tr-êng ®¹i häc Y Hµ néi bé m«n m« - ph«i häc gi¸o tr×nh thùc hµnh M« häc ( s¸ch dïng cho sinh viªn) Hµ Néi - 2011 Tr-êng ®¹i häc Y Hµ néi bé m«n m« - ph«i häc gi¸o tr×nh thùc hµnh M« häc ( s¸ch dïng cho sinh viªn) Hµ Néi - 2011 chñ biªn pgS. NguyÔn ThÞ B×nh THAM GIA BI£N SO¹N pgS. NguyÔn ThÞ B×nh ts. NguyÔn Khang S¬n ts.
Ng« Duy Th×n bs. L-u §×nh Mïi THS. TrÞnh Sinh Tiªn THS. §µo ThÞ Thóy Ph-îng THS.
Lª ThÞ Hång Nhung Th- ký bi ªn so¹n bs. L-u §×nh Mïi 2 H-íng dÉn dïng s¸ch M« häc lµ mét m«n häc vÒ h×nh th¸i. ViÖc xem tiªu b¶n c¸c tÕ bµo, c¸c m«, c¸c c¬ quan d-íi kÝnh hiÓn vi sÏ gióp sinh viªn dÔ dµng hiÓu vµ nhí nh÷ng cÊu tróc ®· ®-îc m« t¶ trong c¸c bµi gi¶ng lý thuyÕt trªn gi¶ng ®êng. Cuèn “Thùc tËp M« häc” ®îc so¹n th¶o nh»m gãp phÇn x©y dùng phong c¸ch häc tËp chñ ®éng vµ qua ®ã n©ng c¸o chÊt l-îng häc tËp cña sinh viªn häc m«n M« häc - Ph«i thai häc.
VÒ néi dung, cuèn s¸ch gåm hai phÇn: phÇn më ®Çu vµ phÇn h-íng dÉn ®äc tiªu b¶n. PhÇn më ®Çu: PhÇn më ®Çu giíi thiÖu kh¸i qu¸t môc ®Ých, yªu cÇu cña viÖc xem c¸c tiªu b¶n m« häc, s¬ l-îc vÒ kü thuËt lµm c¸c tiªu b¶n th«ng th-êng vµ tr×nh bµy nh÷ng nÐt chñ yÕu vÒ cÊu t¹o vµ sö dông kÝnh hiÓn vi quang häc ®Ó ®äc c¸c tiªu b¶n m« häc. PhÇn h-íng dÉn ®äc tiªu b¶n: 2. PhÇn lêi bao gåm yªu cÇu, néi dung vµ tr×nh tù h-íng dÉn sinh viªn ®äc tõng tiªu b¶n.
Tr-íc khi ®äc tiªu b¶n sinh viªn ph¶i ®äc kü phÇn nµy. Nh÷ng ¶nh minh ho¹ cho phÇn lêi: ®©y lµ nh÷ng h×nh ¶nh ®iÓn h×nh nhÊt, sinh viªn cã thÓ c¨n cø vµo c¸c chi tiÕt ®-îc chó thÝch trªn ¶nh ®Ó t×m trªn tiªu b¶n khi xem d-íi kÝnh hiÓn vi. VÏ h×nh: sau khi sinh viªn cã thÓ nhËn biÕt ®óng tiªu b¶n ®ang häc lµ cña m« nµo, c¬ quan nµo, chØ ®óng trªn kÝnh hiÓn vi nh÷ng cÊu trøc ®· nªu trong yªu cÇu mçi tiªu b¶n, sinh viªn ph¶i vÏ l¹i h×nh ®· quan s¸t ®îc vµo phÇn “ h×nh vÏ”. Môc ®Ých, yªu cÇu thùc tËp ®äc tiªu b¶n m« häc: - Minh ho¹ nh÷ng néi dung ®· tr×nh bÇy trong c¸c bµi gi¶ng lý thuyÕt.
- NhËn biÕt cÊu tróc vµ thµnh phÇn cÊu t¹o b×nh th-êng cña tÕ bµo, cña c¸c m« vµ c¸c c¬ quan trong c¬ thÓ ng-êi vµ ®éng vËt ë møc ®é hiÓn vi. - ChÈn ®o¸n ®-îc c¸c tÕ bµo, m« vµ c¬ quan qua c¸c tiªu b¶n vi thÓ. Kü thuËt lµm tiªu b¶n m« häc: Tr×nh tù lµm c¸c b-íc nh- sau: • TrÝch thñ m«, c¬ quan cÇn nghiªn cøu. • Cè ®Þnh c¸c m¶nh m«, c¬ quan b»ng c¸c lo¹i thuèc cè ®Þnh thÝch hîp.
• Thùc hiÖn mét lo¹t kü thuËt ®Ó nÕn (paraffine) ngÊm vµo m¶nh m«, m¶nh c¬ quan. Sau ®ã ®óc c¸c khèi nÕn (hay khèi colloidine hoÆc khèi chÊt dÎo) vµ vïi c¸c m¶nh m« hay m¶nh c¬ quan vµo trong c¸c khèi ®ã. • C¾t thµnh l¸t máng c¸c m¶nh m« hay c¬ quan vïi trong khèi nÕn b»ng m¸y c¾t l¸t. §é dÇy l¸t c¾t kho¶ng tõ 4-7m.
• Nhuém l¸t c¾t ®· d¸n trªn phiÕn kÝnh theo c¸c ph-¬ng ph¸p nhuém thÝch hîp víi yªu cÇu nghiªn cøu. Víi nh÷ng tiªu b¶n m« häc th«ng th-êng, ®Ó nhuém nh©n tÕ bµo th-êng dïng hematoxylin, nh©n sÏ b¾t mÇu xanh tÝm.§Ó nhuém bµo t-¬ng cña tÕ bµo th-êng sö dông eozin, bµo t-¬ng b¾t mÇu ®á hång. Ngoµi ra, mét sè tiªu b¶n ®-îc nhuém b»ng c¸c ph-¬ng ph¸p ®Æc biÖt kh¸c • D¸n l¸ kÝnh lªn phiÕn kÝnh ®Ó b¶o ®Ó b¶o vÖ l¸t c¾t ®· nhuém mÇu. KÝnh hiÓn vi quang häc KÝnh hiÓn vi quang häc lµ lo¹i ph-¬ng tiÖn th-êng xuyªn ®-îc sö dông ®Ó quan s¸t tiªu b¶n m« häc.
CÊu t¹o KÝnh hiÓn vi quang häc 1. Gi¸ ®Ó g¾n vËt kÝnh; 3. Nóm ®iÒu chØnh nhá; 6. Hệ thống đèn, g-¬ng; 8.
Bé phËn di chuyÓn tiªu b¶n 3. C¸ch sö dông • §Æt kÝnh ngay ng¾n tr-íc mÆt, võa tÇm m¾t. • §-a vËt kÝnh cã ®é phãng ®¹i nhá (x10) vµo ®óng vÞ trÝ (®óng luång ¸nh s¸ng truyÒn tõ d-íi lªn qua lç m©m kÝnh). H¹ tô quang xuèng thÊp • §Æt tiªu b¶n lªn m©m kÝnh (mÆt cã d¸n l¸ kÝnh ë phÝa trªn).
Di chuyÓn tiªu b¶n ®Ó l¸t c¾t vµo ®óng vÞ trÝ cã thÓ quan s¸t ®-îc. ViÖc ®äc tiªu b¶n bao giê còng b¾t ®Çu b»ng vËt kÝnh cã ®é phãng ®¹i nhá (th-êng lµ vËt kÝnh x10). §é phãng ®¹i nµy cho phÐp x¸c ®Þnh ®-îc tõng khu vùc c¸c thµnh phÇn cÊu tróc m«, c¬ quan. VËt kÝnh cã ®é phãng ®¹i lín (x40; x60) dïng ®Ó quan s¸t ph¹m vi tÕ bµo hoÆc cÊu tróc chi tiÕt cña mét vïng nhá m«, c¬ quan.
- Dïng vËt kÝnh nhá: 5 + Sau khi ®· ®Æt vËt kÝnh nhá ®óng vÞ trÝ, m¾t nh×n qua thÞ kÝnh, vÆn èc ®iÒu chØnh lín hoÆc èc ®iÒu chØnh nhá ®Ó n©ng hoÆc h¹ vËt kÝnh cho ®Õn khi thÊy râ nhÊt c¸c chi tiÕt trong vi tr-êng. §iÒu chØnh kÝnh lµ mét ®éng t¸c rÊt tÕ nhÞ, cÇn hÕt søc thËn träng, tiÕn hµnh nhÑ nhµng, kh«ng véi vµng, cÈu th¶. Kh«ng chó ý trong viÖc ®iÒu chØnh kÝnh sÏ dÉn ®Õn hËu qu¶ tai h¹i lµ cã thÓ lµm dËp, vì tiªu b¶n (do h¹ vËt kÝnh xuèng qu¸ thÊp. VËt kÝnh ch¹m vµo tiªu b¶n, nhÊt lµ khi xö dông vËt kÝnh cã ®é phãng ®¹i lín).
®Ó tr¸nh lµm dËp, vì tiªu b¶n, nªn tiÕn hµnh ®iÒu chØnh kÝnh nh- sau: + VÆn èc ®iÒu chØnh lín sao cho vËt kÝnh h¹ gÇn s¸t tiªu b¶n. Khi vÆn èc ®iÒu chØnh ph¶i theo dâi kho¶ng c¸ch gi÷a vËt kÝnh vµ tiªu b¶n. + Muèn quan s¸t c¸c vïng kh¸c nhau cña tiªu b¶n, ph¶i di chuyÓn tiªu b¶n sang tr¸i, ph¶i, tiÕn ra tr-íc,lïi l¹i sau. Trong khi di chuyÓn tiªu b¶n, h×nh ¶nh trong vi tr-êng cã thÓ bÞ mê ®i, cÇn ®iÒu chØnh l¹i cho râ b»ng c¸ch xoay èc ®iÒu chØnh nhá theo chiÒu hoÆc ng-îc chiÒu kim ®ång hå.
- Dïng vËt kÝnh lín: + Muèn quan s¸t chi tiÕt c¸c thµnh phÇn cÊu t¹o tÕ bµo, m«, ph¶i ®-a vËt kÝnh lín vµo ®óng vÞ trÝ, nghÜa lµ ®-a vµo ®óng luång ¸nh s¸ng tõ d-íi m©m kÝnh ®i lªn, ®ång thêi lµm t¨ng c-êng nguån s¸ng b»ng c¸ch n©ng tô quang lªn. + Tr-íc khi ®-a vËt kÝnh cã ®é phãng ®¹i lín vµo vÞ trÝ cÇn kiÓm tra xem tiªu b¶n ®· ®Æt ®óng chiÒu ch-a (mÆt d¸n l¸ kÝnh ë phÝa trªn). §Æt kh«ng ®óng chiÒu bao giê còng g©y dËp, vì tiªu b¶n. + Xoay èc ®iÒu chØnh nhá lµm cho vËt kÝnh rêi xa mÆt tiªu b¶n.
NÕu thÊy h×nh ¶nh trªn tiªu b¶n cµng mê ®i, tõ tõ vÆn èc nµy theo chiÒu ng-îc l¹i cho ®Õn khi h×nh ¶nh hiÖn râ. 6 TiªU b¶n sè 1: biÓu m« vu«ng ®¬n TrÝch thñ tõ: ThËn cña chã. Ph-¬ng ph¸p nhuém: Hematoxylin- Eosin (H. Yªu cÇu: NhËn biÕt ®-îc ®Æc ®iÓm cÊu t¹o cña biÓu m« vu«ng ®¬n lîp thµnh èng gãp n»m trong vïng tuû (th¸p Malpighi) cña thËn.
VËt kÝnh x10: T×m ®-îc vïng tuû (th¸p Malpighi) cña thËn lµ vïng nh¹t mµu, gåm toµn èng c¾t ngang trong ®ã nh÷ng èng lín, thµnh dµy gåm 1 hµng tÕ bµo cã ranh giíi râ rµng, lßng réng lµ èng gãp. VËt kÝnh x40: Quan s¸t thµnh èng gãp thÊy ®-îc 1 hµng tÕ bµo h×nh khèi vu«ng, ranh giíi râ rµng. Nh©n trßn, n»m ë gi÷a tÕ bµo. Vïng tuû cña thËn 1.
BiÓu m« vu«ng ®¬n 2 1 H×nh vÏ 7 TiªU b¶n sè 2: biÓu m« l¸t ®¬n TrÝch thñ tõ: ThËn cña chã. Ph-¬ng ph¸p nhuém: H. Yªu cÇu: NhËn biÕt ®-îc ®Æc ®iÓm cÊu t¹o cña biÓu m« l¸t ®¬n gåm 1 hµng tÕ bµo dÑt. VËt kÝnh x10: T×m ®-îc vïng vá cña thËn lµ vïng mµu hång thÉm, trong ®ã cã nh÷ng khèi h×nh h¬i trßn, ®-îc bao quanh bëi 1 khoang s¸ng lµ khoang Bowman cña tiÓu cÇu thËn.
BiÓu m« l¸t ®¬n lîp phÝa ngoµi bao Bowman. VËt kÝnh x40: Quan s¸t ®Æc ®iÓm cÊu t¹o cña biÓu m« l¸t ®¬n: §ã lµ 1 líp rÊt máng t¹o ranh giíi gi÷a khoang Bowman vµ nh÷ng cÊu tróc xung quanh. Nh÷ng tÕ bµo biÓu m« rÊt dÑt. Nh©n h×nh gËy, thÉm mµu h¬i låi vµo khoang Bowman.
Bµo t-¬ng rÊt máng. Vïng vá cña thËn 1. TiÓu cÇu thËn 2. BiÓu m« l¸t ®¬n 2 1 H×nh vÏ H×nh vÏ 8 TiªU b¶n sè 3: biÓu m« trô ®¬n TrÝch thñ tõ: T¸ trµng cña chã.
Ph-¬ng ph¸p nhuém: H. Yªu cÇu: - NhËn biÕt ®-îc biÓu m« phñ trªn c¸c nhung mao ruét lµ biÓu m« trô ®¬n. - Ph©n biÖt ®-îc 2 lo¹i tÕ bµo trong biÓu m« trô ®¬n lµ tÕ bµo trô m©m khÝa vµ tÕ bµo h×nh ®µi. VËt kÝnh x10: T×m c¸c nhung mao ruét: Mçi nhung mao lµ 1 khèi h×nh ngãn tay låi vµo trong lßng ruét gåm 2 phÇn: - Trôc liªn kÕt n»m gi÷a nhung mao ®-îc cÊu t¹o bëi m« liªn kÕt.
- Lîp phÝa ngoµi trôc liªn kÕt lµ biÓu m« trô ®¬n. VËt kÝnh x40: - X¸c ®Þnh biÓu m« trô ®¬n: BiÓu m« ®-îc cÊu t¹o bëi 1 hµng tÕ bµo trô cao, ranh giíi kh«ng râ rµng. Nh©n tÕ bµo h×nh trøng n»m ë phÝa ®¸y, phÇn ngän nhiÒu bµo t-¬ng mµu hång. - Ph©n biÖt 2 lo¹i tÕ bµo: + TÕ bµo m©m khÝa: ChiÕm ®a sè, lµ nh÷ng tÕ bµo ë cùc ngän cã 1 ®-êng viÒn mµu hång bãng.
+ TÕ bµo h×nh ®µi: N»m r¶i r¸c, xen gi÷a c¸c tÕ bµo trô m©m khÝa. ë cùc ngän cã 1 hèc s¸ng (®ã lµ 1 kh«ng bµo chøa chÊt nhÇy kh«ng b¾t mµu thuèc nhuém) 4 3 2 1 Niªm m¹c ruét non 1.Trôc liªn kÕt cña nhung mao. TÕ bµo h×nh ®µi 9 H×nh vÏ 10 TiªU b¶n sè 4: biÓu m« trô gi¶ tÇng cã l«ng chuyÓn TrÝch thñ tõ: KhÝ qu¶n cña chã. Ph-¬ng ph¸p nhuém: H.
Yªu cÇu: NhËn biÕt ®-îc ®Æc ®iÓm cÊu t¹o cña biÓu m« trô gi¶ tÇng cã l«ng chuyÓn phñ mÆt trong cña khÝ qu¶n.VËt kÝnh x10: ë mÆt trong cña thµnh khÝ qu¶n cã 1 d¶i mµu hång, chøa nhiÒu nh©n, ®ã lµ biÓu m« trô gi¶ tÇng.VËt kÝnh x40: Quan s¸t biÓu m«. - BiÓu m« gåm nhiÒu hµng nh©n, ranh giíi tÕ bµo kh«ng râ rµng. Hµng tÕ bµo trªn cïng cã h×nh trô cao, nh©n n»m ë phÝa ®¸y tÕ bµo. - ë cùc ngän cña tÕ bµo trô n»m trªn mÆt biÓu m« lµ 1 ®-êng viÒn kh«ng ®Òu, mµu hång nh¹t, ®ã lµ nh÷ng l«ng chuyÓn dÝnh vµo nhau.
- R¶i r¸c trong biÓu m«, xen gi÷a c¸c tÕ bµo trô cã l«ng chuyÓn lµ nh÷ng tÕ bµo h×nh ®µi (t-¬ng tù tÕ bµo h×nh ®µi ë biÓu m« ruét) 3 1 2 khÝ qu¶n 1. L«ng chuyÓn 11 3 2 1 4 BiÓu m« lîp khÝ qu¶n 1.