Luận Văn Thạc Sĩ: Phân Lập Và Tuyển Chọn Chủng Bacillus Thuringiensis Diệt Sâu Hại Rau Tại Thái ...

• Tác giả: Hoàng Văn Chuyền
• Người hướng dẫn: Nguyễn Quang Tuyên
• Trường học: Đại học Thái Nguyên
• Chuyên ngành: Công nghệ sinh học
• Đề tài: Phân Lập, Tuyển Chọn Một Số Chủng Bacillus Thuringiensis Có Khả Năng Diệt Sâu Hại Rau Tại Thái Nguyên
• Loại tài liệu: khóa luận tốt nghiệp
• Năm xuất bản: 2015
• Địa điểm: Thái Nguyên

Mục lục chi tiết

• LỜI CẢM ƠN
• DANH MỤC BẢNG
• DANH MỤC HÌNH
• DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT
• 1. PHẦN I: MỞ ĐẦU
• 1.1. Đặt vấn đề
• 1.2. Mục đích nghiên cứu
• 1.3. Mục tiêu nghiên cứu
• 1.4. Ý nghĩa của đề tài
• 1.4.1. Ý nghĩa trong khoa học
• 1.4.2. Ý nghĩa thực tiễn
• 2. PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 2.1. Đại cương về Bacillus thuringiensis
• 2.2. Đặc điểm sinh lý của Bt
• 2.3. Đặc điểm sinh hoá của Bt
• 2.4. Đặc điểm phân loại của Bt
• 2.5. Phân loại gene độc tố của Bt
• 2.6. Các loại độc tố của Bt
• 2.6.1. Ngoại độc tố α
• 2.6.2. Ngoại độc tố β
• 2.6.3. Ngoại độc tố γ
• 2.6.4. Nội độc tố δ
• 2.7. Cơ chế tác động của protein tinh thể lên côn trùng
• 2.8. Các yếu tố ảnh hưởng tới quá trình hình thành bào tử và tinh thể độc
• 3. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 3.1. Đối tượng, vật liệu và phạm vi nghiên cứu
• 3.2. Vật liệu hóa chất và dụng cụ nghiên cứu
• 3.3. Phạm vi nghiên cứu
• 3.4. Địa điểm và thời gian nghiên cứu
• 3.5. Nội dung nghiên cứu
• 3.6. Các phương pháp tiến hành thí nghiệm
• 3.6.1. Phương pháp phân lập vi khuẩn Bt
• 3.6.2. Phương pháp xác định đặc tính sinh lý và sinh hóa của các chủng vi khuẩn Bacillus thuringiensis phân lập được
• 3.6.3. Phương pháp xử lý số liệu
• 4. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
• 4.1. Kết quả phân lập Bacillus thuringiensis từ các mẫu
• 4.2. Kết quả xác định đặc tính sinh hóa của vi khuẩn Bacillus thuringiensis phân lập được
• 4.3. Kết quả thử nghiệm khả năng di động
• 4.4. Kết quả thử phản ứng catalaza
• 4.5. Kết quả thử phản ứng Voges – Proskauer (V – P)
• 4.6. Xác định hoạt tính diệt sâu của các chủng vi khuẩn có tinh thể độc
• 4.7. Kết quả xác định số lượng bào tử trong 24h nuôi cấy
• 4.8. Kết quả đánh giá hoạt lực diệt sâu
• KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Mục đích và ý nghĩa của nghiên cứu

Nghiên cứu Phân lập và tuyển chọn chủng Bacillus Thuringiensis diệt sâu hại rau tại Thái Nguyên nhằm mục đích tìm ra các chủng vi khuẩn có khả năng tiêu diệt sâu tơ (Plutella xylostella), một loại sâu hại phổ biến trên rau. Bacillus Thuringiensis (Bt) được biết đến với khả năng sản xuất protein tinh thể độc, có hiệu quả cao trong việc kiểm soát sâu bệnh mà không gây hại đến môi trường. Nghiên cứu này có ý nghĩa khoa học trong việc đánh giá sự đa dạng của các chủng Bt tại Thái Nguyên và phân loại các chủng có hoạt lực diệt sâu cao. Về mặt thực tiễn, nghiên cứu góp phần phát triển các chế phẩm sinh học thân thiện với môi trường, giảm thiểu việc sử dụng thuốc trừ sâu hóa học.

1.1. Mục tiêu nghiên cứu

Mục tiêu chính của nghiên cứu là tuyển chọn 1-2 chủng Bacillus Thuringiensis có hoạt lực diệt sâu cao nhất từ các chủng vi khuẩn sinh tinh thể độc được phân lập. Điều này giúp tạo ra các chế phẩm sinh học hiệu quả, góp phần bảo vệ cây trồng và môi trường.

1.2. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn

Nghiên cứu này không chỉ đánh giá sự đa dạng của các chủng Bt mà còn xác định các đặc điểm hình thái và sinh học của chúng. Điều này có ý nghĩa quan trọng trong việc bảo tồn nguồn gen quý và phát triển các ứng dụng trong nông nghiệp bền vững.

II. Tổng quan về Bacillus Thuringiensis

Bacillus Thuringiensis (Bt) là vi khuẩn Gram dương, có khả năng sinh bào tử và tinh thể độc protein, có hiệu quả cao trong việc diệt côn trùng. Bt được nghiên cứu rộng rãi do tính đặc hiệu và an toàn với môi trường. Các chủng Bt có thể phân lập từ đất, nước và các mẫu thực vật. Chúng có khả năng di động nhờ tiêm mao và hình thành khuẩn lạc màu trắng sữa, bề mặt xù xì. Bt sinh trưởng tốt ở nhiệt độ 28-32°C và pH trung tính.

2.1. Đặc điểm sinh lý và sinh hóa

Bt là vi khuẩn hiếu khí, có khả năng thủy phân tinh bột và khử nitrate thành nitrite. Chúng không lên men sinh axit trong môi trường chứa arabinose, xylose, mannitol nhưng tạo axit trong môi trường glucose. Bt cũng có khả năng phát triển trong môi trường chứa 7% NaCl và pH 5.7.

2.2. Phân loại gene độc tố

Các gene độc tố của Bt bao gồm cry, cyt, và vip, mã hóa các protein tinh thể độc. Gene cry là quan trọng nhất, mã hóa các protein có tính đặc hiệu cao với côn trùng. Các gene này thường nằm trên plasmid và có khả năng diệt côn trùng thuộc bộ cánh vảy, hai cánh và cánh cứng.

III. Phương pháp nghiên cứu

Nghiên cứu sử dụng các phương pháp phân lập vi khuẩn Bt từ các mẫu đất tại Thái Nguyên. Các chủng được tuyển chọn dựa trên khả năng sinh tinh thể độc và hoạt lực diệt sâu. Các đặc tính sinh lý và sinh hóa của các chủng được xác định thông qua các thí nghiệm như phản ứng catalase, Voges-Proskauer, và khả năng di động. Hoạt lực diệt sâu được đánh giá thông qua thử nghiệm trên sâu tơ.

3.1. Phân lập và tuyển chọn chủng Bt

Các mẫu đất được thu thập và nuôi cấy trên môi trường thạch để phân lập các chủng Bt. Các chủng có khả năng sinh tinh thể độc được tuyển chọn và đánh giá hoạt lực diệt sâu.

3.2. Đánh giá hoạt lực diệt sâu

Hoạt lực diệt sâu của các chủng Bt được đánh giá thông qua thử nghiệm trên sâu tơ. Các chủng có tỷ lệ diệt sâu cao nhất được lựa chọn để phát triển thành chế phẩm sinh học.

IV. Kết quả và ứng dụng

Nghiên cứu đã phân lập được một số chủng Bacillus Thuringiensis có hoạt lực diệt sâu cao, đặc biệt là chủng C6 và C16. Các chủng này có tiềm năng ứng dụng trong sản xuất chế phẩm sinh học để kiểm soát sâu hại rau. Kết quả nghiên cứu góp phần giảm thiểu việc sử dụng thuốc trừ sâu hóa học, bảo vệ môi trường và sức khỏe cộng đồng.

4.1. Kết quả phân lập và tuyển chọn

Các chủng Bt được phân lập từ các mẫu đất tại Thái Nguyên, trong đó chủng C6 và C16 thể hiện hoạt lực diệt sâu cao nhất. Các chủng này được đánh giá dựa trên khả năng sinh tinh thể độc và hiệu quả diệt sâu tơ.

4.2. Ứng dụng thực tiễn

Các chủng Bt được tuyển chọn có tiềm năng ứng dụng trong sản xuất chế phẩm sinh học, giúp kiểm soát sâu hại rau một cách hiệu quả và an toàn. Điều này góp phần phát triển nông nghiệp bền vững tại Thái Nguyên.