhạy và độ chính xác. Các công nghệ mới như PCR và ELISA đang được nghiên cứu và áp dụng rộng rãi.

5.2. Tầm quan trọng của việc tuân thủ tiêu chuẩn quốc tế

Việc tuân thủ các tiêu chuẩn quốc tế trong kiểm nghiệm vi sinh vật là rất quan trọng. Điều này không chỉ giúp nâng cao chất lượng sản phẩm mà còn bảo vệ sức khỏe người tiêu dùng, đồng thời tạo niềm tin cho thị trường.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Thương mại quốc tế phát triển mạnh mẽ kéo theo sự gia tăng nhanh chóng của các mặt hàng thực phẩm đông lạnh nhập khẩu vào thị trường Việt Nam. Theo số liệu thống kê từ Cục An toàn thực phẩm giai đoạn 2014-2015, cả nước đã ghi nhận tới 370 vụ ngộ độc thực phẩm khiến 66 trường hợp tử vong, trong đó nguy cơ ô nhiễm vi sinh vật đường ruột như Salmonella và Escherichia coli chiếm tỷ lệ từ 30% đến 40% trong chuỗi cung ứng thịt. Thực trạng này đặt ra yêu cầu cấp thiết đối với công tác kiểm dịch thú y tại các cửa khẩu, đòi hỏi quy trình xét nghiệm vừa phải đảm bảo độ chuẩn xác nghiêm ngặt theo tiêu chuẩn ISO/IEC 17025, vừa phải tối ưu hóa thời gian để đẩy nhanh tiến độ thông quan hàng hóa.

Luận văn thạc sĩ chuyên ngành Thú y của tác giả Nguyễn Thị Hằng, dưới sự hướng dẫn khoa học của PGS.TS. Phạm Hồng Ngân tại Học viện Nông nghiệp Việt Nam, tập trung giải quyết bài toán cốt lõi: Xác định giá trị sử dụng của các phương pháp xét nghiệm vi sinh vật thay thế và ứng dụng vào kiểm nghiệm thịt đông lạnh nhập khẩu. Mục tiêu cụ thể là thẩm định tính chính xác của phương pháp đếm nhanh Petrifilm và môi trường Iris Salmonella so với các phương pháp nuôi cấy truyền thống, từ đó triển khai phân tích thực tế trên 865 mẫu thịt nhập khẩu.

Nghiên cứu được triển khai từ tháng 8/2016 đến tháng 6/2017 tại Phòng Vi sinh thực phẩm thuộc Trạm Chẩn đoán xét nghiệm bệnh động vật - Cơ quan Thú y vùng II. Kết quả nghiên cứu mang lại ý nghĩa kinh tế và kỹ thuật to lớn khi giúp cắt giảm thời gian kiểm nghiệm từ 72-96 giờ xuống chỉ còn 37-48 giờ, giúp doanh nghiệp tiết kiệm hàng trăm triệu đồng chi phí lưu kho bãi và nâng cao năng lực giám sát an toàn sinh học quốc gia.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu được xây dựng dựa trên nền tảng lý thuyết thẩm định phương pháp phân tích vi sinh vật theo hướng dẫn của ISO 16140:2003, tiêu chuẩn quốc gia TCVN 9332:2012 và quy chuẩn kỹ thuật quốc tế AOAC International. Về mặt pháp lý, đề tài bám sát các chỉ tiêu bắt buộc trong Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia QCVN 8-3:2012/BYT về ô nhiễm vi sinh vật trong thực phẩm, Luật An toàn thực phẩm số 55/2010/QH12, cùng các khuyến cáo kỹ thuật từ Quy định Ủy ban Châu Âu EC số 2073/2005.

Khung lý thuyết tập trung vào các khái niệm định lượng và định tính then chốt:

• Độ lặp lại (Sr): Biến thiên kết quả đo trên cùng một mẫu thử trong khoảng thời gian ngắn, yêu cầu kỹ thuật đạt giá trị dưới 0,15.
• Độ tái lặp (SR): Mức độ sai lệch kết quả khi phân tích mẫu trong điều kiện phòng thí nghiệm mở rộng, yêu cầu kỹ thuật đạt giá trị dưới 0,25.
• Độ không đảm bảo đo mở rộng (Ue): Khoảng phân bố chứa phần lớn các giá trị thực của đại lượng đo với hệ số phủ k=2 (độ tin cậy 95%), yêu cầu khống chế dưới 0,5.
• Giới hạn phát hiện (LOD), độ nhạy (Se), độ đặc hiệu (Sp) và độ chính xác (Ac): Các tham số đo lường hiệu năng của phương pháp định tính vi sinh vật gây bệnh.

Phương pháp nghiên cứu

Nguồn dữ liệu thực nghiệm bao gồm 4 chủng chuẩn quốc tế từ hệ thống ATCC: Salmonella enteritidis ATCC 49223, Escherichia coli ATCC 11303, Staphylococcus aureus ATCC 29213 và Vibrio parahaemolyticus ATCC 17802. Tất cả chủng chuẩn đều được kiểm tra sinh hóa và định danh trên hệ thống tự động Vitek 2 Compact với độ tương đồng đạt trên 98%. Nguồn mẫu kiểm nghiệm thực tế gồm 173 lô hàng thịt đông lạnh nhập khẩu tương ứng với 865 mẫu (470 mẫu thịt bò, 320 mẫu đùi gà và 75 mẫu gà nguyên con).

Phương pháp chọn mẫu áp dụng theo kế hoạch lấy mẫu đại diện 5 đơn vị (n=5, c=2, m, M) quy định tại QCVN 8-3:2012/BYT. Trong các thử nghiệm thẩm định, cỡ mẫu thực nghiệm được thiết kế với n=10 lần lặp lại cho mỗi mức nồng độ gây nhiễm nhân tạo từ 10^2 đến 10^4 CFU/g đối với phép thử định lượng và dải nồng độ nhị phân từ 1 đến 20 CFU/25g đối với phép thử định tính.

Lý do lựa chọn phương pháp phân tích: Nghiên cứu đối chứng phương pháp đĩa đông khô pha sẵn Petrifilm (TCVN 9977:2013, TCVN 9975:2013) với phương pháp đổ đĩa thạch truyền thống (TCVN 4884-1:2015, TCVN 7924-2:2008), đồng thời so sánh môi trường tạo màu Iris Salmonella agar (TCCS 03:2016/TYV2-CĐ) với quy trình truyền thống TCVN 4829:2005. Các phương pháp thay thế này giúp loại bỏ nguy cơ sốc nhiệt tế bào vi khuẩn trong quá trình đổ thạch nóng chảy và rút ngắn quy trình tăng sinh. Toàn bộ số liệu được xử lý bằng phần mềm Excel kết hợp công cụ dịch tễ OpenEpi, sử dụng thuật toán Spearman-Karber để tính toán LOD50.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

Quá trình thực nghiệm đã chứng minh các phương pháp thay thế đạt độ tin cậy vượt trội so với tiêu chuẩn tham chiếu:

Thứ nhất, đối với chỉ tiêu định lượng Tổng số vi sinh vật hiếu khí (TCVN 9977:2013), phương pháp Petrifilm cho độ lặp lại Sr dao động từ 0,045 đến 0,047 và độ tái lặp SR từ 0,033 đến 0,038 trên cả hai nền mẫu thịt bò và thịt gà. Giá trị này ổn định hơn rõ rệt so với phương pháp đổ đĩa PCA truyền thống (Sr từ 0,049 đến 0,058; SR từ 0,043 đến 0,056). Độ không đảm bảo đo mở rộng của phương pháp đạt mức 0,1268, thấp hơn nhiều so với ngưỡng khống chế 0,5 theo chuẩn TCVN 9332:2012.

Thứ hai, đối với định lượng E. coli (TCVN 9975:2013), đĩa Petrifilm E. coli/Coliform ghi nhận Sr từ 0,029 đến 0,033, SR từ 0,032 đến 0,039 và độ không đảm bảo đo Ue chỉ ở mức 0,098. Thời gian ủ đọc kết quả được rút ngắn 24 giờ so với kỹ thuật đếm khuẩn lạc truyền thống.

Thứ ba, đối với phương pháp định tính phát hiện Salmonella spp. bằng môi trường thạch Iris Salmonella (TCCS 03:2016/TYV2-CĐ), giới hạn phát hiện đạt mức 2 CFU/25g mẫu. Phương pháp ghi nhận độ nhạy Se đạt 95,56%, độ đặc hiệu Sp đạt 100% và độ chính xác Ac đạt 97,33%. Thời gian cho kết quả giảm mạnh từ 96 giờ xuống còn 37 giờ (giảm hơn 61% thời gian phân tích).

Thứ tư, kết quả ứng dụng kiểm nghiệm trên 173 lô hàng thực tế (865 mẫu thịt đông lạnh nhập khẩu) cho thấy 100% mẫu đạt tiêu chuẩn vệ sinh an toàn thực phẩm. Hoàn toàn không phát hiện Salmonella và E. coli trong toàn bộ các mẫu; mật độ tổng số vi sinh vật hiếu khí dao động trong khoảng từ 4,0x10^1 đến 8,0x10^2 CFU/g, nằm sâu dưới ngưỡng tối đa cho phép 5,0x10^6 CFU/g.

Thảo luận kết quả

Sự vượt trội của phương pháp Petrifilm bắt nguồn từ tính đồng nhất cao của môi trường đông khô pha sẵn, giúp triệt tiêu các sai số do kỹ thuật chuẩn bị môi trường và thao tác đun rót thạch thủ công. Kiểm định phương sai trên nền mẫu thịt gà cho giá trị P-value = 0,39373, khẳng định không có sự sai khác mang tính ngẫu nhiên giữa hai kỹ thuật.

Dữ liệu so sánh độ lặp lại và tái lặp giữa các phương pháp có thể được trực quan hóa tối ưu thông qua biểu đồ cột ghép (Clustered Column Chart), phản ánh độ lệch chuẩn thu hẹp ở phương pháp Petrifilm. Tương tự, hiệu suất phát hiện Salmonella trên môi trường Iris agar được mô tả trực quan qua ma trận phân loại nhị phân 2x2, chứng minh tính chọn lọc tuyệt đối không xuất hiện dương tính giả.

Ý nghĩa thực tiễn của phát hiện này đặc biệt lớn: Việc cắt giảm thời gian thử nghiệm vi sinh vật giúp các lô hàng thịt đông lạnh nhập khẩu được giải phóng nhanh chóng, ngăn ngừa nguy cơ hư hỏng và giảm thiểu đáng kể chi phí lưu kho lạnh cho các đơn vị kinh doanh thực phẩm.

Đề xuất và khuyến nghị

Dựa trên các bằng chứng khoa học vững chắc từ luận văn, 4 giải pháp trọng tâm được khuyến nghị triển khai:

1. Ban hành văn bản kỹ thuật chuẩn hóa: Cục Thú y chủ trì xây dựng và ban hành tài liệu hướng dẫn áp dụng phương pháp Petrifilm (TCVN 9977:2013, TCVN 9975:2013) và môi trường Iris Salmonella cho 100% các Trạm Kiểm dịch động vật cửa khẩu trên toàn quốc trong thời gian 6 tháng tới.
2. Nâng cấp trang thiết bị phòng thử nghiệm: Đầu tư đồng bộ hệ thống định danh vi sinh tự động Vitek 2 và trang cấp đĩa Petrifilm cho ít nhất 15 phòng kiểm nghiệm trọng điểm trong giai đoạn 2024-2025, hướng tới mục tiêu giảm 50% thời gian trả kết quả kiểm dịch thịt nhập khẩu.
3. Tổ chức chương trình thử nghiệm thành thạo liên phòng: Cơ quan Thú y vùng II phối hợp với các trung tâm kiểm nghiệm chuyên ngành tổ chức định kỳ 02 đợt so sánh liên phòng hàng năm, duy trì độ không đảm bảo đo mở rộng Ue luôn dưới mức 0,20 đối với các phép thử vi sinh vật.
4. Số hóa quy trình quản lý dữ liệu kiểm nghiệm: Triển khai phần mềm số hóa kết quả kiểm nghiệm nhằm đồng bộ hóa dữ liệu phân tích từ hơn 800 mẫu kiểm tra mỗi năm lên Cổng thông tin một cửa quốc gia, hoàn thiện trong vòng 12 tháng do các Chi cục Thú y vùng phối hợp cơ quan Hải quan thực hiện.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

Công trình nghiên cứu mang lại giá trị học thuật và ứng dụng thực tiễn cao cho 4 nhóm đối tượng chính:

• Kiểm nghiệm viên và quản lý phòng thử nghiệm vi sinh: Nắm vững quy trình thẩm định phương pháp theo ISO 17025, cách tính độ không đảm bảo đo và phương pháp Spearman-Karber xác định LOD trong thực tế.
• Doanh nghiệp xuất nhập khẩu và phân phối thịt đông lạnh: Hiểu rõ các chỉ tiêu kỹ thuật vi sinh theo QCVN 8-3:2012/BYT và tiêu chuẩn EC 2073/2005 để chủ động kiểm soát chất lượng chuỗi cung ứng lạnh.
• Cơ quan quản lý nhà nước về vệ sinh an toàn thực phẩm: Sử dụng dữ liệu khoa học của luận văn làm căn cứ hoàn thiện các rào cản kỹ thuật hợp pháp, bảo vệ người tiêu dùng trước nguy cơ thực phẩm bẩn.
• Giảng viên, học viên cao học và sinh viên ngành Thú y, Công nghệ Thực phẩm: Tiếp cận một tài liệu tham khảo chuẩn mực về phương pháp bố trí thí nghiệm đối chứng vi sinh và xử lý thống kê y sinh học.

Câu hỏi thường gặp

Ưu điểm nổi bật nhất của đĩa đếm Petrifilm so với phương pháp đổ đĩa thạch truyền thống là gì? Phương pháp Petrifilm sử dụng môi trường đông khô pha sẵn, giúp loại bỏ hoàn toàn nguy cơ sốc nhiệt tế bào vi sinh vật, rút ngắn thời gian chuẩn bị môi trường và giảm thời gian ủ từ 72 giờ xuống 48 giờ với độ lặp lại Sr rất thấp từ 0,045 đến 0,047.

Môi trường Iris Salmonella agar giúp rút ngắn thời gian xét nghiệm như thế nào? Iris Salmonella agar tích hợp gộp bước tăng sinh cơ bản và tăng sinh chọn lọc, cho phép phát hiện Salmonella sau 37 giờ thay vì 96 giờ như phương pháp truyền thống, đồng thời đạt độ đặc hiệu 100% và giới hạn phát hiện 2 CFU/25g mẫu.

Độ không đảm bảo đo của các phương pháp thay thế trong nghiên cứu có đạt chuẩn quốc tế không? Độ không đảm bảo đo mở rộng Ue của phương pháp TCVN 9977:2013 đạt 0,1268 và TCVN 9975:2013 đạt 0,098. Các giá trị này đều nằm sâu dưới ngưỡng giới hạn 0,5 theo TCVN 9332:2012 và đáp ứng toàn diện yêu cầu của ISO/IEC 17025.

Chất lượng vệ sinh của 865 mẫu thịt đông lạnh nhập khẩu trong đề tài được ghi nhận ra sao? Toàn bộ 173 lô hàng tương ứng 865 mẫu thịt bò và thịt gà đông lạnh nhập khẩu đều đạt 100% tiêu chuẩn an toàn thực phẩm theo QCVN 8-3:2012/BYT, không phát hiện vi khuẩn Salmonella và E. coli, tổng số vi sinh vật hiếu khí đều dưới 10^3 CFU/g.

Các chủng chuẩn vi sinh vật sử dụng trong quá trình thẩm định được kiểm soát như thế nào? Đề tài sử dụng 4 chủng chuẩn ATCC chính hãng, được phục hồi và kiểm tra toàn diện 64 phản ứng sinh hóa trên hệ thống tự động Vitek 2 Compact với độ tương đồng đạt trên 98% trước khi tiến hành gây nhiễm thực nghiệm.

Kết luận

• Thẩm định thành công phương pháp định lượng Tổng số vi sinh vật hiếu khí (TCVN 9977:2013) và E. coli (TCVN 9975:2013) bằng đĩa Petrifilm với độ lặp lại và tái lặp vượt trội (Sr từ 0,029 đến 0,047; SR từ 0,032 đến 0,039).
• Xác nhận giá trị sử dụng của môi trường Iris Salmonella agar (TCCS 03:2016/TYV2-CĐ) đạt giới hạn phát hiện 2 CFU/25g, độ đặc hiệu 100% và độ nhạy 95,56%.
• Rút ngắn thời gian xét nghiệm định tính Salmonella từ 96 giờ xuống 37 giờ và định lượng vi sinh vật hiếu khí từ 72 giờ xuống 48 giờ.
• Đánh giá thực nghiệm 865 mẫu thịt đông lạnh nhập khẩu đạt tỷ lệ 100% an toàn theo quy chuẩn kỹ thuật quốc gia QCVN 8-3:2012/BYT.
• Cung cấp cơ sở khoa học và dữ liệu thực nghiệm hoàn chỉnh phục vụ đăng ký công nhận năng lực phòng thử nghiệm theo chuẩn mực quốc tế ISO/IEC 17025.

Trong 6 đến 12 tháng tiếp theo, việc mở rộng chuyển giao quy trình phân tích nhanh này tại các trạm kiểm dịch trên toàn quốc sẽ tạo bước đột phá trong kiểm soát an toàn thực phẩm nhập khẩu. Các đơn vị kiểm nghiệm và doanh nghiệp quan tâm có thể liên hệ Cơ quan Thú y vùng II hoặc Học viện Nông nghiệp Việt Nam để tiếp nhận tài liệu kỹ thuật chi tiết và triển khai áp dụng vào thực tế.

Trích đoạn nội dung tài liệu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ HẰNG XÁC ĐỊNH GIÁ TRỊ SỬ DỤNG CỦA CÁC PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM VI SINH VẬT ỨNG DỤNG TRONG KIỂM NGHIỆM THỊT ĐÔNG LẠNH NHẬP KHẨU Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60 64 01 01 Người hướng dẫn khoa học: PGS. Phạm Hồng Ngân NHÀ XUẤT BẢN ĐẠO HỌC NÔNG NGHIỆP - 2017 LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các kết quả nghiên cứu được trình bày trong luận văn là trung thực, khách quan và chưa từng dùng để bảo vệ lấy bất kỳ học vị nào. Tôi cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn đã được cám ơn, các thông tin trích dẫn trong luận văn này đều được ghi rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Hằng i LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn, tôi đã nhận được sự hướng dẫn, chỉ bảo tận tình của các thầy cô giáo, sự giúp đỡ, động viên của bạn bè, đồng nghiệp và gia đình.

Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tôi được bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới PGS. TS Phạm Hồng Ngân đã tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám Đốc, Ban quản lý đào tạo, Bộ môn Thú y Cộng đồng, Khoa Thú y- Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã tận tình giúp đỡ tôi trong quá trình học tập, thực hiện đề tài và hoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể ban lãnh đạo, cán bộ viên chức cơ quan Thú y vùng 2 đã giúp đỡ tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài.

Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp đã tạo mọi điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi về mọi mặt, động viên khuyến khích tôi hoàn thành luận văn. Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Hằng ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] MỤC LỤC Lời cam đoan. ii Mục lục. iii Danh mục chữ viết tắt.

vi Danh mục bảng .vii Danh mục hình .viii Trích yếu luận văn. ix Thesis abstract. Tính cấp thiết của đề tài. Mục tiêu nghiên cứu.

Phạm vi nghiên cứu. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài. Tổng quan tài liệu. Xác định giá trị sử dụng của phương pháp.

Một số khái niệm. Các thông số kỹ thuật trong thẩm định, xác nhận giá trị sử dụng của phương pháp. Một số cách tiếp cận để xác định giá trị sử dụng của phương pháp từ các tổ chức có uy tín. Luật an toàn thực phẩm và các quy phạm pháp luật qui định giới hạn mức độ ô nhiễm vi sinh vật trong thịt, sản phẩm thịt.

Trên thế giới. Tại Việt Nam. Hệ vi sinh vật gây mất vệ sinh, an toàn trong thịt và các sản phẩm thịt. Tổng số Vi sinh vật hiếu khí.

Ngộ độc thức ăn do thịt nhiễm khuẩn. Ngộ độc và nhiễm bệnh do vi khuẩn. 15 iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Ngộ độc do độc tính của vi khuẩn.

Các phương pháp kiểm nghiệm vi sinh vật trong thịt và sản phẩm thịt. Một số phương pháp định lượng tổng số VSVHK. Một số phương pháp định lượng E. Phương pháp phát hiện Salmonella.

Vật liệu và phương pháp nghiên cứu. Đối tượng, địa điểm nghiên cứu. Đối tượng nghiên cứu. Địa điểm nghiên cứu.

Nội dung nghiên cứu. Xác định giá trị sử dụng của phương pháp. Ứng dụng Kiểm nghiệm một số mẫu thịt đông lạnh nhập khẩu. Chủng chuẩn vi sinh vật.

Các mâũ thịt đông lạnh:. Các thiết bị trong phòng thí nghiệm. Môi trường chính nuôi cấy vi sinh vật. Phương pháp nghiên cứu.

Phương pháp thẩm định tiêu chuẩn. Phương pháp kiểm nghiệm một số chỉ tiêu vi sinh vật trong thịt. Phương pháp phân tích số liệu. Kết quả và thảo luận.

Kết quả thẩm định phương pháp. Kết quả đánh giá hiệu suất môi trường sử dụng trong thẩm định phương pháp. Kết quả kiểm tra nền mẫu đánh giá. Kết quả kiểm tra đặc tính sinh hóa, đặc tính nuôi cấy của chủng chuẩn.

Kết quả xác định nồng độ vi khuẩn gây nhiễm. Kết quả thẩm định TCVN 9977:2013. Kết quả thẩm định TCVN 9975: 2013. Kết quả xác nhận giá trị sử dụng của TCCS 03: 2016/TYV2-CĐ.

Kết quả kiểm nghiệm một số mẫu thịt đông lạnh nhập khẩu. Kết quả kiểm nghiệm mẫu thịt bò đông lạnh. 46 iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Kết quả kiểm nghiệm mẫu đùi gà.

Kết quả kiểm nghiệm trên mẫu thịt gà nguyên con. Kết luận và kiến nghị. 51 Tài liệu tham khảo. 57 v LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt AOAC (Association of Official Analytical Chemists) : Hiệp hội phân tích hoá phân tích chính thức ATCC (American Type Culture Collection) : Hệ thống chủng chuẩn của Hoa Kỳ ATTP : An toàn thực phẩm BYT : Bộ Y Tế CFU (Colony Forming Unit) : Đơn vị hình thành khuẩn lạc E.

coli : Escherichia coli FAO (Food and Agriculture Organization of the : Tổ chức nông lương quốc tế United Nations) FDA (The United States Food and Drug Administration) : Cục Thực phẩm và Dược Hoa Kỳ HACCP(Hazard Analysis and Critical Control Point) : Phân tích mối nguy và điểm kiểm soát tới hạn ICH (International Conference for Harmonization) : Hội thảo quốc tế về đồng bộ hoá ISO (International Organization for Standarlization) :Tổ chức tiêu chuẩn hóa quốc tế KĐBĐ : Không đảm bảo đo LOD ( Limit of Detection) : Giới hạn phát hiện NMKL (Nordisk metodikkomite for levnedsmidler) : Ủy ban phân tích thực phẩm Bắc Âu OIE (World Organisation for Animal Health) : Tổ chức Thú y thế giới QCVN : Quy chuẩn Việt Nam TCCS : Tiêu chuẩn cơ sở TCVN : Tiêu chuẩn Việt Nam TPP (Trans-Pacific Partnership Agreement) : Hiệp định đối tác xuyên Thái Bình Dương TSVSVHK : Tổng số vi sinh vật hiếu khí WHO (World Health Organization) : Tổ chức Y tế thế giới VSATTP : Vệ sinh an toàn thực phẩm WTO (World Trade Organization) : Tổ chức thương mại thế giới. vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC BẢNG Bảng 2. Qui định chung của Châu âu (EC) số 2073/2005 về tiêu chuẩn vi sinh đối thịt và sản phẩm thịt. Giới hạn vi sinh vật trong thịt và sản phẩm thịt theo QCVN 8-3/BYT.

Môi trường chính dùng để thẩm định phương pháp và phân tích các chỉ tiêu VSV. Kết quả đánh giá hiệu suất môi trường. Kết quả xét nghiệm nền mẫu đánh giá. Kết quả kiểm tra, so sánh đặc tính sinh hóa của vi khuẩn.

Kết quả dò nồng độ vi khuẩn E. Kết quả độ lặp lại, độ tái lặp TCVN 9977:2013, TCVN 4884-2:2015. Kết quả tính độ không đảm bảo đo TCVN 9977:2013. Kết quả độ lặp lại, độ tái lặp TCVN 9975:2013, TCVN 7429-2:2008.

Kết quả xác định độ không đảm bảo đo TCVN 9975:2013. Kết quả xác định nồng độ gây nhiễm. Kết quả Tỉ lệ Salmonella dương tính. Kết quả xác định giới hạn phát hiện của phương pháp.

Kết quả phát hiện Salmonella. Kết quả so sánh sự tương đồng TCCS03:2016; TCVN 4884:2005. Kết quả thực hiện thử nghiệm thành thạo. 44 vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC HÌNH Hình 4.

Khuẩn lạc vi khuẩn trên các môi trường chọn lọc đặc trưng. Tỉ lệ % các lô mẫu kiểm nghiệm,. Kết quả định lượng tổng số VSVHK trong các mẫu thịt bò. Kết quả định lượng tổng số VSVHK trong các lô mẫu đùi gà.

Kết quả định lượng tổng số VSVHK trong các lô gà nguyên con. Tỉ lệ nhiễm tổng số VSVHK trên các mẫu kiểm nghiệm. 49 viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Nguyễn Thị Hằng Tên luận văn: “ Xác định giá trị sử dụng của các phương pháp xét nghiệm vi sinh vật ứng dụng trong kiểm nghiệm thịt đông lạnh nhập khẩu”. Ngành: Thú Y Mã số: 60 64 01 01 Cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu - Đảm bảo các kết quả thử nghiệm - Cung cấp số liệu cho hoạt động đánh giá công nhận phép thử.

- Ứng dụng kiểm nghiệm, xét nghiệm mẫu thịt đông lạnh. Phương pháp nghiên cứu Phương pháp thẩm định Thẩm định phương pháp theo Trần Cao Sơn 2010, Tiêu chuẩn Việt nam 9332:2012. Phương pháp kiểm nghiệm mẫu thịt + Định lượng tổng số VSVHK theo TCVN 9977:2013 + Định lượng E.coli theo TCVN 9975:2013 + Định tính Salmonella theo TCCS 03-2016/TYV2-CĐ Kết quả chính và kết luận Kết quả thẩm định phương pháp định lượng Tổng số VSVHK theo TCVN 9977:2013: Các thông số: Độ lặp lại Sr: có giá trị 0,045-0,047 , Độ tái lặp S R có giá trị 0,033-0,038, giá trị độ không đảm bảo đo của phương pháp Ue : 0,126. Kết quả thẩm định phương pháp định lượng E.coli theo TCVN 9975: 2013 Các thông số đạt được độ lặp lại Sr nằm trong khoảng 0,029-0,033, Độ tái lặp S R có giá trị 0,032- 0,039, giá trị độ không đảm bảo đo của phương pháp Ue: 0,098.

Kết quả xác nhận giá trị sử dụng phương pháp phát hiên Salmonella :các thông số giới hạn phát hiện LOD: 2CFU/25g, độ nhạy Se: 95,56%, độ đặc hiệu Sp: 100%, độ chính xác Ac: 97,33%). Kết quả kiểm nghiệm mẫu thịt 94 lô (470) mẫu thịt bò, 64 lô (320 mẫu) thịt đùi gà, 15 lô (75 mẫu) thịt gà nguyên con đông lạnh nhập khẩu được xét nghiệm 3 chỉ tiêu Tổng số vi sinh vật hiếu ix LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. 100% mẫu đạt vệ sinh ATTP, không phát hiện Salmonella và E.coli trong các mẫu xét nghiệm, tổng số VSVHK nằm trong giới hạn cho phép. Kết luận Độ lặp lại, độ tái lặp và độ không đảm bảo đo ở phương pháp thay thế TCVN 9977:2013 và TCVN 9975:2013 có giá trị nhỏ hơn so với phương pháp tham chiếu.

Phương pháp thay thế định tính salmonella theo TCCS 03:2016/TYV2 hoàn toàn tương đồng với TCVN4829:2005. 100% mẫu đạt vệ sinh ATTP, các mẫu xét nghiệm không phát hiện Salmonella và E.coli, tổng số VSVHK nằm trong giới hạn cho phép. x LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] THESIS ABSTRACT Master candidate: Nguyen Thi Hang Thesis title: “Validation of microbiological methods, used for testing imported frozen meat samples” Major: Veterinary Code: 60.01 Education organization: Vietnam National University of Agriculture (VNUA) 1.