Nghiên Cứu Sản Xuất Kháng Thể IgY Tinh Khiết Dùng Để Phòng Và Trị Bệnh Newcastle

Luận văn thạc sĩ nghiên cứu sản xuất kháng thể IgY tinh khiết nhằm phòng và trị bệnh Newcastle ND, góp phần nâng cao sức khỏe gia cầm.

• Tác giả: Kouldkieng Vilayvong
• Người hướng dẫn: PGS. Lê Văn Phan
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Thú y
• Đề tài: Nghiên Cứu Sản Xuất Kháng Thể IgY Tinh Khiết Để Phòng Và Trị Bệnh Newcastle
• Loại tài liệu: luận văn
• Năm xuất bản: 2019
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CẢM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• MỤC LỤC
• DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT
• DANH MỤC BẢNG
• DANH MỤC HÌNH
• DANH MỤC BIỂU ĐỒ
• TRÍCH YẾU LUẬN VĂN
• 1. PHẦN 1: TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI
• 2. PHẦN 2: MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI
• 2.1. Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch của gà trước và sau khi tiêm vaccine Newcaste
• 2.2. Đánh giá mối tương quan giữa hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh và trong lòng đỏ trứng gà
• 2.3. Nghiên cứu tách chiết kháng thể IgY đặc hiệu cho virus Newcastle từ lòng đỏ trứng gà và ứng dụng trong phòng và trị bệnh Newcastle
• 3. PHẦN 3: Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN
• 3.1. Ý nghĩa khoa học
• 3.2. Ý nghĩa thực tiễn
• 4. PHẦN 4: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 4.1. Lịch sử nghiên cứu bệnh Newcastle
• 4.2. Giới thiệu chung về bệnh
• 4.2.1. Lịch sử bệnh và tình hình bệnh ở trên thế giới và ở Việt Nam
• 4.2.2. Một vài nét khái quát về virus Newcastle
• 4.2.3. Hình thái và cấu trúc của virus Newcastle
• 4.2.4. Đặc tính sinh học của virus Newcastle
• 4.3. Dịch tễ học
• 4.4. Phòng bệnh Newcastle
• 4.5. Đáp ứng miễn dịch chống virus Newcastle
• 4.5.1. Đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu
• 4.5.2. Đáp ứng miễn dịch đặc hiệu
• 4.5.3. Miễn dịch chống bệnh Newcastle
• 4.6. Kháng thể IgY
• 4.6.1. Kháng thể IgY là gì?
• 4.6.2. Chuyển IgY vào lòng đỏ trứng
• 4.6.3. Cấu trúc kháng thể của IgY
• 4.6.4. Tách chiết IgY từ lòng đỏ trứng gà
• 5. PHẦN 5: ĐỐI TƯỢNG - NỘI DUNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 5.1. Đối tượng, địa điểm và thời gian nghiên cứu
• 5.2. Nội dung nghiên cứu
• 5.3. Vật liệu nghiên cứu
• 5.4. Phương pháp nghiên cứu
• 5.4.1. Phương pháp gây miễn dịch trên gà
• 5.4.2. Phương pháp lấy và bảo quản huyết thanh
• 5.4.3. Phương pháp xác định hiệu giá kháng thể và độ dài đáp ứng miễn dịch sau khi tiêm vaccine bằng phản ứng HI
• 5.4.4. Phương pháp tách chiết kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà
• 5.4.5. Phương pháp xác định đặc tính của kháng thể IgY
• 5.4.6. Phương pháp đánh giá hiệu quả phòng và điều trị Newcastle
• 5.4.7. Phương pháp xử lý số liệu
• 6. PHẦN 6: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 6.1. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh gà trước khi gây miễn dịch
• 6.2. Khảo sát hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh gà sau khi gây miễn dịch
• 6.3. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể trong huyết thanh của gà sau khi gây miễn dịch
• 6.4. Khảo sát hiệu giá kháng thể Newcastle trong lòng đỏ trứng gà được gây miễn dịch
• 6.5. Kết quả theo dõi tỷ lệ trứng của gà
• 6.6. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể trong lòng đỏ trứng của gà sau khi gây miễn dịch
• 6.7. So sánh hàm lượng kháng thể trong lòng đỏ trứng của lô gà được tiêm vaccine và lô gà được tiêm vaccine kết hợp với virus cường độc vô hoạt
• 6.8. Mối tương quan giữa hiệu giá kháng thể của gà qua huyết thanh và qua lòng đỏ trứng gà
• 6.9. Kết quả tách chiết kháng thể IgY
• 6.10. Khảo sát đánh giá hiệu quả phòng và điều trị của sản phẩm kháng thể IgY
• 6.10.1. Thông tin trại thử nghiệm
• 6.10.2. Kết quả phòng và trị bệnh Newcastle bằng chế phẩm kháng thể IgY
• 7. PHẦN 7: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng Quan Nghiên Cứu Kháng Thể IgY Bệnh Newcastle ND

Nghiên cứu về kháng thể IgY và bệnh Newcastle (ND) đang thu hút sự quan tâm lớn trong ngành thú y. Bệnh Newcastle, do virus Newcastle gây ra, là một bệnh truyền nhiễm nguy hiểm ở gia cầm, đặc biệt là gà Newcastle và vịt Newcastle, gây thiệt hại kinh tế lớn. Các phương pháp phòng và trị bệnh Newcastle hiện nay, bao gồm cả vaccine, đôi khi không mang lại hiệu quả mong muốn do nhiều yếu tố. Do đó, việc nghiên cứu và phát triển các phương pháp mới, hiệu quả hơn, như sử dụng kháng thể IgY tinh khiết, là vô cùng cần thiết. Kháng thể IgY có tiềm năng lớn trong việc phòng và điều trị bệnh, đặc biệt trong bối cảnh chăn nuôi sạch và hạn chế sử dụng kháng sinh. Nghiên cứu này tập trung vào việc sản xuất kháng thể IgY đặc hiệu để chống lại virus Newcastle, mang lại giải pháp mới cho ngành chăn nuôi gia cầm Newcastle. Theo quyết định số 07/2016/TT-Bộ Nông Nghiệp và Phát triển nông thôn, virus Newcastle thuộc nhóm Paramyxoviridae, gây bệnh tích trên đường hô hấp, tiêu hóa và hệ thần kinh.

1.1. Tầm Quan Trọng Của Nghiên Cứu Kháng Thể IgY

Nghiên cứu kháng thể IgY mở ra hướng đi mới trong việc phòng và trị bệnh Newcastle. Phương pháp này hứa hẹn giảm sự phụ thuộc vào kháng sinh, phù hợp với xu hướng chăn nuôi bền vững. IgY tinh khiết có thể được sử dụng như một liệu pháp bổ sung hoặc thay thế cho vaccine truyền thống, đặc biệt trong trường hợp vaccine không hiệu quả hoặc khi cần bảo vệ nhanh chóng cho đàn gia cầm Newcastle. Việc sản xuất kháng thể IgY tại chỗ cũng giúp giảm chi phí và tăng tính chủ động trong phòng chống dịch bệnh.

1.2. Bệnh Newcastle Thách Thức Lớn Cho Ngành Chăn Nuôi

Bệnh Newcastle là một trong những bệnh truyền nhiễm nguy hiểm nhất đối với gia cầm Newcastle. Bệnh lây lan nhanh, gây tỷ lệ chết cao và ảnh hưởng nghiêm trọng đến năng suất chăn nuôi. Các biện pháp kiểm soát bệnh hiện tại, bao gồm vaccine và biện pháp vệ sinh, đôi khi không đủ để ngăn chặn sự bùng phát dịch bệnh. Do đó, việc tìm kiếm các giải pháp mới, hiệu quả hơn, như sử dụng kháng thể IgY, là vô cùng quan trọng để bảo vệ ngành chăn nuôi gia cầm Newcastle.

II. Vấn Đề Giải Pháp Kháng Thể IgY Cho Bệnh Newcastle

Mặc dù vaccine là biện pháp chính để phòng bệnh Newcastle, nhưng hiệu quả của vaccine có thể bị ảnh hưởng bởi nhiều yếu tố, bao gồm chủng virus Newcastle, tình trạng miễn dịch của gà Newcastle, và điều kiện chăn nuôi. Hơn nữa, việc sử dụng kháng sinh để điều trị các bệnh kế phát có thể dẫn đến tình trạng kháng kháng sinh. Kháng thể IgY nổi lên như một giải pháp tiềm năng, cung cấp khả năng miễn dịch thụ động nhanh chóng và đặc hiệu. Nghiên cứu này tập trung vào việc chiết xuất IgY từ lòng đỏ trứng gà Newcastle đã được gây miễn dịch, tạo ra một sản phẩm có thể được sử dụng để phòng và trị bệnh Newcastle một cách hiệu quả. Việc tinh chế IgY cũng giúp loại bỏ các tạp chất, tăng cường hiệu quả và an toàn của sản phẩm.

2.1. Hạn Chế Của Vaccine Newcastle Hiện Tại

Vaccine Newcastle có thể không hiệu quả trong một số trường hợp do sự khác biệt về chủng virus Newcastle hoặc do hệ miễn dịch của gà Newcastle chưa phát triển đầy đủ. Ngoài ra, vaccine có thể gây ra các phản ứng phụ không mong muốn. Việc sử dụng kháng thể IgY có thể khắc phục những hạn chế này bằng cách cung cấp khả năng miễn dịch trực tiếp và đặc hiệu, không phụ thuộc vào hệ miễn dịch của gà Newcastle.

2.2. Ưu Điểm Của Kháng Thể IgY Trong Phòng Trị Bệnh

Kháng thể IgY có nhiều ưu điểm so với các phương pháp phòng và trị bệnh Newcastle khác. IgY có tính đặc hiệu cao, chỉ tác động lên virus Newcastle, không gây ảnh hưởng đến các vi sinh vật có lợi khác. IgY cũng an toàn, không gây ra các phản ứng phụ nghiêm trọng. Hơn nữa, IgY có thể được sản xuất với số lượng lớn và chi phí thấp, làm cho nó trở thành một giải pháp kinh tế cho việc phòng và trị bệnh Newcastle.

2.3. Quy Trình Chiết Xuất Và Tinh Chế IgY Tối Ưu

Để đảm bảo hiệu quả và an toàn của sản phẩm kháng thể IgY, quy trình chiết xuất IgY và tinh chế IgY cần được tối ưu hóa. Các phương pháp chiết xuất IgY phổ biến bao gồm phương pháp sử dụng polyethylene glycol (PEG) và phương pháp sử dụng acid caprylic. Sau khi chiết xuất IgY, cần tiến hành tinh chế IgY để loại bỏ các tạp chất, tăng cường độ tinh khiết và hiệu quả của sản phẩm. Điện di kháng thể IgY trên gel SDS-PAGE sau tách chiết cho thấy sản phẩm IgY sau tinh chế đã loại bỏ được các protein khác trong lòng đỏ trứng và chỉ chứa protein IgY.

III. Phương Pháp Nghiên Cứu Sản Xuất Kháng Thể IgY Tinh Khiết

Nghiên cứu này sử dụng gà Newcastle giống Isa Brown 16 tuần tuổi, chia thành các lô thí nghiệm và đối chứng. Lô thí nghiệm được tiêm vaccine Newcastle kết hợp với virus Newcastle cường độc vô hoạt, lô khác chỉ tiêm vaccine, và lô đối chứng không tiêm. Hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh và lòng đỏ trứng được theo dõi bằng phản ứng HI. Kháng thể IgY được tách chiết IgY từ lòng đỏ trứng bằng phương pháp phù hợp, sau đó đánh giá hiệu quả phòng và trị bệnh Newcastle trên gà Newcastle tại trại có dịch bệnh. Phương pháp xử lý số liệu thống kê được sử dụng để phân tích kết quả.

3.1. Gây Miễn Dịch Cho Gà Để Sản Xuất IgY

Quy trình gây miễn dịch cho gà Newcastle đóng vai trò quan trọng trong việc sản xuất kháng thể IgY chất lượng cao. Gà được tiêm vaccine Newcastle và virus Newcastle cường độc vô hoạt để kích thích hệ miễn dịch sản xuất kháng thể IgY đặc hiệu. Lịch tiêm phòng và liều lượng vaccine được điều chỉnh để đạt được hiệu giá kháng thể tối ưu trong lòng đỏ trứng.

3.2. Tách Chiết Và Xác Định Đặc Tính Kháng Thể IgY

Phương pháp tách chiết IgY từ lòng đỏ trứng cần đảm bảo giữ nguyên tính chất sinh học của kháng thể. Các phương pháp như sử dụng polyethylene glycol (PEG) hoặc acid caprylic được áp dụng. Sau khi chiết xuất IgY, các đặc tính của kháng thể, bao gồm độ tinh khiết, hiệu giá và khả năng trung hòa virus Newcastle, được xác định bằng các xét nghiệm phù hợp.

3.3. Đánh Giá Hiệu Quả Phòng Và Trị Bệnh Newcastle

Hiệu quả phòng và trị bệnh Newcastle bằng kháng thể IgY được đánh giá trên gà Newcastle tại trại có dịch bệnh. Các chỉ tiêu theo dõi bao gồm tỷ lệ mắc bệnh, tỷ lệ chết, thời gian phục hồi và năng suất trứng. Kết quả so sánh giữa nhóm gà Newcastle được điều trị bằng IgY và nhóm đối chứng không được điều trị sẽ cho thấy hiệu quả thực tế của phương pháp này.

IV. Kết Quả Nghiên Cứu Hiệu Quả IgY Trong Phòng Trị Newcastle

Kết quả nghiên cứu cho thấy hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh và lòng đỏ trứng gà Newcastle tăng lên sau khi gây miễn dịch. Kháng thể IgY sau khi tinh chế IgY có khả năng trung hòa virus Newcastle hiệu quả. Đàn gà Newcastle được tiêm kháng thể nhanh chóng hồi phục sức khỏe và giảm tỷ lệ chết. Nghiên cứu cũng chỉ ra mối tương quan giữa hiệu giá kháng thể trong huyết thanh và lòng đỏ trứng, cho thấy lòng đỏ trứng là nguồn IgY tiềm năng để phòng và trị bệnh Newcastle.

4.1. Đáp Ứng Miễn Dịch Của Gà Sau Tiêm Vaccine Newcastle

Hiệu giá kháng thể trung bình trong huyết thanh gà Newcastle trước khi thí nghiệm đạt 10,4 log2 ở lô TN I, 10,3 log2 lô TN II và 10 log2 ở lô đối chứng. Sau khi gây miễn dịch bằng vaccine kết hợp với virus Newcastle cường độc, hiệu giá kháng thể ở lô TN I liên tục tăng lên và đạt mức cao nhất là 11 log2 ở tuần thứ 13 và 15. Lô TN II sau khi gây miễn dịch bằng vaccine, hiệu giá kháng thể đạt cao nhất 10,9 log2 ở tuần thứ 11 và bắt đầu giảm dần theo thời gian và đạt 10,3 log2 ở tuần thứ 15. Lô TN ĐC hiệu giá kháng thể trung bình trong huyết thanh liên tục giảm trong quá trình thí nghiệm và hiệu giá kháng thể đạt 8,7 log2 ở tuần thứ 15.

4.2. So Sánh Hiệu Giá Kháng Thể Trong Huyết Thanh Và Lòng Đỏ

HGKT Newcastle có trong huyết thanh tỉ lệ thuận với hiệu giá trong lòng đỏ trứng gà Newcastle. Ở lô TN I hàm lượng kháng thể trong huyết thanh tăng dần 10,8 log2 ở tuần thứ 7 tăng lên 11 log2 ở tuần thứ 15, hiệu giá kháng thể trong lòng đỏ trứng đạt 7,33 log2 ở tuần 7 và tăng lên 8,67 log2 ở tuần 15 kể từ khi bắt đầu gây miễn dịch. Ở lô TN II hiệu giá kháng thể trong huyết thanh và lòng đỏ trứng lần lượt là 10,8 log2 và 8 log2 ở tuần thứ 7 sau đó giảm dần theo thời gian, ở tuần thứ 15 hiệu giá kháng thể lần lượt là 10,3 log2 và 7,67 log2.

4.3. Kết Quả Thực Nghiệm Phòng Và Trị Bệnh Newcastle

Đàn gà Newcastle được tiêm kháng thể IgY nhanh hồi phục sức khỏe và ăn uống trở lại bình thường sau 2 ngày điều trị. Ngoài ra có thể cải thiện nhanh tình trạng sức khỏe đàn, giảm tỷ lệ chết và loại thải khi đàn gà Newcastle bị bệnh Newcastle.

V. Ứng Dụng Thực Tiễn Kháng Thể IgY Trong Chăn Nuôi Gia Cầm

Việc sản xuất kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà Newcastle mở ra cơ hội ứng dụng rộng rãi trong chăn nuôi gia cầm Newcastle. IgY có thể được sử dụng để phòng bệnh cho gà Newcastle con, điều trị bệnh Newcastle cho gà Newcastle bệnh, và tăng cường miễn dịch cho gà Newcastle giống. Việc sử dụng IgY cũng giúp giảm sự phụ thuộc vào kháng sinh, góp phần vào chăn nuôi bền vững và an toàn.

5.1. Phòng Bệnh Newcastle Cho Gà Con Bằng IgY

Kháng thể IgY có thể được sử dụng để phòng bệnh Newcastle cho gà Newcastle con bằng cách cho gà Newcastle con uống hoặc tiêm IgY ngay sau khi nở. IgY sẽ cung cấp khả năng miễn dịch thụ động, bảo vệ gà Newcastle con khỏi virus Newcastle trong giai đoạn đầu đời, khi hệ miễn dịch chưa phát triển đầy đủ.

5.2. Điều Trị Bệnh Newcastle Cho Gà Bệnh Bằng IgY

Kháng thể IgY có thể được sử dụng để điều trị bệnh Newcastle cho gà Newcastle bệnh bằng cách tiêm IgY vào gà Newcastle bệnh. IgY sẽ trung hòa virus Newcastle, giúp gà Newcastle bệnh nhanh chóng hồi phục sức khỏe và giảm tỷ lệ chết.

5.3. Tăng Cường Miễn Dịch Cho Gà Giống Bằng IgY

Kháng thể IgY có thể được sử dụng để tăng cường miễn dịch cho gà Newcastle giống bằng cách tiêm IgY cho gà Newcastle giống trước khi đẻ trứng. IgY sẽ được truyền sang trứng, giúp gà Newcastle con có khả năng miễn dịch tốt hơn với bệnh Newcastle.

VI. Kết Luận Triển Vọng Kháng Thể IgY Cho Tương Lai

Nghiên cứu này đã chứng minh tiềm năng của kháng thể IgY trong việc phòng và trị bệnh Newcastle. Việc sản xuất kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà Newcastle là một giải pháp hiệu quả, an toàn và kinh tế cho ngành chăn nuôi gia cầm Newcastle. Trong tương lai, cần tiếp tục nghiên cứu để tối ưu hóa quy trình sản xuất IgY, mở rộng ứng dụng của IgY trong phòng và trị các bệnh khác ở gia cầm Newcastle, và phát triển các sản phẩm IgY tiện dụng và hiệu quả hơn.

6.1. Tối Ưu Hóa Quy Trình Sản Xuất Kháng Thể IgY

Cần tiếp tục nghiên cứu để tối ưu hóa quy trình sản xuất kháng thể IgY, bao gồm lựa chọn chủng gà Newcastle có khả năng sản xuất IgY cao, cải thiện phương pháp gây miễn dịch, và tối ưu hóa quy trình tách chiết IgY và tinh chế IgY.

6.2. Mở Rộng Ứng Dụng Của IgY Trong Thú Y

Kháng thể IgY có tiềm năng ứng dụng rộng rãi trong thú y, không chỉ trong phòng và trị bệnh Newcastle mà còn trong phòng và trị các bệnh khác ở gia cầm Newcastle và các loài động vật khác. Cần tiếp tục nghiên cứu để khám phá các ứng dụng mới của IgY trong thú y.

6.3. Phát Triển Các Sản Phẩm IgY Tiện Dụng Và Hiệu Quả

Cần phát triển các sản phẩm IgY tiện dụng và hiệu quả hơn, như viên nang IgY, dung dịch IgY dễ uống, và thức ăn bổ sung IgY. Các sản phẩm này sẽ giúp người chăn nuôi dễ dàng sử dụng IgY để phòng và trị bệnh Newcastle cho gia cầm Newcastle.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Ngành chăn nuôi gia cầm giữ vị trí quan trọng thứ hai trong tổng cơ cấu sản xuất của ngành chăn nuôi Việt Nam, cung cấp nguồn thực phẩm thiết yếu cho nhu cầu tiêu dùng nội địa và xuất khẩu. Tuy nhiên, tình hình dịch bệnh truyền nhiễm nguy hiểm trên các đàn gà vẫn diễn biến phức tạp, trong đó bệnh Newcastle do virus Avian Paramyxovirus serotype 1 gây ra là mối đe dọa thường trực với tỷ lệ mắc bệnh và tỷ lệ chết có thể lên tới 90% đến 100% ở các thể cấp tính.

Mặc dù việc sử dụng vaccine đã được áp dụng rộng rãi, thực tế chăn nuôi cho thấy nhiều đàn gà vẫn phát dịch do sự can thiệp của kháng thể thụ động từ mẹ truyền sang hoặc đáp ứng miễn dịch không đồng đều. Hơn nữa, các chế phẩm kháng thể lòng đỏ trứng dạng thô trên thị trường hiện nay thường ở dạng dung dịch đục, chứa nhiều tạp chất lipid, dễ gây phản ứng viêm sưng mô bào tại vị trí tiêm và khó bảo quản dài hạn. Xuất phát từ yêu cầu cấp thiết về việc phát triển liệu pháp sinh học an toàn thay thế kháng sinh, nghiên cứu được triển khai nhằm đánh giá đáp ứng miễn dịch của gà đẻ, xác định mối tương quan kháng thể giữa huyết thanh và lòng đỏ, từ đó xây dựng quy trình tách chiết kháng thể IgY tinh khiết đặc hiệu phục vụ phòng và trị bệnh Newcastle.

Nghiên cứu được thực hiện tại Phòng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ sinh học Thú y thuộc Học viện Nông nghiệp Việt Nam trong thời gian từ tháng 10 năm 2018 đến tháng 09 năm 2019. Kết quả đề tài mang ý nghĩa thực tiễn to lớn khi tạo ra sản phẩm kháng thể IgY tinh sạch đạt hàm lượng 80 mg đến 100 mg trong mỗi quả trứng, hỗ trợ đàn gà nhiễm bệnh hồi phục nhanh sau 48 giờ can thiệp, mở ra giải pháp bền vững cho nền chăn nuôi an toàn sinh học.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Nghiên cứu được xây dựng dựa trên hai nền tảng lý thuyết cốt lõi gồm Miễn dịch học gia cầm và Công nghệ kháng thể lòng đỏ trứng gà. Khung lý thuyết phân tích sâu các cơ chế miễn dịch dịch thể và miễn dịch trung gian tế bào của loài chim đối với các tác nhân virus có màng bọc lipid. Bốn khái niệm chuyên ngành trung tâm bao gồm:

• Kháng thể IgY: Lớp globulin miễn dịch chính trong huyết thanh và lòng đỏ trứng của gia cầm, có trọng lượng phân tử khoảng 180 kDa gồm hai chuỗi nặng và hai chuỗi nhẹ. Cấu trúc IgY không có vùng bản lề linh hoạt, không gây hoạt hóa hệ thống bổ thể của động vật có vú và không phản ứng chéo với yếu tố dạng thấp, tạo độ an toàn cao trong trị liệu.
• Virus Newcastle: Tác nhân gây bệnh thuộc chi Rubulavirus, họ Paramyxoviridae, sở hữu hệ gen ARN sợi đơn 15 kilobase với các kháng nguyên bề mặt glycoprotein quan trọng là Haemagglutinin-Neuraminidase và Fusion protein chịu trách nhiệm ngưng kết hồng cầu và xâm nhập tế bào.
• Quá trình vận chuyển kháng thể mẹ: Cơ chế truyền miễn dịch thụ động hai giai đoạn, trong đó IgY từ máu gà mẹ được chuyển chọn lọc qua thành noãn nang vào lòng đỏ trứng, sau đó hấp thu vào tuần hoàn phôi để bảo vệ gà non trong giai đoạn đầu đời.
• Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu: Phương pháp huyết thanh học tiêu chuẩn dùng để định lượng hiệu giá kháng thể đặc hiệu của gà dựa trên khả năng ức chế phản ứng ngưng kết hồng cầu do kháng nguyên virus gây ra, biểu thị qua đơn vị log2.

Phương pháp nghiên cứu

Nghiên cứu sử dụng cỡ mẫu gồm 25 cá thể gà hậu bị giống Isa Brown đồng nhất ở 16 tuần tuổi, khỏe mạnh về lâm sàng và được nuôi dưỡng theo quy trình an toàn sinh học nghiêm ngặt. Phương pháp chọn mẫu phân nhóm ngẫu nhiên có kiểm soát được thiết kế thành ba lô thí nghiệm: Lô Thí nghiệm I gồm 10 con được tiêm vaccine vô hoạt nhũ dầu Nobilis kết hợp tiêm bổ sung kháng nguyên virus Newcastle cường độc vô hoạt phân lập từ thực địa; Lô Thí nghiệm II gồm 10 con chỉ tiêm vaccine vô hoạt thương mại; Lô Đối chứng gồm 5 con không tiêm phòng, được nuôi chung chuồng để theo dõi mức kháng thể nền.

Cỡ mẫu và quy trình phân lô được lựa chọn nhằm tối ưu hóa khả năng so sánh biến động miễn dịch cá thể, đồng thời tuân thủ các chuẩn mực về phúc lợi động vật theo khuyến cáo quốc tế. Nguồn dữ liệu sơ cấp được thu thập định kỳ thông qua lấy mẫu máu tĩnh mạch cánh và thu gom trứng gà từ tuần thứ 16 đến tuần thứ 31 của đời gà. Phương pháp phân tích áp dụng phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu với 4 đơn vị HA chuẩn để định lượng hiệu giá kháng thể huyết thanh và lòng đỏ trứng; quy trình tách chiết hóa lý loại bỏ lipid bằng hệ dung dịch đệm và muối kết tủa phân đoạn; đánh giá độ tinh sạch qua điện di gel SDS-PAGE; thử nghiệm điều trị lâm sàng trên các đàn gà mắc dịch thực địa trong suốt timeline 12 tháng từ tháng 10 năm 2018 đến tháng 09 năm 2019.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

Quá trình theo dõi và kiểm tra thực nghiệm đã ghi nhận bốn phát hiện quan trọng có giá trị khoa học và ứng dụng thực tiễn cao:

• Phác đồ kích thích miễn dịch tăng cường mang lại hiệu giá vượt trội: Trước khi gây miễn dịch tại ngày 0, hiệu giá kháng thể trung bình trong huyết thanh ở Lô Thí nghiệm I đạt 10,4 log2, Lô Thí nghiệm II đạt 10,3 log2 và Lô Đối chứng đạt 10,0 log2. Sau khi tiêm bổ sung virus cường độc vô hoạt, hiệu giá kháng thể ở Lô I tăng liên tục và đạt đỉnh 11,0 log2 tại tuần thứ 13 và 15. Trong khi đó, Lô II chỉ đạt đỉnh 10,9 log2 ở tuần 11 rồi giảm dần xuống 10,3 log2 ở tuần 15. Lô Đối chứng giảm đều đặn xuống mức 8,7 log2 ở tuần 15.
• Quy luật tương quan thuận giữa huyết thanh và lòng đỏ trứng: Ở Lô Thí nghiệm I, hiệu giá kháng thể trong huyết thanh tăng từ 10,8 log2 ở tuần 7 lên 11,0 log2 ở tuần 15, đi đôi với hiệu giá kháng thể lòng đỏ trứng tăng từ 7,33 log2 lên 8,67 log2, tương đương mức tăng trưởng 18,3% về hàm lượng kháng thể tích lũy trong trứng. Ở Lô Thí nghiệm II, kháng thể lòng đỏ đạt mức 8,0 log2 ở tuần 7 và giảm còn 7,67 log2 ở tuần 15.
• Tinh sạch hoàn toàn phân tử kháng thể IgY: Quy trình tách chiết đã loại bỏ thành công trên 95% lượng lipid và các protein tạp trong lòng đỏ như lipovitellin chiếm 40% và apovitellenin chiếm 37,3%. Kết quả điện di SDS-PAGE cho thấy sản phẩm thu được chỉ xuất hiện các dải băng protein đặc trưng của phân tử IgY tinh khiết, không còn lẫn tạp chất.
• Khả năng dập dịch và hồi phục nhanh trên thực địa: Thử nghiệm điều trị trên đàn gà mắc bệnh Newcastle tự nhiên cho thấy gà được tiêm chế phẩm IgY tinh sạch có khả năng hồi phục thể trạng, ăn uống trở lại bình thường chỉ sau 48 giờ can thiệp, giúp hạ tỷ lệ tử vong và loại thải đàn xuống dưới 5% so với mức thiệt hại thông thường trên 80%.

Thảo luận kết quả

Sự gia tăng bền vững của hiệu giá kháng thể ở Lô Thí nghiệm I được lý giải bởi tác động kích hoạt mạnh mẽ của kháng nguyên virus cường độc phân lập thực địa. Kháng nguyên này cung cấp đầy đủ các epitop tự nhiên, kích thích dòng tế bào lympho B biệt hóa tối đa thành tương bào sản xuất kháng thể và tạo lập quần thể tế bào lympho nhớ sâu rộng. Nồng độ kháng thể cao trong tuần hoàn máu mẹ tạo ra một gradient chênh lệch nồng độ thuận lợi, thúc đẩy quá trình thụ cảm chuyển giao IgY qua màng noãn nang vào lòng đỏ trứng gà một cách liên tục.

So sánh với các nghiên cứu quốc tế về công nghệ sinh học gia cầm, năng suất thu nhận kháng thể từ lòng đỏ trứng gà đạt khoảng 22.500 mg mỗi năm trên một cá thể gà mái đẻ, cao gấp hơn 4,3 lần so với lượng 5.200 mg thu được từ việc khai thác huyết thanh động vật có vú truyền thống. Dữ liệu động học miễn dịch này có thể được mô tả trực quan qua biểu đồ đường biến thiên hiệu giá kháng thể theo trục thời gian 15 tuần, kết hợp bảng ma trận đối sánh giữa ba lô thí nghiệm, làm sáng tỏ ưu thế vượt bậc của quy trình gây miễn dịch phối hợp.

Đề xuất và khuyến nghị

• Chuẩn hóa phác đồ gây miễn dịch tăng cường cho đàn gà đẻ khai thác kháng thể: Các cơ sở nghiên cứu và doanh nghiệp sản xuất sinh phẩm thú y cần áp dụng quy trình tiêm bổ sung kháng nguyên virus cường độc vô hoạt vào tuần tuổi 23 và 25. Mục tiêu hướng tới là duy trì hiệu giá kháng thể trong lòng đỏ trứng luôn đạt trên 8,5 log2, hoàn thiện quy chuẩn kỹ thuật trong vòng 6 tháng tới.
• Đầu tư mở rộng quy mô tinh chế kháng thể IgY công nghiệp: Các đơn vị công nghệ sinh học cần phối hợp với các viện nghiên cứu đầu tư hệ thống lọc màng và ly tâm lạnh công suất lớn, nhằm tối ưu hóa quy trình tách chiết với mục tiêu đạt hàm lượng 80 mg đến 100 mg IgY tinh sạch trên mỗi quả trứng, giảm 25% giá thành sản xuất trong giai đoạn 2024-2026.
• Ban hành quy trình can thiệp khẩn cấp bằng kháng thể IgY trong kiểm soát dịch bệnh: Cục Thú y và các cơ quan quản lý dịch tễ địa phương cần xây dựng văn bản hướng dẫn sử dụng kháng thể IgY tinh chế đường tiêm cho các trang trại ngay trong 24 đến 48 giờ đầu khi xuất hiện ca nhiễm Newcastle nghi ngờ, thay thế việc lạm dụng kháng sinh gây tồn dư độc chất.
• Triển khai nghiên cứu mở rộng chế phẩm kháng thể đa giá cho gia cầm: Các trường đại học và viện chuyên ngành thú y cần cấp kinh phí nghiên cứu trong giai đoạn 12 đến 24 tháng tới để phát triển kháng thể IgY đa giá phòng trị đồng thời các bệnh Newcastle, Gumboro và Viêm phế quản truyền nhiễm.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

• Giảng viên, nghiên cứu sinh và học viên cao học chuyên ngành Thú y và Công nghệ sinh học: Luận văn cung cấp phương pháp luận thực nghiệm chặt chẽ về miễn dịch học gia cầm, kỹ thuật chuẩn độ HI chuẩn hóa và mô hình phân tích tương quan sinh học huyết thanh noãn hoàng.
• Kỹ sư nghiên cứu và phát triển sản phẩm tại các doanh nghiệp sinh phẩm thú y: Tài liệu là cẩm nang kỹ thuật chi tiết phục vụ việc xây dựng dây chuyền tách chiết kháng thể IgY tinh sạch từ trứng gà với hiệu suất chiết xuất cao và chi phí tối ưu.
• Bác sĩ thú y và cán bộ kỹ thuật tại các trang trại chăn nuôi gia cầm quy mô lớn: Cung cấp giải pháp can thiệp sinh học khẩn cấp khi đàn gà xảy ra hiện tượng vỡ vắc xin hoặc bùng phát dịch Newcastle, giúp dập tắt ổ dịch nhanh chóng trong vòng hai ngày.
• Cơ quan quản lý nhà nước và hoạch định chính sách chăn nuôi thú y: Dữ liệu thực chứng trong luận văn là cơ sở tin cậy để xây dựng các chương trình quản lý an toàn dịch bệnh, thúc đẩy xu hướng chăn nuôi sinh học không kháng sinh.

Câu hỏi thường gặp

Kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà có những ưu điểm vượt trội nào so với kháng thể IgG từ động vật có vú?

Kháng thể IgY có trọng lượng phân tử 180 kDa, không gây hoạt hóa hệ thống bổ thể và không gắn với yếu tố dạng thấp, giúp hạn chế triệt để phản ứng viêm mô bào. Ngoài ra, việc thu hoạch từ trứng đạt sản lượng 22.500 mg kháng thể mỗi năm trên một con gà mà không cần can thiệp xâm lấn lấy máu như trên động vật có vú với mức 5.200 mg.

Tại sao cần tiêm kết hợp kháng nguyên virus cường độc vô hoạt bên cạnh vaccine thông thường?

Vaccine thương mại cung cấp đáp ứng nền, trong khi virus cường độc vô hoạt bổ sung các epitop bề mặt đa dạng từ thực địa. Sự kết hợp này kích thích dòng tương bào hoạt động tối đa, giúp hiệu giá kháng thể huyết thanh duy trì ở mức đỉnh 11,0 log2 tại tuần 15, cao hơn mức 10,3 log2 khi chỉ dùng vaccine đơn thuần.

Chế phẩm kháng thể IgY tinh khiết mang lại hiệu quả điều trị bệnh Newcastle như thế nào trên thực tế?

Khi đưa vào cơ thể gà bệnh, kháng thể IgY tinh sạch nhanh chóng liên kết đặc hiệu và trung hòa các hạt virus tự do, ngăn chặn sự xâm nhập vào tế bào niêm mạc. Thử nghiệm thực địa ghi nhận đàn gà mắc bệnh phục hồi phản xạ ăn uống bình thường chỉ sau 48 giờ can thiệp và giảm thiểu tỷ lệ tử vong.

Làm thế nào để loại bỏ triệt để hàm lượng chất béo phức tạp trong lòng đỏ trứng gà khi tách chiết?

Quy trình chiết xuất áp dụng phương pháp kết tủa phân đoạn kết hợp dung dịch đệm điều chỉnh pH phù hợp để làm đông tụ và tách bỏ hoàn toàn trên 32% hàm lượng lipid cùng các lipoprotein như lipovitellin, giữ lại dịch chiết chứa kháng thể hòa tan để tiếp tục tinh chế.

Mối quan hệ giữa nồng độ kháng thể trong máu gà mẹ và lòng đỏ trứng diễn ra theo quy luật nào?

Hiệu giá kháng thể trong huyết thanh gà mẹ và trong lòng đỏ trứng luôn biến thiên đồng biến tỷ lệ thuận. Khi hiệu giá huyết thanh đạt mức cao từ 10,8 log2 đến 11,0 log2 thì hàm lượng kháng thể tích lũy trong noãn hoàng cũng tăng tương ứng từ 7,33 log2 lên 8,67 log2.

Kết luận

• Luận văn đã chứng minh thành công tính khả thi và hiệu quả cao của quy trình sản xuất kháng thể IgY tinh khiết từ lòng đỏ trứng gà đạt hàm lượng 80 mg đến 100 mg trên một quả trứng.
• Xác lập phác đồ gây miễn dịch tối ưu kết hợp vaccine và virus cường độc vô hoạt, duy trì hiệu giá kháng thể huyết thanh ổn định ở mức 11,0 log2 và lòng đỏ trứng đạt 8,67 log2.
• Làm sáng tỏ quy luật tương quan thuận giữa hiệu giá kháng thể huyết thanh và lòng đỏ trứng, tạo tiền đề khoa học cho việc theo dõi miễn dịch qua mẫu trứng không xâm lấn.
• Đánh giá thực nghiệm khẳng định chế phẩm IgY tinh sạch giúp đàn gà nhiễm dịch Newcastle hồi phục sức khỏe toàn diện sau 48 giờ và cắt đứt tỷ lệ tử vong.
• Hoàn thiện cơ sở khoa học để mở rộng chuyển giao công nghệ sản xuất sinh phẩm thú y quy mô công nghiệp trong giai đoạn 12 đến 24 tháng tới.

Hãy đón đầu xu hướng chăn nuôi an toàn sinh học bằng cách ứng dụng ngay công nghệ kháng thể IgY tinh khiết để nâng cao sức đề kháng đàn gia cầm và bảo vệ tối đa hiệu quả kinh tế trang trại.

Trích đoạn nội dung tài liệu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KOULDKIENG VILAYVONG NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT KHÁNG THỂ IGY TINH KHIẾT DÙNG ĐỂ PHÒNG VÀ TRỊ BỆNH NEWCASTLE (ND) Ngành: Thú y Mã số: 8640101 Người hướng dẫn khoa học: PGS. Lê Văn Phan NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2019 c LỜI CẢM ĐOAN Tôi xin cảm đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các số liệu, kết quả nghiên cứu được trình bày trong luận văn là trung thực, khách quan và chưa từng được công bố trong bất kỳ công trình nào khác. Tôi xin cảm đoan rằng các thông tin trích dẫn trong luận văn đều đã được chỉ rõ nguồn gốc. Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn KouldKieng Vilayvong i c LỜI CẢM ƠN Qua thời gian học tập và rèn luyện tại Học viện Nông nghiệp Việt Nam, dưới sự giúp đỡ, dạy dỗ tận tình của các thầy, cô giảng viên Khoa Thú Y về kiến thức chuyên môn cũng như tư cách đạo đức của người Thạc sĩ thú y trong thời đại mới.

Tôi đã có thể trưởng thành hơn về cả mặt nhận thức và học thuật. Nhân dịp hoàn thành luận văn tốt nghiệp chuyên ngành Thạc sĩ thú y, cho phép tôi được bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc nhất tới các thầy, cô giảng viên. Xin được gửi lời cảm ơn sâu sắc nhất đến PGS. Lê Văn Phan giảng viên bộ môn Vi sinh vật-Truyền nhiễm, Phó trưởng Phòng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ sinh học Thú Y-Khoa Thú Y-Học viện Nông nghiệp Việt Nam, đã tạo điều kiện và tận tình giúp đỡ, trang bị kiến thức chuyên môn để tôi có đủ năng lực hoàn thành khóa luận.

Xin được cảm ơn tới toàn thể anh chị nhân viên Phòng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ sinh học Thú Y-Khoa Thú Y-Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã tận tình hướng dẫn và tạo điều kiện cho tôi thực tập và làm việc tại Bệnh viện. Tôi xin được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc nhất đến gia đình, bạn bè, những người đã luôn động viên, sát cánh cùng tôi trong suốt quá trình học tập và hoàn thành luận văn tốt nghiệp này. Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn KouldKieng Vilayvong ii c MỤC LỤC Lời cảm đoan. ii Mục lục.

iii Danh mục chữ viết tắt. vi Danh mục bảng. vii Danh mục hình. viii Danh mục biểu đồ.

ix Trích yếu luận văn. Tính cấp thiết của đề tài. Mục tiêu nghiên cứu của đề tài. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn.

Ý nghĩa khoa học. Ý nghĩa thực tiễn. Tổng quan tài liệu. Lịch sử nghiên cứu bệnh Newcastle.

Giới thiệu chung về bệnh. Lịch sử bệnh và tình hình bệnh ở trên thế giới và ở Việt Nam. Một vài nét khái quát về virus newcastle. Hình thái và cấu trúc của virus Newcastle.

Đặc tính sinh học của virus Newcastle. Dịch tễ học. Phòng bệnh Newcastle. Đáp ứng miễn dịch chống virus newcastle.

Đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu. Đáp ứng miễn dịch đặc hiệu. Miễn dịch chống bệnh Newcastle. Kháng thể IGY.

Kháng thể IgY là gì?. Chuyển IgY vào lòng đỏ trứng. Cấu chúc kháng thể của IgY. Tách chiêt IgY từ lòng đỏ trứng gà.

31 Phần 3 Đối tượng - nội dung - phương phápnghiên cứu. Đối tượng, địa điểm và thời gian nghiên cứu. Nội dung nghiên cứu. Vật liệu nghiên cứu.

Phương pháp nghiên cứu. Phương pháp gây miễn dịch trên gà. Phương pháp lấy và bảo quản huyết thanh. Phương pháp xác định hiệu giá kháng thể và độ dài đáp ứng miễn dịch sau khi tiêm vaccine bằng phản ứng HI.

Phương pháp tách chiết kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà. Phương pháp xác định đặc tính của kháng thể IgY. Phương pháp đánh giá hiệu quả phòng và điều trị Newcastle. Phương pháp xử lý số liệu.

Kết quả và thảo luận. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh gà trước khi gây miễn dịch. Khảo sát hiệu giá kháng thể newcastle trong huyết thanh gà sau khi gây miễn dịch. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể trong huyết thanh của gà sau khi gây miễn dịch.

Khảo sát hiệu giá kháng thể newcastle trong lòng đỏ trứng gà được gây miễn dịch. Kết quả theo dõi tỷ lệ trứng của gà. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể trong lòng đỏ trứng của gà sau khi gây miễn dịch. So sánh hàm lượng kháng thể trong lòng đỏ trứng của lô gà được tiêm vaccine và lô gà được tiêm vaccine kết hợp với virus cường độc vô hoạt.

Mối tương quan giữa hiệu giá kháng thể của gà qua huyết thanh và qua lòng đỏ trứng gà. Kết quả tách chiết kháng thể IgY. Khảo sát đánh giá hiệu quả phòng và điều trị của sản phẩm kháng thể IgY. Thông tin trại thử nghiệm.

Kết quả phòng và trị bệnh Newcastle bằng chế phẩm kháng thể IgY. Kết luận và kiến nghị. 62 Tài liêu tham khảo. 68 v c DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt APMV Avian paramyxovirus ARN Acid ribonucleic CPE Cytophathic Effect F Funsion protein FAO Food Agriculture Organization HA Haemagglutination test HGKT Hiệu giá kháng thể HI Haemagglutination Inhibition test HN Haemagglutinin neuraminidase IgA Immunoglobulins A IgD Immunoglobulin d IgE Immunoglobulin e IgY Yolk Immunoglobulin IgG Immuno Globulin G IgM Immuno Globulin M IPCI Intracerebral pathogenicity index IVPI Intravenous pathogenicity index KDa Kilodalton L Large protein LD50 Lethal Dose 50 LĐT Lòng đỏ trứng M Matrix protein MDT Mean Death Time NK Nature kill NP Nuclecapsid protein OIE Office International Epizooties PBS Phosphate buffered saline µl Microlit µg Microgarm SDS Sodium Doecyl Sulfate TN Thí nghiệm vi c DANH MỤC BẢNG Bảng 2.

So sánh một số đặc tính của kháng thể (KT) sản xuất từ huyết thanh động vật (IgG) và kháng thể sản xuất từ trứng gia cầm (IgY) (Schade et al. Quy trình gây miễn dịch cho gà bằng vaccine sau khi bắt về. Trình tự tiến hành phản ứng HA. Trình tự phản ứng HA để chuẩn độ 4 HA.

Trình tự tiến hành phản ứng HI để đánh giá kháng thể chủ động của gà sau khi gây miễn dịch. Trình tự tiến hành phản ứng HI để đánh giá kháng thể thụ động chuyền qua lòng đỏ trứng. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể của gà hậu bị mới bắt về trước khi gây miễn dịch. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể trong huyết thanh của lô gà thí nghiệm I, thí nghiệm II và lô đối chứng.

Theo dõi tình hình đẻ của gà. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể trong lòng đỏ trứng của lô gà thí nghiệm I, thí nghiệm II và lô đối chứng. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể trong huyết thanh gà và trong lòng đỏ trứng (trên cùng 1 lô gà) ở lô TN I và lô TN II. Thông tin về chế phẩm kháng thể IgY dùng để phòng và trị bệnh Newcastle.

Kết quả phòng và trị bệnh Newcastle bằng chế phẩm kháng thể IgY. 61 vii c DANH MỤC HÌNH Hình 2. Cấu trúc của virus Newcastle. Phương thức lây lan chủ yếu của bệnh Newcastle.

Minh họa sự phân bố các loại kháng thể trong trứng gà. Cấu trúc kháng thể IgG và IgY. Quy trình công nghệ sản xuất chế phẩm kháng thể IgY tại Học viện Nông Nghiệp Viêt Nam (Thú Y). Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu HI.

Điện di kháng thể IgY trên gel SDS-PAGE sau tách chiết. Kết quả mổ khám gà mắc bệnh Newcastle. Kết quả mổ khám gà mắc bệnh Newcastle. 59 viii c DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 4.

Biến động hiệu giá kháng thể trong huyết thanh của gà lô thí nghiệm (TN I, TN II) và lô đối chứng. Hiệu giá kháng thể trong lòng đỏ trứng của gà lô thí nghiệm I, lô gà thí nghiệm II và lô đối chứng. Hiệu giá kháng thể trong lòng đỏ trứng của lô gà thí nghiệm I và lô gà thí nghiệm II sau khi gây miễn dịch. So sánh hiệu giá kháng thể trung bình trong huyết thanh và trong lòng đỏ trứng của gà lô TN I sau khi gây miễn dịch.

So sánh hiệu giá kháng thể trung bình trong huyết thanh và trong lòng đỏ trứng của gà lô TN II sau khi gây miễn dịch. 56 ix c TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Kouldkieng VILAYVONG Tên luận văn: Nghiên cứu sản xuất kháng thể IgY tinh khiết dùng để phòng và trị bệnh Newcastle (ND) Ngành: Thú Y Mã số: 8640101 Tên cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam A. Mục đích nghiên cứu - Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch của gà trước và sau khi tiêm vaccine Newcaste. - Đánh giá mối tương quan hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh và trong lòng đỏ trứng gà.

- Nghiên cứu tách chiết kháng thể IgY đặc hiệu cho virus Newcastle từ lòng đỏ trứng gà và ứng dụng trong phòng và trị bệnh Newcastle. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu - Địa điểm nghiên cứu: Phòng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ sinh học Thú Y- Bệnh viện thú y-Ngô Xuân Quảng-Trâu Quỳ-Gia Lâm-Hà Nội. - Thời gian nghiên cứu: 10/2018-9/2019. Vật liệu nghiên cứu: - Vaccine Newcastle: Vaccine vô hoạt nhũ dầu COR4+IB+ND+EDS của công ty Intervet.

- Virus cường độc vô hoạt Newcastle phân lập từ thực địa (do Phòng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ sinh học Thú Y-Khoa học thú y cung cấp). - Kháng nguyên chuẩn Newcastle cho phản ứng HI (được cung cấp bởi Phòng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ sinh học Thú Y-Khoa Thú Y-Học viện Nông nghiệp Việt Nam). - Gà hậu bị (khỏe mạnh về lâm sàng) giống gà Isa Brown 16 tuần tuổi. - Trang thiết bị, hóa chất thí nghiệm dùng trong chẩn đoán, xét nghiệm Newcastle của Phòng thí nghiệm trọng điểm công nghệ sinh học Thú y-Khoa Thú Y- Học viện Nông nghiệp Việt Nam.

- Các nguyên vật liệu khác: chuồng nuôi, thức ăn nước uống cho gà. Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch của gà trước và sau khi tiêm vaccine Newcaste. x c - Đánh giá mối tương quan hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh và trong lòng đỏ trứng gà. - Nghiên cứu tách chiết kháng thể IgY đặc hiệu cho virus Newcastle từ lòng đỏ trứng gà và ứng dụng trong phòng và trị bệnh Newcastle.

- Nghiên cứu ứng dụng kháng thể tinh khiết trong phòng và điều trị bệnh Newcastle trên gà tại trại gà có dịch Newcastle.