So sánh hàm lượng Lovastatin và sự hiện diện của gene trong nấm bào ngư (Pleurotus spp.)

Khóa luận tốt nghiệp nghiên cứu tốt nghiệp công nghệ sinh học so sánh tương quan giữa hàm lượng lovastatin và sự hiện diện của các, vận dụng lý thuyết vào thực tế, đề xuất giải

• Tác giả: Trần Yến Vi
• Người hướng dẫn: ThS. Lâm Vỹ Nguyên
• Trường học: Trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh
• Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học
• Đề tài: Nghiên Cứu Hàm Lượng Lovastatin Và Gene Sinh Tổng Hợp Trong Nấm Bào Ngư (Pleurotus Spp.)
• Loại tài liệu: Khóa Luận Tốt Nghiệp
• Năm xuất bản: 2019 - 2023
• Địa điểm: Thủ Đức

Mục lục chi tiết

• LỜI CẢM ƠN
• XÁC NHẬN VÀ CAM ĐOAN
• TÓM TẮT
• 1. CHƯƠNG 1: MỤC TIÊU ĐỀ TÀI
• 1.1. Nội dung thực hiện
• 2. CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 2.1. Giới thiệu chung
• 2.2. Giới thiệu về nấm Pleurotus spp.
• 2.3. Dược tính của nấm Pleurotus spp.
• 2.4. Sinh tổng hợp lovastatin: Phương pháp phát hiện lovastatin và định lượng
• 2.4.1. Ứng dụng của lovastatin
• 2.4.2. Các phương pháp sắc ký
• 2.4.2.1. Phương pháp sắc ký lỏng ghép khối phổ (LC-MS/MS)
• 2.4.2.2. Phương pháp sắc ký lỏng ghép khối phổ siêu hiệu năng (UPLC-MS/MS)
• 3. CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
• 3.1. Đối tượng nghiên cứu
• 3.2. Phương pháp sắc ký lỏng ghép khối phổ siêu hiệu năng UPLC-MS/MS
• 3.3. Phương pháp tăng sinh hệ sợi trong môi trường PDB thu sinh khối chủng nấm Pleurotus spp.
• 3.4. Phương pháp tích chiết
• 4. CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 4.1. Kết quả phương pháp sắc ký lỏng ghép khối phổ siêu hiệu năng UPLC-MS/MS
• 4.2. Khảo sát hàm lượng lovastatin trong một số chủng nấm bào ngư (Pleurotus spp.) ở dòng lưỡng bội và dòng đơn bội
• 4.3. Kết quả phương pháp PCR
• 4.4. So sánh tương quan giữa hàm lượng lovastatin và hệ gene sinh tổng hợp lovastatin của một số chủng nấm bào ngư (Pleurotus spp.)
• 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
• DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT
• DANH SÁCH CÁC BẢNG
• DANH SÁCH CÁC HÌNH

Tóm tắt

I. Tổng quan về hàm lượng Lovastatin trong nấm bào ngư

Nấm bào ngư (Pleurotus spp.) là một trong những loại nấm ăn phổ biến và được nghiên cứu nhiều về giá trị dinh dưỡng cũng như dược tính. Một trong những hợp chất quan trọng có trong nấm bào ngư là Lovastatin, một loại statin tự nhiên có tác dụng giảm cholesterol trong máu. Nghiên cứu này nhằm mục tiêu xác định hàm lượng Lovastatin và hệ gene sinh tổng hợp của nó trong một số chủng nấm bào ngư. Việc tìm hiểu này không chỉ giúp nâng cao giá trị dinh dưỡng của nấm mà còn mở ra hướng đi mới trong việc sử dụng nấm như một loại thực phẩm chức năng.

1.1. Đặc điểm sinh học của nấm Pleurotus spp.

Nấm Pleurotus spp. có hình dạng đặc trưng với mũ nấm xòe và màu sắc đa dạng. Chúng thường mọc trên các gốc cây mục nát và có khả năng phát triển tốt trong điều kiện môi trường khác nhau. Nấm không chỉ được tiêu thụ như thực phẩm mà còn được nghiên cứu về các hợp chất có lợi cho sức khỏe.

1.2. Tác dụng của Lovastatin trong y học

Lovastatin được biết đến với khả năng giảm cholesterol và ngăn ngừa các bệnh tim mạch. Nghiên cứu cho thấy rằng việc tiêu thụ nấm bào ngư có thể cung cấp một nguồn Lovastatin tự nhiên, giúp cải thiện sức khỏe tim mạch.

II. Vấn đề và thách thức trong nghiên cứu hàm lượng Lovastatin

Mặc dù nấm bào ngư chứa Lovastatin, nhưng hàm lượng của nó có thể bị ảnh hưởng bởi nhiều yếu tố như điều kiện môi trường, phương pháp nuôi trồng và giống nấm. Việc xác định chính xác hàm lượng Lovastatin trong nấm là một thách thức lớn. Nghiên cứu này sẽ phân tích các yếu tố ảnh hưởng đến hàm lượng Lovastatin và tìm ra giải pháp để tối ưu hóa quy trình sản xuất.

2.1. Các yếu tố ảnh hưởng đến hàm lượng Lovastatin

Hàm lượng Lovastatin trong nấm bào ngư có thể bị ảnh hưởng bởi các yếu tố như nhiệt độ, độ ẩm, và chất dinh dưỡng trong môi trường nuôi trồng. Việc hiểu rõ các yếu tố này sẽ giúp cải thiện quy trình sản xuất nấm.

2.2. Thách thức trong việc xác định gene sinh tổng hợp Lovastatin

Việc phát hiện và phân tích hệ gene sinh tổng hợp Lovastatin trong nấm bào ngư là một thách thức lớn. Các phương pháp như PCR cần được áp dụng một cách chính xác để đảm bảo kết quả đáng tin cậy.

III. Phương pháp nghiên cứu hàm lượng Lovastatin trong nấm

Nghiên cứu này sử dụng phương pháp sắc ký lỏng ghép khối phổ siêu hiệu năng (UPLC-MS/MS) để định tính và định lượng Lovastatin trong các mẫu nấm bào ngư. Phương pháp PCR cũng được áp dụng để phát hiện sự hiện diện của các gene sinh tổng hợp Lovastatin. Các mẫu nấm sẽ được thu thập từ nhiều nguồn khác nhau để đảm bảo tính đại diện.

3.1. Phương pháp UPLC MS MS trong nghiên cứu

Phương pháp UPLC-MS/MS cho phép xác định hàm lượng Lovastatin với độ chính xác cao. Kỹ thuật này giúp phân tích nhanh chóng và hiệu quả, từ đó cung cấp thông tin cần thiết cho nghiên cứu.

3.2. Kỹ thuật PCR trong phát hiện gene sinh tổng hợp

Kỹ thuật PCR được sử dụng để phát hiện sự hiện diện của các gene sinh tổng hợp Lovastatin. Phương pháp này cho phép xác định các gene liên quan đến quá trình tổng hợp Lovastatin trong nấm bào ngư.

IV. Kết quả nghiên cứu hàm lượng Lovastatin trong nấm bào ngư

Kết quả nghiên cứu cho thấy rằng một số chủng nấm bào ngư có hàm lượng Lovastatin đáng kể. Mẫu TVL6a ở thể lưỡng bội có hàm lượng Lovastatin cao nhất, đạt 6.9534 ng/g. Các mẫu khác cũng cho thấy sự hiện diện của Lovastatin, nhưng với hàm lượng thấp hơn. Điều này cho thấy tiềm năng của nấm bào ngư như một nguồn cung cấp Lovastatin tự nhiên.

4.1. So sánh hàm lượng Lovastatin giữa các mẫu

Các mẫu nấm bào ngư được phân tích cho thấy sự khác biệt rõ rệt về hàm lượng Lovastatin. Mẫu TVL6a có hàm lượng cao nhất, trong khi các mẫu khác như TVL6-24 và TSG5-11 có hàm lượng thấp hơn.

4.2. Sự hiện diện của gene sinh tổng hợp Lovastatin

Kết quả từ phương pháp PCR cho thấy sự hiện diện của các gene sinh tổng hợp Lovastatin trong tất cả các mẫu nấm được nghiên cứu. Điều này khẳng định khả năng tổng hợp Lovastatin của nấm bào ngư.

V. Kết luận và triển vọng nghiên cứu về Lovastatin

Nghiên cứu này đã chỉ ra rằng nấm bào ngư có khả năng chứa hàm lượng Lovastatin đáng kể và có hệ gene sinh tổng hợp Lovastatin. Điều này mở ra cơ hội cho việc phát triển nấm bào ngư như một nguồn thực phẩm chức năng có lợi cho sức khỏe. Các nghiên cứu tiếp theo cần được thực hiện để tối ưu hóa quy trình sản xuất và nâng cao hàm lượng Lovastatin trong nấm.

5.1. Triển vọng ứng dụng nấm bào ngư trong y học

Nấm bào ngư có thể được phát triển như một nguồn thực phẩm chức năng giúp giảm cholesterol và ngăn ngừa bệnh tim mạch. Việc nghiên cứu sâu hơn về Lovastatin trong nấm sẽ mang lại nhiều lợi ích cho sức khỏe cộng đồng.

5.2. Hướng nghiên cứu trong tương lai

Các nghiên cứu trong tương lai nên tập trung vào việc cải thiện quy trình nuôi trồng nấm bào ngư để tối ưu hóa hàm lượng Lovastatin. Đồng thời, việc nghiên cứu các yếu tố môi trường ảnh hưởng đến sự tổng hợp Lovastatin cũng cần được chú trọng.

Nội dung chính

Bối cảnh và vấn đề nghiên cứu

Nấm bào ngư (Pleurotus spp.) là một trong những loại nấm ăn và nấm dược liệu được nuôi trồng phổ biến trên toàn cầu, chiếm khoảng 25% tổng sản lượng nấm thương mại thế giới. Bên cạnh giá trị dinh dưỡng cao (giàu protein, chất xơ, vitamin nhóm B, vitamin C và các khoáng chất), nấm thuộc chi Pleurotus còn được ghi nhận chứa các hoạt chất có hoạt tính sinh học quan trọng, tiêu biểu là lovastatin (mevinolin/monacolin K). Hợp chất này có khả năng ức chế cạnh tranh enzyme 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A (HMG-CoA) reductase – enzyme giữ vai trò giới hạn tốc độ trong chu trình sinh tổng hợp cholesterol ở người, từ đó giúp hạ lipid máu và giảm nguy cơ mắc các bệnh lý tim mạch.

Tuy nhiên, trong quá trình tiến hóa, chọn giống và dưới tác động của các yếu tố sinh thái môi trường nuôi trồng, khả năng duy trì và hàm lượng tích lũy lovastatin trong các chủng nấm ăn có sự biến động lớn, thậm chí bị suy giảm hoặc thoái hóa. Điều này đặt ra dấu hỏi khoa học về việc liệu các chủng nấm bào ngư đang lưu hành và canh tác thực tế có còn chứa lovastatin hay không, và cơ sở di truyền liên quan đến các gene trong hệ gene sinh tổng hợp hợp chất này hiện diện ra sao ở các mức độ bội thể khác nhau.

Mục tiêu nghiên cứu: Khóa luận hướng đến việc xác định hàm lượng lovastatin và khảo sát nguồn vật liệu di truyền có chứa các gene trong hệ gene sinh tổng hợp lovastatin ở một số chủng nấm bào ngư (Pleurotus spp.) ở cả thể đơn bội và thể lưỡng bội.

Nhiệm vụ nghiên cứu cụ thể (đánh số theo văn bản):

1. Nội dung 1: Khảo sát hàm lượng lovastatin trong một số chủng nấm bào ngư bằng phương pháp sắc ký lỏng ghép khối phổ siêu hiệu năng (UPLC-MS/MS).
2. Nội dung 2: Kiểm tra sự hiện diện của các gene thuộc hệ gene sinh tổng hợp lovastatin trong một số chủng nấm bào ngư bằng kỹ thuật PCR.
3. Nội dung 3: So sánh tương quan giữa hàm lượng lovastatin và hệ gene sinh tổng hợp lovastatin trong các giống nấm bào ngư nghiên cứu.

Đối tượng và phạm vi nghiên cứu:

• Đối tượng nghiên cứu: Gồm 10 mẫu nấm bào ngư (Pleurotus spp.) do Viện Nghiên cứu Công nghệ Sinh học Ứng dụng (ABI) phân lập và định danh, chia thành 2 nhóm:
  • 05 mẫu ở thể lưỡng bội ($2n$): Trắng Vĩnh Long (TVL6a), Trắng Sài Gòn (TSG5a), Xám Vĩnh Long (DVL3a), Xám Bến Tre (XBT1a), Xám Sài Gòn (XSG1a).
  • 05 mẫu ở thể đơn bội ($n$): Trắng Vĩnh Long (TVL6-24), Trắng Sài Gòn (TSG5-32), Trắng Sài Gòn (TSG5-11), Xám Bến Tre (XBT2-4), Xám Vĩnh Long (DVL3-4).
• Phạm vi không gian: Phòng thí nghiệm thuộc Trung tâm Công nghệ Sinh học TP. Hồ Chí Minh (Số 2374, Quốc lộ 1, Khu phố 2, Phường Trung Mỹ Tây, Quận 12, TP.HCM).
• Phạm vi thời gian: Thời gian thực hiện đề tài trong 6 tháng (hoàn thành tháng 03/2024).

---

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Cơ sở lý thuyết và cơ chế sinh tổng hợp

Khóa luận dựa trên lý thuyết phân loại học nấm (Fungi, Basidiomycota, Agaricomycetes, Agaricales, Pleurotaceae, Pleurotus), chu trình sinh trưởng phân lập đơn bội - lưỡng bội, và con đường chuyển hóa polyketide sinh tổng hợp lovastatin ($C_{24}H_{36}O_5$, khối lượng phân tử 404,5 g/mol). Quá trình tổng hợp lovastatin khởi đầu từ các đơn vị acetate/acetyl-CoA và malonyl-CoA thông qua cụm gene polyketide synthase (lov cluster), lần lượt tạo thành các chất trung gian như monacolin L, monacolin J nhờ hệ thống monooxygenase cytochrome P450 (LovA) và kết thúc bằng phản ứng este hóa tạo lovastatin hoạt tính.

Khóa luận khảo sát 10 gene cấu trúc và điều hòa trong cụm sinh tổng hợp lovastatin (LovA, LovB, LovC, LovD, LovE, LovF, LovG, LovR, LovT, LaeA) cùng các gene tham chiếu/nội chuẩn (Act, E2-6).

Phương pháp nghiên cứu thực nghiệm

Mẫu nấm bào ngư (Đơn bội / Lưỡng bội)

1. Phương pháp chiết xuất mẫu phân tích hóa học:

   • Cân 2,55 g mẫu nấm, chiết Soxhlet bằng 120 mL acetonitrile ($CH_3CN$) ở 60°C trong 3 giờ.
   • Cô quay chân không trên máy Buchi R-300 ở 60°C, 150 vòng/phút, ngưng tụ 5°C đến còn 10–15 mL, sau đó thổi khô dung môi hoàn toàn bằng khí nitơ.
   • Tái hòa tan cắn trong 2 mL methanol, đánh siêu âm (bể Elmasonic S 300 H), lọc qua màng PTFE kích thước lỗ lọc 0,22 µm trước khi tiêm vào hệ thống sắc ký.

2. Phương pháp sắc ký lỏng ghép khối phổ siêu hiệu năng (UPLC-MS/MS):

   • Thiết bị sắc ký: Waters ACQUITY UPLC H-Class, sử dụng cột phân tích ACQUITY UPLC BEH C18 ($1,7\ \mu\text{m}, 2,1 \times 100\ \text{mm}$), nhiệt độ cột 60°C, thể tích tiêm 5 µL, tốc độ dòng 0,40 mL/phút.
   • Pha động: Kênh A ($H_2O$ chứa 0,01% acid formic), Kênh B (Methanol 100%). Chương trình gradient: 0,0–1,0 phút (5% B); 1,5 phút (35% B); 6,0–8,0 phút (95% B); 8,1–11,0 phút (5% B).
   • Hệ thống khối phổ: Xevo TQ-S micro, nguồn ion hóa phun điện tử dương ($ESI^+$), điện thế mao quản (Capillary voltage) 3,00 kV, điện thế Cone 15,00 V, nhiệt độ nguồn $130^\circ\text{C}$, nhiệt độ khử dung môi $350^\circ\text{C}$, lưu lượng khí khử solvat 600 L/h.
   • Chế độ phân mảnh (MRM): Phân tích chuyển tiếp ion $405,50 \rightarrow 199,20$ (Cone 15V, Collision 10/15V - dùng định lượng) và $405,50 \rightarrow 285,40$ (dùng định tính).
   • Thẩm định phương pháp: Xây dựng đường chuẩn trong khoảng tuyến tính 1–100 µg/L; đánh giá độ lặp lại ($n=10$) theo chuẩn AOAC để xác định giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ).

3. Phương pháp nuôi cấy sinh khối và tách chiết DNA:

   • Nuôi cấy hệ sợi nấm trong bình tam giác chứa môi trường lỏng Potato Dextrose Broth (PDB, 2,88 g/120 mL) ở nhiệt độ 27°C từ 7 đến 14 ngày.
   • Tách chiết DNA tổng số: Sử dụng 30–100 mg sinh khối nấm khô nghiền nhỏ, bổ sung 100 µL đệm TE buffer, ủ 12 giờ ở nhiệt độ phòng, phá màng bằng lò vi sóng trong 1 phút 30 giây, sốc lạnh ở -20°C trong 10 phút, ly tâm 10.000 rpm trong 2 phút (máy Eppendorf 5430R) và thu dịch nổi chứa DNA.

4. Kỹ thuật PCR và điện di sản phẩm:

   • Thành phần phản ứng PCR (tổng thể tích 20 µL): $10\ \mu\text{L}$ Master mix 2X, $0,5\ \mu\text{L}$ Primer F ($10\ \mu\text{M}$), $0,5\ \mu\text{L}$ Primer R ($10\ \mu\text{M}$), $8\ \mu\text{L}\ H_2O$, $1\ \mu\text{L}$ DNA khuôn.
   • Chu trình nhiệt PCR: Tiền biến tính ở 95°C (5 phút); 40 chu kỳ lặp lại gồm Biến tính 95°C (30 giây), Bắt cặp 50–62°C tùy cặp mồi (30 giây), Kéo dài 72°C (60 giây); Hoàn thiện ở 72°C (10 phút).
   • Điện di kiểm tra trên gel agarose 1,2% trong đệm TAE 1X nhuộm GelRed, hiệu điện thế 100V trong 30 phút, thang chuẩn HyperLadder 100 bp, chụp và phân tích ảnh gel trên hệ thống Cleaver Scientific với phần mềm Genpix.

Tên cặp mồi	Trình tự mồi xuôi / ngược ($5' \rightarrow 3'$)	Kích thước đoạn khuếch đại (bp)
LovA	F: GCG ATG TCA AGC CAC TCC TCA TTA TG R: AGA CCC AAG CTC CC AGT ACG TCA AG	704 bp
LovB	F: GCC GGA TTC TAT AAA AAC CTG AGG ATTC R: AGT CCT CAT TAT TCG AGA CTC GCA GC	226 bp
LovC	F: GCA GAG GAG GTC TTT GAC TAT CG R: GAC TCG ACG TTG GTG ATA CAG TCG	701 bp
LovD	F: GGA TCT GGA CGG AGA GAA CTG R: CAG GGT TCC AGT TGG AAG AAC	388 bp
LovE	F: TCG ATG CGT CTA CAG TGA GC R: TAG CTG TCC GGT GGA TCA AG	350 bp
LovF	F: TYG CAT CTT GCC ATT CAG AG R: TCG AGT CAA ATG AGT AGG A	181 bp
LovG	F: GCT CCG TTC CCT TCC TCT GCA R: GGG GTG TTG AGT CTG CCA GTC G	485 bp
LovR	F: GCC TCA AGA ATG GTG CCT CCG R: TTC AAC GCC CAT GCC TCC AAC	331 bp
LovT	F: GAT CCT TGT GTC CAT ATC CGC CG R: GCT AGC GAA ATG CCG ATG GG	740 bp
LaeA	F: GGA TGC ACG AGA ACA TAA TCC TGG C R: AAC TTG TGG AAA AGA TGC AGG CGA TC	857 bp
Act	F: CCA CGT TAC CAC TTT CAA CTC C R: GAG GAG CGA TGA TCT TGA CCT	350 bp
E2-6	F: TGA CCA GCG AAG AAA TGA CA R: TTA TCT TTC ATC CAT TTC CA	255 bp

---

Nội dung chính theo từng chương

Chương 1. Mở đầu

Chương này nêu bật tính cấp thiết của đề tài xuất phát từ nhu cầu đánh giá thành phần dược tính hạ mỡ máu trong nấm ăn thương mại. Xác định mục tiêu tổng quát là đánh giá hàm lượng lovastatin tự nhiên bằng UPLC-MS/MS và khảo sát cụm gene tổng hợp lovastatin bằng PCR trên 10 chủng nấm bào ngư đơn bội và lưỡng bội, qua đó thiết lập 3 nội dung nghiên cứu thực nghiệm tương ứng.

Chương 2. Tổng quan tài liệu

Tổng hợp hệ thống tài liệu khoa học về đặc điểm sinh học, chu trình sống và vị trí phân loại của chi Pleurotus. Phân tích cấu trúc phân tử của lovastatin, cơ chế ức chế cạnh tranh với enzyme HMG-CoA reductase, con đường biến dưỡng từ acetate qua monacolin L, J đến lovastatin, và vai trò của 18 khung đọc mở (ORF)/gene trong cụm gene sinh tổng hợp ở vi nấm. Chương này cũng phân tích tổng quan các kỹ thuật phân tích hóa lý (HPLC-UV, LC-MS/MS, UPLC-MS/MS) và kỹ thuật sinh học phân tử (PCR, giải trình tự ITS).

Chương 3. Vật liệu và phương pháp

Trình bày chi tiết toàn bộ danh mục thiết bị, hóa chất đạt tiêu chuẩn phân tích, nguồn gốc 10 chủng nấm (Pleurotus spp.) thu thập từ Vĩnh Long, Sài Gòn, Bến Tre. Mô tả cụ thể các bước thực nghiệm: chiết xuất Soxhlet, điều kiện chạy khối phổ đa phản ứng (MRM), chương trình rửa giải pha động gradient, công thức xác định LOD/LOQ, quy trình nuôi cấy nấm trong môi trường PDB lỏng, phương pháp tách chiết DNA bằng microwave-TE buffer, thiết kế 12 cặp mồi đặc hiệu và chu trình nhiệt PCR.

Chương 4. Kết quả và thảo luận

Chương 4 cung cấp dữ liệu thực nghiệm chi tiết qua hai nhóm phương pháp phân tích hóa học và sinh học phân tử:

1. Kết quả UPLC-MS/MS và thẩm định phương pháp:
   • Đường chuẩn lovastatin thiết lập từ 1 đến 100 µg/L cho phương trình tuyến tính: $y = 824,83x + 2095,7$ với hệ số tương quan rất cao $R^2 = 0,9985$.
   • Thời gian lưu của pic lovastatin chuẩn xuất hiện ổn định ở 5,52 phút, mảnh ion định lượng $m/z = 405,50 \rightarrow 199,20$.
   • Đánh giá độ lặp lại ($n=10$) cho thấy độ lệch chuẩn $SD = 0,18$, tỷ số $R = 6,33$ (thỏa mãn tiêu chuẩn AOAC $4 < R < 10$). Giới hạn phát hiện $LOD = 0,55\ \mu\text{g/L}$ và giới hạn định lượng $LOQ = 1,84\ \mu\text{g/L}$ (tương đương 1,84 ng/g mẫu).

Lần phân tích ($n=10$)	Diện tích peak	Hàm lượng đo được (µg/L)	Thông số thống kê
1	5966,73	3,27	Hàm lượng trung bình: 3,50 µg/L
2	6048,23	3,41	Độ lệch chuẩn (SD): 0,18
3	6067,04	3,45	Hệ số biến thiên (%): 5,14%
4	6182,69	3,64	LOD: 0,55 µg/L
5	5897,26	3,15	LOQ: 1,84 µg/L
6	6188,45	3,65	Giá trị R (AOAC): 6,33
7	6233,22	3,73
8	6067,23	3,45
9	6172,14	3,62
10	6154,14	3,59

2. Kết quả định lượng lovastatin trong các mẫu nấm bào ngư:

   • Nhóm lưỡng bội: Mẫu TVL6a (Trắng Vĩnh Long) phát hiện pic sắc ký rõ nét ở thời gian lưu 5,52 phút và phổ ion phân mảnh $m/z = 405,50$, định lượng được 6,9534 ng/g. Bốn mẫu còn lại (TSG5a, DVL3a, XBT1a, XSG1a) có tín hiệu dưới ngưỡng định lượng của thiết bị ($LOQ < 1,84\ \text{ng/g}$).
   • Nhóm đơn bội: Hai mẫu định lượng được lovastatin là TVL6-24 (1,0249 ng/g) và TSG5-11 (1,5724 ng/g). Ba mẫu còn lại (TSG5-32, DVL3-4, XBT2-4) dưới ngưỡng định lượng ($< LOQ$).

3. Kết quả tăng sinh khối hệ sợi trong môi trường PDB:

   • Quan sát sau 7 ngày và 14 ngày nuôi cấy cho thấy sau 14 ngày lượng sinh khối tăng không đáng kể so với 7 ngày.
   • Chủng TSG5-11 có tốc độ tăng trưởng hệ sợi mạnh nhất, trong khi chủng TVL6-24 tăng trưởng yếu nhất.

4. Kết quả kiểm tra hệ gene sinh tổng hợp bằng PCR:

   • Ở thể lưỡng bội: Mẫu TVL6a cho kết quả dương tính với 10 cặp mồi (trừ LovG và E2-6 bị smear); TSG5a dương tính với 11 cặp mồi; DVL3a phát hiện 9/12 gene; XBT1a phát hiện 5/12 gene; XSG1a chỉ phát hiện 4/12 gene.
   • Ở thể đơn bội: Dữ liệu điện di gel agarose xác định sự hiện diện của các gene trong hệ thống sinh tổng hợp như sau:

STT	Dòng đơn bội	LovA	LovB	LovC	LovD	LovE	LovF	LovG	LovR	LovT	LaeA	Act	E2-6	Tổng số gene phát hiện
1	TVL6-24	+	-	+	+	+	-	+	-	-	-	+	+	7/12
2	TSG5-11	+	+	+	+	+	+	+	-	-	-	+	+	9/12
3	TSG5-32	-	+	+	+	+	+	+	-	-	-	+	+	8/12
4	DVL3-4	+	+	+	+	-	+	+	+	+	+	+	+	11/12
5	XBT2-4	+	+	-	+	+	+	+	-	-	+	+	+	9/12

(Ghi chú: +: có phát hiện vạch khuếch đại đặc hiệu; -: không phát hiện).

Chương Kết luận và đề nghị

Đánh giá mức độ hoàn thành mục tiêu nghiên cứu, xác nhận tiềm năng tích lũy lovastatin của các dòng nấm Trắng Vĩnh Long (TVL6a, TVL6-24) và Trắng Sài Gòn (TSG5-11), đồng thời đề xuất định hướng tối ưu hóa quy trình PCR và mở rộng sang phân tích phiên mã.

---

Kết quả và đóng góp

Kết quả định lượng và phát hiện di truyền chính

• Xây dựng thành công quy trình phân tích lovastatin bằng UPLC-MS/MS với độ chính xác cao ($R^2 = 0,9985$, $LOD = 0,55\ \mu\text{g/L}$, $LOQ = 1,84\ \mu\text{g/L}$).
• Xác định được 3 dòng nấm có khả năng tích lũy lovastatin vượt ngưỡng LOQ:
  • Dòng lưỡng bội TVL6a đạt 6,9534 ng/g.
  • Dòng đơn bội TSG5-11 đạt 1,5724 ng/g.
  • Dòng đơn bội TVL6-24 đạt 1,0249 ng/g.
• Chứng minh các dòng nấm mang hàm lượng lovastatin đo được (TVL6a, TVL6-24, TSG5-11) đều đồng thời mang phần lớn các gene then chốt trong cụm gene sinh tổng hợp (LovA, LovC, LovD, LovE, LovG).
• Ghi nhận dòng đơn bội DVL3-4 mang số lượng gene trong cụm nhiều nhất (11/12 gene kiểm tra), mặc dù hàm lượng lovastatin tự do trong điều kiện nuôi cấy tĩnh chưa vượt ngưỡng LOQ.

Đóng góp thực tiễn và khoa học

• Cung cấp dẫn liệu thực nghiệm khách quan chứng minh sự tồn tại thực tế của hợp chất lovastatin trong quả thể/hệ sợi nấm bào ngư (Pleurotus spp.) tại Việt Nam.
• Xác định được các nguồn vật liệu giống triển vọng (đặc biệt là chủng Trắng Vĩnh Long TVL6a và Trắng Sài Gòn TSG5-11) phục vụ cho công tác bảo tồn nguồn gene, lai tạo và chọn lọc giống nấm ăn có giá trị dược liệu cao.
• Thiết lập bộ thông số kỹ thuật tối ưu hóa cho hệ thống sắc ký lỏng khối phổ Xevo TQ-S micro và bộ 12 cặp mồi PCR đặc hiệu phục vụ cho các nghiên cứu giám định di truyền cụm gene chuyển hóa thứ cấp ở nấm lớn.

---

Hạn chế và hướng nghiên cứu tiếp

Hạn chế của đề tài

• Quy mô mẫu khảo sát còn giới hạn trong 10 chủng (5 mẫu đơn bội, 5 mẫu lưỡng bội) thu thập tại ba tỉnh thành phía Nam.
• Một số phản ứng PCR đối với các mồi như LovD, LovG, LovR, E2-6 trên một số mẫu xuất hiện hiện tượng vệt mờ (smear) hoặc đa băng, đòi hỏi phải tiếp tục tinh chỉnh nhiệt độ bắt cặp ($T_m$).
• Nghiên cứu mới dừng lại ở mức độ kiểm tra sự hiện diện của gene trên DNA tổng số (định tính PCR), chưa tiến hành đánh giá mức độ biểu hiện gene (mức độ phiên mã mRNA qua RT-qPCR) để giải thích đầy đủ vì sao có mẫu mang đầy đủ gene (như DVL3-4) nhưng hàm lượng lovastatin đo được lại dưới ngưỡng LOQ.
• Hàm lượng lovastatin ở đa số các mẫu còn thấp, cần tối ưu hóa môi trường nuôi cấy và cơ chất để kích thích sinh tổng hợp.

Hướng nghiên cứu tiếp theo

• Tiếp tục tối ưu hóa các thành phần dinh dưỡng cơ chất (tỷ lệ C/N, nguồn carbon, bổ sung tiền chất) và điều kiện nuôi trồng (nhiệt độ, độ ẩm, chu kỳ chiếu sáng) nhằm kích thích cụm gene lov hoạt động mạnh hơn.
• Thực hiện phân tích biểu hiện gene định lượng (Real-time RT-PCR / RNA-Seq) đối với các gene LovA, LovB, LovF trên các dòng đơn bội và lưỡng bội ưu tú.
• Ứng dụng các dòng đơn bội mang nguồn gene tốt (TSG5-11, TVL6-24, DVL3-4) để tiến hành lai tạo các dòng lưỡng bội mới có năng suất thể quả cao kết hợp tích lũy lovastatin vượt trội.

---

Giá trị tham khảo

• Đối tượng sử dụng phù hợp: Sinh viên, học viên cao học và nghiên cứu viên thuộc các chuyên ngành Công nghệ Sinh học, Sinh học Ứng dụng, Hóa phân tích, Dược liệu học, Công nghệ Thực phẩm và Nông nghiệp Công nghệ cao.
• Nội dung giá trị thực tiễn cao:
  • Quy trình chiết xuất Soxhlet kết hợp làm sạch và các thông số cài đặt UPLC-MS/MS (cột BEH C18, pha động methanol/acid formic, ion precursor/product ion chế độ MRM) có thể áp dụng trực tiếp cho việc định lượng statin trong các nền mẫu sinh học thực vật và vi nấm.
  • Danh mục trình tự nucleotide 12 cặp primer đặc hiệu cho cụm gene lov và điều kiện chu trình nhiệt PCR là tài liệu tham khảo chuẩn cho các nghiên cứu sinh học phân tử nấm lớn.

---

Câu hỏi thường gặp

1. Giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) của phương pháp UPLC-MS/MS trong nghiên cứu này là bao nhiêu?

Theo kết quả thẩm định lặp lại 10 lần ($n=10$) dựa trên độ lệch chuẩn $SD = 0,18$ và thỏa mãn tiêu chuẩn AOAC với hệ số $R = 6,33$ ($4 < R < 10$), phương pháp UPLC-MS/MS có giới hạn phát hiện $LOD = 0,55\ \mu\text{g/L}$ và giới hạn định lượng $LOQ = 1,84\ \mu\text{g/L}$ (tương đương 1,84 ng/g mẫu).

2. Mẫu nấm bào ngư nào có hàm lượng lovastatin cao nhất ở thể lưỡng bội và thể đơn bội?

Ở thể lưỡng bội ($2n$), mẫu nấm Trắng Vĩnh Long (TVL6a) có hàm lượng lovastatin cao nhất, đạt 6,9534 ng/g. Ở thể đơn bội ($n$), mẫu Trắng Sài Gòn (TSG5-11) đạt hàm lượng cao nhất với 1,5724 ng/g, tiếp theo là mẫu Trắng Vĩnh Long (TVL6-24) đạt 1,0249 ng/g.

3. Thông số phân mảnh ion (MRM) của lovastatin trên hệ thống khối phổ Xevo TQ-S micro được thiết lập như thế nào?

Hệ thống sử dụng nguồn ion hóa dương $ESI^+$, điện thế mao quản 3,00 kV, điện thế Cone 15,00 V. Quá trình quét MRM theo dõi hai bước chuyển khối: ion $405,50 \rightarrow 199,20$ (mảnh ion con có cường độ lớn nhất, dùng để định lượng) và ion $405,50 \rightarrow 285,40$ (mảnh ion con có cường độ thấp hơn, dùng để định tính).

4. Quy trình tách chiết DNA nhanh từ sinh khối nấm khô được tiến hành ra sao?

Quy trình sử dụng 30–100 mg mẫu nấm khô nghiền nhỏ, bổ sung 100 µL dung dịch đệm TE, ủ 12 giờ ở nhiệt độ phòng. Hỗn hợp được xử lý phá vỡ tế bào bằng lò vi sóng trong 1 phút 30 giây, sốc nhiệt lạnh ở -20°C trong 10 phút, sau đó ly tâm 10.000 vòng/phút trong 2 phút để thu dịch nổi chứa DNA tổng số.

5. Tại sao có mẫu phát hiện nhiều gene sinh tổng hợp nhưng hàm lượng lovastatin lại dưới ngưỡng định lượng?

Điển hình là mẫu đơn bội DVL3-4 phát hiện tới 11/12 gene trong hệ gene sinh tổng hợp lovastatin nhưng hàm lượng hóa học lại dưới ngưỡng định lượng ($LOQ < 1,84\ \text{ng/g}$). Điều này là do phản ứng PCR trên DNA bộ gene chỉ phản ánh sự hiện diện về mặt cấu trúc di truyền, trong khi việc tạo ra sản phẩm thứ cấp lovastatin còn phụ thuộc vào mức độ biểu hiện (phiên mã, dịch mã), sự điều hòa của các yếu tố môi trường nuôi cấy và sự tương tác giữa các enzyme trong chu trình chuyển hóa.

---

Kết luận

Khóa luận tốt nghiệp của sinh viên Trần Yến Vi đã hoàn thành đầy đủ các mục tiêu đề ra khi ứng dụng thành công kỹ thuật sắc ký lỏng ghép khối phổ siêu hiệu năng UPLC-MS/MS và kỹ thuật PCR để khảo sát lovastatin cùng hệ gene sinh tổng hợp tương ứng trên 10 chủng nấm bào ngư (Pleurotus spp.). Kết quả đã định lượng được hàm lượng lovastatin trong các dòng TVL6a ($2n$, đạt 6,9534 ng/g), TSG5-11 ($n$, đạt 1,5724 ng/g) và TVL6-24 ($n$, đạt 1,0249 ng/g), đồng thời làm rõ sự phân bố của 10 gene chức năng trong cụm gene lov. Đây là cơ sở khoa học và dữ liệu thực nghiệm có giá trị cao, mở ra triển vọng tuyển chọn, lai tạo và phát triển các giống nấm ăn giàu hoạt tính sinh học phục vụ hỗ trợ sức khỏe tim mạch.

Trích đoạn nội dung tài liệu

Đặt vấn đề Nắm được sử dụng rộng rãi từ thời cô đại, không chỉ làm thực phẩm hoặc nguyên liệu tạo hương vị thực phẩm bởi nam có độ dai, giòn riêng biệt của mỗi loài, kích thích vị giác nên giúp người ăn ngon miệng hơn, mà nam còn cho mục đích y học hoặc chức năng, vì hương vị và kết cau đặc biệt của chúng. Nam tươi chứa khoảng 85 - 90 % độ am, 3 % protein, 4 % carbohydrate, 0,3 - 0, 4% chất béo và 1 % khoáng chất và vitamin cũng như một số đặc tính chữa bệnh như giảm mức cholesterol trong máu, chống ung thư và chống oxy hóa. Nhiều nghiên cứu cho thấy rằng trong nấm Pleurofus có chứa hợp chất statin, đặc biệt là lovastatin - một loại thuốc được phép lưu hành trên thị trường giúp làm giảm cholesterol trong máu và giảm nguy cơ mắc bệnh tim mạch, nhưng qua quá trình tiến hóa và yếu tố ảnh hưởng từ môi trường thì hợp chất này dần dan mắt đi. Điều này làm chúng ta nghi ngờ về việc khi sử dụng nam Pleurotus spp.

thì lượng lovastatin có tồn tại trong nam ăn hay không đó là ân số. Việc tiến hành nghiên cứu này sẽ khảo sát hệ gene sinh tổng hợp lovastatin và hàm lượng lovastatin của một số chủng nắm bào ngư (Pleurofus spp.) có tồn tại trong nam hay không thông qua các phương pháp sắc khí lỏng ghép khối phổ siêu hiệu năng (UPLC-MS/MS) và kỹ thuật PCR để xác định hệ gene sinh tổng hợp lovastatin và hàm lượng lovastatin có trong nam một số chủng nam bào ngư Pleurotus spp. Mục tiêu đề tài Xác định hàm lượng lovastatin và khảo sát tìm ra nguồn vật liệu có chứa hệ gene sinh tong hop lovastatin trong một số chủng nắm bào ngư (P/eurotus spp. Nội dung thực hiện Nội dung 1: Khảo sát hàm lượng lovastatin trong một số chủng nắm bào ngư bằng phương pháp sắc ký long ghép khối phổ siêu hiệu năng UPLC-MS/MS.

Nội dung 2: Kiểm tra hệ gene sinh tổng hợp lovastatin trong một số chủng nam bào ngư bằng phương pháp PCR. Nội dung 3: So sánh tương quan giữa hàm lượng của lovastatin và hệ gene sinh tổng hợp lovastatin trong một số giống nắm bào ngư. TONG QUAN TÀI LIEU 2. Giới thiệu chung 2.

Giới thiệu về nắm Pleurotus spp. Các loài Pleurotus là loại nam thiết yếu về mặt thương mại và được trồng rộng rãi trên khắp thé giới. Chỉ riêng việc sản xuất nam Pleurotus đã chiếm khoảng 25% tổng số nam được trồng trên toàn cầu. Ở Mỹ và Châu Au, loài Pleurotus được coi là loại nam ăn có hương vị ngon và độ giòn ngọt.

Trong khi ở Hàn Quốc, việc trồng chúng mang lại lợi nhuận kinh tế và là một trong những loài được tiêu thụ nhiều. Các loài Pleurotus chủ yêu được tìm thay ở các khu rừng nhiệt đới và ôn đới và thường mọc trên các cành cây đồ, gốc cây chết mục nát và các khúc gỗ âm ướt. Nam Pleurotus được coi là tốt cho sức khỏe vì giàu protein, chất xơ, vitamin và khoáng chất. Nam Pleurotus được tiêu thụ như một loại thực phẩm chức năng vì chúng có hương vị và mùi thom hap dan, giá trị dinh dưỡng và dược liệu.

Loài Pleurotus là loại nam ăn được có giá trị thương mại quan trọng và được trồng trên toàn cầu. Nam Pleurotus có hình vỏ sò hoặc vỏ sò với nhiều màu sắc khác nhau như trắng, kem, xám, vàng, hồng hoặc nâu nhạt. Nam Pleurotus còn được gọi là nam bao ngư hay còn được gọi là nâm sò. Phân loại : Giới (Regnum) : Nấm (Fungi) Ngành (Phylum) : Nắm đảm (Basidiomycota) Lớp (Class) : Nam tản (Agaricomycetes) Bộ (Ordo) : Nam tan (Agaricales) Ho (Familia) : Nam sò (Pleurotaceae) Chi (Genus) : Nam sò (Pleurotus) Có hơn 30 loài nam thuộc chi Pleurotus, da số chúng thuộc loại nam ăn và được trồng thương mại.

Trong đó, nam Pleurotus là loại nam ăn được trồng nhiều chiếm 25% tổng sản lượng nắm trồng trên thế giới. Với đặc điểm dễ trồng, phù hợp với điều kiện sống môi trường và khí hậu nên đây là loại nam có nhiều hình dang khác nhau do quá trình lai tạo (Phạm Thành Hồ, 2022). Nghiên cứu sâu rộng về các thuộc tính dinh dưỡng và dược liệu của loài Pleurofus đã được nhiều nhà nghiên cứu nghiên. Sự hiện diện của mevinolin, axIt nicotinic và hàm lượng hợp chất B-glucans cao hon 6 Jodi Pleurotus đã được chứng minh thành công là thực phẩm bé sung cho bệnh nhân tim nhằm giảm mức cholesterol trong máu.

Đặc điểm hình thái và sinh học Nam Pleurotus spp. có dạng hình phiếu lệch, mũ nắm xòe, chóp nắm lõm nhẹ, dưới mũ nam có lớp tơ mỏng. Nam Pleurotus mọc chủ yêu thành cụm it mọc đơn lẻ. Quả thé khá to đường kính trung bình từ 2 — 4 cm trơn bóng, mau từ xám đến trắng xám, thịt nam màu trắng dày, cuống mọc xiên màu trắng hoặc gan trang, dày từ 2 — 6 cm.

Đến giai đoạn trưởng thành nam Pleurotus spp. sẽ phát tán bao tử, nhờ gió bao tử bay đi khắp mọi nơi, khi gặp điều kiện thích hợp sẽ hình thành sợi nấm và phát triển thành quả thé nam. Hình dạng Pleurotus cystidiosus. ( Hussain, 2015) (A)(B) Basidiomata trên Morus alba, (C) Pleurocystidia, (D) Thân quả, (E) basidiospores, (F) Basidia, (G) Heilocystidia,(H) sợi nam có gai.

Trong tu nhién, nam P. cystidiosus thường được mọc trên các than cây khô, trong môi trường nuôi trồng nông nghiệp nam P. cystidiosus được trồng trên rơm, ba mía, mun cưa cao su,. Thường là trên những cây đã chết, hoặc trên những khúc gỗ đã dé.

Các chất nền khác nhau có chứa lignin va cellulose có thé được sử dụng để canh tác khi trồng, chang hạn như dam gỗ, lúa mì ngô, rơm ra, thân cây bông, vỏ phê thai và các chat thải nông nghiệp, tuy nhiên nắm P. cystidiosus sẽ không trên gỗ lá kim. cystidiosus không thé hình thành qua thé ở nhiệt độ thấp hơn 16 °C và cao hon 32°C. Nhiệt độ tối ưu cho sự hình thành quả thể và năng suất đã được tìm thấy ở 26 °C.

Ở nhiệt độ này, qua thé xuất hiện sau 60 đến 70 ngày ké từ khi sinh sản va nam P. cystidiosus có thời gian bao quan lâu nhất trong số tat cả các loài Pleurotus ( Zervakis và ctv, 1992) ) ms, °§Lo] Lo} Meiosis Spores n n ` Karyogamy \ © SS Germination 47 Gy 3n F >> ~~ Hyphal anastomosis n+n Ry 2S) v“ Hình 2. Chu trình sinh trưởng của nam Pleurotus spp. (Anupam Barh, 2019) Nam Pleurotus là một loại homobasidiomycete dị thé.

Việc giao phối có kiểm soát bởi sự di truyền tứ cực hai yêu tố. Vòng đời của nam được bat đầu bang sự nảy mam của bao tử đảm đơn bội. Các bào tử đảm nảy mam sẽ phát triển thành sợi nam đơn bội. Hai sợi nắm đơn bội tương thích hợp nhất (anastomosis) và tạo thành sợi nắm hai nhân có hai nhân không hợp nhất.

Karyogamy, tức là sự hợp nhất của hai nhân đơn bội, xảy ra ở basidium trong thể quả (basidiocarp). Điều này tạo ra bốn bào tử đảm đơn bội, chúng lại bước vào cùng một chu kỳ. Giá trị dinh dưỡng Nắm được đánh giá cao về thành phần gần giống và đặc tính dinh dưỡng và được coi là có 28,6 — 15,4 % protein, 84,1-61,3 % carbohydrate và 3 — 33,3 % chất xơ. Hàm lượng protein của chúng cao hon so với rau, nhưng it hon so với thịt và sữa.

Các loài Pleurotus là nguồn giàu protein và khoáng chất (Na, Ca, P, Fe và K) và vitamin (Phức hợp Vitamin C và B). Ngoài ra, vị umami đậm đà trong nam Pleurotus có thé làm tăng chat lượng thực phẩm. Tỷ lệ đáng ké của carbohydrate bao gồm chat xơ, rất giàu chất xơ (6 ~ 28 %), đặc biệt là ở cuống mà con người không thé dé dang tiêu hóa và hoạt động cơ bản như chất xơ. Chúng chứa tất cả các axit amin thiết yếu, hạn chế các axit amin chứa lưu huỳnh, cysteine va methionine.

Mặc dù chúng cũng chứa các lipid chính, bao gồm axit béo tự do, mono, di và triglycerid, este sterol và phospholipid. Nam Pleurotus được coi là thực phẩm chức năng vi giá trị thực phẩm cao hơn, chủ yếu là do hàm lượng protein và chất béo, carbohydrate, khoáng chất và vitamin cao. Các thành phan hoạt động được tìm thay trong nắm Pleurotus là polysaccharides, chất xo, oligosaccharides, triterpenoid, peptide, protein, alcohol và phenol, và các nguyên tố khoáng như kẽm, đồng, iot, selen và sắt, vitamin va axit amin. Những chat này đã được chứng minh là có tác dụng tăng cường hệ thống miễn dịch, có đặc tính chống ung thư và hoạt động như các đặc tính chống tăng cholesterol máu và bảo vệ gan.

Loài Pleurotus là thực phẩm có lợi cho những người bị tăng huyết áp và các bệnh tim mạch do hàm lượng kali va natri cao. Dược tính của nắm Pleurotus spp. Một số nhóm nghiên cứu đã mô tả tác dụng dược lý của cả quả thé và chiết xuất sợi nam của nam Pleurotus spp. Việc xem xét hiện tại đề xuất rằng không chi nắm basidiomata cũng như sợi nắm của chúng nên được khám phá như một nguồn tài nguyên tuyệt vời có thé tái tạo va dé tiếp cận dé phát triển thực phẩm chức năng, dinh dưỡng và thậm chí ca dược phẩm có tác dụng chống oxy hóa, kháng khuẩn, chống viêm, chống ung thư và điều hòa miễn dịch.

Vào năm 2018, Pandey đã công bố kết quả nghiên cứu khả năng sinh tổng hợp lovastatin của các nam đảm lớn ở An Độ. Kết quả của nghiên cứu ghi nhận trong 40 loại nấm được lựa chọn thì các chủng P/eurofus (bao gồm P. cystidiousus) đều tao lovastatin. Nhiều nghiên cứu đã chứng minh rang các hợp chat chống oxy hóa đóng vai trò quan trọng trong việc phòng chống ung thư (Hou, 2003).

Trong nghiên cứu này, ?. cystidiosus phân đoạn A4-2 và A4-3 đã thé hiện các hoạt động chống oxy hóa và chống tăng sinh cao.cystidiosus có tiềm năng như một tác nhân chống ung thư (Menikpurage va ctv, 2012). Khai niém: Statin là một nhóm dược chất rất thành công trong việc lam giảm mức cholesterol trong máu, giảm nguy cơ bị sức khỏe tấn công hoặc đột quy. Nhóm statin bao gôm: lovastatin, mevastatin, atorvastatin, pravastatin, rosuvastatin, fluvastatin va simvastatin.

Trong những năm gần đây, statin cũng đã được báo cáo là có các hoạt tính sinh học khác và nhiều công dụng điều trị tiềm năng. Lovastatin là một loại thuốc thuộc nhóm statin được sử dụng để làm hạ cholesterol, điều trị rối loạn lipid máu, giúp làm giảm nguy cơ nhồi máu cơ tim và đột quy, bệnh Alzheimer và các bệnh về xương. Lovastatin là hoạt chất có trong các sản phẩm men gạo đỏ, được dùng làm chất bổ sung vào chế độ ăn uống. Trong các sản pham như vay, lovastatin chủ yếu được gọi là monakolin K và kèm thêm 13 monacolin tự nhiên có trong men gạo đỏ.