Đánh giá một số đặc tính sinh học của virus cường độc dịch tả vịt VG-04 sau khi bảo quản

Luận văn thạc sĩ vnua đánh giá đặc tính sinh học của virus cường độc dịch tả vịt vg 04 sau bảo quản, cung cấp thông tin hữu ích cho nghiên cứu.

• Tác giả: Vũ Thị Ngọc
• Người hướng dẫn: PGS. Nguyễn Bá Hiên
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Thú Y
• Đề tài: Đánh giá một số đặc tính sinh học của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG – 04 sau bảo quản
• Loại tài liệu: Luận văn
• Năm xuất bản: 2016
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CAM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• MỤC LỤC
• DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT
• DANH MỤC BẢNG
• DANH MỤC HÌNH
• TRÍCH YẾU LUẬN VĂN
• 1. TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI
• 2. MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU
• 3. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 3.1. GIỚI THIỆU VỀ BỆNH DỊCH TẢ VỊT VÀ VIRUS GÂY BỆNH DỊCH TẢ VỊT
• 3.1.1. Lịch sử và phân bố bệnh
• 3.1.2. Truyền nhiễm học
• 3.1.3. Triệu chứng và bệnh tích
• 3.1.4. Biện pháp can thiệp và phòng bệnh dịch tả vịt
• 3.2. Tình hình nghiên cứu về bệnh dịch tả vịt
• 3.2.1. Tình hình nghiên cứu về bệnh dịch tả vịt tại Việt Nam
• 3.2.2. Những nghiên cứu về bệnh dịch tả vịt ở nước ngoài
• 3.3. Virus gây bệnh dịch tả vịt
• 3.3.1. Hình thái và kích thước
• 3.3.2. Sức đề kháng
• 3.3.3. Đặc tính nuôi cấy
• 3.4. Miễn dịch chống virus dịch tả vịt
• 3.4.1. Đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu
• 3.4.2. Đáp ứng miễn dịch đặc hiệu
• 3.4.3. Độ dài miễn dịch
• 4. VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 4.1. Địa điểm và thời gian nghiên cứu
• 4.2. Đối tượng và vật liệu nghiên cứu
• 4.3. Nội dung nghiên cứu
• 4.3.1. Kiểm tra một số đặc tính sinh học của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG - 04 được lưu giữ ở dạng nước trứng và bệnh phẩm ở -860C sau 10 năm
• 4.3.2. Nghiên cứu một số đặc tính sinh học phân tử của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG – 04
• 4.4. Phương pháp nghiên cứu
• 4.4.1. Phương pháp xác định khả năng thích ứng và ổn định của chủng virus
• 4.4.2. Phương pháp xác định chỉ số ELD50 (liều gây chết 50% phôi) của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG - 04
• 4.4.3. Phương pháp xác định chỉ số EID50 (liều gây nhiễm 50% phôi) của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG - 04
• 4.4.4. Phương pháp xác định chỉ số LD50 (liều gây chết 50% động vật thí nghiệm) trên vịt của chủng VG - 04
• 4.4.5. Nghiên cứu biến đổi bệnh lý trên vịt do chủng virus cường độc dịch tả
• 4.4.6. Phương pháp tách chiết DNA tổng số của virus
• 4.4.7. Phản ứng PCR để khuếch đại đoạn gene US7
• 4.4.8. Giải trình tự gene và xây dựng cây phả hệ
• 4.4.9. Phương pháp xử lý số liệu
• 5. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 5.1. Kết quả kiễm tra một số đặc tính sinh học của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG – 04 sau bảo quản
• 5.2. Kết quả kiểm tra khả năng thích ứng và ổn định của chủng virus dịch tả vịt cường độc VG-04 trên phôi vịt
• 5.3. Kết quả đánh giá chỉ số ELD50 của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG – 04 sau bảo quản
• 5.4. Kết quả đánh giá chỉ số EID50 của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG – 04 sau bảo quản
• 5.5. Kết quả đánh giá chỉ số LD50 của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG – 04 sau bảo quản
• 5.6. Kết quả nghiên cứu biến đổi bệnh lý trên vịt do virus cường độc dịch tả vịt chủng VG – 04 gây ra
• 5.7. Kết quả nghiên cứu một số đặc điểm sinh học phân tử của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG-04
• 5.8. Kết quả khuếch đại trình tự đoạn gene US7
• 5.9. Kết quả phân tích trình tự gene US7
• 5.10. Kết quả phân tích cây phả hệ (phylogenetic tree) dựa trên trình tự vùng
• 6. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng quan về virus dịch tả vịt VG 04 và đặc tính sinh học

Virus dịch tả vịt VG-04 là một trong những chủng virus gây bệnh dịch tả vịt nghiêm trọng nhất. Đặc tính sinh học của virus này rất quan trọng trong việc phát triển các biện pháp phòng ngừa và điều trị. Nghiên cứu về virus VG-04 giúp hiểu rõ hơn về khả năng lây lan và mức độ độc lực của nó.

1.1. Đặc điểm sinh học của virus dịch tả vịt VG 04

Virus VG-04 thuộc họ Herpesviridae, có khả năng gây bệnh cao cho vịt. Đặc điểm sinh học của virus này bao gồm khả năng nhân lên trong tế bào, gây ra các triệu chứng lâm sàng nghiêm trọng và tỷ lệ tử vong cao.

1.2. Tầm quan trọng của việc bảo quản virus VG 04

Việc bảo quản virus VG-04 trong điều kiện tối ưu là rất cần thiết để duy trì tính ổn định của các đặc tính sinh học. Nếu không được bảo quản đúng cách, virus có thể thay đổi độc lực và tính kháng nguyên.

II. Thách thức trong việc bảo quản virus dịch tả vịt VG 04

Bảo quản virus dịch tả vịt VG-04 gặp nhiều thách thức do điều kiện môi trường và phương pháp lưu trữ. Việc duy trì tính ổn định của virus trong thời gian dài là một vấn đề quan trọng trong nghiên cứu và ứng dụng thực tiễn.

2.1. Các yếu tố ảnh hưởng đến sự ổn định của virus

Nhiệt độ, độ ẩm và thời gian bảo quản là những yếu tố chính ảnh hưởng đến sự ổn định của virus VG-04. Việc kiểm soát các yếu tố này là rất quan trọng để đảm bảo virus không bị biến đổi.

2.2. Phương pháp bảo quản virus hiệu quả

Các phương pháp bảo quản virus như đông lạnh ở nhiệt độ -860C đã được chứng minh là hiệu quả trong việc duy trì tính sinh học của virus VG-04. Nghiên cứu cho thấy virus vẫn giữ được khả năng gây bệnh sau thời gian bảo quản dài.

III. Phương pháp nghiên cứu đặc tính sinh học virus VG 04

Nghiên cứu đặc tính sinh học của virus VG-04 được thực hiện thông qua nhiều phương pháp khác nhau. Các chỉ số như ELD50, EID50 và LD50 được xác định để đánh giá mức độ độc lực và khả năng gây bệnh của virus.

3.1. Phương pháp xác định ELD50 và EID50

Phương pháp xác định ELD50 và EID50 được thực hiện bằng cách tiêm virus vào phôi vịt và theo dõi tỷ lệ tử vong. Kết quả cho thấy virus VG-04 có khả năng gây chết cao cho phôi vịt.

3.2. Phương pháp nghiên cứu LD50 trên vịt

LD50 được xác định bằng cách tiêm virus vào vịt và theo dõi triệu chứng lâm sàng. Kết quả cho thấy virus VG-04 có độc lực mạnh, gây ra các triệu chứng nghiêm trọng và tỷ lệ tử vong cao.

IV. Kết quả nghiên cứu đặc tính sinh học virus VG 04 sau bảo quản

Kết quả nghiên cứu cho thấy virus VG-04 vẫn giữ được khả năng gây bệnh sau thời gian bảo quản. Các chỉ số ELD50 và EID50 cho thấy virus vẫn có khả năng nhân lên và gây chết phôi vịt.

4.1. Đánh giá khả năng thích ứng của virus VG 04

Virus VG-04 cho thấy khả năng thích ứng tốt khi được bảo quản ở nhiệt độ thấp. Kết quả cho thấy virus vẫn có thể nhân lên hiệu quả trong điều kiện bảo quản.

4.2. Phân tích trình tự gene US7 của virus VG 04

Phân tích trình tự gene US7 cho thấy virus VG-04 có mức độ tương đồng cao với các chủng virus dịch tả vịt khác. Điều này cho thấy virus vẫn giữ được tính ổn định về mặt di truyền sau thời gian bảo quản.

V. Ứng dụng thực tiễn của nghiên cứu virus dịch tả vịt VG 04

Nghiên cứu về virus VG-04 có nhiều ứng dụng thực tiễn trong việc phát triển vaccine và các biện pháp phòng ngừa bệnh dịch tả vịt. Kết quả nghiên cứu sẽ giúp cải thiện hiệu quả phòng chống dịch bệnh trong chăn nuôi.

5.1. Phát triển vaccine từ virus VG 04

Virus VG-04 có thể được sử dụng để phát triển vaccine hiệu quả cho vịt. Việc sử dụng vaccine từ virus cường độc giúp tăng cường khả năng miễn dịch cho đàn vịt.

5.2. Các biện pháp phòng ngừa bệnh dịch tả vịt

Nghiên cứu về virus VG-04 cung cấp thông tin quan trọng để xây dựng các biện pháp phòng ngừa hiệu quả. Việc tiêm phòng và quản lý chăn nuôi hợp lý sẽ giúp giảm thiểu thiệt hại do dịch bệnh.

VI. Kết luận và triển vọng nghiên cứu virus dịch tả vịt VG 04

Kết luận từ nghiên cứu cho thấy virus VG-04 vẫn giữ được tính ổn định về đặc tính sinh học sau thời gian bảo quản. Nghiên cứu này mở ra triển vọng cho việc bảo tồn và phát triển các biện pháp phòng ngừa bệnh dịch tả vịt trong tương lai.

6.1. Tầm quan trọng của việc bảo tồn virus VG 04

Bảo tồn virus VG-04 là rất cần thiết để phục vụ cho nghiên cứu và phát triển vaccine. Việc duy trì tính ổn định của virus sẽ giúp nâng cao hiệu quả phòng chống dịch bệnh.

6.2. Hướng nghiên cứu trong tương lai

Nghiên cứu trong tương lai cần tập trung vào việc phát triển các phương pháp bảo quản hiệu quả hơn và nghiên cứu sâu hơn về đặc tính sinh học của virus VG-04 để phục vụ cho công tác phòng chống dịch bệnh.

Trích đoạn nội dung tài liệu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM VŨ THỊ NGỌC ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA CHỦNG VIRUS CƯỜNG ĐỘC DỊCH TẢ VỊT VG – 04 SAU BẢO QUẢN Chuyên ngành: Thú Y Mã số: 60 64 01 01 Người hướng dẫn khoa học: PGS. Nguyễn Bá Hiên NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2016 LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các kết quả nghiên cứu được trình bày trong luận văn là trung thực, khách quan và chưa từng dùng để bảo vệ lấy bất kỳ học vị nào. Tôi xin cam đoan rằng mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn đã được cám ơn, các thông tin trích dẫn trong luận văn này đều được chỉ rõ nguồn gốc. Hà Nội, ngày… tháng 12 năm 2016 Tác giả luận văn Vũ Thị Ngọc i LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn, tôi đã nhận được sự hướng dẫn, chỉ bảo tận tình của các thầy cô giáo, sự giúp đỡ, động viên của bạn bè, đồng nghiệp và gia đình.

Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tôi được bày tỏ lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc đến PGS. Nguyễn Bá Hiên đã tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Vi sinh vật – Truyền nhiễm, Khoa Thú y - Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã tận tình giúp đỡ tôi trong quá trình học tập, thực hiện đề tài và hoàn thành luận văn. Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp đã tạo mọi điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi về mọi mặt, động viên khuyến khích tôi hoàn thành luận văn.

Hà Nội, ngày. Tác giả luận văn Vũ Thị Ngọc ii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] MỤC LỤC Lời cam đoan. ii Mục lục. iii Danh mục chữ viết tắt.

vi Danh mục bảng. vii Danh mục hình. viii Danh mục hình. viii Trích yếu luận văn.

ix Thesis abstract. Tính cấp thiết của đề tài. Mục tiêu nghiên cứu. Tổng quan tài liệu.

Giới thiệu về bệnh dịch tả vịt và virus gây bệnh dịch tả vịt. Lịch sử và phân bố bệnh. Truyền nhiễm học. Triệu chứng và bệnh tích.

Biện pháp can thiệp và phòng bệnh dịch tả vịt. Tình hình nghiên cứu về bệnh dịch tả vịt. Tình hình nghiên cứu về bệnh dịch tả vịt tại Việt Nam. Những nghiên cứu về bệnh dịch tả vịt ở nước ngoài.

Virus gây bệnh dịch tả vịt. Hình thái và kích thước. Sức đề kháng. Đặc tính nuôi cấy.

Miễn dịch chống virus dịch tả vịt. Đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu .22 iii LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Đáp ứng miễn dịch đặc hiệu. Độ dài miễn dịch.

Vật liệu, nội dung và phương pháp nghiên cứu. Địa điểm và thời gian nghiên cứu. Đối tượng và vật liệu nghiên cứu. Nội dung nghiên cứu.

Kiểm tra một số đặc tính sinh học của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG - 04 được lưu giữ ở dạng nước trứng và bệnh phẩm ở -860C sau 10 năm. Nghiên cứu một số đặc tính sinh học phân tử của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG – 04. Phương pháp nghiên cứu. Phương pháp xác định khả năng thích ứng và ổn định của chủng virus.

Phương pháp xác định chỉ số ELD50 (liều gây chết 50% phôi) của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG - 04. Phương pháp xác định chỉ số EID50 (liều gây nhiễm 50% phôi) của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG - 04. Phương pháp xác định chỉ số LD50 (liều gây chết 50% động vật thí nghiệm) trên vịt của chủng VG - 04. Nghiên cứu biến đổi bệnh lý trên vịt do chủng virus cường độc dịch tả.

Phương pháp tách chiết DNA tổng số của virus. Phản ứng PCR để khuếch đại đoạn gene US7. Giải trình tự gene và xây dựng cây phả hệ. Phương pháp xử lý số liệu.

Kết quả và thảo luận. Kết quả kiễm tra một số đặc tính sinh học của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG – 04 sau bảo quản. Kết quả kiểm tra khả năng thích ứng và ổn định của chủng virus dịch tả vịt cường độc VG-04 trên phôi vịt. Kết quả đánh giá chỉ số ELD50 của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG – 04 sau bảo quản.

Kết quả đánh giá chỉ số EID50 của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG – 04 sau bảo quản .46 iv LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Kết quả đánh giá chỉ số LD50 của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG – 04 sau bảo quản. Kết quả nghiên cứu biến đổi bệnh lý trên vịt do virus cường độc dịch tả vịt chủng VG – 04 gây ra. Kết quả nghiên cứu một số đặc điểm sinh học phân tử của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG-04.

Kết quả khuếch đại trình tự đoạn gene US7. Kết quả phân tích trình tự gene US7. Kết quả phân tích cây phả hệ (phylogenetic tree) dựa trên trình tự vùng. Kết luận và đề nghị .61 Tài liệu tham khảo .63 v LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT bp : Base pair CPE : Cytopathogenic effect Cs : cộng sự DEF : Duck Embryo Fibroblast DEV : Duck enteritis virus DNA : Deoxy ribonucleic acid EID50 : 50 percent Embryo Infectious Dose ELD50 : 50 percent Embryo Lethal Dose FAO : Food and Agriculture Organization Kb : Kilo base LD50 : 50 percent Lethal Dose MEM : Minimum essential medium NI : Neutralization Index OIE : World Organisation for Animal Health P : page PBS : Phosphate Buffered Saline PCR : Polymerase chain reaction RT-PCR : Reverse Transcription – Polymerase chain reaction SN : Serum Neutralization Tr : trang US : Unique Short VN : Virus Neutralization VSV-TN : Vi sinh vật - Truyền nhiễm vi LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC BẢNG Bảng 3.

Trình tự các cặp mồi được sử dụng trong nghiên cứu. Kết quả cấy truyền chủng virus dịch tả vịt cường độc VG – 04 trên phôi vịt. Kết qua kiểm tra bệnh tích đại thể trên phôi vịt sau khi gây nhiễm. Kết qua kiểm tra bệnh tích đại thể trên phôi vịt sau khi gây nhiễm virus cường.

Kết quả xác định chỉ số ELD50 của chủng virus cường độc dịch tả vịt. Kết quả xác định chỉ số ELD50 của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG - 04 sau bảo quản ở dạng nước trứng. Chỉ số ELD50 của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG – 04 trước và sau khi bảo quản. Kết quả xác định chỉ số EID50 của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG - 04 sau bảo quản ở dạng bệnh phẩm.

Kết quả xác định chỉ số EID50 của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG – 04 sau bảo quản ở dạng nước trứng. Chỉ số EID50 của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG – 04 trước và sau khi bảo quản. Kết quả xác định chỉ số LD50 của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG – 04 sau bảo quản ở dạng bệnh phẩm. Kết quả xác định chỉ số LD50 của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG - 04 sau bảo quản ở dạng nước trứng.

Chỉ số LD50 của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG – 04 trước và sau khi bảo quản. Mức độ tương đồng về trình tự nucleotide vùng gene US7 giữa chủng virus dịch tả vịt cường độc VG- 04 trong nghiên cứu này với các chủng virus dịch tả vịt tham chiếu khác trên thế giới .58 vii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] DANH MỤC HÌNH Hình 2. Các giai đoạn của phản ứng PCR. Hệ gen của virus dich tả vịt.

Phôi vịt bị nhiễm virus dịch tả vịt (bên trái) xuất huyết da. Vịt ủ rũ, bỏ ăn, khó thở, liệt chân. Vịt sưng mặt, chảy nước mắt, nước mũi. Phân loãng, màu trắng xanh.

Xuất huyết thực quản, khí quản. Gan xuất huyết và hoại tử. Ruột xuất huyết hình vòng nhẫn. Dạ dày cơ và dạ dày tuyến xuất huyết.

Gan thoái hóa mỡ (HE40X). Sung huyết biểu mô khí quản và bong tróc (HE40X). Tế bào biểu mô khí quản bong tróc (HE10X). Xuất huyết ở hạ niêm mạc khí quản (HE40X).

Kết quả kiểm tra sản phảm PCR trên gel Agarose. So sánh trình tự vùng gene US7 giữa chủng virus cường độc dịch tả vịt VG - 04 trong nghiên cứu này với các chủng virus dịch tả vịt tham chiếu khác trên thế giới. Mối quan hệ di truyền giữa chủng virus dịch tả vịt cường độc VG-04 trong nghiên cứu này với các chủng virus dịch tả vịt tham chiếu khác trên thế giới dựa trên trình tự gene US7.60 viii LUAN VAN CHAT LUONG download : add [e-mail] TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Vũ Thị Ngọc Tên Luận văn: “Đánh giá một số đặc tính sinh học của chủng virus cường độc dịch tả vịt VG – 04 sau bảo quản”. Ngành: Thú Y Mã số: 60 64 01 01 Tên cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Nghiên cứu này nhằm đánh giá được một số đặc tính sinh học và sinh học phân tử của chủng virus dịch tả vịt cường độc VG – 04 sau thời gian bảo quản ở các dạng lưu trữ khác nhau.

Phương pháp nghiên cứu Trong nghiên cứu này chủng virus cường độc dịch tả vịt VG-04 đã được khảo sát về một số đặc tính sinh học và sinh học phân tử. Khả năng thích ứng và ổn định khi truyền đời qua phôi vịt của chủng virus cường độc VG - 04 được đánh giá bằng phương pháp tiêm truyền trên trứng vịt có phôi 13 ngày tuổi. Các chỉ số như liều virus gây chết 50% phôi trứng (ELD50), liều virus gây nhiễm 50% phôi trứng (EID50) và liều gây chết 50% động vật thí nghiệm (LD50) được xác định theo phương pháp của Reed và Muench (1938). DNA tổng số của virus được tách chiết rồi bổ sung trực tiếp vào ống phản ứng PCR sử dụng kit AccuPower PCR PreMix (BIONEER).

Kit này chứa DNA taq- polymerase và các thành phần cần thiết cho quá trình khuếch đại DNA. Sản phẩm PCR sẽ được kiểm tra trên gel agarose và được gửi sang công ty Macrogen của Hàn Quốc để giải trình tự gene.