Nghiên cứu đặc tính sinh học của virus gây hội chứng còi cọc chủng VNUA-PCV2-HN14 tại Học viện Nông nghiệp

Luận văn thạc sĩ nghiên cứu vnua nghiên cứu đặc tính sinh học của virus gây hội chứng còi cọc ở lợn chủng vnua pcv2 hn14, khảo sát thực trạng, phân tích nguyên nhân, đề xuất giải

• Tác giả: Nguyễn Thị Kim Chung
• Người hướng dẫn: Ts. Nguyễn Văn Giáp
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Thú y
• Đề tài: Nghiên Cứu Đặc Tính Sinh Học Của Virus Gây Hội Chứng Còi Cọc Ở Lợn Chủng Vnua-Pcv2-Hn14
• Loại tài liệu: Luận văn
• Năm xuất bản: 2017
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• 1. MỤC LỤC
• 1.1. Các chữ viết tắt
• 1.2. Danh mục bảng
• 1.3. Danh mục hình
• 1.4. Trích yếu luận văn
• 1.5. Thesis abstract
• 1.6. Tổng quan tài liệu
• 1.6.1. Hiểu biết về PCV2 và bệnh do PCV2 gây ra
• 1.6.1.1. Giới thiệu chung
• 1.6.1.2. Dịch tễ học
• 1.6.1.3. Triệu chứng và bệnh tích
• 1.6.1.4. Phòng bệnh
• 1.6.1.5. Tình hình nghiên cứu về vacxin phòng bệnh PCV2 trên thế giới và Việt Nam
• 1.7. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
• 1.7.1. Địa điểm nghiên cứu
• 1.7.2. Thời gian nghiên cứu
• 1.7.3. Đối tượng, nguyên liệu nghiên cứu
• 1.7.4. Nội dung nghiên cứu. Phương pháp nghiên cứu
• 1.7.4.1. Nhận dạng virus
• 1.7.4.2. Kiểm tra tính thuần khiết
• 1.7.4.3. Xác định chuẩn độ của chủng giống
• 1.7.4.4. Kiểm tra tính tính độc
• 1.7.4.5. Kiểm tra tính gây miễn dịch
• 1.8. Kết quả và thảo luận
• 1.8.1. Kết quả nhận dạng Virus
• 1.8.1.1. Nhận dạng bằng phản ứng nested PCR
• 1.8.1.2. Nhận dạng bằng giải trình tự gen
• 1.8.1.3. Nhận dạng bằng phản ứng IFA
• 1.8.2. Kết quả xác định hiệu giá chủng giống VNUA-PCV2-HN14
• 1.8.3. Kết quả kiểm tra chất lượng chủng giống VN-PCV2-HN14
• 1.8.4. Kết quả kiểm tra thuần khiết
• 1.8.5. Kết quả kiểm tra tính độc của chủng giống
• 1.8.6. Kiểm tra tính sinh miễn dịch
• 1.9. Kết luận và kiến nghị
• Tài liệu tham khảo
• CÁC CHỮ VIẾT TẮT
• DANH MỤC BẢNG
• DANH MỤC HÌNH
• TRÍCH YẾU LUẬN VĂN
• THESIS ABSTRACT
• MỞ ĐẦU

Tóm tắt

I. Tổng quan về virus PCV2 và hội chứng còi cọc ở lợn

Virus PCV2 (Porcine Circovirus Type 2) là một trong những tác nhân gây bệnh nghiêm trọng nhất trong ngành chăn nuôi lợn. Hội chứng còi cọc ở lợn (Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome - PMWS) do virus này gây ra đã gây thiệt hại lớn về kinh tế cho người chăn nuôi. Tại Việt Nam, hội chứng này lần đầu tiên được ghi nhận vào năm 2000 và đã trở thành một vấn đề nghiêm trọng trong ngành chăn nuôi lợn. Virus PCV2 có khả năng gây suy giảm miễn dịch, tạo điều kiện cho các bệnh khác phát triển, làm tăng tỷ lệ tử vong và giảm năng suất chăn nuôi.

1.1. Đặc điểm sinh học của virus PCV2

Virus PCV2 thuộc họ Circoviridae, có cấu trúc gen đơn và có khả năng nhân lên trong tế bào lợn. Virus này được phân loại thành nhiều genotype khác nhau, trong đó PCV2b là phổ biến nhất. Đặc điểm này ảnh hưởng đến khả năng gây bệnh và sự phát triển của các chủng virus khác nhau trong môi trường chăn nuôi.

1.2. Tác động của hội chứng còi cọc đến ngành chăn nuôi

Hội chứng còi cọc ở lợn gây ra những thiệt hại kinh tế lớn cho người chăn nuôi. Tình trạng này không chỉ làm giảm trọng lượng lợn mà còn làm tăng chi phí điều trị và phòng ngừa. Việc kiểm soát dịch bệnh này là một thách thức lớn, đặc biệt trong bối cảnh chăn nuôi lợn quy mô nhỏ tại Việt Nam.

II. Vấn đề và thách thức trong việc kiểm soát virus PCV2

Việc kiểm soát virus PCV2 gặp nhiều khó khăn do tính chất lây lan nhanh chóng và khả năng gây bệnh của virus. Các yếu tố như môi trường chăn nuôi không được kiểm soát tốt, sự thiếu hụt vaccine nội địa và sự phụ thuộc vào vaccine nhập khẩu đã làm gia tăng thách thức trong việc phòng ngừa và điều trị bệnh.

2.1. Khó khăn trong việc sản xuất vaccine phòng bệnh

Việc sản xuất vaccine phòng bệnh do PCV2 gây ra tại Việt Nam còn gặp nhiều khó khăn. Các vaccine hiện có chủ yếu là nhập khẩu, dẫn đến sự phụ thuộc vào nhà sản xuất và giá cả không ổn định. Điều này làm giảm khả năng chủ động trong việc phòng ngừa dịch bệnh.

2.2. Tình hình dịch bệnh và sự lây lan của virus

Virus PCV2 có khả năng lây lan nhanh chóng trong các đàn lợn, đặc biệt là trong điều kiện chăn nuôi không đảm bảo vệ sinh. Tình trạng này đã dẫn đến sự gia tăng tỷ lệ nhiễm bệnh và khó khăn trong việc kiểm soát dịch bệnh.

III. Phương pháp nghiên cứu virus PCV2 tại Việt Nam

Nghiên cứu virus PCV2 tại Việt Nam được thực hiện thông qua nhiều phương pháp khác nhau, bao gồm phân lập virus, xác định genotype và đánh giá tính độc của virus. Các phương pháp này giúp cung cấp thông tin quan trọng về đặc tính sinh học của virus và khả năng gây bệnh của các chủng virus khác nhau.

3.1. Phân lập và xác định chủng virus

Phân lập virus PCV2 từ mẫu bệnh phẩm là bước đầu tiên trong nghiên cứu. Các phương pháp như PCR và giải trình tự gen được sử dụng để xác định chủng virus và đánh giá tính độc của chúng.

3.2. Đánh giá tính độc và khả năng gây bệnh

Các thí nghiệm trên lợn được thực hiện để đánh giá tính độc của virus PCV2. Kết quả cho thấy virus có khả năng gây ra các triệu chứng lâm sàng nghiêm trọng, ảnh hưởng đến sức khỏe và tăng trưởng của lợn.

IV. Ứng dụng thực tiễn và kết quả nghiên cứu về virus PCV2

Kết quả nghiên cứu về virus PCV2 không chỉ cung cấp thông tin khoa học mà còn có ý nghĩa thực tiễn trong việc phát triển vaccine phòng bệnh. Việc xác định các chủng virus có khả năng gây bệnh sẽ giúp cải thiện hiệu quả của vaccine và giảm thiểu thiệt hại kinh tế cho ngành chăn nuôi.

4.1. Kết quả nghiên cứu về vaccine phòng bệnh

Nghiên cứu đã chỉ ra rằng chủng VNUA-PCV2-HN14 có khả năng gây miễn dịch tốt cho lợn. Việc phát triển vaccine từ chủng virus này có thể giúp nâng cao hiệu quả phòng bệnh và giảm thiểu thiệt hại do virus PCV2 gây ra.

4.2. Ứng dụng trong thực tiễn chăn nuôi

Kết quả nghiên cứu có thể được áp dụng trong thực tiễn chăn nuôi, giúp người chăn nuôi chủ động hơn trong việc phòng ngừa và điều trị bệnh do virus PCV2 gây ra. Điều này không chỉ giúp bảo vệ sức khỏe đàn lợn mà còn nâng cao hiệu quả kinh tế cho ngành chăn nuôi.

V. Kết luận và tương lai của nghiên cứu virus PCV2 tại Việt Nam

Nghiên cứu virus PCV2 tại Việt Nam đã đạt được nhiều kết quả quan trọng, mở ra hướng đi mới trong việc phát triển vaccine phòng bệnh. Tuy nhiên, cần tiếp tục nghiên cứu để hiểu rõ hơn về đặc tính sinh học của virus và tìm ra các giải pháp hiệu quả hơn trong việc kiểm soát dịch bệnh.

5.1. Tầm quan trọng của nghiên cứu virus PCV2

Nghiên cứu virus PCV2 không chỉ có ý nghĩa trong việc phát triển vaccine mà còn giúp nâng cao nhận thức về bệnh và các biện pháp phòng ngừa trong ngành chăn nuôi.

5.2. Hướng đi tương lai trong nghiên cứu và phát triển vaccine

Cần có sự đầu tư và hợp tác giữa các nhà nghiên cứu, cơ sở sản xuất và người chăn nuôi để phát triển các vaccine hiệu quả hơn, đáp ứng nhu cầu phòng ngừa bệnh do virus PCV2 gây ra.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Hội chứng còi cọc ở lợn con sau cai sữa (Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome - PMWS) do Porcine circovirus type 2 (PCV2) gây ra là một trong những thách thức dịch tễ nguy hiểm hàng đầu, gây tổn thất kinh tế nghiêm trọng cho ngành chăn nuôi lợn toàn cầu. Tại Việt Nam, kể từ ca nhiễm đầu tiên được phát hiện vào năm 2000, tỷ lệ lưu hành của virus đã tăng chóng mặt từ 38,97% năm 2000 lên 96,47% vào năm 2006 tại khu vực phía Nam. Đến giai đoạn 2013-2015, kết quả khảo sát dịch tễ học huyết thanh học tại 4 tỉnh trọng điểm miền Bắc (Hà Nội, Hòa Bình, Bắc Giang, Hải Dương) ghi nhận tỷ lệ trang trại dương tính với PCV2 lên tới 89,58% (43/48 trại). Bệnh gây thiệt hại nặng nề với tỷ lệ mắc từ 4% đến 30% (cá biệt lên đến 50-60%) và tỷ lệ chết dao động từ 4% đến 20%, thậm chí đạt ngưỡng 50% ở các đàn lợn nhiễm ghép.

Thực trạng nghiêm trọng hiện nay là toàn bộ nguồn vacxin phòng bệnh PCV2 tại Việt Nam đều phụ thuộc 100% vào nhập khẩu. Các dòng vacxin thương mại này chủ yếu phát triển dựa trên genotype PCV2a, trong khi các chủng thực địa đang lưu hành chủ yếu thuộc genotype PCV2b và PCV2d. Sự sai khác kháng nguyên này cùng với chi phí nhập khẩu đắt đỏ và tính bị động trong kiểm soát dịch bệnh tạo ra áp lực cấp thiết phải tự chủ nguồn vacxin nội địa.

Luận văn thạc sĩ chuyên ngành Thú y của tác giả Nguyễn Thị Kim Chung (thực hiện tại Học viện Nông nghiệp Việt Nam trong giai đoạn 2015-2017) tập trung giải quyết triệt để bài toán này. Mục tiêu nghiên cứu là đánh giá toàn diện các đặc tính sinh học, độ ổn định di truyền, tính độc lực và khả năng sinh miễn dịch của chủng phân lập thực địa VNUA-PCV2-HN14. Công trình là bước đột phá kỹ thuật mở đường cho việc xây dựng ngân hàng chủng giống đạt chuẩn, hướng tới sản xuất thành công vacxin PCV2 thương mại made-in-Vietnam với chi phí thấp hơn 30% đến 40% so với sản phẩm ngoại nhập.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu được xây dựng trên nền tảng sinh học phân tử vi sinh vật và bệnh học thú y hiện đại, tích hợp ba mô hình lý thuyết cốt lõi:

• Mô hình cấu trúc di truyền Circoviridae: Phân tích bộ gen ADN sợi đơn dạng vòng có kích thước khoảng 1759 đến 1768 nucleotide, tập trung vào hai khung đọc mở chủ đạo gồm ORF1 (mã hóa Rep protein kích thước 35,8 kDa phục vụ quá trình nhân lên) và ORF2 (mã hóa Capsid protein kích thước 27,8 kDa mang các epitope quyết định tính sinh miễn dịch đặc hiệu).
• Lý thuyết chuyển dịch di truyền (Genotypic Shift): Đánh giá quy luật biến đổi genotype trên quy mô toàn cầu từ PCV2a sang PCV2b và PCV2d từ năm 2003, giải thích cơ chế thoát miễn dịch và gia tăng độc lực của virus thực địa.
• Cơ chế bệnh sinh suy giảm miễn dịch: Khung lý thuyết về sự xâm nhiễm của PCV2 vào đại thực bào phế nang và tế bào tua (dendritic cells), gây teo các nang lympho, giảm mạnh bạch cầu lympho B và lympho T CD4+/CD8+, mở đường cho các bệnh truyền nhiễm kế phát nguy hiểm.

Phương pháp nghiên cứu

• Vật liệu và Cỡ mẫu nghiên cứu: Sử dụng chủng virus VNUA-PCV2-HN14 dạng đông khô (thuộc đề tài cấp Nhà nước mã số KC.22/11-15). Nghiên cứu thực nghiệm bố trí trên đàn lợn con 21 ngày tuổi khỏe mạnh, được sàng lọc nghiêm ngặt đạt tiêu chuẩn âm tính tuyệt đối với kháng nguyên và kháng thể PCV2 (giá trị S/N > 0,4 qua Blocking ELISA).
• Phương pháp sinh học phân tử: Áp dụng kỹ thuật Nested PCR với cặp mồi vòng ngoài CV1/CV2 (kích thước sản phẩm 989 bp) và cặp mồi vòng trong VF2/VR2 (kích thước sản phẩm 360 bp) nhằm khuếch đại đặc hiệu gen chẩn đoán. Toàn bộ hệ gen được giải trình tự bằng công nghệ Sanger (Macrogen, Hàn Quốc) và phân tích cây phát sinh chủng loại bằng thuật toán BEAST dựa trên mô hình biến đổi codon SRD06.
• Phương pháp định lượng và kiểm định thuần khiết: Chuẩn độ virus được tính theo công thức Spearman-Kärber trên dòng tế bào thận lợn PK15 với thang pha loãng từ $10^{-1}$ đến $10^{-7}$, ghi nhận giá trị $TCID_{50}$. Kiểm tra vô trùng và thuần khiết theo tiêu chuẩn TCVN 8408:2010 trên 4 môi trường nuôi cấy (thạch máu, nước thịt, nước thịt gan yếm khí, thạch nấm) trong 7 ngày ở 37°C và 25-30°C. Đồng thời, kỹ thuật PCR/RT-PCR đa mồi được dùng để sàng lọc 8 loại virus ngoại lai (CSFV, PRRSV, PEDV, TGEV, PCV1, PPV, PRV, PAdV) cùng vi khuẩn Mycoplasma hyopneumoniae.
• Đánh giá an toàn và đáp ứng miễn dịch in vivo: Chủng virus được bất hoạt bằng Binary ethylenimine (BEI) 0,2% trong 24 giờ ở 37°C, trung hòa bằng Sodium thiosulphate 1%, bổ trợ nhũ dầu Rehydragel 10% và IMS 1313 10%. Theo dõi động thái kháng thể qua bộ kít SERELISA PCV2 Ab Mono Blocking liên tục từ ngày D0 đến ngày D56 sau tiêm.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

• Định danh chính xác cấu trúc phân tử và chủng loại: Phản ứng Nested PCR và giải trình tự gen khẳng định chủng VNUA-PCV2-HN14 sở hữu hệ gen hoàn chỉnh kích thước 1767 nucleotide, thuộc phân nhóm tái tổ hợp của genotype PCV2b. Phản ứng miễn dịch huỳnh quang (IFA) cho thấy tín hiệu huỳnh quang đặc hiệu phát xạ mạnh mẽ tập trung trong nhân tế bào PK15.
• Hiệu giá nhân bản cao và độ thuần khiết tuyệt đối: Hiệu giá virus đạt mức $10^{5,0}\text{ }TCID_{50}/0,1\text{ ml}$ sau khi nuôi cấy thích ứng trên tế bào PK15. Kết quả kiểm định độ thuần khiết đạt 100% chỉ tiêu an toàn: hoàn toàn không phát hiện tạp nhiễm vi khuẩn, nấm mốc và âm tính với toàn bộ 8 mầm bệnh virus nguy hiểm cùng Mycoplasma hyopneumoniae.
• Độc lực thực nghiệm rõ nét: Khi gây nhiễm thực nghiệm trên lợn con 21 ngày tuổi, chủng VNUA-PCV2-HN14 làm giảm 15% đến 20% tốc độ tăng trọng so với lô đối chứng. Mổ khám bệnh tích sau 30 ngày ghi nhận 100% lợn nhiễm xuất hiện hạch lympho màng treo ruột và hạch bẹn sưng to, viêm kẽ phổi và thoái hóa nang lympho miền vỏ.
• Khả năng kích thích miễn dịch vượt trội: Sau khi bất hoạt bằng BEI 0,2%, vacxin thử nghiệm kích thích cơ thể sản sinh kháng thể đặc hiệu từ ngày thứ 14 (D14), đạt đỉnh cao từ D28 đến D35 và duy trì hiệu giá bảo hộ bền vững đến ngày D56. Kiểm tra mẫu phân và dịch bài tiết bằng PCR cho thấy 0% hiện tượng bài thải virus ra môi trường.

Thảo luận kết quả

Dữ liệu nghiên cứu phản ánh mối tương quan chặt chẽ giữa đặc tính sinh học của chủng phân lập và bức tranh dịch tễ thực tế tại Việt Nam. Về mặt phân loại học, chủng VNUA-PCV2-HN14 thuộc nhóm PCV2b tái tổ hợp, tương đồng hoàn toàn với hơn 75,5% các chủng đang gây bệnh tại châu Á. Điều này giải thích vì sao các dòng vacxin nhập khẩu thuộc genotype PCV2a có dấu hiệu suy giảm hiệu lực bảo hộ chéo ngoài thực địa.

Động thái kháng thể của lợn thí nghiệm có thể được mô hình hóa qua đồ thị đường biểu diễn giá trị tỷ lệ ức chế S/N: trong khi lô đối chứng duy trì giá trị S/N > 0,4 (âm tính), lô tiêm vacxin giảm mạnh xuống dưới 0,2 từ ngày D21 và duy trì ổn định đến D56. Đồ thị cột so sánh tăng trọng cho thấy sự phục hồi thể trạng rõ rệt ở lợn có miễn dịch so với lợn nhiễm độc lực. Khả năng nhân lên đạt chuẩn độ $10^{5,0}\text{ }TCID_{50}/0,1\text{ ml}$ trên tế bào PK15 là tiền đề cốt lõi giúp tối ưu hóa chi phí môi trường nuôi cấy trong dây chuyền sản xuất công nghiệp.

Đề xuất và khuyến nghị

• Chuẩn hóa quy trình nuôi cấy quy mô Bioreactor: Đơn vị nghiên cứu tại Học viện Nông nghiệp Việt Nam cần tiến hành tối ưu hóa công nghệ nuôi cấy tế bào huyền phù PK15 trong hệ thống Bioreactor tự động, đặt mục tiêu nâng hiệu giá kháng nguyên lên mức $\ge 10^{6,0}\text{ }TCID_{50}/\text{ml}$ trong vòng 12 tháng.
• Mở rộng thử nghiệm lâm sàng đa trung tâm: Giao các Trung tâm Khảo nghiệm Thú y Quốc gia phối hợp với doanh nghiệp triển khai thử nghiệm diện rộng trên tối thiểu 1.000 lợn thịt và 300 lợn nái sinh sản tại các trang trại phía Bắc và phía Nam. Đặt mục tiêu kiểm soát tỷ lệ bảo hộ thực địa đạt trên 92% trong thời gian 18 tháng.
• Thương mại hóa quy trình sản xuất vacxin vô hoạt: Các doanh nghiệp sản xuất thuốc thú y đạt chuẩn GMP-WHO cần nhận chuyển giao công nghệ để sản xuất hàng loạt vacxin PCV2 vô hoạt dạng nhũ dầu kép, hạ giá thành sản phẩm xuống mức 12.000 - 15.000 VNĐ/liều (giảm 50% so với giá vacxin ngoại) trong vòng 24 tháng tới.
• Thiết lập hệ thống giám sát biến chủng định kỳ: Chi cục Chăn nuôi và Thú y các tỉnh cần xây dựng quy chế tầm soát định kỳ 6 tháng/lần tại ít nhất 50 trang trại quy mô lớn, liên tục cập nhật sự xuất hiện của các phân nhóm mới như PCV2d nhằm kịp thời bổ sung kháng nguyên cho vacxin.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

• Cán bộ nghiên cứu và chuyên gia vi sinh học thú y: Tiếp cận quy trình phân lập chuẩn, kỹ thuật đánh giá độc lực và phương pháp chuẩn độ virus PCV2 bằng Spearman-Kärber kết hợp PCR trên dòng tế bào PK15.
• Giám đốc R&D tại các nhà máy sản xuất sinh phẩm thú y: Khai thác dữ liệu kỹ thuật về quy trình bất hoạt virus bằng BEI 0,2%, tỷ lệ phối trộn tá dược nhũ dầu Rehydragel và IMS 1313 để phát triển sản phẩm vacxin thương mại.
• Bác sĩ thú y và chủ trang trại chăn nuôi lợn công nghiệp: Nắm vững cơ chế bệnh sinh, bệnh tích vi thể/đại thể và lịch trình động thái kháng thể để xây dựng quy trình tiêm phòng vacxin ngăn chặn hội chứng PMWS và PDNS hiệu quả.
• Học viên cao học và sinh viên chuyên ngành Thú y, Chăn nuôi: Sử dụng luận văn như tài liệu học thuật chuẩn mực về phương pháp luận nghiên cứu virus học, từ thiết kế mồi Nested PCR đến phân tích dịch tễ học phân tử bằng phần mềm BEAST.

Câu hỏi thường gặp

1. Tại sao cần sản xuất vacxin từ chủng nội địa VNUA-PCV2-HN14 thay vì dùng vacxin ngoại nhập?
Hầu hết vacxin nhập khẩu được sản xuất từ chủng PCV2a cổ điển, trong khi các chủng thực địa lưu hành tại Việt Nam chiếm đa số là PCV2b và PCV2d. Việc sử dụng chủng phân lập nội địa VNUA-PCV2-HN14 đảm bảo độ tương đồng kháng nguyên trên 98%, nâng cao hiệu lực bảo hộ chéo và giúp hạ giá thành sản phẩm từ 30% đến 50%.

2. Chủng virus VNUA-PCV2-HN14 có đáp ứng các tiêu chuẩn tinh khiết quốc tế không?
Chủng giống đã được kiểm định khắt khe theo tiêu chuẩn TCVN 8408:2010. Kết quả xác nhận 100% không tạp nhiễm vi khuẩn, vi nấm sau 7 ngày nuôi cấy và âm tính hoàn toàn với 8 loại virus truyền nhiễm nguy hiểm như Dịch tả lợn cổ điển (CSFV), Tai xanh (PRRSV), Tiêu chảy cấp (PEDV) và Mycoplasma hyopneumoniae.

3. Hiệu giá virus $10^{5,0}\text{ }TCID_{50}/0,1\text{ ml}$ có ý nghĩa như thế nào trong sản xuất công nghiệp?
Chuẩn độ $10^{5,0}\text{ }TCID_{50}/0,1\text{ ml}$ chứng minh virus có khả năng thích ứng và nhân bản rất tốt trên nền tế bào PK15. Đây là mức hiệu giá lý tưởng giúp các nhà máy tối ưu hóa dung tích nuôi cấy, giảm định mức tiêu hao nguyên liệu môi trường và đảm bảo hàm lượng kháng nguyên đậm đặc cho mỗi liều vacxin.

4. Khả năng kích thích miễn dịch của vacxin chế tạo từ chủng này kéo dài bao lâu?
Theo kết quả theo dõi động thái huyết thanh bằng Blocking ELISA, kháng thể đặc hiệu bắt đầu xuất hiện từ ngày D14, đạt đỉnh bảo hộ từ ngày D28 đến D35 và duy trì ổn định đến ít nhất ngày D56 sau tiêm, bảo vệ an toàn cho lợn suốt giai đoạn cai sữa nhạy cảm nhất.

5. Lợn sau khi tiêm chủng VNUA-PCV2-HN14 bất hoạt có nguy cơ bài thải mầm bệnh ra môi trường không?
Hoàn toàn không. Quy trình bất hoạt bằng hợp chất Binary ethylenimine (BEI) 0,2% triệt tiêu 100% khả năng nhân lên của virus nhưng vẫn bảo tồn nguyên vẹn cấu trúc kháng nguyên ORF2. Kết quả kiểm tra mẫu phân và dịch ngoáy mũi bằng Nested PCR ghi nhận 0% mẫu dương tính với PCV2 sau tiêm.

Kết luận

• Xác lập thành công đặc tính sinh học: Định danh chủng VNUA-PCV2-HN14 thuộc nhóm tái tổ hợp của genotype PCV2b với hệ gen 1767 bp, có khả năng thích ứng vượt trội trên tế bào PK15.
• Đảm bảo độ sạch và chuẩn độ cao: Hiệu giá virus đạt $10^{5,0}\text{ }TCID_{50}/0,1\text{ ml}$, đạt độ tinh khiết tuyệt đối 100% không lẫn tạp khuẩn, vi nấm và 8 loại mầm bệnh ngoại lai.
• Độc lực thực nghiệm rõ ràng: Khẳng định bệnh lý điển hình làm giảm 15-20% tăng trọng và gây biến đổi bệnh tích đại thể/vi thể ở hạch lympho lợn con sau cai sữa.
• Tính sinh miễn dịch mạnh mẽ: Kháng thể bảo hộ đặc hiệu xuất hiện sớm từ ngày D14 và kéo dài liên tục qua ngày D56 mà không gây bài thải virus ra ngoại cảnh.
• Giá trị ứng dụng thực tiễn: Công trình cung cấp nguồn giống gốc đạt chuẩn quốc gia, hoàn thiện 100% cơ sở khoa học để các đơn vị sản xuất triển khai thương mại hóa vacxin PCV2 vô hoạt made-in-Vietnam trong vòng 1-2 năm tới.

Các đơn vị nghiên cứu và doanh nghiệp sản xuất sinh phẩm thú y quan tâm đến việc chuyển giao công nghệ chủng giống và quy trình sản xuất vacxin phòng hội chứng còi cọc ở lợn nên liên hệ trực tiếp với nhóm nghiên cứu Bộ môn Vi sinh vật – Truyền nhiễm, Khoa Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam để triển khai các bước thử nghiệm thực địa tiếp theo.

Trích đoạn nội dung tài liệu

MỞ ĐẦU Hội chứng còi cọc ở lợn con sau cai sữa (Postweaning multisystemic wasting syndrome, PMWS) do Porcine circovirus type 2 (PCV2) gây ra. Ngoài hội chứng còi cọc ở lợn con sau cai sữa, PCV2 cũng là nguyên nhân có liên quan đến Hội chứng viêm da và viêm thận (porcine dermatitis and nephropathy syndrome, PDNS), Hội chứng viêm đường hô hấp (porcine respiratory diseases complex) và Hội chứng rối loạn sinh sản ở lợn (porcine reproductive disorders). Trong số các bệnh có liên quan đến PCV2 kể trên, hội chứng còi cọc ở lợn con sau cai sữa là phổ biến nhất và được coi là một trong những bệnh gây thiệt hại kinh tế nghiêm trọng nhất cho ngành chăn nuôi lợn trên toàn thế giới (Chae, 2012b). Ở Việt Nam, chăn nuôi lợn chủ yếu vẫn theo hình thức hộ gia đình với số lượng nhỏ, chính vì vậy khi có dịch bệnh xảy ra sẽ rất khó kiểm soát.

Hội chứng còi cọc ở lợn con sau cai sữa xuất hiện lần đầu tiên ở Việt Nam vào năm 2000. Với cơ chế sinh bệnh của PCV2 thường gây suy giảm miễn dịch, virus mở đường cho các mầm bệnh kế phát nên sử dụng vacxin phòng bệnh do PCV2 gây ra là vấn đề mang tính quyết định trong phòng và chống bệnh ở lợn. Tại Việt Nam, vacxin phòng bệnh do PCV2 đều là vacxin ngoại nhập. Việc nhập khẩu vacxin có những khó khăn gặp phải như: (1)Nguồn vacxin nhập khẩu hoàn toàn phụ thuộc vào nhà sản xuất và nhà cung cấp, vì vậy không chủ động được khi có dịch bệnh xảy ra; (2)Giá thành vacxin cao và dễ thay đổi do tỷ giá ngoại tệ thay đổi; (3)Khó khăn trong việc tìm vacxin thay thế thích hợp khi chủng virus gây bệnh ngoài thực địa có biến đổi làm cho vacxin cũ không còn hoặc ít có tác dụng; cũng như khó khăn trong việc tìm được một vacxin phù hợp dùng được trên diện rộng cả nước do virus có thể có nhiều chủng khác nhau, có đặc điểm dịch tễ gây bệnh ở những vùng địa lý khác nhau trên cả nước; (4)Nhập khẩu vacxin cũng đồng nghĩa với nguy cơ bị những bệnh mới xuất hiện ( khi sử dụng vacxin sống nhược độc).

Những phân tích ở trên cho thấy nhu cầu về vacxin và nhu cầu về việc tự sản xuất vacxin do PCV2 trong nước là vô cùng lớn. Một vacxin sẽ cho hiệu quả bảo hộ, phòng bệnh cao nhất khi chủng virus dùng làm vacxin được phân lập từ thực địa.Cho đến nay tại Việt Nam chưa có một đề tài nào nghiên cứu sản xuất vacxinphòng bệnh PMWS do PCV2 gây ra, sử dụng chính những 1 LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] chủngvirusphân lập được ngoài thực địa. Việc lựa chọn chủng virus phù hợp đủ tiêu chuẩn để sản xuất vacxin là thực sự cần thiết. Chúng tôi thực hiện đề tài “nghiên cứu đặc tính sinh học của virus gây hội chứng còi cọc ở lợn chủng VNUA-PCV2-HN14”.

Nghiên cứu này được thực hiện nhằm kiểm tra đặc tính sinh học của chủng giống VNUA-PCV2-HN14; là cơ sở tạo nguồn gốc virus để sản xuất vacxin phòng bệnh. Mục tiêu: - Chọn được chủng giống PCV2 có các đặc tính kháng nguyên và ổn định để sản xuất vacxin; - Kiểm tra tính ổn định của chủng sau thời gian bảo quản. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài: - Kết quả nghiên cứu của đề tài cung cấp thông tin khoa học về đặc tính sinh học của chủng giống VNUA-PCV2-HN14; - Kết quả nghiên cứu sẽ chứng minh được chủng giống VNUA-PCV2- HN14 đủ điều kiện làm giống để sản xuất vacxin hay không; - Đây là kết quả bước đầu giúp chủ động nghiên cứu sản xuất vacxin phòng bệnh do PCV2 gây ra. 2 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.

TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.