I. Xác định Lutein bằng HPLC Pha Đảo RP
Phần này tập trung vào việc thiết lập phương pháp HPLC Pha Đảo RP để xác định lutein. Phương pháp này dựa trên việc sử dụng cột pha đảo C18 (250 x 4,6 cm; 5 µm) để tách lutein khỏi hỗn hợp lutein ester. Sử dụng HPLC Pha Đảo RP giúp xác định hàm lượng lutein trong mẫu một cách chính xác và hiệu quả.
1.1. Cải biến Phương pháp HPLC
Để phù hợp với điều kiện phòng thí nghiệm và đối tượng nghiên cứu, bài báo trình bày việc cải biến phương pháp HPLC để xác định lutein trong hỗn hợp lutein ester. Quá trình cải biến tập trung vào việc lựa chọn các thông số phù hợp như thành phần pha động, tốc độ dòng, và thể tích bơm mẫu.
1.2. Dựng Đường Chuẩn HPLC
Sau khi cải biến phương pháp HPLC, bài báo tiến hành dựng đường chuẩn cho lutein. Đường chuẩn được dựng dựa trên việc đo nồng độ lutein chuẩn với các nồng độ khác nhau, sau đó chạy HPLC và thu thập dữ liệu. Dữ liệu thu được được sử dụng để xây dựng đường chuẩn, giúp xác định hàm lượng lutein trong mẫu dựa trên diện tích peak.
1.3. Thẩm Định Phương pháp HPLC
Để đánh giá độ chính xác và độ tin cậy của phương pháp HPLC đã được xây dựng, bài báo tiến hành thẩm định phương pháp. Quá trình thẩm định bao gồm kiểm tra tính đặc hiệu, độ lặp lại, độ tuyến tính, giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ), cũng như xác định độ thu hồi.
II. Ứng dụng trong Khảo sát Xà phòng hóa Lutein Ester
Phần này tập trung vào việc ứng dụng phương pháp HPLC Pha Đảo RP đã được cải biến để khảo sát quá trình xà phòng hóa lutein ester. Quá trình xà phòng hóa chuyển hóa lutein ester thành lutein tự do, là dạng cơ thể có thể hấp thụ.
2.1. Ảnh hưởng của Điều kiện Xà phòng hóa
Bài báo trình bày khảo sát ảnh hưởng của các điều kiện xà phòng hóa như nồng độ oleoresin, nồng độ KOH, nhiệt độ, và thời gian phản ứng đến hiệu suất xà phòng hóa. Bằng cách sử dụng HPLC để theo dõi hàm lượng lutein tự do trong sản phẩm, bài báo phân tích và đánh giá hiệu quả của các điều kiện xà phòng hóa khác nhau.
2.2. Thử nghiệm Quy trình Xà phòng hóa
Dựa trên kết quả khảo sát ảnh hưởng của các điều kiện xà phòng hóa, bài báo tiến hành thử nghiệm quy trình xà phòng hóa tối ưu hóa. Thử nghiệm được thực hiện trên mẫu lutein ester chiết tách từ hoa cúc vạn thọ. Hàm lượng lutein tự do trong sản phẩm sau xà phòng hóa được xác định bằng HPLC để đánh giá hiệu quả của quy trình.
