HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM TRẦN THỊ NHUẬN NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT VÀ THỬ NGHIỆM VẮC XIN VÔ HOẠT NHỊ GIÁ ND-IB PHÒNG BỆNH NEWCASTLE VÀ BỆNH VIÊM PHẾ QUẢN TRUYỀN NHIỄM Ở GIA CẦM Ngành: Thú y Mã số: 8 64 01 01 Người hướng dẫn khoa học: PGS. Bùi Trần Anh Đào TS. Trịnh Quang Đại NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2020 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là đề tài nghiên cứu do chính tôi thực hiện. Các số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực, do tôi thực hiện có sự giúp đỡ của các đồng nghiệp trong Công ty và chưa từng được công bố trong bất kỳ công trình khoa học nào.
Tôi xin cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn đã được cám ơn, các thông tin trích dẫn trong luận văn đều được chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày. năm 2020 Tác giả luận văn Trần Thị Nhuận i LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn, tôi đã nhận được sự hướng dẫn, chỉ bảo tận tình của các thầy cô giáo, sự giúp đỡ, động viên của bạn bè, đồng nghiệp và gia đình. Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tôi được bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới Thầy PGS.TS Bùi Trần Anh Đào đã tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình học tập nghiên cứu và hoàn thành luận văn.
Tôi xin chân thành cảm ơn tới TS. Trịnh Quang Đại và Ban Giám đốc Công ty Cổ phần Thuốc thú y Trung Ương 5 cùng toàn thể cán bộ công nhân viên trong Nhà máy vắc xin và sinh phẩm thú y đã giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện luận văn. Nhân dịp này, tôi xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, người thân, bạn bè – những người luôn tạo điều kiện, động viên, giúp đỡ tôi vượt qua mọi khó khăn, động viên khuyến khích tôi hoàn thành luận văn này. Hà Nội, ngày.
năm 2020 Tác giả luận văn Trần Thị Nhuận ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com MỤC LỤC Lời cam đoan. i Lời cam đoan. ii Mục lục. iii Danh mục chữ viết tắt.
vii Danh mục bảng. viii Trích yếu luận văn. Tính cấp thiết của đề tài. Mục tiêu của đề tài.
Phạm vi nghiên cứu. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài. Tổng quan tài liệu. Giới thiệu chung về bệnh Newcastle.
Lịch sử bệnh Newcastle trên thế giới. Lịch sử bệnh Newcastle tại Việt Nam. Virus gây bệnh Newcastle. Truyền nhiễm học của bệnh.
Triệu chứng, bệnh tích bệnh Newcastle. Phương pháp chẩn đoán bệnh Newcastle. Vắc xin phòng bệnh Newcastle. Giới thiệu chung về bệnh Viêm phế quản truyền nhiễm.
Lịch sử bệnh Viêm phế quản truyền nhiễm trên thế giới. Lịch sử bệnh Viêm phế quản truyền nhiễm tại Việt Nam. Virus gây bệnh Viêm phế quản truyền nhiễm. Truyền nhiễm học của bệnh.
Triệu chứng, bệnh tích bệnh Viêm phế quản truyền nhiễm. Phương pháp chẩn đoán bệnh. Vắc xin phòng bệnh Viêm phế quản truyền nhiễm. Tình hình nghiên cứu sản xuất vắc xin .20 iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.
Trên thế giới. Tại Việt Nam. Những yêu cầu cơ bản để sản xuất vắc xin vô hoạt nhị giá ND-IB. Yêu cầu Chủng giống sản xuất.
Yêu cầu kháng nguyên. Yêu cầu chất bất hoạt. Yêu cầu chất bổ trợ. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu.
Địa điểm nghiên cứu. Thời gian nghiên cứu. Đối tượng/vật liệu nghiên cứu. Đối tượng nghiên cứu.
Vật liệu nghiên cứu. Nội dung nghiên cứu. Đánh giá đặc tính sinh học của chủng giống để sản xuất vắc xin. Xác định liều cơ bản của vắc xin đơn giá.
Nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất vắc xin vô hoạt ND-IB. Sản xuất thử nghiệm. Kiểm nghiệm vắc xin. Thử nghiệm vắc xin.
Phương pháp nghiên cứu. Phương pháp xác định hiệu giá virus ND (LaSota) bằng phản ứng HA (Haemagglutination). Phương pháp xác định hiệu giá virus ND (LaSota) trên trứng gà có phôi (EID 50 ). Phương pháp xác định chỉ số độc lực virus Newcastle trên não gà con 01 ngày tuổi (ICPI - Intracerebral Pathogenicity Index).
Phương pháp xác định chỉ số độc lực virus Newcastle khi tiêm tĩnh mạch gà 6 tuần tuổi (IVPI - Intravenous Pathogenicity Index). Phương pháp xác định hiệu giá virus IB-H120 trên trứng gà có phôi. Phương pháp sản xuất kháng nguyên ND (LaSota) trên phôi trứng gà. Phương pháp sản xuất kháng nguyên IB (H120) trên phôi trứng gà .34 iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.
Phương pháp bất hoạt virus ND, IB và kiểm tra sau bất hoạt. Phương pháp phối trộn kháng nguyên với chất bổ trợ. Phương pháp kiểm tra chất lượng vắc xin. Phương pháp xác định hiệu giá kháng thể kháng virus ND trong huyết thanh gà sau khi sử dụng vắc xin bằng phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà HI (haemagglutination inhibition).
Phương pháp xác định hiệu giá kháng thể kháng virus IB trong huyết thanh gà sau khi sử dụng vắc xin bằng phản ứng ELISA. Phương pháp xử lý số liệu. Kết quả và thảo luận. Kết quả Khảo sát đặc tính sinh học của chủng giống để sản xuất vắc xin.
Kết quả Khảo sát đặc tính sinh học của giống Virus ND (chủng LaSota). Kết quả khảo sát đặc tính sinh học của giống virus IB-H120. Kết quả xác định liều cơ bản vắc xin đơn giá. Kết quả sản xuất kháng nguyên ND (LaSota) và IB-H120.
Kết quả lựa chọn chất bất hoạt virus. Kết quả xác định hàm lượng mỗi kháng nguyên có trong 1 liều vắc xin đơn. Kết quả Nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất vắc xin vô hoạt ND-IB. Kết quả phối trộn 9 nghiệm thức vắc xin vô hoạt.
Kết quả đánh giá 9 nghiệm thức vắc xin trên động vật thí nghiệm. Kết quả nghiên cứu Quy trình sản xuất vắc xin vô hoạt ND-IB với chất bổ trợ dầu. Kết quả kiểm nghiệm vắc xin vô hoạt ND-IB. Kết quả kiểm tra cảm quan, chỉ tiêu vật lý.
Kết quả kiểm tra vô trùng vắc xin vô hoạt ND-IB. Kết quả kiểm tra an toàn. Kết quả kiểm tra hiệu lực. Kết quả thử nghiệm vắc xin vô hoạt ND-IB tại Công ty Cổ phần Thuốc thú y Trung Ương 5 .63 v LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.
Kết luận và kiến nghị. Đặc tính sinh học của chủng giống sản xuất vắc xin. Xác định liều cơ bản vắc xin đơn giá. Nghiên cứu quy trình sản xuất vắc xin vô hoạt ND-IB.
Sản xuất thử nghiệm. Kiểm nghiệm vắc xin. Thử nghiệm vắc xin .67 Tài liệu tham khảo .72 vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa đầy đủ ARN : Acid ribonucleic CEF : Chicken embryo fibroblast CEK : Chicken embryo kidney CK : Chicken kidney CPE : Cytopathic Effect EID 50 : 50% Egg Infective Doses ELISA : Enzyme-linked Immunosorbent assay FAO : Food and Agriculture Organization HA : Hemagglutination Assay HI : Haemagglutination inhibition IB : Infectious Bronchitis IBV : Infectious Bronchitis Virus ICPI : Intracerebral Pathogenicity Index IVPI : Intravenous Pathogenicity Index MDT : Mean Dead Time ND : Newcastle Disease NDV : Newcastle Disease Virus PBS : Phosphate Buffered Saline vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com DANH MỤC BẢNG Bảng 3. Nghiệm thức phối trộn vắc xin.
Sơ đồ thực hiện phản ứng HA. Xác định chỉ số ICPI. Xác định chỉ số IVPI. Sơ đồ thực hiện phản ứng HI (haemagglutination inhibition).
Kết quả xác định hiệu giá virus ND chủng LaSota qua các tiếp đời. Kết quả xác định hiệu giá virus Newcastle chủng LaSota. Kết quả chỉ số độc lực ICPI virus LaSota trên gà 1 ngày tuổi. Kết quả chỉ số độc lực IVPI virus LaSota trên gà 6 tuần tuổi.
Kết quả theo dõi tình trạng phôi gà sau gây nhiễm virus IB-H120. Kết quả xác định hiệu giá giống IB- H120 ở đời 1. Kết quả tổng hợp hiệu giá giống virus IB-H120 qua các tiếp đời. Kết quả EID 50 giống IB- H120 lần 1.
Kết quả sản xuất kháng nguyên LaSota và IB-H120. Kết quả kiểm tra virus sau bất hoạt trên phôi trứng. Kết quả kiểm tra tính đáp ứng miễn dịch của virus sau vô hoạt trên gà thí nghiệm tại D21. Kết quả kiểm tra virus ND (LaSota) ở 5 thang liều sau bất hoạt trên phôi trứng.
Kết quả kiểm tra virus IB-H120 ở 5 thang liều sau bất hoạt trên phôi trứng. Kết quả kiểm tra vắc xin đơn ở từng hiệu giá kháng nguyên sau phối trộn với nhũ dầu. Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn từng vắc xin đơn tại 5 thang liều sau phối trộn với chất bổ trợ dầu. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể kháng virus ND (LaSota) bằng phương pháp HI.
Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể IBV bằng phương pháp Elisa. Kết quả kiểm tra vắc xin đơn sau phối trộn với chất bổ trợ dầu .55 viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn từng vắc xin đơn sau phối trộn với chất bổ trợ dầu. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể LaSota bằng phương pháp HI.
Kết quả đánh giá hiệu lực bảo hộ vắc xin LaSota vô hoạt. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể kháng virus IB. Kết quả kiểm tra 9 nghiệm thức sau phối trộn 2 loại kháng nguyên với chất bổ trợ dầu. Kết quả đánh giá 9 nghiệm thức trên động vật thí nghiệm.
Kết quả sản xuất vắc xin vô hoạt ND-IB quy mô phòng thí nghiệm. Kết quả kiểm tra vắc xin vô hoạt ND-IB sau phối trộn. Kết quả kiểm tra vô trùng 3 lô vắc xin vô hoạt ND-IB. Kết quả kiểm tra độ an toàn vắc xin vô hoạt ND-IB.
Kết quả kiểm tra hiệu lực vắc xin vô hoạt ND-IB. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể (HI, ELISA) của gà sau khi sử dụng vắc xin vô hoạt ND-IB .65 ix LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Trần Thị Nhuận Tên Luận văn: Nghiên cứu sản xuất và thử nghiệm vắc xin vô hoạt nhị giá ND-IB phòng bệnh Newcastle và bệnh viêm phế quản truyền nhiễm ở gia cầm Ngành: Thú y Mã số: 8.