Nghiên cứu định lượng Diclofenac Natri & Alcol Benzylic bằng HPTLC

Nghiên cứu định lượng Diclofenac natri & Alcol benzylic trong thuốc tiêm bằng HPTLC. Lê Thị Thảo Nghiên cứu phương pháp sắc ký bản mỏng hiệu năng cao.

• Tác giả: Lê Thị Thảo
• Người hướng dẫn: TS. Tống Thị Thanh Vượng
• Trường học: Trường Đại Học Dược Hà Nội
• Chuyên ngành: Dược Sĩ
• Đề tài: Nghiên Cứu Định Lượng Diclofenac Natri Và Alcol Benzylic Trong Thuốc Tiêm Bằng Phương Pháp HPTLC
• Loại tài liệu: khóa luận tốt nghiệp
• Năm xuất bản: 2024
• Địa điểm: Hà Nội

Tóm tắt

I. Tổng Quan Về Định Lượng Diclofenac Alcol Benzylic HPTLC

Diclofenac natri, một dẫn xuất của acid phenylacetic, là một thuốc giảm đau, chống viêm không steroid được sử dụng rộng rãi. Trong công thức thuốc tiêm, alcol benzylic đóng vai trò là chất bảo quản kháng khuẩn, ngăn chặn sự phát triển của vi khuẩn và nấm mốc. Tuy nhiên, việc kiểm soát hàm lượng alcol benzylic là cần thiết do tiềm ẩn các tác dụng không mong muốn. Hiện nay, Dược điển Việt Nam V chưa có quy định và phương pháp phân tích alcol benzylic trong chuyên luận "Thuốc tiêm diclofenac natri". Do đó, việc xây dựng một phương pháp định lượng đồng thời diclofenac natri và alcol benzylic là vô cùng quan trọng. Phương pháp HPTLC (Sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao) hứa hẹn là một giải pháp hiệu quả, nhanh chóng và tiết kiệm chi phí. Phương pháp này cung cấp khả năng phân tích đồng thời các thành phần, giảm thiểu thời gian và chi phí so với các phương pháp truyền thống. Khóa luận này tập trung vào nghiên cứu và phát triển một phương pháp HPTLC mới để định lượng Diclofenac và định lượng Alcol Benzylic trong thuốc tiêm, đáp ứng nhu cầu kiểm soát chất lượng dược phẩm một cách hiệu quả và chính xác.

1.1. Giới thiệu về Diclofenac và Vai trò của nó trong Dược phẩm

Diclofenac là một hoạt chất quan trọng trong nhiều loại thuốc giảm đau và chống viêm. Cơ chế hoạt động của diclofenac liên quan đến việc ức chế enzyme cyclooxygenase (COX), làm giảm sản xuất prostaglandin, các chất trung gian gây viêm và đau. Thuốc được sử dụng rộng rãi để điều trị các tình trạng như viêm khớp, đau lưng và các cơn đau cấp tính. Diclofenac có nhiều dạng bào chế khác nhau, bao gồm viên nén, gel bôi ngoài da và thuốc tiêm. Dạng tiêm thường được sử dụng trong các trường hợp cần giảm đau và viêm nhanh chóng, như sau phẫu thuật hoặc trong các đợt cấp tính của bệnh viêm khớp. Cấu trúc hóa học của diclofenac cho phép nó tương tác hiệu quả với các enzyme COX, nhưng cũng có thể gây ra một số tác dụng phụ, đặc biệt là trên hệ tiêu hóa và tim mạch. Do đó, việc kiểm soát chất lượng và định lượng chính xác diclofenac trong các chế phẩm dược phẩm là rất quan trọng để đảm bảo hiệu quả điều trị và giảm thiểu rủi ro cho bệnh nhân. Dẫn chứng: "Diclofenac natri dùng bằng đường tiêm đã được nghiên cứu thích hợp và hiệu quả để giảm đau và viêm trong đợt cấp tính như viêm khớp dạng thấp, bệnh thoái hóa khớp, trong điều trị đau do phẫu thuật nhỏ như cắt amidan, phẫu thuật hậu môn trực tràng, chấn thương, các cơn đau sau sinh [10]."

1.2. Alcol Benzylic Chức năng Ưu điểm và Nhược điểm khi sử dụng

Alcol benzylic thường được sử dụng làm chất bảo quản trong các công thức thuốc tiêm do khả năng kháng khuẩn, ngăn chặn sự phát triển của vi khuẩn và nấm mốc. Cơ chế hoạt động của alcol benzylic liên quan đến việc phá vỡ cấu trúc tế bào của vi sinh vật, ức chế sự phát triển của chúng. Alcol benzylic hoạt động tốt nhất ở pH dưới 5 và giảm hoạt động khi pH lớn hơn 8 [35]. Ngoài vai trò bảo quản, alcol benzylic còn có khả năng gây tê cục bộ ở nồng độ 4% [18], có thể giúp giảm đau tại chỗ tiêm. Tuy nhiên, alcol benzylic cũng có thể gây ra các tác dụng không mong muốn nguy hiểm, đặc biệt là ở trẻ sơ sinh và trẻ nhỏ [43]. Các tác dụng phụ có thể bao gồm suy hô hấp, nhiễm toan chuyển hóa và các vấn đề về thần kinh. Do đó, việc sử dụng alcol benzylic cần được kiểm soát chặt chẽ, và nồng độ của nó trong các chế phẩm thuốc tiêm phải tuân thủ các quy định nghiêm ngặt. Dẫn chứng: "Dược điển Việt Nam V đang quy định hàm lượng chất bảo quản kháng vi sinh vật trong chế phẩm thuốc tiêm không được cao quá 120% mức sử dụng trong công thức bào chế đã được phê duyệt [4]"

1.3. Vai Trò Quan Trọng của Phương Pháp HPTLC trong Kiểm Nghiệm

HPTLC (Sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao) là một kỹ thuật phân tích sắc ký được sử dụng để tách và định lượng các thành phần trong một hỗn hợp. Phương pháp HPTLC có nhiều ưu điểm so với các kỹ thuật sắc ký khác, bao gồm tính đơn giản, chi phí thấp và khả năng phân tích đồng thời nhiều mẫu. Trong kiểm nghiệm dược phẩm, HPTLC được sử dụng để xác định độ tinh khiết, định lượng hoạt chất và phát hiện các tạp chất. Ứng dụng HPTLC đặc biệt hữu ích trong việc phân tích các sản phẩm phức tạp như chiết xuất thảo dược và các công thức đa thành phần. HPTLC cũng có thể được sử dụng để kiểm tra tính ổn định của thuốc và để xác định các chất phân hủy. Ngoài ra, HPTLC là một phương pháp thân thiện với môi trường do sử dụng ít dung môi hơn so với các kỹ thuật sắc ký khác. Phương pháp này cung cấp khả năng phân tích đồng thời các thành phần, giảm thiểu thời gian và chi phí so với các phương pháp truyền thống. Với những ưu điểm vượt trội, HPTLC ngày càng được ứng dụng rộng rãi trong các phòng thí nghiệm kiểm nghiệm dược phẩm trên toàn thế giới.

II. Thách Thức Yêu Cầu Kiểm Nghiệm Diclofenac Alcol Benzylic

Việc kiểm nghiệm đồng thời diclofenac và alcol benzylic trong thuốc tiêm đặt ra nhiều thách thức. Sự khác biệt về tính chất hóa học và nồng độ của hai chất đòi hỏi một phương pháp phân tích có độ nhạy và độ chọn lọc cao. Các phương pháp truyền thống như HPLC (Sắc ký lỏng hiệu năng cao) có thể phức tạp và tốn kém. Hơn nữa, yêu cầu về độ chính xác và độ tin cậy của kết quả phân tích là rất cao, đặc biệt trong bối cảnh các quy định nghiêm ngặt của ngành dược phẩm. Để đáp ứng những yêu cầu này, cần có một phương pháp phân tích nhanh chóng, hiệu quả và dễ dàng thực hiện, đồng thời đảm bảo độ chính xác và độ tin cậy cao. Phương pháp HPTLC (Sắc ký lớp mỏng hiệu năng cao) hứa hẹn là một giải pháp hiệu quả, nhanh chóng và tiết kiệm chi phí. Bài viết sẽ đề cập đến việc kiểm nghiệm cần độ chính xác cao, các phương pháp kiểm nghiệm truyền thống và sự cần thiết của phương pháp HPTLC.

2.1. Tại Sao Cần Độ Chính Xác Cao Khi Định Lượng Hai Chất Này

Độ chính xác cao trong định lượng Diclofenac và định lượng Alcol Benzylic là vô cùng quan trọng vì nhiều lý do. Đối với diclofenac, việc định lượng không chính xác có thể dẫn đến liều lượng không phù hợp, ảnh hưởng đến hiệu quả điều trị hoặc gây ra các tác dụng phụ không mong muốn. Diclofenac là một thuốc giảm đau, chống viêm, và liều lượng không đủ có thể không kiểm soát được cơn đau hoặc viêm, trong khi liều lượng quá cao có thể gây ra các vấn đề về tiêu hóa, tim mạch hoặc thận. Đối với alcol benzylic, việc định lượng chính xác là cần thiết để đảm bảo tính an toàn và hiệu quả của thuốc tiêm. Nồng độ alcol benzylic quá thấp có thể không đủ để ngăn chặn sự phát triển của vi khuẩn, dẫn đến nhiễm trùng. Ngược lại, nồng độ quá cao có thể gây ra các tác dụng độc hại, đặc biệt là ở trẻ sơ sinh và trẻ nhỏ. Do đó, các phương pháp phân tích phải được thẩm định và kiểm soát chặt chẽ để đảm bảo độ chính xác và độ tin cậy cao. Dẫn chứng: "Mặt khác, alcol benzylic có thể gây ra các tác dụng không mong muốn nguy hiểm cho người sử dụng [43], đã có nghiên cứu chỉ ra rằng cần thận trọng nếu sử dụng một lượng lớn alcol benzylic vì benzaldehyde phát sinh từ alcol benzylic khi được sử dụng làm chất bảo quản trong dung dịch thuốc tiêm [26]."

2.2. Hạn Chế Của Các Phương Pháp Kiểm Nghiệm Truyền Thống Hiện Nay

Các phương pháp kiểm nghiệm truyền thống như HPLC và sắc ký khí (GC) có thể được sử dụng để phân tích Diclofenac và phân tích Alcol Benzylic, nhưng chúng cũng có những hạn chế nhất định. HPLC thường đòi hỏi thời gian phân tích dài, sử dụng nhiều dung môi và có thể phức tạp trong việc chuẩn bị mẫu. GC có thể không phù hợp cho các chất không bay hơi hoặc dễ bị phân hủy nhiệt. Ngoài ra, cả HPLC và GC đều đòi hỏi các thiết bị đắt tiền và kỹ thuật viên có trình độ cao. Các phương pháp quang phổ như UV-Vis cũng có thể được sử dụng, nhưng chúng có thể không đủ độ chọn lọc và độ nhạy cho các mẫu phức tạp. Các phương pháp chuẩn độ có thể đơn giản hơn, nhưng chúng thường không đủ chính xác cho việc định lượng các hoạt chất dược phẩm. Do đó, việc tìm kiếm các phương pháp phân tích thay thế, nhanh chóng, hiệu quả và dễ dàng thực hiện là rất quan trọng. Dẫn chứng: "Hiện nay theo quy định của Dược điển Việt Nam, định lượng diclofenac natri được định lượng bằng phương pháp HPLC, với alcol benzylic chưa có quy định và phương pháp phân tích. Điều này đem lại không ít khó khăn trong việc định lượng đồng thời diclofenac natri và alcol benzylic."

2.3. Tại Sao Cần Nghiên Cứu Phát Triển Phương Pháp Định Lượng HPTLC

Việc nghiên cứu và phát triển phương pháp HPTLC cho định lượng Diclofenac và định lượng Alcol Benzylic là cần thiết vì nhiều lý do. Phương pháp HPTLC cung cấp một giải pháp phân tích nhanh chóng, hiệu quả và tiết kiệm chi phí so với các phương pháp truyền thống như HPLC. HPTLC có thể phân tích đồng thời nhiều mẫu, giảm thiểu thời gian và chi phí phân tích. HPTLC cũng đơn giản hơn trong việc chuẩn bị mẫu và đòi hỏi ít dung môi hơn, làm cho nó thân thiện với môi trường hơn. Ngoài ra, HPTLC có thể được sử dụng để phân tích các chất không bay hơi và dễ bị phân hủy nhiệt. Phương pháp này cũng có thể được sử dụng để xác định độ tinh khiết, định lượng hoạt chất và phát hiện các tạp chất. HPTLC là một phương pháp linh hoạt và có thể được điều chỉnh để phù hợp với nhiều ứng dụng khác nhau. Với những ưu điểm vượt trội, HPTLC ngày càng được ứng dụng rộng rãi trong các phòng thí nghiệm kiểm nghiệm dược phẩm. Dẫn chứng: "So sánh với phương pháp định lượng DC theo Dược điển Việt Nam, phương pháp định lượng DC trong thuốc tiêm bằng HPTLC đã xây dựng có ưu điểm là độ chọn lọc tốt, cho phép xác định chính xác hàm lượng hoạt chất chính DC mà không yêu cầu phức tạp về giai đoạn xử lý mẫu trước khi đưa vào phân tích bằng phương pháp HPLC."

III. Phương Pháp Xây Dựng Quy Trình HPTLC Định Lượng Diclofenac

Quy trình xây dựng phương pháp HPTLC để định lượng Diclofenac và Alcol Benzylic bao gồm các bước chính sau: Chuẩn bị mẫu, lựa chọn pha động và pha tĩnh, tối ưu hóa điều kiện sắc ký, thẩm định phương pháp và ứng dụng phương pháp để phân tích mẫu thực tế. Chuẩn bị mẫu bao gồm hòa tan mẫu trong dung môi phù hợp và pha loãng đến nồng độ thích hợp. Lựa chọn pha động và pha tĩnh dựa trên tính chất hóa học của các chất cần phân tích. Tối ưu hóa điều kiện sắc ký bao gồm điều chỉnh thành phần pha động, tốc độ dòng và nhiệt độ để đạt được sự phân tách tốt nhất. Thẩm định phương pháp bao gồm xác định độ chọn lọc, độ tuyến tính, độ chính xác và độ đúng của phương pháp. Sau khi thẩm định, phương pháp có thể được sử dụng để phân tích mẫu thực tế và xác định hàm lượng Diclofenac và Alcol Benzylic. Bài viết sẽ đi sâu vào việc xây dựng quy trình, cách lựa chọn pha động, cách xác định bước sóng tối ưu và thẩm định quy trình phân tích.

3.1. Chi Tiết Các Bước Chuẩn Bị Mẫu cho Phân Tích HPTLC

Quá trình chuẩn bị mẫu đóng vai trò quan trọng trong việc đảm bảo độ chính xác và độ tin cậy của phân tích HPTLC. Đầu tiên, mẫu thuốc tiêm cần được hòa tan hoàn toàn trong một dung môi phù hợp. Dung môi này phải có khả năng hòa tan cả Diclofenac và Alcol Benzylic, đồng thời không gây ảnh hưởng đến quá trình sắc ký. Methanol thường là một lựa chọn tốt vì nó có khả năng hòa tan nhiều loại hợp chất và tương thích với pha tĩnh silica gel trong HPTLC. Sau khi hòa tan, mẫu cần được pha loãng đến nồng độ thích hợp. Nồng độ này phải đủ cao để đảm bảo độ nhạy của phương pháp, nhưng không quá cao để tránh quá tải cột sắc ký. Quá trình pha loãng cần được thực hiện cẩn thận để đảm bảo độ chính xác. Sau khi pha loãng, mẫu nên được lọc qua một bộ lọc có kích thước lỗ nhỏ (ví dụ, 0,45 μm) để loại bỏ các hạt rắn có thể gây tắc nghẽn cột sắc ký hoặc ảnh hưởng đến quá trình phát hiện. Ngoài ra, cần chuẩn bị các dung dịch chuẩn của Diclofenac và Alcol Benzylic với nồng độ đã biết để sử dụng làm chuẩn so sánh trong quá trình định lượng. Các dung dịch chuẩn này phải được chuẩn bị cẩn thận bằng cách sử dụng các chất chuẩn có độ tinh khiết cao và cân chính xác. Dẫn chứng: "Lấy 5 đơn vị chế phẩm thuốc tiêm, trộn đều. Hút chính xác 1,0 ml thuốc tiêm cho vào bình định mức 10 mL. Hòa tan và pha loãng bằng MeOH, định mức đến vạch. Hút chính xác 1,0 ml của bình định mức 10 mL trên cho vào bình định mức 10ml, pha loãng bằng MeOH, định mức đến vạch. Ta được dung dịch thử với nồng độ DC 250 µg/mL."

3.2. Lựa Chọn Pha Động và Pha Tĩnh Tối Ưu cho Tách Chiết Hiệu Quả

Lựa chọn pha động và pha tĩnh là một bước quan trọng trong việc xây dựng một phương pháp HPTLC hiệu quả. Pha tĩnh thường là silica gel, một vật liệu có tính hấp phụ cao và được sử dụng rộng rãi trong sắc ký lớp mỏng. Pha động là một hỗn hợp dung môi có khả năng hòa tan các chất cần phân tích và di chuyển chúng qua pha tĩnh. Thành phần của pha động có thể được điều chỉnh để tối ưu hóa sự phân tách của các chất. Trong trường hợp phân tích Diclofenac và phân tích Alcol Benzylic, một pha động bao gồm n-hexan, chloroform, aceton và acid acetic có thể được sử dụng. Tỷ lệ của các dung môi này có thể được điều chỉnh để đạt được sự phân tách tốt nhất. Ví dụ, tăng tỷ lệ aceton có thể làm tăng sức rửa giải của pha động và làm cho các chất di chuyển nhanh hơn trên lớp sắc ký. Thêm acid acetic có thể giúp cải thiện hình dạng của các pic và giảm sự kéo đuôi. Việc lựa chọn pha động và pha tĩnh cần được thực hiện dựa trên tính chất hóa học của Diclofenac và Alcol Benzylic, cũng như kinh nghiệm và kiến thức về sắc ký lớp mỏng. Dẫn chứng: "Như vậy, sau khi khảo sát 5 pha động thì pha động (E) là n- Hexan: chloroform: aceton: acid acetic (60:60:35:0,75, tt/tt/tt/tt) được lựa chọn do khả năng khai triển tối ưu nhất."

3.3. Tối Ưu Hóa Điều Kiện Sắc Ký Bước Sóng Tốc Độ Dòng Nhiệt Độ

Tối ưu hóa điều kiện sắc ký là một bước quan trọng để đảm bảo sự phân tách tốt nhất của Diclofenac và Alcol Benzylic. Bước sóng phát hiện là một yếu tố quan trọng, vì nó ảnh hưởng đến độ nhạy của phương pháp. Bước sóng nên được lựa chọn sao cho cả Diclofenac và Alcol Benzylic đều có độ hấp thụ cao. Trong nhiều trường hợp, bước sóng 210 nm thường được sử dụng cho HPTLC vì nó có độ hấp thụ tốt cho nhiều loại hợp chất hữu cơ. Tốc độ dòng của pha động cũng có thể ảnh hưởng đến sự phân tách. Tốc độ dòng quá nhanh có thể làm giảm sự phân tách, trong khi tốc độ dòng quá chậm có thể kéo dài thời gian phân tích. Nhiệt độ cũng có thể ảnh hưởng đến sự phân tách, nhưng thường không được kiểm soát trong HPTLC. Các yếu tố khác cần xem xét bao gồm kích thước hạt của pha tĩnh, độ dày của lớp sắc ký và thể tích mẫu được sử dụng. Tất cả các yếu tố này cần được điều chỉnh cẩn thận để đạt được sự phân tách tốt nhất và độ nhạy cao nhất. Dẫn chứng: "Kết quả quét phổ cho thấy DC có khả năng hấp thụ UV với cực đại hấp thụ ở khoảng 280 nm và BA có khả năng hấp thụ UV với cực đại hấp thụ khoảng 210 nm. Ngoài ra, khi tiến hành quét bằng densitometer tại các bước sóng khác như 215 nm, 220 nm, 230 nm đáp ứng của BA trên sắc kí đồ giảm dần, chiều cao pic giảm dần, tại 230 nm BA không hiện pic, không thuận lợi cho việc định lượng BA đồng thời cùng với DC."

IV. Thẩm Định Quy Trình HPTLC Định Lượng Diclofenac Chi Tiết

Thẩm định quy trình là một bước quan trọng để đảm bảo rằng phương pháp HPTLC được sử dụng là đáng tin cậy và phù hợp với mục đích sử dụng. Các thông số thẩm định chính bao gồm độ chọn lọc, độ tuyến tính, độ chính xác, độ đúng và giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ). Độ chọn lọc đảm bảo rằng phương pháp có thể phân biệt giữa Diclofenac, Alcol Benzylic và các thành phần khác trong mẫu. Độ tuyến tính xác định phạm vi nồng độ mà phương pháp cho đáp ứng tuyến tính. Độ chính xác đo lường sự gần gũi giữa các kết quả phân tích lặp lại. Độ đúng đo lường sự gần gũi giữa kết quả phân tích và giá trị thực. LOD và LOQ xác định nồng độ thấp nhất mà phương pháp có thể phát hiện và định lượng một cách đáng tin cậy. Bài viết sẽ đi vào chi tiết về các bước thẩm định quy trình, độ chọn lọc, độ phù hợp của hệ thống,khoảng tuyến tính và độ chính xác.

4.1. Đánh Giá Độ Chọn Lọc của Phương Pháp HPTLC Đã Xây Dựng

Độ chọn lọc là khả năng của phương pháp phân tích để phân biệt giữa chất cần phân tích và các chất khác có thể có trong mẫu. Trong trường hợp phân tích Diclofenac và phân tích Alcol Benzylic, độ chọn lọc đảm bảo rằng phương pháp có thể phân biệt giữa hai chất này và các tá dược khác có trong thuốc tiêm. Để đánh giá độ chọn lọc, cần phân tích các mẫu chuẩn của Diclofenac và Alcol Benzylic riêng biệt và trong hỗn hợp. Sau đó, so sánh sắc ký đồ của các mẫu này để xác định xem có sự trùng lặp giữa các pic hay không. Nếu có sự trùng lặp, cần điều chỉnh điều kiện sắc ký (ví dụ, thay đổi thành phần pha động) để cải thiện sự phân tách. Ngoài ra, cần phân tích các mẫu placebo (chỉ chứa tá dược) để xác định xem có bất kỳ thành phần nào trong tá dược gây nhiễu đến việc phân tích Diclofenac và Alcol Benzylic hay không. Nếu có sự nhiễu, cần thực hiện các biện pháp để loại bỏ hoặc giảm thiểu sự nhiễu này. Dẫn chứng: "+ Sắc ký đồ mẫu placebo thêm chuẩn xuất hiện hai vết chính tương đương về vị trí với vết ở mẫu chuẩn. + Sắc ký đồ của mẫu placebo không thấy xuất hiện vết tương ứng với hai vết chính trong sắc ký đồ của mẫu chuẩn. + Hệ số tinh khiết và hệ số chồng phổ của mẫu placebo thêm chuẩn và mẫu chuẩn đều lớn hơn 0,99. Như vậy, phương pháp HPTLC đã xây dựng đáp ứng được yêu cầu về độ chọn lọc."

4.2. Xác Định Độ Phù Hợp Của Hệ Thống Trong Quy Trình HPTLC

Độ phù hợp của hệ thống là một thông số quan trọng để đảm bảo rằng hệ thống HPTLC đang hoạt động đúng cách và cho kết quả đáng tin cậy. Độ phù hợp của hệ thống được đánh giá bằng cách phân tích lặp lại một dung dịch chuẩn của Diclofenac và Alcol Benzylic và tính toán các thông số thống kê như độ lệch chuẩn tương đối (RSD) của diện tích pic và thời gian lưu. RSD của diện tích pic phải nhỏ hơn một giá trị quy định (ví dụ, 2%) để đảm bảo rằng hệ thống đang cho đáp ứng ổn định. Thời gian lưu cũng phải ổn định trong suốt quá trình phân tích. Nếu độ phù hợp của hệ thống không đạt yêu cầu, cần kiểm tra và điều chỉnh các thông số của hệ thống (ví dụ, thành phần pha động, tốc độ dòng, nhiệt độ) để cải thiện hiệu suất. Độ phù hợp của hệ thống cần được đánh giá thường xuyên để đảm bảo rằng hệ thống HPTLC đang hoạt động đúng cách và cho kết quả đáng tin cậy. Dẫn chứng: "Từ kết quả trên cho thấy diện tích pic và hệ số Rf thu được của 6 lần phân tích mẫu dung dịch hỗn hợp chuẩn DC và BA có giá trị RSD đều nhỏ hơn 2,0%, đạt yêu cầu theo quy định của ICH. Như vậy, hệ thống sắc ký phù hợp cho định lượng DC và BA."

4.3. Đánh Giá Khoảng Tuyến Tính và Độ Chính Xác của Phương Pháp

Khoảng tuyến tính là phạm vi nồng độ mà phương pháp phân tích cho đáp ứng tuyến tính. Độ tuyến tính là một thông số quan trọng để đảm bảo rằng phương pháp có thể được sử dụng để định lượng Diclofenac và Alcol Benzylic một cách chính xác. Để đánh giá độ tuyến tính, cần phân tích một loạt các dung dịch chuẩn của Diclofenac và Alcol Benzylic với nồng độ khác nhau và xây dựng một đường chuẩn bằng cách vẽ đồ thị đáp ứng (ví dụ, diện tích pic) so với nồng độ. Đường chuẩn phải tuyến tính trong một phạm vi nồng độ đủ rộng để bao phủ nồng độ dự kiến của Diclofenac và Alcol Benzylic trong mẫu thực tế. Hệ số tương quan (R2) của đường chuẩn phải lớn hơn một giá trị quy định (ví dụ, 0,99) để đảm bảo rằng độ tuyến tính là tốt. Độ chính xác là khả năng của phương pháp phân tích để cho kết quả gần với giá trị thực. Độ chính xác được đánh giá bằng cách phân tích lặp lại một mẫu chuẩn có nồng độ đã biết và tính toán RSD của các kết quả. RSD phải nhỏ hơn một giá trị quy định (ví dụ, 2%) để đảm bảo rằng phương pháp có độ chính xác tốt. Dẫn chứng: "Kết quả phân tích trên 12 mẫu độc lập trong 2 ngày thu được: • Trung bình hàm lượng so với nhãn của DC 2 ngày (n = 12) là 101,7% RSD là 2,1%. • Trung bình hàm lượng so với nhãn của BA 2 ngày (n = 12) là 100,6% RSD là 1,5%."

V. Ứng Dụng HPTLC Định Lượng Diclofenac Alcol Benzylic Thực Tế

Sau khi được thẩm định, phương pháp HPTLC có thể được ứng dụng để định lượng Diclofenac và Alcol Benzylic trong các mẫu thuốc tiêm thực tế. Quy trình phân tích bao gồm chuẩn bị mẫu, chạy sắc ký lớp mỏng và định lượng các chất bằng cách so sánh với các chuẩn đã biết. Ứng dụng HPTLC có thể giúp kiểm tra chất lượng và đảm bảo an toàn cho các sản phẩm thuốc tiêm. Bài viết sẽ đi vào ứng dụng của HPTLC, kết quả định lượng trên các mẫu thuốc, so sánh với các phương pháp khác và thảo luận về ưu điểm và nhược điểm.

5.1. Quy Trình Phân Tích Mẫu Thuốc Tiêm Bằng Phương Pháp HPTLC

Quy trình phân tích mẫu thuốc tiêm bằng phương pháp HPTLC bao gồm các bước sau: Chuẩn bị mẫu bằng cách hòa tan và pha loãng mẫu đến nồng độ thích hợp. Chấm mẫu và các chuẩn lên bản mỏng sắc ký. Chạy sắc ký lớp mỏng bằng cách sử dụng pha động đã được tối ưu hóa. Phát hiện các chất bằng cách sử dụng đèn UV hoặc thuốc thử phù hợp. Định lượng các chất bằng cách so sánh diện tích pic của mẫu với diện tích pic của các chuẩn đã biết. Sau khi định lượng, kết quả cần được so sánh với các tiêu chuẩn quy định để đánh giá chất lượng của mẫu thuốc tiêm. Nếu kết quả không đạt yêu cầu, cần thực hiện các biện pháp khắc phục để đảm bảo chất lượng sản phẩm. Dẫn chứng: "Các mẫu thử được tiến hành xử lý và sắc ký theo phương pháp đã xây dựng và thẩm định. Mỗi mẫu thử được pha loãng 100 lần. Mỗi mẫu thử tiến hành phân tích 3 mẫu độc lập, lấy kết quả trung bình hàm lượng DC và BA."

5.2. Kết Quả Định Lượng Diclofenac và Alcol Benzylic Trong Mẫu Thuốc

Kết quả định lượng Diclofenac và Alcol Benzylic trong các mẫu thuốc tiêm có thể được sử dụng để đánh giá chất lượng của sản phẩm. Kết quả cần được so sánh với các tiêu chuẩn quy định để xác định xem sản phẩm có đáp ứng yêu cầu hay không. Nếu kết quả không đạt yêu cầu, cần thực hiện các biện pháp khắc phục để đảm bảo chất lượng sản phẩm. Ví dụ, nếu hàm lượng Diclofenac thấp hơn tiêu chuẩn, cần điều chỉnh quy trình sản xuất để tăng hàm lượng hoạt chất. Nếu hàm lượng Alcol Benzylic vượt quá tiêu chuẩn, cần điều chỉnh quy trình sản xuất để giảm hàm lượng chất bảo quản. Kết quả định lượng cũng có thể được sử dụng để theo dõi tính ổn định của sản phẩm theo thời gian. Dẫn chứng: "Hai mẫu thuốc tiêm thu thập được có hàm lượng trung bình là 76,8 ± 1,2 (mg) và 76,6 ± 1,7 (mg) và trung bình hàm lượng so với nhãn (%) lần lượt là 102,4% và 102,1% đều đạt yêu cầu về hàm lượng diclofenac natri theo quy định của DĐVN V trong chuyên luận “Thuốc tiêm diclofenac natri” (đạt 95% - 105% hàm lượng so với nhãn)."

5.3. So Sánh Kết Quả HPTLC Với Các Phương Pháp Định Lượng Khác

Kết quả định lượng Diclofenac và Alcol Benzylic bằng phương pháp HPTLC có thể được so sánh với kết quả thu được từ các phương pháp định lượng khác như HPLC hoặc UV-Vis để đánh giá độ tin cậy của phương pháp HPTLC. Nếu kết quả thu được từ các phương pháp khác nhau tương đồng, điều này cho thấy rằng phương pháp HPTLC là đáng tin cậy. Nếu kết quả khác biệt, cần xem xét các yếu tố có thể gây ra sự khác biệt, ví dụ, sự khác biệt trong quy trình chuẩn bị mẫu, điều kiện sắc ký hoặc phương pháp phát hiện. So sánh kết quả với các phương pháp khác là một cách tốt để đảm bảo tính chính xác và độ tin cậy của phương pháp HPTLC. Đồng thời làm nổi bật những ưu điểm của HPTLC so với các phương pháp khác. Dẫn chứng: "So sánh với phương pháp định lượng DC theo Dược điển Việt Nam, phương pháp định lượng DC trong thuốc tiêm bằng HPTLC đã xây dựng có ưu điểm là độ chọn lọc tốt, cho phép xác định chính xác hàm lượng hoạt chất chính DC mà không yêu cầu phức tạp về giai đoạn xử lý mẫu trước khi đưa vào phân tích bằng phương pháp HPLC."

VI. Kết Luận Triển Vọng Phát Triển Phương Pháp HPTLC

Nghiên cứu đã thành công trong việc xây dựng và thẩm định một phương pháp HPTLC đơn giản, nhanh chóng và hiệu quả để định lượng Diclofenac và Alcol Benzylic trong thuốc tiêm. Phương pháp này có độ chọn lọc, độ tuyến tính, độ chính xác và độ đúng tốt. Bài viết tóm tắt lại các kết quả chính, thảo luận về tiềm năng ứng dụng rộng rãi và đề xuất các hướng nghiên cứu trong tương lai.

6.1. Tóm Tắt Kết Quả Nghiên Cứu và Ưu Điểm của Phương Pháp HPTLC

Nghiên cứu đã chứng minh rằng phương pháp HPTLC có thể được sử dụng để định lượng Diclofenac và Alcol Benzylic trong thuốc tiêm một cách chính xác và đáng tin cậy. Phương pháp này có nhiều ưu điểm so với các phương pháp định lượng khác như HPLC, bao gồm tính đơn giản, chi phí thấp và khả năng phân tích đồng thời nhiều mẫu. Phương pháp cũng có độ chọn lọc tốt, cho phép phân biệt giữa Diclofenac, Alcol Benzylic và các thành phần khác trong mẫu. Độ tuyến tính, độ chính xác và độ đúng của phương pháp cũng đạt yêu cầu theo tiêu chuẩn quốc tế. Với những ưu điểm này, phương pháp HPTLC có thể được ứng dụng rộng rãi trong các phòng thí nghiệm kiểm nghiệm dược phẩm để kiểm tra chất lượng và đảm bảo an toàn cho các sản phẩm thuốc tiêm. Dẫn chứng: "Phương pháp định lượng đã được thẩm định theo ICH. Kết quả cho thấy phương pháp có tính chọn lọc cao, độ đúng đạt yêu cầu và có sự tương quan tuyến tính giữa diện tích pic và khối lượng trong khoảng khảo sát từ 0,9951 - 1,9902µg/vết đối với DC; 1,6 - 3,2µg/vết đối với BA với R2 > 0,99."

6.2. Tiềm Năng Ứng Dụng Rộng Rãi của HPTLC trong Kiểm Nghiệm Dược Phẩm

Phương pháp HPTLC có tiềm năng ứng dụng rộng rãi trong kiểm nghiệm dược phẩm do những ưu điểm vượt trội so với các phương pháp phân tích khác. HPTLC có thể được sử dụng để kiểm tra chất lượng của nhiều loại thuốc khác nhau, bao gồm thuốc tiêm, thuốc viên, thuốc kem và thuốc mỡ. Phương pháp cũng có thể được sử dụng để định lượng các hoạt chất, xác định độ tinh khiết và phát hiện các tạp chất. Ngoài ra, HPTLC có thể được sử dụng để theo dõi tính ổn định của thuốc theo thời gian. Với sự phát triển của công nghệ, HPTLC ngày càng trở nên tự động hóa và hiệu quả hơn, làm cho nó trở thành một công cụ quan trọng trong kiểm nghiệm dược phẩm. Dẫn chứng: "Với nhiều ưu điểm nổi bật như trên, TLC và HPTLC được ứng dụng rộng rãi để phân tích trong ngành dược phẩm, hóa học làm sàng, hóa học pháp y, hóa sinh, mỹ phẩm, phân tích thực phẩm, phân tích môi trường, thực phẩm chức năng thảo dược, thuốc đông y [34]."

6.3. Hướng Nghiên Cứu và Phát Triển Phương Pháp HPTLC trong Tương Lai

Trong tương lai, cần tiếp tục nghiên cứu và phát triển phương pháp HPTLC để mở rộng khả năng ứng dụng và cải thiện hiệu suất. Một số hướng nghiên cứu tiềm năng bao gồm: Phát triển các pha tĩnh mới với độ chọn lọc cao hơn. Tối ưu hóa thành phần pha động để cải thiện sự phân tách. Ứng dụng các kỹ thuật phát hiện mới để tăng độ nhạy. Phát triển các phương pháp tự động hóa để tăng hiệu quả và giảm sai sót. Nghiên cứu cũng cần tập trung vào việc phát triển các phương pháp HPTLC để phân tích các loại thuốc mới và các sản phẩm phức tạp như chiết xuất thảo dược. Ngoài ra, cần tăng cường hợp tác giữa các nhà nghiên cứu và các phòng thí nghiệm kiểm nghiệm dược phẩm để thúc đẩy việc ứng dụng HPTLC vào thực tế. Dẫn chứng: "Mở rộng ứng dụng phương pháp đã xây dựng cho định lượng DC và BA cho nhiều mẫu thử khác trên thị trường đến từ các nhà sản xuất khác nhau."

Trích đoạn nội dung tài liệu

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1. Tổng quan về diclofenac natri 1. Công thức cấu tạo và tính chất hóa lý Công thức hóa học: C14H10Cl2NNaO2 (M= 318,1) [3]. Công thức cấu tạo của diclofenac natri Tên khoa học: Natri [2-[(2,6-diclorophenyl)amino]phenyl] acetate [3].

Tính chất: bột tinh thể không mùi, màu trắng đến trắng nhạt, hơi hút ẩm. Dễ tan trong MeOH, tan trong ethanol 96 %, hơi tan trong nước, khó tan trong aceton. Chảy ở khoảng 280 °C kèm theo phân hủy [3]. Độ ổn định: Diclofenac natri là một dẫn chất của anilin có thể bị oxy hóa, có nhóm phenyl acetat dễ bị thủy phân, đặc biệt dưới tác động của lực cơ học, nhiệt độ, độ ẩm, ánh sáng.

Tuy nhiên, nếu tồn tại ở dạng rắn thì tương đối ổn định [6]. Diclofenac natri có tính acid yếu (pka khoảng 4) và độ hòa tan của nó phụ thuộc vào độ pH của môi trường [29]. Độ tan thay đổi theo pH [28] pH Độ tan(mg/mL) 1,2-3 <0,004 4,0 0,021 5,0 0,086 6,0 0,59 7,0 1,87 7,5 1,69 Diclofenac có sinh khả dụng thấp do độ tan kém, vì vậy dạng dược dụng là muối Na+, K+, diethylamin, N-(2-hydroxyethyl) pyrolidin, các muối này có độ tan tốt và ổn định hơn, trong đó muối diclofenac natri được sử dụng nhiều hơn cả [5]. Liều dùng Diclofenac là thuốc chống viêm không steroid, dẫn xuất của acid phenylacetic.

Thuốc có tác dụng chống viêm, giảm đau và hạ sốt nhanh. Trên thực tế, diclofenac natri thường được chỉ định trong giảm đau cấp tính và chống viêm. Diclofenac natri là một chất ức chế mạnh hoạt tính của cyclooxygenase (COX), ít nhất là hai isoenzym COX-1 và COX-2 để làm giảm tạo thành prostaglandin, prostacyclin, thromboxan là những chất trung gian của viêm. COX-1 có mặt trong các mô cơ thể, điều hòa hoạt động sinh lý hệ thống tiêu hóa, thận và nội mô mạch máu, khi bị ức chế sẽ gây ra các tác dụng bất lợi trên hệ tiêu hóa, thận và tiểu cầu.

COX- 2 có mặt chủ yếu tại các tổ chức viêm, khi bị ức chế sẽ kiểm soát được quá trình viêm mà không ảnh hưởng tới chức năng khác của cơ thể. Tác dụng chống viêm, giảm đau, hạ sốt chủ yếu do ức chế COX-2 [5]. Ức chế COX-1 gây ra các tác dụng phụ ở niêm mạc dạ dày (ức chế tạo mucin là một chất có tác dụng bảo vệ đường tiêu hóa) và kết tập tiểu cầu. Cần phải tính toán liều một cách thận trọng, tùy theo nhu cầu và đáp ứng của từng cá nhân và cần phải dùng liều thấp nhất có tác dụng nhằm hạn chế nguy cơ phản ứng bất lợi và độc tính.

Liều tối đa là 150 mg [5]. Phân loại liều dùng theo chỉ định [5] Chỉ định Liều dùng Viêm cột sống dính khớp Uống 100 - 125 mg/ngày, chia làm nhiều lần Uống 100 - 150 mg/ngày, chia làm nhiều lần Thoái hóa khớp Liều tối đa gel 1% bôi toàn cơ thể là 32g/ngày Đau cấp hay thống kinh nguyên phát Uống 50 mg, 3 lần/ngày Uống 75 - 150 mg/ngày, chia làm 2 - 3 lần Viêm khớp dạng thấp Đặt 75 - 150 mg/ ngày chia làm nhiều lần Đợt cấp viêm khớp, đau lưng cấp, Tiêm bắp 1 lần/ngày ống tiêm 75mg/3ml đau rễ thần kinh, cơn đau sỏi thận 1 giọt/ mắt, 4 lần/ngày, bắt đầu 24 giờ sau phẫu Phẫu thuật đục thủy tinh thể thuật 1. Dược động học Hấp thu: diclofenac natri hấp thu hầu như hoàn toàn qua đường tiêu hóa, thuốc cũng hấp thu qua đường hậu môn và qua da.Thức ăn, thuốc kháng acid làm giảm tốc độ hấp thu của thuốc, nhưng không ảnh hưởng nhiều đến mức độ hấp thu. Nồng độ trong huyết tương giảm đáng kể khi dùng đồng thời với liều điều trị của aspirin.

Không có sự thay đổi về dược động học ở người suy thận [5]. 3 Phân bố: Sau khi uống, thuốc phân bố vào dịch màng hoạt dịch, đạt nồng độ đỉnh khoảng 60 – 70% nồng độ đỉnh trong huyết tương, tuy nhiên sau 3 – 6 giờ, nồng độ ở dịch màng hoạt dịch của thuốc và chất chuyển hóa cao hơn nhiều nồng độ trong huyết tương [5]. Chuyển hóa: thuốc chuyển hóa bước đầu mạnh ở gan, nên khoảng 50 – 60% liều diclofenac natri tới tuần hoàn dưới dạng không đổi [10]. Thải trừ: thuốc bài tiết qua nước tiểu và phân.

Dưới 1% liều dạng không đổi thải trừ vào nước tiểu. Khoảng 60% liều thải trừ vào nước tiểu dưới dạng các chất chuyển hóa, số còn lại thải trừ qua phân. Thanh thải toàn bộ trong huyết tương khoảng 263 ml/phút [5]. Tác dụng không mong muốn Diclofenac dường như tác động có chọn lọc hơn đối với sự ức chế COX-2, nên nó có tăng nguy cơ liên quan đến các biến cố tim mạch và ít nguy cơ xảy ra các biến cố trên đường tiêu hóa hơn [9].

Trên tim mạch: tăng nguy cơ nhồi máu cơ tim, suy tim, đột quỵ và tử vong [13]. Sự ức chế COX-2 làm giảm quá trình tổng hợp prostaglandin-I2 (PGI2), chất có tác dụng bảo vệ tim mạch dưới dạng ngăn ngừa hình thành huyết khối, tăng huyết áp và tạo ra các mảng xơ vữa động mạch. Nguy cơ trầm trọng hơn nếu bệnh nhân có tiền sử bệnh tim mạch và quá liều [9]. Trên đường tiêu hóa: giảm sản xuất chất nhầy bởi các tế bào biểu mô dạ dày, ít tiết bicarbonate hơn và ít thay đổi tế bào biểu mô hơn, tăng nguy cơ tổn thương qua trung gian acid đối với các tế bào biểu mô dạ dày và giảm khả năng tái tạo các vùng bị tổn thương và dẫn đến tổn thương đường tiêu hóa [17].

Trên thận: giảm tưới máu thận và phát triển tổn thương thận cấp tính. Nguy cơ tăng lên ở những bệnh nhân có tiền sử tổn thương thận và giảm áp lực tưới máu [9]. Trên gan: làm tăng nồng độ transaminase ở gan, gây tổn thương gan [9]. Sốc phản vệ: là một phản ứng không phổ biến nhưng vẫn cần lưu ý.

Các triệu chứng có thể bao gồm nổi mề đay, đỏ bừng, thay đổi nhịp tim, co thắt phế quản, phù mạch, hạ huyết áp và những triệu chứng khác [38]. Huyết học: tăng nguy cơ chảy máu có tương quan với việc sử dụng NSAID do tác dụng ức chế kết tập tiểu cầu thông qua ức chế COX-1. Một số trường hợp hiếm gặp, bệnh nhân có thể bị giảm bạch cầu trung tính và thiếu máu bất sản [9]. Da liễu: bôi diclofenac tại chỗ có thể gây kích ứng da nhẹ đến trung bình tại chỗ bôi thuốc [9].

Tổng quan về alcol benzylic 1. Công thức cấu tạo và tính chất hóa lý Công thức hóa học: C7H8O (M= 108,14) [35]. Công thức cấu tạo của alcol benzylic Tên khoa học: phenylmethanol. Tên khác: phenylcarbinol, benzenemethanol [35].

Tính chất: chất lỏng trong suốt, nhờn, mùi nhẹ, dễ chịu [39]. Điểm nóng chảy tại -15oC, điểm sôi tại 205oC [39]. Độ hòa tan: tan trong nước 41050 mg/L ở 25oC [39]. Alcol benzylic hòa tan được trong benzene, MeOH, ether, aceton, chloroform, ethanol.

Phổ UV: đạt cực đại ở 200-210 nm và 240-250 nm và quay trở lại đến đường cơ sở ở bước sóng 280 nm [39]. Ứng dụng Alcol benzylic là một loại alcol thơm, nguyên chất và có hiệu quả chống lại hầu hết các vi khuẩn gram dương, nấm men và nấm mốc nhưng kém hiệu quả hơn đối với vi khuẩn gram âm [35]. Alcol benzylic chủ yếu được sử dụng làm tá dược cho các sản phẩm thuốc tiêm bắp, chẳng hạn như thuốc kháng sinh, thuốc chống viêm hoặc thuốc chống loạn thần và cả các sản phẩm thuốc tiêm tĩnh mạch (thuốc chống ung thư, heparin, thuốc tim mạch…) [16]. Bên cạnh đó, alcol benzylic cũng được dùng trong mỹ phẩm, sản phẩm chống nấm và chống viêm chủ yếu với công dụng bảo quản, ngăn chặn sự phát triển của vi khuẩn, được sử dụng như một chất bảo quản chống lại các vi khuẩn gram dương, nấm mốc, nấm men, mặc dù nó chỉ có khả năng kháng khuẩn nhẹ, pH mà alcol benzylic hoạt động tối ưu là dưới 5 và giảm hoạt động khi pH lớn hơn 8 [35].

Ngoài ra, alcol benzylic được sử dụng làm thành phần tạo hương thơm được sử dụng trong các loại nước hoa dùng trong mỹ phẩm, nước hoa, dầu gội, xà phòng vệ sinh và đồ vệ sinh cá nhân khác cũng như trong các sản phẩm như chất tẩy rửa gia dụng [39]. Bên cạnh đó, alcol benzylic cũng giảm độ nhớt cho các loại sữa rửa mặt, sữa tắm… [31]. 5 Alcol benzylic rất hữu ích được sử dụng như một dung môi hoặc gây tê cục bộ trong lĩnh vực y tế. Alcol benzylic trong dược phẩm được sử dụng như gây tê cục bộ khi sử dụng nồng độ 4% [18].

Độc tính Mặc dù được sử dụng rộng rãi nhưng alcol benzylic cần được xử lý cẩn thận do độc tính tiềm ẩn ở nồng độ cao. Sản phẩm oxy hóa độc hại chính là benzaldehyde, xảy ra trong quá trình oxy hóa khi bảo quản lâu dài hoặc quá trình khử trùng bằng nhiệt các dạng thuốc tiêm chứa alcol benzylic [23]. Ngoài ra, alcol benzylic có thể bị oxy hóa thành acid benzoic, liên hợp với glycerin trong gan và bài tiết qua nước tiểu, tuy nhiên phản ứng liên hợp bị hạn chế ở trẻ nhỏ dẫn đến lượng lớn alcol benzylic sẽ bị tích tụ trong máu và gây rối loạn trao đổi chất ở trẻ [11]. Alcol benzylic có mặt như một tá dược, nhưng điều quan trọng là nồng độ của nó không vượt quá giá trị giới hạn cho từng loại công thức, vì nó có thể gây ra các hội chứng ngộ độc gây tử vong, dị ứng và các tác dụng không mong muốn trên hệ thần kinh [43].

Ngộ độc alcol benzylic biểu hiện điển hình là suy thoái thần kinh dần dần, nhiễm toan chuyển hóa nghiêm trọng, khó thở, giảm tiểu cầu, suy gan và suy thận, hạ huyết áp, trụy tim mạch và tử vong [43]. Phản ứng quá mẫn có thể xảy ra sau khi tiếp xúc qua đường tiêm hoặc qua da với alcol benzylic. Các phản ứng cấp tính bao gồm nổi mề đay, ban đỏ, phù nề, mệt mỏi, buồn nôn, phù mạch, phát ban và sốt [32]. Chóng mặt.

Đau đầu khi hít phải và khi nuốt phải xuất hiện đau bụng, tiêu chảy, buồn nôn, nôn mửa [32]. Tăng cường đào thải: chạy thận nhân tạo có thể tăng cường đào thải alcol benzylic và các chất chuyển hóa của nó và cũng hữu ích để giúp điều chỉnh tình trạng nhiễm toan chuyển hóa nghiêm trọng [32]. Phương pháp điều trị chính đối với ngộ độc alcol benzylic là ngừng tiếp xúc và điều trị triệu chứng [32]. Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước 6 Bảng 1.

Một số phương pháp định lượng diclofenac natri và alcol benzylic. Phương pháp định lượng hợp Điều kiện sắc ký Kết quả chất [TLTK] Pha tĩnh: TLC silicagel 60 F254 Rf= 0,51 Định lượng aluminim LOD: 4 µmol/L DC bằng Pha động: Toluen: ethyl acetat: Khoảng tuyến tính 5-80 µg/ mL.