BOÄ GIAÙO DUÏC VAØ ÑAØO TAÏO TRÖÔØNG ÑAÏI HOÏC MÔÛ – BAÙN COÂNG THAØNH PHOÁ HOÀ CHÍ MINH KHOA COÂNG NGHEÄ SINH HOÏC Ñeà taøi: NHAÂN GIOÁNG VOÂ TÍNH IN VITRO LAN DENDROBIUM SP. VAØ KHAÛO SAÙT SÖÏ THAØNH LAÄP CUÏM CHOÀI TREÂN MOÂI TRÖÔØNG LOÛNG GIAÙ THEÅ CAÀU GIAÁY LOÏC LUAÄN VAÊN TOÁT NGHIEÄP CÖÛ NHAÂN KHOA HOÏC CHUYEÂN NGAØNH CNSH THÖÏC VAÄT GIAÙO VIEÂN HÖÔÙNG DAÃN : Th. TRAÀN TRUNG HIEÁU SINH VIEÂN THÖÏC HIEÄN : NGUYEÃN QUOÁC PHONG MSSV : 30000295 KHOÙA HOÏC : 2000 – 2004 Thaønh phoá Hoà Chí Minh, thaùng 11/2004 Khoùa luaän toát nghieäp 2004 LÔØI CAÙM ÔN Sau thôøi gian hoïc taäp vaø reøn luîeân taïi tröôøng Ñaïi Hoïc Môû Baùn Coâng thaønh Phoá Hoà Chí Minh. Ñeán nay toâi ñaõ hoaøn thaønh tröông trình hoïc vaø luaän vaên toát nghieäp.
Toâi xin chaân thaønh caûm ôn Ban giaùm hieäu tröôøng Ñaïi Hoïc Môû Baùn Coâng. Xin chaân thaønh caûm ôn quyù thaày coâ khoa Coâng Ngheä Sinh Hoïc tröôøng Ñaïi Hoïc Môû Baùn Coâng ñaõ taän tình höôùng daãn toâi trong suoát khoaù hoïc 2000 – 2004. Xin caûm ôn Thaïc só Nguyeãn Thanh Mai vaø caùc caùn boä, nhaân vieân phoøng thí nghieäm thuoäc khoa Coâng Ngheä Sinh Hoïc tröôøng Ñaïi Hoïc Môû Baùn Coâng ñaõ taïo ñieàu kieän thuaän lôïi cho toâi hoaøn thaønh luaän vaên toát nghieäp naøy. Xin caûm ôn Th.Löông Thò Myõ Ngaân, giaûng vieân boä moân Coâng Ngheä Sinh Hoïc Tröôøng Ñaïi Hoïc Khoa Hoïc Töï Nhieân Tp.
Hoà Chí Minh ñaõ nhieät tình giuùp ñôõ toâi trong hoïc taäp nghieân cöùu vaø thöïc hieän ñeà taøi luaän vaên toát nghieäp naøy. Chaân thaønh caûm ôn Th.Traàn Trung Hieáu, giaûng vieân boä moân Coâng Ngheä Sinh Hoïc Tröôøng Ñaïi Hoïc Khoa Hoïc Töï Nhieân Tp. Hoà Chí Minh ñaõ tröïc tieáp giuùp ñôõ toâi trong hoïc taäp nghieân cöùu vaø thöïc hieän ñeà taøi luaän vaên toát nghieäp naøy. Cuoái cuøng con xin kính gôûi lôøi bieát ôn saâu saéc ñeán Cha Meï cuøng taát caû ngöôøi thaân trong gia ñình ñaõ heát loøng chaêm lo vaø uûng hoä con trong suoát thôøi gian hoïc taäp.
Sinh vieân thöïc hieän :Nguyeãn Quoác Phong Trang 2 Khoùa luaän toát nghieäp 2004 Trang PHAÀN 1 - MÔÛ ÑAÀU. 6 PHAÀN 2 - TOÅNG QUAN TAØI LIEÄU. NGUOÀN GOÁC VAØ SÖÏ PHAÂN BOÁ. GIAÙ TRÒ KINH TEÁ CUÛA DENDROBIUM SP.
ÑAËC ÑIEÅM SINH HOÏC CUÛA DENDROBIUM SP. Caùc giai ñoaïn phaùt trieån. Giai ñoaïn naåy maàm. Giai ñoaïn caây con.
Giai ñoaïn tröôûng thaønh. Giai ñoaïn ra hoa. Ñaëc ñieåm phaân loaïi. Döïa vaøo hình daïng giaû haønh.
Döïa vaøo hình daïng hoa. CAÙC ÑIEÀU KIEÄN CÔ BAÛN ÑEÅ NUOÂI TROÀNG DENDROBIUM SP. Ñoä thoâng thoaùng. Söï nghæ cuûa lan.
Thay chaäu, giaù theå vaø taùch chieát. Saâu beänh vaø caùc vaán ñeà khaùc. Nhu caàu phaân boùn. PHÖÔNG PHAÙP NUOÂI CAÁY MOÂ DENDROBIUM SP.
CAÙC NGHIEÂN CÖÙU VEÀ NHAÂN GIOÁNG IN VITRO CAÂY LAN. HEÄ THOÁNG GIAÙ THEÅ (SUPPORT SYSTEMS) ÑÖÔÏC SÖÛ DUÏNG TRONG NUOÂI CAÁY IN VITRO MOÂ THÖÏC VAÄT. HIEÄN TÖÔÏNG THUYÛ TINH THEÅ (VITRIFICATION) TRONG NUOÂI CAÁY MOÂ THÖÏC VAÄT. 41 PHAÀN 3 – VAÄT LIEÄU VAØ PHÖÔNG PHAÙP NGHIEÂN CÖÙU.VAÄT LIEÄU VAØ ÑIEÀU KIEÄN THÍ NGHIEÄM.
43 a) Ñòa ñieåm thí nghieäm. 43 c) Moâi tröôøng nuoâi caáy. 44 d) Ñieàu kieän thí nghieäm. 44 Sinh vieân thöïc hieän :Nguyeãn Quoác Phong Trang 3 Khoùa luaän toát nghieäp 2004 2.
PHÖÔNG PHAÙP THÍ NGHIEÄM. 46 a) Thí nghieäm 1: Khaûo saùt söï taêng tröôûng cuûa choài treân moâi tröôøng KD loûng vôùi giaù theå laø caàu giaáy loïc. 46 b) Thí nghieäm 2: Khaûo saùt söï aûnh höôûng cuûa khoaùng ña löôïng vaø vi löôïng cuûa moâi tröôøng KD loûng leân söï taêng tröôûng cuûa lan. 47 c) Thí nghieäm 3: AÛnh höôûng cuûa noàng ñoä BA leân söï hình thaønh cuïm choài töø choài beân.
48 d) Thí nghieäm 4: So saùnh söï thaønh laäp cuïm choài töø choài beân treân moâi tröôøng loûng giaù theå laø caàu giaáy vaø moâi tröôøng giaù theå agar. 48 e) Thí nghieäm 5: AÛnh höôûng cuûa BA keát hôïp vôùi NAA leân söï taïo laäp cuïm choài töø choài beân treân moâi tröôøng loûng vôùi giaù theå laø caàu giaáy loïc. 49 f) Thí nghieäm 6: Khaûo saùt söï aûnh höôûng cuûa Vitamin B1 leân söï hình thaønh reã treân moâi tröôøng KD raén vôùi giaù theå laø agar. 50 g) Thí nghieäm 7 : Söï phaùt trieån caây con ra vöôøn öôm.
51 PHAÀN 4 – KEÁT QUAÛ VAØ BIEÄN LUAÄN. 53 PHAÀN 5 – KEÁT LUAÄN VAØ ÑEÀ NGHÒ. 55 PHAÀN 6 – TAØI LIEÄU THAM KHAÛO. 70 Sinh vieân thöïc hieän :Nguyeãn Quoác Phong Trang 4 Khoùa luaän toát nghieäp 2004 CAÙC KYÙ HIEÄU VIEÁT TAÉT PLB : Protocorm-like body.
MS : Moâi tröôøng muoái khoaùng cô baûn Murashige vaø Skoog (1962). KD : Moâi tröôøng nuoâi caáy lan Knudson. NAA : α-naphthyl axetic acid. mg/l : Noàng ñoä chaát tan tính baèng mg chöùa trong 1 lít dung dòch.
g/l : Noàng ñoä chaát tan tính baèng gram chöùa trong 1 lít dung dòch. atm : Ñôn vò ño aùp suaát tính baèng atmosphere. mm : Ñôn vò ño chieàu daøi tính baèng milimetre. M : Giaù trò trung bình.
CV% : Coefficient of Variation. Ñoä bieán ñoäng tính baèng %. LSD (0,05) : Least Significant Difference Test. Ñoä sai bieät nhoû nhaát coù yù nghóa ôû möùc ñoä tin caäy 0,05.
Sinh vieân thöïc hieän :Nguyeãn Quoác Phong Trang 5 Khoùa luaän toát nghieäp 2004 Phaàn 1 : MÔÛ ÑAÀU Vieät Nam laø moät quoác gia thuoäc vuøng khí haäu nhieät ñôùi thích hôïp cho söï phaùt trieån cuûa nhieàu loaïi phong lan. Ñaëc bieät ñoái vôùi nhoùm Dendrobium laø nhoùm lan chòu nhieät thích öùng vôùi nhieät ñoä hôn 200C (Arditti J. Ñaây laø nhoùm lan coù hoa to trung bình, hoa beàn töø 7-10 ngaøy raát thích hôïp cho vieäc caét caønh (Pages,1971). Ñaát nöôùc chuùng ta ñöôïc thieân nhieân öu ñaõi veà ñòa lyù, khí haäu cuõng nhö nhieät ñoä, aåm ñoä vaø aùnh saùng, raát thích hôïp vôùi vieäc troàng phong lan.
Röøng cuûa chuùng ta laø moät trung taâm coù nhieàu loaøi phong lan quí nhö Ngoïc Ñieåm, Kim Ñieäp, Long Tu, Thuûy Tieân, Hoûa Hoaøng, YÙ Thaûo. vôùi nhieàu maøu saéc röïc rôõ, ña daïng. Trong khoaûng 600 loaøi lan nhieät ñôùi, caùc nhaø nuoâi troàng ñaõ choïn loïc ñöôïc hôn 50 loaøi nhöng chæ moät soá khoâng nhieàu thu huùt ñöôïc söï chuù yù vaø haáp daãn ñaàu tö phaùt trieån chuû yeáu döïa treân giaù trò thöông maïi vaø khaû naêng lai gioáng toát. Phaûi keå ñeán : Cattleya, Cymbidium, Dendrobium, Lycaste, Miltonia, Oncidium, Odontoglosum, Paphiopedium, Phalaenopsis vaø caùc loaøi Vanda.
[8, 9] Töø xöa trong daân gian ñaõ xuaát hieän vieäc nhaân gioáng vaø nuoâi troàng phong lan. Nhoùm Dendrobium coù khaù nhieàu loaøi caây ñeïp nhö Thaùi Bình, Long Tu, Thuyû Tieân,… chuû yeáu laø khai thaùc ôû röøng, phöông thöùc nhaân gioáng truyeàn thoáng baèng kyõ thuaät taùch chieát neân heä soá nhaân coøn raát thaáp. Phong lan cho traùi, nhöng trong moâi tröôøng töï nhieân tyû leä naåy maàm raát thaáp. Vôùi coâng ngheä nhaân gioáng hieän nay, töø moät caù theå ban ñaàu coù theå taïo ra vaøi ngaøn ñeán moät trieäu caây con.
Thò tröôøng phong lan ngaøy nay ñaõ trôû thaønh moät maët haøng lôùn treân quoác teá, thu ñöôïc nhieàu ngoaïi teä. ÔÛ caùc nöôùc phaùt trieån nhö Anh, Myõ, Ñöùc, YÙ, Nhaät, Sinh vieân thöïc hieän :Nguyeãn Quoác Phong Trang 6 Khoùa luaän toát nghieäp 2004 Bæ, Haø Lan, Na Uy, Phaàn Lan, Singapore, Hoàng Koâng. ñeàu nhaäp khaåu raát nhieàu hoa phong lan. Thaùi Lan laø nöôùc xuaát khaåu phong lan nhieàu nhaát ôû Ñoâng Nam AÙ.
Vieät Nam chuùng ta cuõng coù nhieàu trieån voïng kinh doanh xuaát khaåu hoa phong lan. Phong traøo chôi lan ôû thaønh phoá Hoà Chí Minh trong nhöõng naêm gaàn ñaây phaùt trieån raát maïnh, khoâng nhöõng nuoâi troàng phong lan trong nöôùc maø coøn nhaäp veà caùc gioáng lan ngoaïi ñeå caáy moâ nhaân gioáng vaø nhaè m ñaùp öùng nhu caàu cuûa ngöôøi tieâu duøng. [13] Ngaøy nay, vôùi ñaø phaùt trieån chung cuûa xaõ hoäi, nhu caàu thöôûng ngoaïn nhöõng caây coù höông hoa ñaëc saéc, coù hình daùng kyø laï vaãn khoâng ngöøng ngaøy moät taêng cao. Ñeå giaûi quyeát nhöõng nhu caàu thöïc teá ñoù, vaán ñeà caây gioáng chính laø moái quan taâm haøng ñaàu vaø caáp baùch hôn caû.
Nhaát laø nguoàn caây gioáng ñoàng ñeàu, saïch beänh vôùi soá löôïng lôùn vaø chæ trong moät thôøi gian ngaén. Söï tieán boä veà khoa hoïc taïo gioáng ñaõ ñaùp öùng ñöôïc nhöõng yeâu caàu ñoù thoâng qua con ñöôøng nuoâi caáy moâ. Baèng phöông phaùp nuoâi caáy moâ, haøng loaït caây troàng mang phaåm chaát toát ñaõ ñöôïc taïo ra chæ töø nhöõng sinh moâ ban ñaàu. Vôùi nhöõng ñieàu kieän öùng duïng thöïc teá ñoù vaø vôùi mong muoán hoaøn thieän daàn töøng böôùc quy trình nuoâi caáy moâ cho caây caûnh, chuùng toâi tieán haønh thöïc hieän ñeà taøi : Nhaân gioáng voâ tính in-vitro lan Dendrobium sp.
vaø khaûo saùt söï thaønh laäp cuïm choài treân moâi tröôøng lỏng với giaù theå laø caàu giaáy loïc trong hoäp nhöïa 500ml vaø chai thuyû tinh 250ml. Trong quaù trình thöïc hieän do khaû naêng, ñieàu kieän, trình ñoä coù haïn neân ñeà taøi khoâng theå traùnh khoûi nhöõng thieáu soùt, raát mong nhaän ñöôïc söï ñoùng goùp cuûa quyù thaày coâ vaø caùc yù kieán ñoùng goùp töø ñoäc giaû. Sinh vieân thöïc hieän :Nguyeãn Quoác Phong Trang 7 Khoùa luaän toát nghieäp 2004 Phaàn 2 : TOÅNG QUAN TAØI LIEÄU 1. Nguoàn goác vaø söï phaân boá: Theo nhaø thöïc vaät hoïc A.
L Takhtajan (1980), lan Dendrobium ñöôïc xeáp vaøo: * Ngaønh haït kín: Magnoliophyta. * Lôùp moät laù maàm: Liliopsida (Monocotyledones). * Phaân lôùp haønh: Liliidae. * Boä lan: Orchidales.
* Hoï lan: Orchidaceae. * Gioáng: Dendrobium.Dendrobium toboense Lan röøng coù ôû nhieàu nöôùc treân theá giôùi : Vieät Nam, Thaùi Lan, Malayxia, Brazil. Treân khaép traùi ñaát, haàu nhö nôi naøo coù thöïc vaät laø coù phong lan, nhöng soá löôïng nhieàu ít khaùc nhau raát lôùn lieân quan maät thieát ñeán ñoä cao. [9] Theo cuoán “Flore geùneùrale de L’Indochine” cuûa Le Comte thì nöôùc Vieät Nam coù soá löôïng lan raát ña daïng, coù treân 634 loaøi phong lan quí.
Trong cuoán Sinh vieân thöïc hieän :Nguyeãn Quoác Phong Trang 8 Khoùa luaän toát nghieäp 2004 “Phong lan Vieät Nam” cuûa Traàn Hôïp thì coù 750 chi vaø 25.000 loaïi lan röøng. Cho tôùi nay thì soá löôïng lan ñöôïc lai taïo hôn 100. raát phong phuù veà chuûng loaïi, coù raát nhieàu loaøi trong hoï Orchidaceae, goàm hôn 1600 loaøi. Phaân boá treân caùc vuøng thuoäc chaâu AÙ nhieät ñôùi, taäp trung nhieàu nhaát ôû Ñoâng Nam AÙ vaø UÙc chaâu.
Ngöôøi ta thaáy Dendrobium ôû caùc haûi ñaûo treân Thaùi Bình Döông ñeán Hy maõ laïp sôn, töø Philippines ñeán Fidgi, ñöông nhieân laø coù caû ôû Vieät Nam. Neáu nhö caùc nöôùc Nam Myõ töï haøo veà caùc loaøi thuoäc gioáng Cattleya tuyeät ñeïp, thì caùc nöôùc Ñoâng Nam AÙ cuõng haõnh dieän vì coù gioáng Dendrobium voâ cuøng phong phuù. [9] Ñieàu kieän sinh thaùi cuõng raát ña daïng, coù nhieàu loaøi chæ moïc vaø ra hoa ôû vuøng laïnh, coù loaøi ôû vuøng noùng, coù loaøi trung gian. Cuõng coù loaøi thích nghi vôùi baát cöù ñieàu kieän khí haäu naøo.