Khảo Sát Thành Phần Hóa Học Từ Cao Chiết n-Hexane Của Lá Vẹt Trụ (Bruguiera Cylindrica)

Khảo sát thành phần hóa học từ cao chiết n-hexane của lá vẹt trụ Bruguiera cylindrica, cung cấp thông tin quý giá cho nghiên cứu dược liệu.

• Tác giả: Phạm Anh Thư
• Người hướng dẫn: ThS. Nguyễn Thị Lệ Thủy
• Trường học: Trường Đại Học Mở Thành Phố Hồ Chí Minh
• Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học
• Đề tài: Khảo Sát Thành Phần Hóa Học Từ Cao Chiết n-Hexane Của Lá Vẹt Trụ (Bruguiera Cylindrica)
• Loại tài liệu: Khóa Luận Tốt Nghiệp
• Năm xuất bản: 2020
• Địa điểm: Thành Phố Hồ Chí Minh

Mục lục chi tiết

• LỜI CẢM ƠN
• 1. PHẦN I: TỔNG QUAN
• 1.1. Mô tả tổng quan về chi Bruguiera
• 1.1.1. Cây Vẹt đen (Bruguiera sexangul)
• 1.1.2. Cây Vẹt dù (Bruguiera gymnorrhiza)
• 1.1.3. Cây Vẹt trụ (Bruguiera cylindrica)
• 1.1.4. Cây Vẹt tách (Bruguiera parviflora)
• 1.2. Các nghiên cứu thành phần hóa học trên chi Bruguiera
• 1.2.1. Vỏ cây Vẹt đen (Bruguiera sexangula)
• 1.2.2. Thân cây Vẹt đen (Bruguiera sexangula)
• 1.2.3. Từ rễ cây Vẹt dù (Bruguiera gymnorrhiza)
• 1.2.4. Từ thân và lá cây Vẹt dù (Bruguiera gymnorrhiza)
• 1.2.5. Từ hoa của cây Vẹt dù (Bruguiera gymnorrhiza)
• 1.2.6. Từ quả Vẹt trụ (Bruguiera cylindrica)
• 1.2.7. Từ rễ và lá Vẹt trụ (Bruguiera cylindrica)
• 1.3. Các nghiên cứu về hoạt tính sinh học của chi Bruguiera
• 2. PHẦN II: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 2.1. Vật liệu và phương tiện nghiên cứu
• 2.2. Phương pháp nghiên cứu
• 2.3. Quy trình điều chế cao và cô lập chất
• 3. PHẦN III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
• 3.1. Biện luận cấu trúc hợp chất BC01
• 3.2. Biện luận cấu trúc hợp chất BC04
• 3.3. Biện luận cấu trúc hợp chất BC02
• 3.4. Biện luận cấu trúc hợp chất BC05
• 3.5. Biện luận cấu trúc hợp chất BC03
• 4. PHẦN VI: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng quan về khảo sát thành phần hóa học lá Vẹt trụ

Khảo sát thành phần hóa học từ cao chiết n-hexane của lá Vẹt trụ (Bruguiera cylindrica) là một nghiên cứu quan trọng nhằm xác định các hợp chất có hoạt tính sinh học. Cây Vẹt trụ không chỉ có giá trị sinh học mà còn có tiềm năng ứng dụng trong y học. Việc nghiên cứu này giúp hiểu rõ hơn về các thành phần hóa học và ứng dụng của chúng trong thực tiễn.

1.1. Giới thiệu về cây Vẹt trụ Bruguiera cylindrica

Cây Vẹt trụ (Bruguiera cylindrica) là một trong những loài thực vật quan trọng trong hệ sinh thái rừng ngập mặn. Nó có khả năng sinh trưởng tốt trong môi trường nước mặn và đóng vai trò quan trọng trong việc bảo vệ bờ biển.

1.2. Tầm quan trọng của việc khảo sát thành phần hóa học

Khảo sát thành phần hóa học giúp xác định các hợp chất có giá trị trong lá Vẹt trụ, từ đó có thể phát triển các sản phẩm dược phẩm và thực phẩm chức năng. Điều này không chỉ mang lại lợi ích kinh tế mà còn góp phần bảo vệ sức khỏe cộng đồng.

II. Thách thức trong nghiên cứu thành phần hóa học từ lá Vẹt trụ

Nghiên cứu thành phần hóa học từ cao chiết n-hexane của lá Vẹt trụ gặp nhiều thách thức. Các yếu tố như điều kiện môi trường, phương pháp chiết xuất và phân tích có thể ảnh hưởng đến kết quả nghiên cứu. Việc lựa chọn phương pháp phù hợp là rất quan trọng để đảm bảo độ chính xác và tin cậy của dữ liệu.

2.1. Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình chiết xuất

Nhiệt độ, thời gian chiết xuất và tỷ lệ dung môi là những yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến hiệu suất chiết xuất. Việc tối ưu hóa các điều kiện này sẽ giúp thu được cao chiết có chất lượng tốt nhất.

2.2. Khó khăn trong việc phân tích thành phần hóa học

Phân tích thành phần hóa học đòi hỏi các thiết bị hiện đại và kỹ thuật chuyên môn cao. Việc xác định cấu trúc của các hợp chất cũng có thể gặp khó khăn do sự tương đồng giữa các hợp chất trong tự nhiên.

III. Phương pháp chiết xuất và phân tích thành phần hóa học

Phương pháp chiết xuất n-hexane được sử dụng để thu nhận các hợp chất từ lá Vẹt trụ. Sau khi chiết xuất, các hợp chất sẽ được phân tích bằng các kỹ thuật hiện đại như sắc ký lỏng cao áp (HPLC) và phổ khối (MS). Những phương pháp này giúp xác định chính xác các thành phần hóa học có trong cao chiết.

3.1. Quy trình chiết xuất n hexane

Quy trình chiết xuất n-hexane bao gồm các bước như chuẩn bị mẫu, chiết xuất và cô đặc. Mỗi bước cần được thực hiện cẩn thận để đảm bảo thu được cao chiết có chất lượng cao.

3.2. Phân tích thành phần hóa học bằng HPLC

Sắc ký lỏng cao áp (HPLC) là một trong những phương pháp hiệu quả để phân tích các hợp chất trong cao chiết. Phương pháp này cho phép xác định và định lượng các hợp chất một cách chính xác.

IV. Kết quả nghiên cứu thành phần hóa học từ lá Vẹt trụ

Kết quả nghiên cứu cho thấy cao chiết n-hexane từ lá Vẹt trụ chứa nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học. Các hợp chất này có thể được ứng dụng trong y học và công nghiệp thực phẩm. Việc xác định các hợp chất này không chỉ giúp hiểu rõ hơn về cây Vẹt trụ mà còn mở ra hướng nghiên cứu mới cho các sản phẩm từ thiên nhiên.

4.1. Các hợp chất chính được phát hiện

Nghiên cứu đã phát hiện nhiều hợp chất như triterpenoid, flavonoid và phenolic trong cao chiết n-hexane. Những hợp chất này có khả năng kháng viêm và chống oxy hóa cao.

4.2. Tiềm năng ứng dụng trong y học

Các hợp chất từ lá Vẹt trụ có thể được phát triển thành các sản phẩm dược phẩm mới. Chúng có thể hỗ trợ điều trị nhiều bệnh lý, từ viêm nhiễm đến ung thư.

V. Kết luận và triển vọng nghiên cứu trong tương lai

Khảo sát thành phần hóa học từ cao chiết n-hexane của lá Vẹt trụ đã chỉ ra tiềm năng lớn của cây này trong nghiên cứu dược liệu. Các kết quả đạt được mở ra hướng đi mới cho việc phát triển các sản phẩm từ thiên nhiên. Nghiên cứu trong tương lai cần tiếp tục khai thác và tối ưu hóa các hợp chất có giá trị từ cây Vẹt trụ.

5.1. Tóm tắt kết quả nghiên cứu

Nghiên cứu đã xác định được nhiều hợp chất có hoạt tính sinh học từ lá Vẹt trụ, cho thấy tiềm năng ứng dụng trong y học và công nghiệp.

5.2. Đề xuất hướng nghiên cứu tiếp theo

Cần tiếp tục nghiên cứu sâu hơn về các hợp chất này, bao gồm việc thử nghiệm lâm sàng và phát triển sản phẩm từ thiên nhiên nhằm nâng cao giá trị kinh tế và sức khỏe cộng đồng.

Nội dung chính

Bối cảnh và vấn đề nghiên cứu

Việt Nam nằm trong khu vực khí hậu nhiệt đới gió mùa với độ ẩm cao và diện tích rừng ngập mặn rộng lớn, tạo nên hệ thực vật phong phú, có truyền thống lâu đời trong việc ứng dụng cây cỏ làm thuốc chữa bệnh. Trong đó, Khu dự trữ sinh quyển Cần Giờ (Rừng Sác) tại Thành phố Hồ Chí Minh, được UNESCO công nhận là Khu dự trữ sinh quyển thế giới vào ngày 21/01/2000, là một quần thể sinh thái ngập mặn tiêu biểu với 220 loài thực vật bậc cao thuộc 155 chi và 60 họ. Trong hệ sinh thái này, họ Đước (Rhizophoraceae) chiếm 13 loài và là nhóm thực vật đóng vai trò quan trọng về mặt sinh thái học lẫn giá trị hợp chất tự nhiên.

Các nghiên cứu thực vật ngập mặn đã chứng minh sự hiện diện của nhiều chất chuyển hóa thứ cấp có hoạt tính sinh học giá trị. Đối với loài Vẹt trụ (Bruguiera cylindrica), quả già của loài này chứa hàm lượng carbohydrate cao và có hoạt tính kháng oxy hóa mạnh với giá trị IC50 đạt 13,47 ppm (so với quả non là 81,60 ppm). Bên cạnh đó, cao chiết ethanol của cây thể hiện khả năng ức chế vi trùng gây bệnh sốt rét với IC50 đạt 173,75 µg/ml; hợp chất 3-feruloyltaraxerol cô lập từ phân đoạn cao n-hexane cho thấy độc tính tế bào đối với dòng tế bào ung thư phổi. Xuất phát từ cơ sở đó, đề tài khóa luận tốt nghiệp ngành Công nghệ sinh học do sinh viên Phạm Anh Thư thực hiện tập trung vào việc khai thác thành phần hóa thực vật của lá cây Vẹt trụ tại Cần Giờ.

Mục tiêu và nhiệm vụ nghiên cứu của đề tài được xác định cụ thể:

1. Chiết xuất và điều chế các phân đoạn cao chiết từ lá cây Vẹt trụ (Bruguiera cylindrica).
2. Phân lập các hợp chất hóa học tinh khiết từ phân đoạn cao chiết n-hexane bằng các kỹ thuật sắc ký thích hợp.
3. Xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất cô lập được thông qua các phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) và đối chiếu với các tài liệu chuẩn.
4. Tìm kiếm các hợp chất có tiềm năng hoạt tính sinh học và giá trị kinh tế nhằm định hướng ứng dụng trong nghiên cứu phát triển dược liệu.

Đối tượng và phạm vi nghiên cứu:

• Đối tượng nghiên cứu: Lá trưởng thành màu xanh, có chiều dài khoảng 10–17 cm của loài Vẹt trụ (Bruguiera cylindrica), thuộc họ Đước (Rhizophoraceae). Mẫu thực vật do Tiến sĩ Phạm Văn Ngọt (Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh) định danh.
• Phạm vi không gian: Nguyên liệu thực vật được thu hái tại rừng ngập mặn huyện Cần Giờ, Thành phố Hồ Chí Minh. Các thực nghiệm điều chế cao và phân lập chất được tiến hành tại Phòng thí nghiệm Sinh hóa, Khoa Công nghệ Sinh học, Trường Đại học Mở Thành phố Hồ Chí Minh (địa chỉ: 68 Lê Thị Trung, phường Phú Lợi, thành phố Thủ Dầu Một, tỉnh Bình Dương). Dữ liệu phổ cộng hưởng từ hạt nhân được đo đạc tại Viện Hóa học thuộc Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
• Phạm vi thời gian: Khóa luận hoàn thành và bảo vệ vào năm 2020.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp

Khung lý thuyết của nghiên cứu dựa trên cơ sở phân loại học thực vật học chi Vẹt (Bruguiera) và hóa học các hợp chất thiên nhiên (phytochemistry). Về mặt phân loại học, chi Vẹt tại Việt Nam theo giáo trình thực vật học của Phạm Hoàng Hộ gồm có bốn loài: Vẹt trụ (Bruguiera cylindrica), Vẹt dù (Bruguiera gymnorrhiza), Vẹt tách (Bruguiera parviflora) và Vẹt đen (Bruguiera sexangula). Về mặt hóa học thực vật, các nghiên cứu trên chi này cho thấy sự tích lũy phong phú của các nhóm hợp chất thứ cấp như triterpenoid (khung lupane, oleanane, dammarane, lanostane), diterpenoid (khung kaurane, beyerane, pimarene), alkaloid, lignan, flavonoid, dẫn xuất phenolic và các hợp chất chứa lưu huỳnh mạch vòng (cyclic disulfides).

Phương pháp nghiên cứu thực nghiệm được triển khai tuần tự theo quy trình hóa thực vật chuẩn:

• Phương pháp chiết xuất phân đoạn rắn – lỏng: Bột lá Vẹt trụ khô được ngâm dầm hồi lưu tại nhiệt độ phòng với dung môi ethanol 90% theo tỷ lệ 1:12 (g/ml), thực hiện lặp lại 15 lần (chu kỳ 24 giờ/lần). Dịch chiết gom lại được thu hồi dung môi dưới áp suất giảm bằng máy cô quay chân không để thu cao tổng ethanol. Tiếp đó, cao tổng ethanol được chiết phân bố lỏng – rắn với các dung môi có độ phân cực tăng dần: n-hexane, ethyl acetate và methanol.
• Phương pháp sắc ký lớp mỏng (TLC): Thực hiện trên bản mỏng tráng sẵn silica gel pha thường DC-Alufolien 60 F254 và pha đảo RP18 F254s (Merck). Các vết chất được phát hiện dưới đèn tử ngoại ở bước sóng 254 nm và 365 nm, hoặc hiện màu bằng thuốc thử dung dịch H2SO4 10% kết hợp hơ nóng trên bếp điện.
• Phương pháp sắc ký cột (CC): Sử dụng cột thủy tinh với chất nhồi pha thường là silica gel (cỡ hạt 0,040–0,063 mm, Merck) và rây phân tử Sephadex LH-20 để phân tách, tinh chế các phân đoạn.
• Phương pháp xác định cấu trúc hóa học: Sử dụng phổ cộng hưởng từ hạt nhân một chiều gồm phổ 1H-NMR (tần số 500 MHz) và phổ 13C-NMR (tần số 125 MHz) đo trên máy Bruker AM500 FT-NMR Spectrometer / Bruker Avance 500III. Dung môi đo phổ là CDCl3 và DMSO-d6. Cấu trúc chất được giải đoán thông qua độ dịch chuyển hóa học (δ, ppm), hình dạng mũi phổ, hằng số ghép spin (J, Hz) và đối chiếu trực tiếp với các công bố khoa học chuyên ngành.

Nguồn dữ liệu của đề tài bao gồm dữ liệu thực nghiệm sơ chế mẫu thực vật, khối lượng cao chiết, các phân đoạn sắc ký và hệ phổ NMR thực đo của năm hợp chất tinh khiết, kết hợp cơ sở dữ liệu đối chiếu từ các bài báo khoa học quốc tế về chi thực vật Bruguiera.

Nội dung chính theo từng chương

PHẦN I: TỔNG QUAN

Chương tổng quan hệ thống hóa các đặc điểm thực vật học, lịch sử nghiên cứu hóa học và hoạt tính sinh học của chi Bruguiera:

• Đặc điểm hình thái học: Mô tả chi tiết 4 loài Vẹt tại Việt Nam. Loài Vẹt trụ (Bruguiera cylindrica) là cây thân gỗ cao khoảng 20 m, có nhiều rễ đầu gối và rễ nhỏ ở gốc, vỏ màu xám. Lá hình elip, nhọn, không lông, kích thước 5–17 cm x 2,5–8 cm; cuống lá dài 1–4,5 cm. Cụm hoa gồm 3 hoa, hoa màu kem đến xanh; quả dài 10–12 cm; trụ dưới lá mầm dài 8–15 cm, rộng 5 mm, thường cong và không có gân.
• Nghiên cứu thành phần hóa học: Tổng hợp các công bố khoa học từ năm 1969 đến 2018 trên các bộ phận của chi Vẹt. Tiêu biểu gồm alkaloid mới brugine từ vỏ cây Vẹt đen (Loder và cộng sự, 1969); các diterpene và cyclic disulfide như bruguierol, isobrugierol từ thân cây Vẹt đen (Bao Shuyun và cộng sự, 2005); các ent-kaurane diterpenoid từ rễ và thân Vẹt dù; các dẫn xuất triterpenoid ester pentacyclic từ quả Vẹt trụ như 3α-(E)-feruloyltaraxerol, 3α-(E)-coumaroyllupeol, 3β-lupeol (Surat Laphookhieo và cộng sự, 2004, 2005); và các hợp chất taraxerol, β-sitosterol, eicosanol từ lá Vẹt trụ (Nithyamol và cộng sự, 2018).
• Nghiên cứu hoạt tính sinh học: Đề cập tác dụng dược lý dân gian và thực nghiệm như hoạt tính kháng độc tế bào ung thư (dòng NCI-H460, nguyên bào sợi chuột L-929, bệnh bạch cầu dòng tủy K562), hoạt tính ức chế chọn lọc COX-2 của bruguierin A, khả năng kháng ký sinh trùng sốt rét của 3β-(Z)-caffeoyllupeol (EC50 = 8,6 µM), hoạt tính ức chế enzyme protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B) điều trị đái tháo đường và béo phì của gymnorrhizol và bruguiesulfurol, tác dụng ức chế vi khuẩn Vibrio alcaligenes, Vibrio alginolyticus, cùng khả năng ức chế sinh tổng hợp cholesterol hạ lipid máu.

PHẦN II: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Chương này mô tả chi tiết nguồn nguyên liệu, trang thiết bị, hóa chất và toàn bộ quy trình thực nghiệm:

• Chuẩn bị nguyên liệu: 8 kg lá Vẹt trụ khô xay nhuyễn được ngâm dầm với ethanol 90% (tỷ lệ 1:12 g/ml, 15 lần x 24 giờ) ở nhiệt độ phòng. Sau khi thu hồi dung môi dưới áp suất thấp, thu được 900 g cao tổng ethanol.
• Điều chế cao phân đoạn: Chiết phân bố cao ethanol thu được 100 g cao n-hexane, 300 g cao ethyl acetate và 380 g cao methanol. Phân đoạn cao n-hexane (100 g) được chọn để tiến hành phân lập hợp chất.
• Quy trình cô lập chất: Sắc ký cột silica gel (cột kích thước 120 x 6 cm) với hệ dung môi n-hexane : ethyl acetate (H:EA từ 98:2 đến 0:100 v/v) và ethyl acetate : methanol (EA:Me từ 90:10 đến 0:100 v/v) chia cao n-hexane thành 5 phân đoạn lớn ký hiệu từ H1 đến H5.
  • Phân đoạn H2 qua cột silica gel hệ H:EA (90:10 đến 0:100 v/v) và tinh chế qua cột Sephadex LH-20 thu được hợp chất BC03 (10,2 mg).
  • Phân đoạn H3 (13,2 g) qua cột silica gel hệ H:EA (80:20 đến 0:100 v/v) và EA:Me (90:10 đến 0:100 v/v) thu được 6 phân đoạn phụ (H31 đến H36).
  • Từ phân đoạn H31, qua sắc ký cột hệ H:EA (95:5 đến 0:100 v/v) và cột Sephadex LH-20 thu được hợp chất BC01 (7,5 mg).
  • Từ phân đoạn H34, qua sắc ký cột hệ H:EA (60:40 đến 0:100 v/v) và cột Sephadex LH-20 thu được hợp chất BC02 (8,2 mg).
  • Phân đoạn H33 (10,5 g) qua cột silica gel thu 6 phân đoạn nhỏ (H33.1 đến H33.6); trong đó phân đoạn H33.1 qua cột hệ H:EA (90:10 đến 0:100 v/v) và Sephadex LH-20 cho hợp chất BC04 (6,1 mg); phân đoạn H33.2 qua cột hệ H:EA (80:20 đến 0:100 v/v) và Sephadex LH-20 cho hợp chất BC05 (5,8 mg).

PHẦN III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN

Chương này trình bày chi tiết kết quả biện luận cấu trúc hóa học của năm hợp chất cô lập được:

• Hợp chất BC01 (7,5 mg): Chất rắn vô định hình màu trắng, tan trong CDCl3. Phổ 1H-NMR xuất hiện 7 tín hiệu methyl mũi đơn ở vùng trường cao (δH 0,68–1,68 ppm), 1 cặp tín hiệu olefin đặc trưng của liên kết đôi ngoài vòng tại δH 4,57 ppm và 4,69 ppm đặc trưng cho khung sườn lupane. Tín hiệu proton gắn carbon mang nhóm hydroxy tại δH 3,18 ppm (1H, dd, J = 11,5 Hz, H-3) chứng minh nhóm 3-OH có cấu hình β. Phổ 13C-NMR hiển thị 30 tín hiệu carbon, gồm liên kết đôi ngoài vòng tại δC 109,3 ppm (C-29) và δC 150,9 ppm (C-20), carbon mang nhóm hydroxy ở δC 79,0 ppm (C-3). Hợp chất được xác định là Lupeol.
• Hợp chất BC04 (6,1 mg): Chất dạng dầu không màu, tan trong CDCl3. Phổ 1H-NMR cũng có 7 tín hiệu methyl đơn và cặp olefin ngoại vòng tại δH 4,57 và 4,69 ppm của khung lupane. Ngoài ra, phổ có 2 tín hiệu proton vòng thơm ghép ortho tại δH 7,43 ppm (2H, d, J = 8,5 Hz) và δH 6,85 ppm (2H, d, J = 8,5 Hz); 2 proton olefin ghép trans tại δH 6,27 ppm và δH 7,61 ppm với hằng số ghép lớn (J = 15,5 Hz), đặc trưng cho nhóm trans-coumaroyl. Tín hiệu methine oxy hóa xuất hiện dạng mũi đơn bầu tại δH 4,74 ppm (1H, brs, H-3) cho thấy cấu hình α. Phổ 13C-NMR có tín hiệu carbon carbonyl tại δC 167,1 ppm (C-9') và carbon C-3 tại δC 78,4 ppm. Hợp chất được xác định là 3α-(E)-coumaroyllupeol.
• Hợp chất BC02 (8,2 mg): Bột trắng vô định hình, tan trong CDCl3. Phổ 1H-NMR hiển thị 8 tín hiệu methyl mũi đơn (δH 0,84–1,17 ppm), một proton olefin tại δH 5,62 ppm (1H, d, J = 6,0 Hz) và một proton hydroxyl mũi đơn bầu tại δH 3,46 ppm (1H, brs, H-3) với giá trị J thấp đặc trưng cấu hình α. Phổ 13C-NMR cho thấy 30 tín hiệu carbon với liên kết đôi nội vòng ở δC 141,6 ppm (C-5) và δC 122,0 ppm (C-6), carbon gắn nhóm hydroxy ở δC 76,5 ppm (C-3), phù hợp với khung oleanane. Hợp chất được xác định là Glut-5-en-3-ol.
• Hợp chất BC05 (5,8 mg): Tinh thể hình kim màu trắng, tan trong CDCl3. Phổ 1H-NMR có 8 tín hiệu methyl đơn (δH 0,81–1,19 ppm), hai proton olefin tại δH 5,51 ppm và 5,56 ppm, cùng một proton hydroxyl tại δH 3,24 ppm (1H, dd, J = 12,0; 5,0 Hz, H-3) có cấu hình β. Phổ 13C-NMR có 30 carbon, trong đó có 4 tín hiệu carbon olefin (gồm C-9 ở δC 154,3 ppm, C-11, C-12, C-13) biểu thị hệ liên kết đôi liên hợp diene của khung oleanane, và carbon C-3 ở δC 78,87 ppm. Hợp chất được xác định là 3β-hydroxy-oleana-9(11),12-diene.
• Hợp chất BC03 (10,2 mg): Chất rắn vô định hình màu vàng, tan trong DMSO-d6. Phổ 1H-NMR cho thấy khung flavone đặc trưng: một proton H-3 dạng mũi đơn tại δH 6,87 ppm; vòng A mang 5,7-dihydroxy với hai proton thơm ghép meta tại δH 6,20 ppm (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6) và δH 6,50 ppm (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8); nhóm 5-OH liên kết hydro nội phân tử xuất hiện ở vùng trường rất thấp δH 12,96 ppm; vòng B thế tại vị trí 3', 4' gồm các proton tại δH 7,56 ppm (1H, d, J = 2,0 Hz, H-2'), δH 6,94 ppm (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5'), δH 7,57 ppm (1H, dd, J = 8,0; 2,0 Hz, H-6'); và một nhóm methoxy tại δH 3,89 ppm (3H, s, 3'-OCH3). Phổ 13C-NMR gồm 16 carbon với carbonyl C-4 ở δC 181,7 ppm, C-2 ở δC 163,7 ppm, C-3 ở δC 103,1 ppm và nhóm methoxy ở δC 56,0 ppm. Hợp chất được xác định là flavonoid Chrysoeriol.

PHẦN VI: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ

Tổng kết lại năm hợp chất phân lập được từ lá Vẹt trụ và đưa ra ba đề xuất thực nghiệm nối tiếp nhằm hoàn thiện hướng nghiên cứu của đề tài.

Kết quả và đóng góp

Nghiên cứu đã hoàn thành toàn bộ mục tiêu thực nghiệm đề ra, phân lập và làm sáng tỏ cấu trúc hóa học của năm hợp chất chuyển hóa thứ cấp từ phân đoạn cao n-hexane của lá Vẹt trụ (Bruguiera cylindrica) Cần Giờ.

Ký hiệu mẫu	Tên hợp chất	Phân loại hóa học	Khối lượng (mg)	Trạng thái cảm quan	Độ tan
BC01	Lupeol	Triterpenoid (khung lupane)	7,5	Chất rắn vô định hình màu trắng	Chloroform
BC02	Glut-5-en-3-ol	Triterpenoid (khung oleanane)	8,2	Bột trắng vô định hình	Chloroform
BC03	Chrysoeriol	Flavonoid (khung flavone)	10,2	Chất rắn vô định hình màu vàng	Methanol, DMSO
BC04	3α-(E)-coumaroyllupeol	Triterpenoid ester	6,1	Chất dạng dầu không màu	Chloroform
BC05	3β-hydroxy-oleana-9(11),12-diene	Triterpenoid (khung oleanane)	5,8	Tinh thể hình kim màu trắng	Chloroform

Về mặt đóng góp khoa học, đề tài đã bổ sung dữ liệu thực nghiệm về thành phần hóa học của bộ phận lá loài Vẹt trụ tại Việt Nam. Trong khi các nghiên cứu trước đây trên thế giới và tại Việt Nam tập trung chủ yếu vào vỏ, rễ hoặc quả cây Vẹt trụ, khóa luận này đã chứng minh lá cây Vẹt trụ tại Rừng ngập mặn Cần Giờ là nguồn tích lũy đa dạng các triterpenoid pentacyclic có giá trị (khung lupane, oleanane, bao gồm cả dẫn xuất coumaroyl ester) và flavonoid tự nhiên.

Về mặt giải pháp và kiến nghị, tác giả đề xuất ba định hướng:

1. Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa thực vật của hai phân đoạn cao chiết còn lại của lá Vẹt trụ là cao ethyl acetate (300 g) và cao methanol (380 g).
2. Tiến hành thử nghiệm khảo sát hoạt tính sinh học (in vitro) đối với các phân đoạn cao chiết toàn phần và các hợp chất tinh khiết đã cô lập được.
3. Thực hiện thử nghiệm khảo sát độc tính cấp của nguyên liệu lá Vẹt trụ để bảo đảm tính an toàn khi định hướng ứng dụng dược phẩm.

Hạn chế và hướng nghiên cứu tiếp

Khóa luận chỉ giới hạn khảo sát thành phần hóa học trên phân đoạn cao chiết kém phân cực (cao n-hexane, 100 g), chưa tiến hành phân lập trên hai phân đoạn cao phân cực trung bình và cao là ethyl acetate (300 g) và methanol (380 g). Đồng thời, trong khuôn khổ thời gian và trang thiết bị của khóa luận tốt nghiệp, đề tài mới dừng lại ở bước chiết tách và định danh cấu trúc bằng phổ NMR một chiều (1H và 13C), chưa triển khai các phép đo phổ hai chiều (COSY, HSQC, HMBC, NOESY) hoặc khối phổ (MS), cũng như chưa tiến hành thử nghiệm hoạt tính sinh học và đánh giá độc tính thực tế của các hợp chất tinh khiết đã thu nhận.

Các hướng mở tiếp theo bám sát đúng kiến nghị trong văn bản khóa luận:

• Phân lập hóa thực vật đối với hai phân đoạn cao ethyl acetate và methanol nhằm tận dụng toàn diện nguồn nguyên liệu đã chiết tách.
• Đánh giá hoạt tính sinh học in vitro (kháng khuẩn, kháng oxy hóa, kháng tế bào ung thư, hạ đường huyết hoặc ức chế enzyme) của lupeol, glut-5-en-3-ol, chrysoeriol, 3α-(E)-coumaroyllupeol và 3β-hydroxy-oleana-9(11),12-diene.
• Khảo sát độc tính của dịch chiết nguyên liệu thực vật.

Giá trị tham khảo

Khóa luận tốt nghiệp này là tài liệu tham khảo hữu ích cho sinh viên, học viên cao học và cán bộ nghiên cứu thuộc các chuyên ngành Công nghệ sinh học, Dược học, Hóa học các hợp chất tự nhiên và Hóa hữu cơ.

Các nội dung có giá trị tham khảo chuyên môn cao bao gồm:

• Quy trình chiết ngấm kiệt quy mô 8 kg bột dược liệu lá tươi phơi khô bằng ethanol, phương pháp điều chế cao phân đoạn theo độ phân cực tăng dần.
• Kỹ thuật sắc ký cột phân tách phân đoạn cao n-hexane, hệ dung môi giải ly kết hợp n-hexane : ethyl acetate và ethyl acetate : methanol, cùng bước tinh chế cuối bằng gel Sephadex LH-20.
• Dữ liệu quy kết dịch chuyển hóa học trên phổ 1H-NMR và 13C-NMR của nhóm triterpenoid pentacyclic (khung lupane và oleanane) và flavone (chrysoeriol), phục vụ công tác tra cứu phổ đối chiếu trong phân tích cấu trúc hóa thực vật.

Câu hỏi thường gặp

Khối lượng nguyên liệu bột lá Vẹt trụ ban đầu và hiệu suất thu nhận các phân đoạn cao chiết là bao nhiêu? Nghiên cứu sử dụng 8 kg bột lá Vẹt trụ khô, ngâm dầm 15 lần với ethanol 90% (tỷ lệ 1:12 g/ml) để thu được 900 g cao chiết tổng ethanol. Khi chiết phân đoạn pha rắn, lượng cao thu nhận lần lượt là 100 g cao n-hexane, 300 g cao ethyl acetate và 380 g cao methanol.

Từ phân đoạn cao n-hexane, tác giả đã cô lập được những hợp chất nào và khối lượng tương ứng là bao nhiêu? Từ 100 g cao n-hexane, tác giả đã phân lập được 5 hợp chất tinh khiết: BC01 (Lupeol, 7,5 mg), BC02 (Glut-5-en-3-ol, 8,2 mg), BC03 (Chrysoeriol, 10,2 mg), BC04 (3α-(E)-coumaroyllupeol, 6,1 mg) và BC05 (3β-hydroxy-oleana-9(11),12-diene, 5,8 mg).

Dấu hiệu quang phổ NMR nào trên hợp chất BC04 chứng minh sự hiện diện của nhóm thế coumaroyl tại vị trí C-3? Trên phổ 1H-NMR của BC04, nhóm coumaroyl được chứng minh bởi 2 proton thơm ghép ortho tại δH 7,43 ppm và 6,85 ppm (J = 8,5 Hz), 2 proton olefin ghép trans tại δH 6,27 ppm và 7,61 ppm (J = 15,5 Hz). Nhóm carboxyl ester thể hiện tại δC 167,1 ppm trên phổ 13C-NMR. Vị trí C-3 mang cấu hình α được xác nhận bởi tín hiệu methine dạng mũi đơn bầu tại δH 4,74 ppm (1H, brs, H-3) gắn với carbon C-3 tại δC 78,4 ppm.

Cấu hình nhóm hydroxyl tại vị trí C-3 của hợp chất BC01 (Lupeol) và BC02 (Glut-5-en-3-ol) khác nhau như thế nào? Ở hợp chất BC01, proton H-3 xuất hiện tại δH 3,18 ppm dưới dạng mũi đôi đôi (dd) với hằng số ghép lớn J = 11,5 Hz, chứng minh nhóm hydroxyl ở vị trí C-3 có hướng trục (axial) tương ứng cấu hình β. Ngược lại, ở hợp chất BC02, proton H-3 xuất hiện tại δH 3,46 ppm dưới dạng mũi đơn bầu (brs) với giá trị hằng số ghép nhỏ, chứng minh nhóm hydroxyl ở vị trí C-3 có cấu hình α.

Kết luận

Khóa luận tốt nghiệp của tác giả Phạm Anh Thư đã khảo sát thực nghiệm thành phần hóa thực vật từ cao chiết n-hexane của lá Vẹt trụ (Bruguiera cylindrica) thu hái tại Khu dự trữ sinh quyển Rừng ngập mặn Cần Giờ. Bằng các kỹ thuật sắc ký cột silica gel pha thường và rây phân tử Sephadex LH-20, nghiên cứu đã cô lập thành công năm hợp chất tinh khiết bao gồm bốn triterpenoid (lupeol, glut-5-en-3-ol, 3α-(E)-coumaroyllupeol, 3β-hydroxy-oleana-9(11),12-diene) và một flavonoid (chrysoeriol). Cấu trúc của các hợp chất được định danh rõ ràng thông qua phân tích phổ 1H-NMR, 13C-NMR và đối chiếu với tài liệu quốc tế. Kết quả này đóng góp dữ liệu khoa học nền tảng cho việc khai thác hợp chất tự nhiên từ các loài thực vật ngập mặn chi Bruguiera tại Việt Nam.

Trích đoạn nội dung tài liệu

ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam là nước có khí hậu nhiệt đới, độ ẩm khá cao, diện tích rừng rất rộng do đó hệ thực vật rất phong phú và đa dạng. Từ thời xa xưa, ông cha ta đã biết dùng cây cỏ để chữa bệnh. Trải qua hàng ngàn năm lịch sử, các cây thuốc được phát hiện ngày càng nhiều hơn, các kinh nghiệm dùng cây thuốc chữa bệnh đã được tích lũy dần dần trong nhân dân, rồi được truyền từ đời này sang đời khác. Và hiện nay, rừng ngập mặn cũng được coi là tài nguyên quý trên trái đất.

Khu dự trữ sinh quyển Cần Giờ còn gọi là Rừng Sác là một quần thể gồm các loài động, thực vật rừng trên cạn và thuỷ sinh, được hình thành trên vùng châu thổ rộng lớn của các cửa sông Đồng Nai, sông Sài Gòn và sông Vàm Cỏ. UNESCO đã công nhận đây là khu dự trữ sinh quyển thế giới vào ngày 21/1/2000 với hệ động thực vật đa dạng độc đáo điển hình của vùng ngập mặn. Nơi đây được công nhận là một khu du lịch trọng điểm quốc gia Việt Nam. Rừng ngập mặn Cần Giờ có 220 loài thực vật bậc cao với 155 chi, thuộc 60 họ; trong đó, các họ có nhiều loài nhất gồm: họ Cúc (Asteraceae) 8 loài, họ Thầu dầu (Euphorbiaceae) 9 loài, họ Đước (Rhizophoraceae) 13 loài, họ Cói (Cyperaceae) 20 loài, họ Hòa thảo (Poaceae) 20 loài, họ Đậu (Fabaceae) 29 loài.

Thực vật ngập mặn đã được nghiên cứu là có những hợp chất mới mang nhiều hoạt tính sinh học có giá trị cao như quả cây Vẹt Trụ (Bruguiera cylindrica) có hàm lượng carbohydrate cao là 29. Năng suất quả già lớn hơn quả non với giá trị lần lượt là 9. Trái cây già có hoạt tính kháng oxy hóa hiệu quả hơn (13.47 ppm) so với trái non (81.60 ppm) và được phân loại là chất chống oxy hóa rất mạnh (IC50 < 50 ppm). Các hợp chất hoạt tính sinh học như chất chống oxy hóa là nhóm phenol[1].

Vẹt trụ còn có các hợp chất polysaccharide, cao chiết ethanol có khả năng kháng vi trùng gây bệnh sốt rét tại giá trị IC50 là 173.75 g/ml, hợp chất 3- feruloyltaraxerol từ cao chiết n-hexane chứng minh khả năng gây độc tế bào kháng lại tế bào ung thư phổi[2],. 1 Trên cơ sơ đó mà đề tài “Khảo sát thành phần hóa học từ cao chiết n-hexan của lá Vẹt trụ (Bruguiera cylindrica)” được thực hiện nhằm xác định thành phần hóa học của cao chiết n-hexan của lá cây Vẹt trụ (Brugruiera cylindrica) và tìm ra những hợp chất hóa học có hoạt tính và có lợi về kinh tế để góp phần phát triển các loại thuốc thảo dược sau này. 2 PHẦN I: TỔNG QUAN 1. Mô tả tổng quan về chi Bruguiera Chi Vẹt (Brugueira) thuộc họ Đước (Rhizophoraceae), theo Phạm Hoàng Hồ[3] tại Việt Nam gồm có 4 loài: Vẹt trụ (Bruguiera cylindrica), Vẹt dù (Bruguiera gymnorrhiza), Vẹt tách (Bruguiera parviflora), Vẹt đen (Bruguiera sexangul) 1.

Cây Vẹt đen (Bruguiera sexangul)[4] Cây cao khoảng 20m, vỏ cây có màu nâu nhạt đén xám. Lá có hình elip hoặc thuôn dài, nhọn; phiến lá dài 8-16 cm, rộng 3-6 cm, phẳng; cuống lá dài 1.5-5 cm; lá kèm dài 3.5-4 cm, có màu xanh lá hoặc màu vàng-xanh. Hoa đơn dộc, dài 3 cm từ phần gốc; đài hoa dài 10-12 mm, có màu vàng đến màu nâu gỉ. Cánh hoa dài 1.5 cm, 2 thùy, có lông ở gốc và thường mọc theo mép.

Bao phấn dài 4-5 mm, không niêm mạc. Trụ dưới lá mần dài 6-12 cm, rộng 1.5-2 cm, hơi có góc cạnh, thu hẹp ở hai đầu. Cây Vẹt dù (Bruguiera gymnorrhiza)[4] Cây cao khoảng 20 m, vỏ cây màu xám đến đen; nhiều rễ đầu gối. Lá hình elip, nhọn; phiến lá dài 8-20 cm, rộng 3-9 cm; cuống lá dài 2-4 cm; lá kèm thường có màu đỏ.

Hoa đơn độc, dài 3.5 cm từ phần gốc, cuống nhỏ dài 1-2.5 cm, được thu lại, ít nhất một bên có màu đỏ. Có khoảng 10-16 đài hoa, màu từ hồng nhạt đến đỏ tươi. Cánh hoa dài 1.5 cm, 2 thùy, màu từ tráng chuyển sang vàng nâu; lề và đáy cánh hoa có lông tơ; có 2 đến 3 lồng mền kết thúc mỗi thùy. 1 trong lõm gian thùy.

Bao phấn dài 4 mm, có chất nhầy. Trụ dưới lá mần dài 10-25 cm, rộng 1.5 cm, thẳng, hơi có gân và trong ở đỉnh. Cây Vẹt trụ (Bruguiera cylindrica)[4] Cây cao khoảng 20 m với rễ cây nhở ở gốc; rất nhiều rễ đầu gối; vỏ cây có màu xám. Lá có hình elip, nhọn, không có lông; phiến lá daì 5-17 cm, rộng 2.5-8 cm; cuống lá dài 4 1-4.5 cm; lá kèm dài 2.

Cụm hoa có 3 hoa; cuống hoa dài 5 mm; cuống nhỏ dài 2 mm; hoa có màu kem đến xanh. Cánh hoa dài 3-4 mm, có lông dọc theo mép cánh. Bao phấn dài 0.5 mm, ngắn hơn sợi tơ, thon dần lên. Quả dài 10-12 cm.

Trụ dưới lá mần dài 8-15 cm, rộng 5 mm, thường cong và không có gân. Cây Vẹt tách (Bruguiera parviflora)[4] Cây cao khoảng 20 m; nhiều rễ đầu gối; vỏ cây nhăn, có màu xám. Lá hình elip, nhọn; phiến lá dài 4-13 cm.5-4 cm; cuống lá dài 1.5-2 cm; lá kèm dài 4. Cụm hoa có 3-10 hoa; cuống hoa dài 2 cm; cuống nhỏ dài 6-13 mm; hoa có màu vàng- xanh.

Có khoảng 8 đài hoa, dài 2 mm, đài cương lên bên trong quả. Cánh hoa dài 1.5-2 mm, có lông ngoài gần đáy cánh hoa; thùy dài 0.5 mm; có 3 lông ở đầu mỗi thùy và 1 lông ở lõm gian thùy. Bao phấn thuôn dài, riêng biệt ngắn hơn sợi tơ. Qủa dài 1-2 cm.

5 Trụ dưới lá mần 7-20 cm, rộng 5 mm, không có gân, mùa lá rụng kèm theo quả; thành quả không rụng như một cổ áo trên cây con, các cánh hướng xuống dưới. Các nghiên cứu thành phần hóa học trên chi Bruguiera Có nhiều nghiên cứu hóa học về các bộ phần khác nhau (lá, thân, vỏ, trái, hoa, rễ và nhánh) của chi Bruguiera đã phân lập được các alkaloids, diterpenoids, triterpenoids, steroids, lignans, flavonoids, phenolics, sulphur… 1. Vỏ cây Vẹt đen (Bruguiera sexangula) Năm 1969, Loder và cộng sự[5] đã cô lập được một alkaloid mới, đó là brugine (1) và các alkaloids được biết đến ở vùng nhiệt đới (2), tropine acetate (3), tropine benzoate 6 (4), tropine isobutyrate (5), tropine isovalerate (6), tropine n-butyrate (7) and tropine propionate (8) từ vỏ cây Vẹt đen (Bruguiera sexangula). Thân cây Vẹt đen (Bruguiera sexangula) Năm 2005, Shuyun Bao và cộng sự[6] đã cô lập và đặt tên cho một dithiobenzoquinone mới (-)-3,4-dihydro-3-hydroxy-7-methoxy-2H-1,5-benzodithiepine-6,9-dione (9); ba diterpenes mới, cụ thể là 17-hydroxy-16-oxobeyer-9(11)-ene-19-al (10), 16,17- dihydroxy-19-nor-ent-9(11)-kaurene-3-one (11), (16R)-13,17-epoxy-16-hydroxy-ent- 9(11)-kaurene-19-al (12); sáu diterpenes đã được biết đến là 17-hydroxy-16- oxobeyerane-19-al (13), 16,17-dihydroxy-ent-9(11)-kaurene-19-al (14), methyl 16,17- dihydroxy-ent-9(11)-kaurene-19-oate (15), methyl (16R)-13,17-epoxy-16-hydroxy-ent- 9(11)-kaurene-19-oate (16), ceriopsin F (17), ent-8(14)-pimarene-1β,15R,16-triol (18); hai cyclic disulfide là brugierol (19), isobrugierol (20); và 2,6-dimethoxy-1,4- benzoquinone (21) từ thân cây Vẹt đen (Bruguiera sexangula), được thu thập từ Haikou, đảo Haiman, Trung Quốc.

Năm 2007, Shuyun Bao và cộng sự[7] cũng cô lập được bốn phenolic glycosides mới, được đặt tên là rhyncoside A–D (22–25) và hai dẫn xuất mới của lignan, được đặt tên là rhyncoside E—F (26-27) cùng với mười hai thành phần phenolic đã được biết dến bao gồm hai phenolic glycoside là 3,4,5-trimethoxyphenyl-β-D-glucopyranoside (28), 1-(α- L-rhamnopyranosyl-(1–6)-β-D-glucopyranosyloxy)-3,4,5-trimethoxybenzene (29); bốn flavonoids là tricin (30), rutin (31), nicotiflorin (32) và myricetin 3-O-rutinoside (33); và sáu lignans gồm lyoniside (34), (+)-lyoniresinol 3α-O-α-L-rhamnopyranoside (35), (+)- 5′-methoxyisolariciresinol 9′-β-D-xylopyranoside (36) và hedyotisols A–C (37–39) từ thân cây Vẹt đen (Bruguiera sexangula), được thu thập từ đường bờ biển gần Xiamen, Fujian province, Trung Quốc. Năm 2010, Liang Li và cộng sự[8] đã cô lập được triterpenoid mới thuộc khung lanostane, đặt tên là sexangulic acid (40) từ thân cây Vẹt đen (Bruguiera sexangula). Từ rễ cây Vẹt dù (Bruguiera gymnorrhiza) Năm 1999, Chitti Subrahmanyam và cộng sự[9] đã cô lập được steviol (41) và năm diterpene là 13-hydroxy-16-ent-kaurene-19-al (42), 16-ent-kaurene-13,19-diol (43), isopimar-7-ene-15S,16-diol (44), methyl (16R)-13,17-epoxy-16-hydroxy-ent-9(11)- kaurene-19-oate (45) and ent-8(14)-pimarene-1β,15R,16-triol (46) từ rễ cây Vẹt dù (Bruguiera gymnorrhiza). Từ thân và lá cây Vẹt dù (Bruguiera gymnorrhiza) Năm 2004, Li Han và cộng sự[10] đã cô lập được ba ent-kaurane diterpenoid, đặt tên là 13,16α,17-trihydroxy-ent-9(11)-kaurene-19-oic acid (47), 16α,17-dihydroxy-ent- 9(11)-kaurene 19-al (14), 17-chloro-13,16β-dihydroxy-ent-kaurane-19-al (48) và một ent-beyerane diterpenoid, đặt là (4R,5S,8R,9R,10S,13S)-ent-17-hydroxy-16- oxobeyerane-19-al (13) cùng với 9 ent-kaurane diterpenoid đã biết tên bao gồm methyl 16α,17-dihydroxy-ent-kaurane-19-oate (49), 16α,17-dihydroxy-ent-9(11)-kaurene-19- oic acid (50), methyl 16α,17-dihydroxy-ent-9(11)-kaurene-19-oate (15), 16α,17- dihydroxy-ent-kaurane-19-al (51), 16αH-17-hydroxy-ent-kaurane-19-oic acid (52), 16αH-17,19-ent-kauranediol (53), 13-hydroxy-16-ent-kaurene-19-al (42), 16-ent- kaurene-13,19-diol (43) and 16-ent-kaurene-19-ol (54) từ thân cây Vẹt dù (Bruguiera gymnorrhiza).

Cũng trong năm này, Yan-Qiu Sun and Yue-Wei Guo[11] đã cô lập được một hợp chất mới đặt tên là gymnorrhizol (55) từ những phân thân cây bị bong ra và lá cây Vẹt dù (Bruguiera gymnorrhiza). Năm 2005, Li Han và cộng sự[12] đã cô lập được năm hợp chất aromatic, đặt tên là bruguierol A–C (56–58), 1-(3-hydroxyphenyl)hexane-2,5-diol (59) và 3-(3- hydroxybutyl)-1,1-dimethylisochroman-6,8-diol (60); ba pimaren diterpenoids tên là ent-8(14)-pimarene-15R,16-diol (61), ent-8(14)-pimarene-1a,15R,16-triol (62) và (5R,9S,10R,13S,15S)-ent-8(14)-pimarene-1-oxo-15R,16-diol (63); tiếp đến là ba diterpenoids đã biết, đó là ent-8(14)-pimarene-1β,15R,16-triol (46), isopimar-7-ene- 8 15S,16-diol (44) và isopimar-7-ene-1β,15S,16-triol (64) từ thân cây Vẹt dù (Bruguiera gymnorrhiza) sống trong rừng ngập mặn. Năm 2007, Li Han và cộng sự. Năm 2008, Suisheng Shang và Shengjing Long[14] đã cô lập được một neolignan dioate là brugnanin (72) từ thân cây Vẹt dù (Bruguiera gymnorrhiza).

Năm 2009, Xiao-Ying Huang và cộng sự[15] đã cô lập được hai novel polydisulfides là trans-3,3′-dihydroxy-1,5,1′,5′-tetrathiacyclodecane (73), cis-3,3′-dihydroxy-1,5,1′,5′- tetrathiacyclodecane (74), tiếp đến là năm cyclic disulfides đã được biết đến, gymnorrhizol (55), neogymnorrhizol (75), bruguiesulfurol (71), brugierol (19) and isobrugierol (20) từ thân và lá cây Vẹt dù (Bruguiera gymnorrhiza). Năm 2011, You-Sheng Cai và cộng sự[16] đã cô lập được bảy hợp chất mới, đặt tên là palmarumycins BG1–BG7 (76–82) cũng như một dẫn xuất mới của preussomerin BG1 là preussomerin BG1 (83) từ các bộ phần trên không của cây Vẹt dù (Bruguiera gymnorrhiza). Từ hoa của cây Vẹt dù (Bruguiera gymnorrhiza) Năm 2006, Sudarat Homhual và cộng sự[17,18] đã cô lập được ba dammarane triterpenes, là bruguierins A–C (68–70); a new cyclic 4-hydroxydithiosulfonate, đặt tên là bruguiesulfurol (71) cũng như hai hợp chất đã biết là 4-hydroxydithiolane 1-oxide, brugierol (19) và isobrugierol (20) từ hoa của cây Vẹt dù (Bruguiera gymnorrhiza). Từ quả Vẹt trụ (Bruguiera cylindrica) Năm 2004, Surat Laphookhieo và cộng sự[19] đã cô lập được sáu pentacyclic triterpenoid esters, đặt tên là 3α-(E)-feruloyltaraxerol (84), 3α-(Z)-feruloyltaraxerol (85), 3β-(E)-feruloyltaraxerol (86), 3β-(Z)-feruloyltaraxerol (87), 3α-(E)-coumaroyltaraxerol (88) and 3α-(Z)-coumaroyltaraxerol (89) together with two known compounds such as 3α-taraxerol (90) và 3β-taraxerol (91) từ quả cây Vẹt trụ (Bruguiera cylindrica).

9 Năm 2005, Chatchanok Karalai và Surat Laphookhieo[20] đã cô lập được ba pentacyclic triterpenoid esters mới, đã đặt tên là 3α-(E)-coumaroyllupeol (92), 3α-(Z)- coumaroyllupeol (93) và 3α-(E)-caffeoyltaraxerol (94), cùng với sáu lupane-type triterpenoids đã biết bao gồm 3β-(E)-coumaroyllupeol (95), 3β-(Z)-coumaroyllupeol (96), 3β-(E)-caffeoyllupeol (97), 3β-lupeol (98), 3α- lupeol (99) và lupenone (100) từ quả Vẹt trụ (Bruguiera cylindrica). Từ rễ và lá Vẹt trụ (Bruguiera cylindrica) Năm 2007, từ rễ cây Vẹt trụ (Bruguiera cylindrical), Suchada Chantrapromma và cộng sự[21] đã cô lập được hợp chất ent-kaurane diterpene đó là 16-ent-kaurene-19-al (101); Abdul Wahab Salae và cộng sự[22] cũng đã cô lập được một hợp chất diterpenoid, as 16-ent-kaurene-13,19-diol (43).