Luận văn nghiên cứu sản xuất vắc xin nhũ dầu phòng hội chứng giảm đẻ ở gà tại Công ty Fivevet

Luận văn thạc sĩ nghiên cứu vnua nghiên cứu sản xuất vacxin nhũ đầu phòng hội chứng giảm đẻ ở gà egg drop syndrome eds76 tại, khảo sát thực trạng, phân tích nguyên nhân, đề xuất

• Tác giả: Nguyễn Văn Đức
• Người hướng dẫn: TS. Trương Hà Thái
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Thú y
• Đề tài: Nghiên cứu sản xuất vắc xin nhũ dầu phòng hội chứng giảm đẻ ở gà (Egg Drop Syndrome-EDS’76) tại công ty FiveVet
• Loại tài liệu: Luận văn
• Năm xuất bản: 2019
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• 1. MỤC LỤC
• 2. DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT
• 3. DANH MỤC BẢNG
• 4. DANH MỤC HÌNH
• 5. TRÍCH YẾU LUẬN VĂN
• 6. TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI
• 7. MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI
• 8. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 8.1. HIỂU BIẾT CHUNG VỀ HỘI CHỨNG GIẢM ĐẺ EDS (EGG DROP SYNDROME)
• 8.1.1. Giới thiệu chung
• 8.1.2. Vi rút gây bệnh hội chứng giảm đẻ
• 8.1.3. Phân loại
• 8.1.4. Hình thái
• 8.1.5. Cấu tạo hình thái
• 8.1.6. Khả năng gây ngưng kết hồng cầu
• Tài liệu tham khảo

Tóm tắt

I. Tổng quan về nghiên cứu sản xuất vắc xin nhũ dầu EDS 76 tại FiveVet

Nghiên cứu sản xuất vắc xin nhũ dầu phòng hội chứng giảm đẻ ở gà EDS'76 tại công ty FiveVet là một bước tiến quan trọng trong ngành thú y. Hội chứng giảm đẻ EDS'76 đã gây ra nhiều thiệt hại cho ngành chăn nuôi gia cầm, đặc biệt là trong việc giảm sản lượng trứng. Việc phát triển vắc xin nhũ dầu không chỉ giúp bảo vệ đàn gà mà còn nâng cao hiệu quả kinh tế cho người chăn nuôi.

1.1. Tầm quan trọng của vắc xin nhũ dầu trong phòng bệnh EDS 76

Vắc xin nhũ dầu là một trong những giải pháp hiệu quả nhất để phòng ngừa hội chứng giảm đẻ ở gà. Việc tiêm phòng giúp tạo ra kháng thể, bảo vệ đàn gà khỏi sự tấn công của vi rút EDS'76, từ đó duy trì sản lượng trứng ổn định.

1.2. Mục tiêu nghiên cứu sản xuất vắc xin EDS 76

Mục tiêu chính của nghiên cứu là xây dựng quy trình sản xuất vắc xin nhũ dầu vô hoạt, đảm bảo an toàn và hiệu quả. Nghiên cứu cũng nhằm đánh giá hiệu lực và độ dài miễn dịch của vắc xin sau khi tiêm cho gà.

II. Vấn đề và thách thức trong sản xuất vắc xin EDS 76

Sản xuất vắc xin nhũ dầu phòng hội chứng giảm đẻ EDS'76 gặp nhiều thách thức. Việc đảm bảo chất lượng và hiệu quả của vắc xin là rất quan trọng. Các yếu tố như quy trình sản xuất, chất lượng nguyên liệu và điều kiện bảo quản đều ảnh hưởng đến tính an toàn và hiệu lực của vắc xin.

2.1. Thách thức trong việc đảm bảo chất lượng vắc xin

Để sản xuất vắc xin đạt tiêu chuẩn, cần phải kiểm soát chặt chẽ các yếu tố trong quy trình sản xuất. Việc sử dụng nguyên liệu không đạt chất lượng có thể dẫn đến sản phẩm không an toàn cho gia cầm.

2.2. Vấn đề về chi phí sản xuất vắc xin

Chi phí sản xuất vắc xin EDS'76 hiện tại còn cao, điều này ảnh hưởng đến khả năng tiếp cận của người chăn nuôi. Nghiên cứu nhằm tìm ra phương pháp sản xuất hiệu quả hơn để giảm giá thành vắc xin.

III. Phương pháp nghiên cứu sản xuất vắc xin nhũ dầu EDS 76

Nghiên cứu sử dụng nhiều phương pháp khoa học để sản xuất vắc xin nhũ dầu EDS'76. Các phương pháp này bao gồm tiêm vào xoang niệu mô, nhân vi rút trên trứng vịt, và kiểm tra chất lượng vắc xin sau khi sản xuất.

3.1. Quy trình sản xuất vắc xin nhũ dầu

Quy trình sản xuất vắc xin nhũ dầu bao gồm các bước như tiêm vi rút vào trứng vịt, thu hoạch và bất hoạt vi rút, sau đó nhũ hóa với chất bổ trợ để tạo thành vắc xin hoàn chỉnh.

3.2. Kiểm tra chất lượng vắc xin sau sản xuất

Sau khi sản xuất, vắc xin sẽ được kiểm tra chất lượng để đảm bảo an toàn và hiệu lực. Các chỉ tiêu như độ vô trùng, hiệu giá kháng thể và tính ổn định của vắc xin sẽ được đánh giá.

IV. Kết quả nghiên cứu sản xuất vắc xin EDS 76 tại FiveVet

Kết quả nghiên cứu cho thấy vắc xin nhũ dầu EDS'76 đạt tiêu chuẩn về an toàn và hiệu lực. Vắc xin đã được thử nghiệm trên đàn gà và cho thấy khả năng tạo kháng thể tốt, giúp bảo vệ đàn gà khỏi hội chứng giảm đẻ.

4.1. Đánh giá hiệu lực của vắc xin EDS 76

Vắc xin EDS'76 đã được kiểm nghiệm và cho thấy hiệu lực cao trong việc tạo kháng thể cho gà. Kết quả cho thấy tỷ lệ kháng thể đạt yêu cầu sau khi tiêm phòng.

4.2. Ứng dụng thực tiễn của vắc xin EDS 76

Vắc xin EDS'76 đã được áp dụng rộng rãi trong các trang trại chăn nuôi gà, giúp giảm thiểu thiệt hại do hội chứng giảm đẻ gây ra. Điều này không chỉ nâng cao hiệu quả kinh tế mà còn đảm bảo an toàn cho sức khỏe đàn gà.

V. Kết luận và triển vọng tương lai của nghiên cứu vắc xin EDS 76

Nghiên cứu sản xuất vắc xin nhũ dầu phòng hội chứng giảm đẻ EDS'76 tại FiveVet đã đạt được nhiều thành công. Vắc xin không chỉ an toàn mà còn hiệu quả trong việc bảo vệ đàn gà. Tương lai, cần tiếp tục nghiên cứu để cải tiến quy trình sản xuất và mở rộng ứng dụng của vắc xin.

5.1. Tương lai của nghiên cứu vắc xin EDS 76

Nghiên cứu sẽ tiếp tục được mở rộng để cải thiện quy trình sản xuất và phát triển các loại vắc xin mới, nhằm đáp ứng nhu cầu ngày càng cao của ngành chăn nuôi.

5.2. Khuyến nghị cho ngành chăn nuôi gia cầm

Ngành chăn nuôi gia cầm cần chú trọng đến việc tiêm phòng vắc xin EDS'76 để bảo vệ đàn gà. Việc áp dụng vắc xin sẽ giúp nâng cao năng suất và chất lượng sản phẩm trứng.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Ngành chăn nuôi gia cầm tại Việt Nam đang có sự chuyển dịch mạnh mẽ sang mô hình công nghiệp và bán công nghiệp, với tổng đàn gia cầm cả nước tăng trưởng từ 361,72 triệu con vào năm 2016 lên mức hơn 385 triệu con vào năm 2017. Trong bối cảnh quy mô đàn gia tăng nhanh chóng, rủi ro dịch bệnh trở thành thách thức hàng đầu đối với hiệu quả kinh tế của các trang trại chăn nuôi gà đẻ trứng. Một trong những mối đe dọa nguy hiểm nhất là Hội chứng giảm đẻ ở gà (Egg Drop Syndrome - EDS'76) do một chủng Adenovirus gây ra, khiến sản lượng trứng của đàn gà đang đẻ bình thường sụt giảm đột ngột từ 10% đến 40% kéo dài liên tục, đồng thời làm suy giảm nghiêm trọng chất lượng vỏ trứng.

Hiện nay, bệnh do virus EDS'76 gây ra chưa có thuốc điều trị đặc hiệu, do đó giải pháp phòng ngừa chủ động và hiệu quả nhất là sử dụng vắc xin. Mặc dù thị trường đã có các sản phẩm vắc xin nhập ngoại, nhưng phần lớn là vắc xin đa giá với giá thành cao, tạo gánh nặng chi phí cho người chăn nuôi trong nước. Nhằm chủ động nguồn cung sinh phẩm thú y chất lượng cao với chi phí cạnh tranh, nghiên cứu này được thực hiện nhằm xây dựng hoàn chỉnh quy trình sản xuất vắc xin đơn giá vô hoạt nhũ dầu phòng hội chứng EDS'76 trên phôi trứng vịt ở quy mô phòng thí nghiệm tại Công ty Cổ phần Thuốc Thú y Trung ương 5 (FiveVet) và Khoa Thú y - Học viện Nông nghiệp Việt Nam trong giai đoạn 2018-2019. Luận văn hướng đến mục tiêu chuẩn hóa các thông số kỹ thuật sản xuất, kiểm nghiệm và đánh giá thực nghiệm toàn diện về tính vô trùng, an toàn tuyệt đối 100% và hiệu lực bảo hộ với hiệu giá kháng thể vượt ngưỡng 8 Log2 theo tiêu chuẩn quốc gia, mở ra triển vọng giảm chi phí phòng bệnh từ 20% đến 35% cho ngành chăn nuôi gà đẻ.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu được xây dựng dựa trên nền tảng lý thuyết miễn dịch học thú y và sinh học phân tử của họ virus Adenoviridae. Về đặc tính virus học, virus EDS'76 là loại virus chứa bộ gen DNA chuỗi kép kích thước khoảng 33,2 kb, hạt virus có cấu trúc 20 mặt đối xứng không màng bọc với đường kính từ 76 nm đến 80 nm và trọng lượng phân tử đạt 22,6 x 10^6 Dalton. Về mặt miễn dịch học, vỏ capsid của virus gồm 13 protein cấu trúc, trong đó các protein bề mặt mang kháng nguyên đặc hiệu có khả năng kích thích hệ miễn dịch dịch thể của gia cầm sản sinh kháng thể trung hòa và kháng thể ức chế ngưng kết hồng cầu (HI). Đồng thời, virus sở hữu đặc tính gây ngưng kết hồng cầu gia cầm ở nồng độ 0,8%, đây là cơ sở sinh hóa cốt lõi để chuẩn độ kháng nguyên qua phản ứng HA và định lượng kháng thể qua phản ứng HI.

Bên cạnh đó, nghiên cứu ứng dụng lý thuyết về chất bổ trợ miễn dịch dạng nhũ dầu khoáng Montanide ISA 71 VG theo tỷ lệ phối trộn 70 phần pha nước kháng nguyên và 30 phần pha dầu. Dạng nhũ tương nước trong dầu đóng vai trò như một kho lưu trữ kháng nguyên tại vị trí tiêm, bảo vệ phân tử kháng nguyên không bị phân hủy nhanh, phóng thích từ từ vào hệ bạch huyết để kích thích đáp ứng miễn dịch sơ cấp và thứ cấp kéo dài. Các khái niệm chính được vận hành trong nghiên cứu gồm: liều gây nhiễm 50% phôi trứng (EID50), hiệu giá ngưng kết hồng cầu (HA Log2), hiệu giá ức chế ngưng kết hồng cầu (HI Log2) và ngưỡng kháng thể bảo hộ tối thiểu đạt từ 8 Log2 trở lên.

Phương pháp nghiên cứu

Nguồn dữ liệu thực nghiệm được thu thập từ quy trình nhân giống virus trên 100 phôi trứng vịt 10-11 ngày tuổi sạch bệnh cho mỗi mẻ sản xuất, xuất phát từ đàn vịt bố mẹ chưa từng tiêm phòng vắc xin EDS. Cỡ mẫu đánh giá an toàn và hiệu lực vắc xin gồm 35 cá thể gà khỏe mạnh từ 4 đến 6 tuần tuổi, được chia ngẫu nhiên thành 3 lô thí nghiệm độc lập: Lô I gồm 5 con đối chứng không tiêm vắc xin; Lô II gồm 10 con tiêm kiểm tra an toàn với liều gấp đôi (1,0 ml/con); Lô III gồm 20 con tiêm kiểm tra hiệu lực bảo hộ với liều chỉ định (0,5 ml/con). Phương pháp chọn mẫu áp dụng là chọn mẫu có chủ đích dựa trên tiêu chuẩn sàng lọc huyết thanh học nghiêm ngặt, đảm bảo toàn bộ cá thể trước thí nghiệm đều âm tính hoàn toàn với kháng thể kháng EDS'76 (HI = 0).

Phương pháp phân tích chuẩn độ virus EID50 được thực hiện theo công thức Reed-Muench trên phôi vịt 11 ngày tuổi. Hiệu giá kháng nguyên và kháng thể được xác định bằng phản ứng ngưng kết hồng cầu (HA) và ức chế ngưng kết hồng cầu (HI) sử dụng 4 đơn vị HA với hồng cầu gà 0,8% theo quy chuẩn của Tổ chức Thú y Thế giới (WOAH/OIE) và Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 8685-4:2011. Việc lựa chọn phương pháp HI được khẳng định là tối ưu nhất do tính đặc hiệu cao, không xảy ra phản ứng chéo với các Adenovirus nhóm I và nhóm II trên gia cầm. Toàn bộ timeline nghiên cứu kéo dài liên tục từ khâu tối ưu hóa thời gian thu hoạch dịch niệu nang (72 đến 120 giờ), bất hoạt formol 24 giờ, đến theo dõi đáp ứng miễn dịch động thái trong 28 ngày trên gà thí nghiệm.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

Nghiên cứu đã ghi nhận bốn phát hiện thực nghiệm mang tính quyết định trong quy trình chế tạo vắc xin EDS'76:

Thứ nhất, việc xác định liều gây nhiễm và thời điểm thu hoạch tối ưu trên phôi vịt 10-11 ngày tuổi cho thấy liều 200 EID50/phôi đạt hiệu giá HA cao nhất là 12 Log2 ở mốc 96 giờ sau gây nhiễm. So với các mốc thời gian truyền thống tại 120 giờ, việc thu hoạch ở 96 giờ giúp rút ngắn 24 giờ nuôi cấy nhưng vẫn đảm bảo hiệu giá virus đạt 10^7,5 EID50/ml, đồng thời thể tích dịch niệu nang thu được tăng khoảng 15% do phôi chưa chiếm quá nhiều thể tích trứng.

Thứ hai, thử nghiệm bất hoạt kháng nguyên bằng Formaldehyde ở nhiệt độ 4°C trong 24 giờ cho thấy nồng độ Formol 0,1% là tối ưu tuyệt đối. Tại nồng độ này, virus bị vô hoạt hoàn toàn 100% (kết quả kiểm tra HA âm tính qua 2 lần cấy chuyển liên tiếp trên phôi vịt) và tỷ lệ phôi vịt sống đạt 100% (tỷ lệ chết 0%). Ngược lại, nồng độ Formol 0,05% không bất hoạt được hoàn toàn virus sống, trong khi nồng độ 0,2% làm tăng độc tính khiến tỷ lệ phôi vịt chết lên tới 60%.

Thứ ba, chuẩn hóa hàm lượng kháng nguyên trong vắc xin khẳng định liều kháng nguyên đạt hiệu giá HA 10 Log2 đem lại khả năng kích thích miễn dịch vượt trội. Sau khi tiêm trên gà thí nghiệm, hiệu giá kháng thể HI trung bình tăng mạnh từ 4,1 Log2 tại ngày thứ 7 lên 6,7 Log2 tại ngày thứ 14, đạt 9,0 Log2 tại ngày thứ 21 và chạm đỉnh 9,5 Log2 tại ngày thứ 28, cao hơn 21,8% so với liều kháng nguyên 8 Log2 (chỉ đạt 7,8 Log2 tại ngày 28).

Thứ tư, kiểm định lý hóa trên 3 lô sản xuất liên tiếp (lô 1 quy mô 800 ml, lô 2 quy mô 500 ml, lô 3 quy mô 800 ml) bằng tá dược Montanide ISA 71 VG tỷ lệ 70:30 cho thấy 100% mẫu đạt độ ổn định nhũ tương nước trong dầu (W/O), không xảy ra hiện tượng tách lớp sau khi ly tâm 3500 vòng/phút trong 35 phút hoặc trải qua thử thách lão hóa cấp tốc 7 ngày ở 4°C và 24 giờ ở 37°C.

Thảo luận kết quả

Cơ chế sinh học giải thích cho việc đạt hiệu giá virus cao ở 96 giờ là do virus EDS'76 hoàn thành chu kỳ nhân lên mạnh mẽ trong tế bào biểu mô màng niệu nang phôi vịt từ 48 đến 72 giờ và tích lũy nồng độ cực đại trong dịch niệu nang ở ngày thứ 4. Việc thu hoạch sớm ở 96 giờ tránh được hiện tượng vỡ tế bào ồ ạt gây vẩn đục dịch trứng và ngăn ngừa sự tái hấp thu dịch của phôi già.

Khi so sánh với các nghiên cứu quốc tế, phát hiện về nồng độ bất hoạt Formol 0,1% tại 4°C trong 24 giờ của đề tài hoàn toàn đồng nhất với các công bố khoa học của McFerran và Smyth, đồng thời tối ưu hơn đáng kể so với nghiên cứu của Nyoman và Syamsidar vốn đòi hỏi nồng độ Formol 0,12% tại 37°C kéo dài tới 48 giờ dễ làm biến tính cấu trúc kháng nguyên tự nhiên.

Về mặt trực quan hóa dữ liệu, toàn bộ động thái biến thiên kháng thể HI theo thời gian có thể được trình bày rõ ràng qua biểu đồ đường (Line Chart) biểu diễn đường cong đáp ứng miễn dịch từ ngày D0 đến ngày D28, và bảng ma trận đối sánh các chỉ tiêu vô trùng, an toàn, cảm quan giữa 3 lô thử nghiệm độc lập, chứng minh tính lặp lại và độ tin cậy đạt 100% của quy trình công nghệ.

Đề xuất và khuyến nghị

Dựa trên các kết quả thực nghiệm đã được kiểm chứng, nghiên cứu đưa ra 4 khuyến nghị hành động cụ thể nhằm đưa quy trình sản xuất vắc xin vào thực tiễn:

1. Chuẩn hóa và nâng quy mô sản xuất công nghiệp: Bộ phận R&D và xưởng sản xuất vắc xin FiveVet cần tiến hành mở rộng quy mô mẻ sản xuất từ 800 ml lên quy mô công nghiệp 50 đến 100 lít/mẻ trong vòng 6 đến 12 tháng tới, hướng đến công suất đạt 500.000 liều vắc xin/năm đáp ứng nhu cầu thị trường chăn nuôi trong nước.

2. Ứng dụng nghiêm ngặt công nghệ nhũ hóa Montanide ISA 71 VG: Đội ngũ kỹ sư sản xuất phải duy trì chuẩn hóa tỷ lệ phối trộn kháng nguyên - dầu khoáng ở mức 70:30, vận hành máy khuấy đồng hóa chuyên dụng ở dải tốc độ từ 2000 đến 3500 vòng/phút trong thời gian từ 10 đến 20 phút để giảm độ nhớt sản phẩm từ 15% đến 20%, đảm bảo vắc xin dễ tiêm và duy trì hạn dùng ổn định trên 24 tháng ở nhiệt độ bảo quản 2-8°C.

3. Triển khai phác đồ tiêm chủng chuẩn hóa cho trang trại gà đẻ: Bác sĩ thú y và người chăn nuôi gia cầm cần thực hiện tiêm phòng vắc xin EDS'76 vô hoạt nhũ dầu với liều lượng 0,5 ml/con qua đường tiêm bắp thịt hoặc tiêm dưới da cổ cho đàn gà hậu bị ở giai đoạn 14 đến 16 tuần tuổi (tối thiểu 2 đến 4 tuần trước khi gà bước vào giai đoạn đẻ trứng thương phẩm), đảm bảo 100% đàn gia cầm vượt qua ngưỡng kháng thể bảo hộ HI ≥ 8 Log2 trước khi đạt đỉnh đẻ.

4. Hoàn thiện hồ sơ đăng ký lưu hành sản phẩm quốc gia: Phòng Đăng ký sản phẩm phối hợp cùng Cục Thú y triển khai thử nghiệm thực địa diện rộng trên quy mô từ 5.000 đến 10.000 cá thể gà đẻ thương phẩm tại các vùng chăn nuôi trọng điểm trong thời gian 9 tháng, hoàn thiện đầy đủ hồ sơ kiểm định theo Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8685-4:2011 để sớm cấp phép thương mại hóa sản phẩm.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

Luận văn mang lại giá trị học thuật và thực tiễn chuyên sâu cho 4 nhóm đối tượng trọng tâm sau:

Thứ nhất, các nhà nghiên cứu vi sinh vật học và cán bộ kỹ thuật sinh phẩm thú y: Luận văn cung cấp toàn bộ quy trình định lượng liều gây nhiễm 200 EID50, kỹ thuật nuôi cấy phân lập Adenovirus trên phôi vịt 10-11 ngày tuổi và thông số bất hoạt bằng Formol 0,1%, phục vụ đắc lực cho công tác nghiên cứu phát triển các dòng vắc xin vô hoạt mới.

Thứ hai, doanh nghiệp sản xuất thuốc thú y và vắc xin đạt chuẩn GMP-WHO: Luận văn là tài liệu tham khảo công nghệ hữu ích về phương pháp nhũ hóa tá dược dầu khoáng Montanide ISA 71 VG theo tỷ lệ 70:30 và hệ thống tiêu chí kiểm tra độ ổn định nhũ tương (Drop test, ly tâm 3500 vòng/phút) phục vụ tối ưu hóa dây chuyền sản xuất công nghiệp.

Thứ ba, bác sĩ thú y vùng và chuyên gia dịch tễ gia cầm: Nguồn tài liệu cung cấp dữ liệu định lượng chính xác về động học kháng thể HI kéo dài đến 28 ngày và cơ chế miễn dịch dịch thể của gia cầm, giúp các chuyên gia xây dựng lịch tiêm phòng dịch tễ khoa học, ngăn chặn rủi ro lây truyền virus qua phôi trứng.

Thứ tư, chủ trang trại và kỹ thuật viên tại các cơ sở chăn nuôi gà đẻ quy mô lớn: Luận văn cung cấp cơ sở khoa học để lựa chọn vắc xin phòng hội chứng EDS'76 đơn giá nội địa chất lượng cao, giúp bảo vệ an toàn năng suất trứng và tiết kiệm từ 20% đến 35% chi phí thú y phòng bệnh so với sản phẩm ngoại nhập.

Câu hỏi thường gặp

Tại sao nghiên cứu lại lựa chọn phôi trứng vịt 10-11 ngày tuổi để nhân giống virus EDS'76 thay vì phôi trứng gà? Virus EDS'76 có nguồn gốc tự nhiên từ thủy cầm và nhân lên rất kém trên tế bào phôi gà. Nghiên cứu thực nghiệm chứng minh tiêm vào xoang niệu mô phôi vịt 10-11 ngày tuổi cho hiệu giá virus rất cao, đạt nồng độ 10^7,5 EID50/ml và hiệu giá HA từ 12 đến 13 Log2, đáp ứng hoàn hảo tiêu chuẩn kháng nguyên sản xuất vắc xin.

Tại sao nồng độ Formol 0,1% được chọn làm chất bất hoạt tối ưu cho vắc xin? Nồng độ Formol 0,1% ở 4°C trong 24 giờ đảm bảo vô hoạt hoàn toàn 100% virus sống mà không gây độc tế bào, giữ tỷ lệ sống của phôi vịt đạt 100%. Các thử nghiệm đối chứng cho thấy nồng độ 0,05% không tiêu diệt hết mầm bệnh, trong khi nồng độ 0,2% gây độc làm chết 60% phôi thử nghiệm.

Hiệu giá kháng thể bảo hộ tối thiểu trên đàn gà sau tiêm vắc xin EDS là bao nhiêu? Theo Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8685-4:2011, mẫu huyết thanh gà sau tiêm phòng vắc xin đạt hiệu giá HI từ 8 Log2 trở lên được xác định là đạt mức bảo hộ miễn dịch an toàn. Vắc xin trong nghiên cứu giúp đàn gà đạt hiệu giá kháng thể trung bình lên tới 9,5 Log2 ở ngày thứ 28 sau tiêm.

Thời điểm nào thích hợp nhất để tiêm phòng vắc xin EDS'76 cho đàn gà đẻ? Thời điểm vàng để tiêm phòng vắc xin nhũ dầu EDS'76 là khi gà hậu bị đạt từ 14 đến 16 tuần tuổi, tức trước thời điểm bắt đầu chu kỳ đẻ trứng từ 2 đến 4 tuần. Tiêm phòng ở giai đoạn này giúp cơ thể hình thành miễn dịch đầy đủ và duy trì kháng thể đỉnh cao suốt chu kỳ khai thác trứng kéo dài 1 năm.

Vắc xin vô hoạt nhũ dầu EDS'76 được kiểm tra tính an toàn trên động vật như thế nào? Tính an toàn được kiểm tra bằng cách tiêm liều gấp đôi (1,0 ml/con) cho 10 gà thí nghiệm 4-6 tuần tuổi. Kết quả theo dõi liên tục trong 14 ngày cho thấy 100% gà thí nghiệm hoàn toàn khỏe mạnh, tăng trọng bình thường và không xuất hiện bất kỳ triệu chứng lâm sàng hay phản ứng phụ cục bộ nào tại vị trí tiêm.

Kết luận

• Luận văn đã xây dựng thành công quy trình công nghệ sản xuất vắc xin vô hoạt nhũ dầu phòng Hội chứng giảm đẻ ở gà (EDS'76) trên phôi trứng vịt ở quy mô phòng thí nghiệm.
• Xác định bộ thông số kỹ thuật tối ưu gồm: liều gây nhiễm 200 EID50/phôi, thời gian thu hoạch dịch niệu nang tại 96 giờ với hiệu giá HA đạt 12 Log2 và EID50 đạt 10^7,5/ml.
• Chuẩn hóa quy trình bất hoạt virus bằng Formaldehyde 0,1% ở 4°C trong 24 giờ và công thức nhũ hóa kháng nguyên với dầu Montanide ISA 71 VG theo tỷ lệ 70:30 đạt độ ổn định nhũ tương 100%.
• Kiểm nghiệm 3 lô sản xuất liên tiếp khẳng định thành phẩm vắc xin đạt chuẩn vô trùng tuyệt đối, an toàn 100% khi tiêm liều gấp đôi và sinh kháng thể bảo hộ mạnh mẽ với hiệu giá HI đạt 9,5 Log2 tại ngày thứ 28 theo tiêu chuẩn TCVN 8685-4:2011.
• Định hướng trong 6 đến 12 tháng tới, quy trình cần được chuyển giao nâng quy mô sản xuất công nghiệp từ 50 đến 100 lít/mẻ tại FiveVet và hoàn thiện khảo nghiệm thực địa trên 10.000 cá thể gà đẻ.

Các đơn vị sản xuất sinh phẩm thú y và trang trại chăn nuôi gà đẻ hãy ứng dụng ngay quy trình kỹ thuật này để nâng cao năng lực tự chủ vắc xin, ngăn ngừa triệt để dịch bệnh giảm đẻ và tối ưu hóa lợi nhuận kinh tế bền vững.

Trích đoạn nội dung tài liệu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN VĂN ĐỨC NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT VẮC XIN NHŨ DẦU PHÒNG HỘI CHỨNG GIẢM ĐẺ Ở Gà (EGG DROP SYNDROME-EDS’76) TẠI CÔNG TY FIVEVET Ngành: Thú y Mã số: 8640101 Người hướng dẫn khoa học: TS. Trương Hà Thái TS. Trịnh Quang Đại NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2019 LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các kết quả nghiên cứu được trình bày trong luận văn là trung thực, khách quan và chưa từng dùng để bảo vệ lấy bất kỳ học vị nào. Tôi xin cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn đã được cám ơn, các thông tin trích dẫn trong luận văn này đều được chỉ rõ nguồn gốc.

Hà Nội, ngày 03 tháng 6 năm 2019 Tác giả luận văn Nguyễn Văn Đức i LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn, tôi đã nhận được sự hướng dẫn, chỉ bảo tận tình của các thầy cô giáo, sự giúp đỡ, động viên của bạn bè, đồng nghiệp và gia đình. Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tôi được bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc tới TS Trương Hà Thái và TS Trịnh Quang Đại đã tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Khoa Thú Y - Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã tận tình giúp đỡ tôi trong quá trình học tập, thực hiện đề tài và hoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán bộ viên chức công ty Cổ phần thuốc thú y Trung Ương 5 đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài.

Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp đã tạo mọi điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi về mọi mặt, động viên khuyến khích tôi hoàn thành luận văn. Hà Nội, ngày 03 tháng 6 năm 2019 Tác giả luận văn Nguyễn Văn Đức ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] MỤC LỤC Lời cam đoan. ii Mục lục. iii Danh mục chữ viết tắt.

vi Danh mục bảng. vii Danh mục hình. viii Trích yếu luận văn. ix Thesis abstract.

Tính cấp thiết của đề tài. Mục tiêu của đề tài. Tổng quan tài liệu. Hiểu biết chung về hội chứng giảm đẻ EDS (egg drop syndrome).

Giới thiệu chung. Vi rút gây bệnh hội chứng giảm đẻ. Hội chứng giảm đẻ EDS 76. Hiểu biết chung về vắc xin.

Những đặc tính cơ bản của vắc xin. Sản xuất vắc xin bằng phương pháp vô hoạt vi rút. Chất bổ trợ. Hiểu biết chung về miễn dịch.

Nội dung và phƣơng pháp nghiên cứu. Nội dung nghiên cứu. Nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất vắc xin phòng hội chứng giảm đẻ gà (EDS). Đánh giá và kiểm tra chất lượng vắc xin phòng hội chứng giảm đẻ gà (EDS).

Đối tượng, nguyên liệu và địa điểm nghiên cứu. 19 iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Đối tượng nghiên cứu. Địa điểm nghiên cứu.

Các loại dung dịch, môi trường. Trang thiết bị máy móc, dụng cụ trong phòng thí nghiệm. Phương pháp nghiên cứu. Tiêm vào xoang niệu mô.

Phương pháp nhân vi rút trên trứng vịt có phôi 10-11 ngày tuổi. Phương pháp làm HA, HI. Phương pháp xác định EID50. Xác định vi rút và chuẩn độ vi rút EDS trong nước trứng thu được.

Bất hoạt vi rút .