Nghiên Cứu Sản Xuất Kháng Thể IgY Tinh Khiết Dùng Để Phòng Và Trị Bệnh Newcastle

Luận văn thạc sĩ nghiên cứu sản xuất kháng thể IgY tinh khiết nhằm phòng và trị bệnh Newcastle ND, góp phần nâng cao sức khỏe gia cầm.

• Tác giả: Kouldkieng Vilayvong
• Người hướng dẫn: PGS. Lê Văn Phan
• Trường học: Học viện Nông nghiệp Việt Nam
• Chuyên ngành: Thú y
• Đề tài: Nghiên Cứu Sản Xuất Kháng Thể IgY Tinh Khiết Để Phòng Và Trị Bệnh Newcastle
• Loại tài liệu: luận văn
• Năm xuất bản: 2019
• Địa điểm: Hà Nội

Mục lục chi tiết

• LỜI CẢM ĐOAN
• LỜI CẢM ƠN
• MỤC LỤC
• DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT
• DANH MỤC BẢNG
• DANH MỤC HÌNH
• DANH MỤC BIỂU ĐỒ
• TRÍCH YẾU LUẬN VĂN
• 1. PHẦN 1: TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI
• 2. PHẦN 2: MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI
• 2.1. Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch của gà trước và sau khi tiêm vaccine Newcaste
• 2.2. Đánh giá mối tương quan giữa hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh và trong lòng đỏ trứng gà
• 2.3. Nghiên cứu tách chiết kháng thể IgY đặc hiệu cho virus Newcastle từ lòng đỏ trứng gà và ứng dụng trong phòng và trị bệnh Newcastle
• 3. PHẦN 3: Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN
• 3.1. Ý nghĩa khoa học
• 3.2. Ý nghĩa thực tiễn
• 4. PHẦN 4: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
• 4.1. Lịch sử nghiên cứu bệnh Newcastle
• 4.2. Giới thiệu chung về bệnh
• 4.2.1. Lịch sử bệnh và tình hình bệnh ở trên thế giới và ở Việt Nam
• 4.2.2. Một vài nét khái quát về virus Newcastle
• 4.2.3. Hình thái và cấu trúc của virus Newcastle
• 4.2.4. Đặc tính sinh học của virus Newcastle
• 4.3. Dịch tễ học
• 4.4. Phòng bệnh Newcastle
• 4.5. Đáp ứng miễn dịch chống virus Newcastle
• 4.5.1. Đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu
• 4.5.2. Đáp ứng miễn dịch đặc hiệu
• 4.5.3. Miễn dịch chống bệnh Newcastle
• 4.6. Kháng thể IgY
• 4.6.1. Kháng thể IgY là gì?
• 4.6.2. Chuyển IgY vào lòng đỏ trứng
• 4.6.3. Cấu trúc kháng thể của IgY
• 4.6.4. Tách chiết IgY từ lòng đỏ trứng gà
• 5. PHẦN 5: ĐỐI TƯỢNG - NỘI DUNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 5.1. Đối tượng, địa điểm và thời gian nghiên cứu
• 5.2. Nội dung nghiên cứu
• 5.3. Vật liệu nghiên cứu
• 5.4. Phương pháp nghiên cứu
• 5.4.1. Phương pháp gây miễn dịch trên gà
• 5.4.2. Phương pháp lấy và bảo quản huyết thanh
• 5.4.3. Phương pháp xác định hiệu giá kháng thể và độ dài đáp ứng miễn dịch sau khi tiêm vaccine bằng phản ứng HI
• 5.4.4. Phương pháp tách chiết kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà
• 5.4.5. Phương pháp xác định đặc tính của kháng thể IgY
• 5.4.6. Phương pháp đánh giá hiệu quả phòng và điều trị Newcastle
• 5.4.7. Phương pháp xử lý số liệu
• 6. PHẦN 6: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 6.1. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh gà trước khi gây miễn dịch
• 6.2. Khảo sát hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh gà sau khi gây miễn dịch
• 6.3. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể trong huyết thanh của gà sau khi gây miễn dịch
• 6.4. Khảo sát hiệu giá kháng thể Newcastle trong lòng đỏ trứng gà được gây miễn dịch
• 6.5. Kết quả theo dõi tỷ lệ trứng của gà
• 6.6. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể trong lòng đỏ trứng của gà sau khi gây miễn dịch
• 6.7. So sánh hàm lượng kháng thể trong lòng đỏ trứng của lô gà được tiêm vaccine và lô gà được tiêm vaccine kết hợp với virus cường độc vô hoạt
• 6.8. Mối tương quan giữa hiệu giá kháng thể của gà qua huyết thanh và qua lòng đỏ trứng gà
• 6.9. Kết quả tách chiết kháng thể IgY
• 6.10. Khảo sát đánh giá hiệu quả phòng và điều trị của sản phẩm kháng thể IgY
• 6.10.1. Thông tin trại thử nghiệm
• 6.10.2. Kết quả phòng và trị bệnh Newcastle bằng chế phẩm kháng thể IgY
• 7. PHẦN 7: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
• TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng Quan Nghiên Cứu Kháng Thể IgY Bệnh Newcastle ND

Nghiên cứu về kháng thể IgY và bệnh Newcastle (ND) đang thu hút sự quan tâm lớn trong ngành thú y. Bệnh Newcastle, do virus Newcastle gây ra, là một bệnh truyền nhiễm nguy hiểm ở gia cầm, đặc biệt là gà Newcastle và vịt Newcastle, gây thiệt hại kinh tế lớn. Các phương pháp phòng và trị bệnh Newcastle hiện nay, bao gồm cả vaccine, đôi khi không mang lại hiệu quả mong muốn do nhiều yếu tố. Do đó, việc nghiên cứu và phát triển các phương pháp mới, hiệu quả hơn, như sử dụng kháng thể IgY tinh khiết, là vô cùng cần thiết. Kháng thể IgY có tiềm năng lớn trong việc phòng và điều trị bệnh, đặc biệt trong bối cảnh chăn nuôi sạch và hạn chế sử dụng kháng sinh. Nghiên cứu này tập trung vào việc sản xuất kháng thể IgY đặc hiệu để chống lại virus Newcastle, mang lại giải pháp mới cho ngành chăn nuôi gia cầm Newcastle. Theo quyết định số 07/2016/TT-Bộ Nông Nghiệp và Phát triển nông thôn, virus Newcastle thuộc nhóm Paramyxoviridae, gây bệnh tích trên đường hô hấp, tiêu hóa và hệ thần kinh.

1.1. Tầm Quan Trọng Của Nghiên Cứu Kháng Thể IgY

Nghiên cứu kháng thể IgY mở ra hướng đi mới trong việc phòng và trị bệnh Newcastle. Phương pháp này hứa hẹn giảm sự phụ thuộc vào kháng sinh, phù hợp với xu hướng chăn nuôi bền vững. IgY tinh khiết có thể được sử dụng như một liệu pháp bổ sung hoặc thay thế cho vaccine truyền thống, đặc biệt trong trường hợp vaccine không hiệu quả hoặc khi cần bảo vệ nhanh chóng cho đàn gia cầm Newcastle. Việc sản xuất kháng thể IgY tại chỗ cũng giúp giảm chi phí và tăng tính chủ động trong phòng chống dịch bệnh.

1.2. Bệnh Newcastle Thách Thức Lớn Cho Ngành Chăn Nuôi

Bệnh Newcastle là một trong những bệnh truyền nhiễm nguy hiểm nhất đối với gia cầm Newcastle. Bệnh lây lan nhanh, gây tỷ lệ chết cao và ảnh hưởng nghiêm trọng đến năng suất chăn nuôi. Các biện pháp kiểm soát bệnh hiện tại, bao gồm vaccine và biện pháp vệ sinh, đôi khi không đủ để ngăn chặn sự bùng phát dịch bệnh. Do đó, việc tìm kiếm các giải pháp mới, hiệu quả hơn, như sử dụng kháng thể IgY, là vô cùng quan trọng để bảo vệ ngành chăn nuôi gia cầm Newcastle.

II. Vấn Đề Giải Pháp Kháng Thể IgY Cho Bệnh Newcastle

Mặc dù vaccine là biện pháp chính để phòng bệnh Newcastle, nhưng hiệu quả của vaccine có thể bị ảnh hưởng bởi nhiều yếu tố, bao gồm chủng virus Newcastle, tình trạng miễn dịch của gà Newcastle, và điều kiện chăn nuôi. Hơn nữa, việc sử dụng kháng sinh để điều trị các bệnh kế phát có thể dẫn đến tình trạng kháng kháng sinh. Kháng thể IgY nổi lên như một giải pháp tiềm năng, cung cấp khả năng miễn dịch thụ động nhanh chóng và đặc hiệu. Nghiên cứu này tập trung vào việc chiết xuất IgY từ lòng đỏ trứng gà Newcastle đã được gây miễn dịch, tạo ra một sản phẩm có thể được sử dụng để phòng và trị bệnh Newcastle một cách hiệu quả. Việc tinh chế IgY cũng giúp loại bỏ các tạp chất, tăng cường hiệu quả và an toàn của sản phẩm.

2.1. Hạn Chế Của Vaccine Newcastle Hiện Tại

Vaccine Newcastle có thể không hiệu quả trong một số trường hợp do sự khác biệt về chủng virus Newcastle hoặc do hệ miễn dịch của gà Newcastle chưa phát triển đầy đủ. Ngoài ra, vaccine có thể gây ra các phản ứng phụ không mong muốn. Việc sử dụng kháng thể IgY có thể khắc phục những hạn chế này bằng cách cung cấp khả năng miễn dịch trực tiếp và đặc hiệu, không phụ thuộc vào hệ miễn dịch của gà Newcastle.

2.2. Ưu Điểm Của Kháng Thể IgY Trong Phòng Trị Bệnh

Kháng thể IgY có nhiều ưu điểm so với các phương pháp phòng và trị bệnh Newcastle khác. IgY có tính đặc hiệu cao, chỉ tác động lên virus Newcastle, không gây ảnh hưởng đến các vi sinh vật có lợi khác. IgY cũng an toàn, không gây ra các phản ứng phụ nghiêm trọng. Hơn nữa, IgY có thể được sản xuất với số lượng lớn và chi phí thấp, làm cho nó trở thành một giải pháp kinh tế cho việc phòng và trị bệnh Newcastle.

2.3. Quy Trình Chiết Xuất Và Tinh Chế IgY Tối Ưu

Để đảm bảo hiệu quả và an toàn của sản phẩm kháng thể IgY, quy trình chiết xuất IgY và tinh chế IgY cần được tối ưu hóa. Các phương pháp chiết xuất IgY phổ biến bao gồm phương pháp sử dụng polyethylene glycol (PEG) và phương pháp sử dụng acid caprylic. Sau khi chiết xuất IgY, cần tiến hành tinh chế IgY để loại bỏ các tạp chất, tăng cường độ tinh khiết và hiệu quả của sản phẩm. Điện di kháng thể IgY trên gel SDS-PAGE sau tách chiết cho thấy sản phẩm IgY sau tinh chế đã loại bỏ được các protein khác trong lòng đỏ trứng và chỉ chứa protein IgY.

III. Phương Pháp Nghiên Cứu Sản Xuất Kháng Thể IgY Tinh Khiết

Nghiên cứu này sử dụng gà Newcastle giống Isa Brown 16 tuần tuổi, chia thành các lô thí nghiệm và đối chứng. Lô thí nghiệm được tiêm vaccine Newcastle kết hợp với virus Newcastle cường độc vô hoạt, lô khác chỉ tiêm vaccine, và lô đối chứng không tiêm. Hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh và lòng đỏ trứng được theo dõi bằng phản ứng HI. Kháng thể IgY được tách chiết IgY từ lòng đỏ trứng bằng phương pháp phù hợp, sau đó đánh giá hiệu quả phòng và trị bệnh Newcastle trên gà Newcastle tại trại có dịch bệnh. Phương pháp xử lý số liệu thống kê được sử dụng để phân tích kết quả.

3.1. Gây Miễn Dịch Cho Gà Để Sản Xuất IgY

Quy trình gây miễn dịch cho gà Newcastle đóng vai trò quan trọng trong việc sản xuất kháng thể IgY chất lượng cao. Gà được tiêm vaccine Newcastle và virus Newcastle cường độc vô hoạt để kích thích hệ miễn dịch sản xuất kháng thể IgY đặc hiệu. Lịch tiêm phòng và liều lượng vaccine được điều chỉnh để đạt được hiệu giá kháng thể tối ưu trong lòng đỏ trứng.

3.2. Tách Chiết Và Xác Định Đặc Tính Kháng Thể IgY

Phương pháp tách chiết IgY từ lòng đỏ trứng cần đảm bảo giữ nguyên tính chất sinh học của kháng thể. Các phương pháp như sử dụng polyethylene glycol (PEG) hoặc acid caprylic được áp dụng. Sau khi chiết xuất IgY, các đặc tính của kháng thể, bao gồm độ tinh khiết, hiệu giá và khả năng trung hòa virus Newcastle, được xác định bằng các xét nghiệm phù hợp.

3.3. Đánh Giá Hiệu Quả Phòng Và Trị Bệnh Newcastle

Hiệu quả phòng và trị bệnh Newcastle bằng kháng thể IgY được đánh giá trên gà Newcastle tại trại có dịch bệnh. Các chỉ tiêu theo dõi bao gồm tỷ lệ mắc bệnh, tỷ lệ chết, thời gian phục hồi và năng suất trứng. Kết quả so sánh giữa nhóm gà Newcastle được điều trị bằng IgY và nhóm đối chứng không được điều trị sẽ cho thấy hiệu quả thực tế của phương pháp này.

IV. Kết Quả Nghiên Cứu Hiệu Quả IgY Trong Phòng Trị Newcastle

Kết quả nghiên cứu cho thấy hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh và lòng đỏ trứng gà Newcastle tăng lên sau khi gây miễn dịch. Kháng thể IgY sau khi tinh chế IgY có khả năng trung hòa virus Newcastle hiệu quả. Đàn gà Newcastle được tiêm kháng thể nhanh chóng hồi phục sức khỏe và giảm tỷ lệ chết. Nghiên cứu cũng chỉ ra mối tương quan giữa hiệu giá kháng thể trong huyết thanh và lòng đỏ trứng, cho thấy lòng đỏ trứng là nguồn IgY tiềm năng để phòng và trị bệnh Newcastle.

4.1. Đáp Ứng Miễn Dịch Của Gà Sau Tiêm Vaccine Newcastle

Hiệu giá kháng thể trung bình trong huyết thanh gà Newcastle trước khi thí nghiệm đạt 10,4 log2 ở lô TN I, 10,3 log2 lô TN II và 10 log2 ở lô đối chứng. Sau khi gây miễn dịch bằng vaccine kết hợp với virus Newcastle cường độc, hiệu giá kháng thể ở lô TN I liên tục tăng lên và đạt mức cao nhất là 11 log2 ở tuần thứ 13 và 15. Lô TN II sau khi gây miễn dịch bằng vaccine, hiệu giá kháng thể đạt cao nhất 10,9 log2 ở tuần thứ 11 và bắt đầu giảm dần theo thời gian và đạt 10,3 log2 ở tuần thứ 15. Lô TN ĐC hiệu giá kháng thể trung bình trong huyết thanh liên tục giảm trong quá trình thí nghiệm và hiệu giá kháng thể đạt 8,7 log2 ở tuần thứ 15.

4.2. So Sánh Hiệu Giá Kháng Thể Trong Huyết Thanh Và Lòng Đỏ

HGKT Newcastle có trong huyết thanh tỉ lệ thuận với hiệu giá trong lòng đỏ trứng gà Newcastle. Ở lô TN I hàm lượng kháng thể trong huyết thanh tăng dần 10,8 log2 ở tuần thứ 7 tăng lên 11 log2 ở tuần thứ 15, hiệu giá kháng thể trong lòng đỏ trứng đạt 7,33 log2 ở tuần 7 và tăng lên 8,67 log2 ở tuần 15 kể từ khi bắt đầu gây miễn dịch. Ở lô TN II hiệu giá kháng thể trong huyết thanh và lòng đỏ trứng lần lượt là 10,8 log2 và 8 log2 ở tuần thứ 7 sau đó giảm dần theo thời gian, ở tuần thứ 15 hiệu giá kháng thể lần lượt là 10,3 log2 và 7,67 log2.

4.3. Kết Quả Thực Nghiệm Phòng Và Trị Bệnh Newcastle

Đàn gà Newcastle được tiêm kháng thể IgY nhanh hồi phục sức khỏe và ăn uống trở lại bình thường sau 2 ngày điều trị. Ngoài ra có thể cải thiện nhanh tình trạng sức khỏe đàn, giảm tỷ lệ chết và loại thải khi đàn gà Newcastle bị bệnh Newcastle.

V. Ứng Dụng Thực Tiễn Kháng Thể IgY Trong Chăn Nuôi Gia Cầm

Việc sản xuất kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà Newcastle mở ra cơ hội ứng dụng rộng rãi trong chăn nuôi gia cầm Newcastle. IgY có thể được sử dụng để phòng bệnh cho gà Newcastle con, điều trị bệnh Newcastle cho gà Newcastle bệnh, và tăng cường miễn dịch cho gà Newcastle giống. Việc sử dụng IgY cũng giúp giảm sự phụ thuộc vào kháng sinh, góp phần vào chăn nuôi bền vững và an toàn.

5.1. Phòng Bệnh Newcastle Cho Gà Con Bằng IgY

Kháng thể IgY có thể được sử dụng để phòng bệnh Newcastle cho gà Newcastle con bằng cách cho gà Newcastle con uống hoặc tiêm IgY ngay sau khi nở. IgY sẽ cung cấp khả năng miễn dịch thụ động, bảo vệ gà Newcastle con khỏi virus Newcastle trong giai đoạn đầu đời, khi hệ miễn dịch chưa phát triển đầy đủ.

5.2. Điều Trị Bệnh Newcastle Cho Gà Bệnh Bằng IgY

Kháng thể IgY có thể được sử dụng để điều trị bệnh Newcastle cho gà Newcastle bệnh bằng cách tiêm IgY vào gà Newcastle bệnh. IgY sẽ trung hòa virus Newcastle, giúp gà Newcastle bệnh nhanh chóng hồi phục sức khỏe và giảm tỷ lệ chết.

5.3. Tăng Cường Miễn Dịch Cho Gà Giống Bằng IgY

Kháng thể IgY có thể được sử dụng để tăng cường miễn dịch cho gà Newcastle giống bằng cách tiêm IgY cho gà Newcastle giống trước khi đẻ trứng. IgY sẽ được truyền sang trứng, giúp gà Newcastle con có khả năng miễn dịch tốt hơn với bệnh Newcastle.

VI. Kết Luận Triển Vọng Kháng Thể IgY Cho Tương Lai

Nghiên cứu này đã chứng minh tiềm năng của kháng thể IgY trong việc phòng và trị bệnh Newcastle. Việc sản xuất kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà Newcastle là một giải pháp hiệu quả, an toàn và kinh tế cho ngành chăn nuôi gia cầm Newcastle. Trong tương lai, cần tiếp tục nghiên cứu để tối ưu hóa quy trình sản xuất IgY, mở rộng ứng dụng của IgY trong phòng và trị các bệnh khác ở gia cầm Newcastle, và phát triển các sản phẩm IgY tiện dụng và hiệu quả hơn.

6.1. Tối Ưu Hóa Quy Trình Sản Xuất Kháng Thể IgY

Cần tiếp tục nghiên cứu để tối ưu hóa quy trình sản xuất kháng thể IgY, bao gồm lựa chọn chủng gà Newcastle có khả năng sản xuất IgY cao, cải thiện phương pháp gây miễn dịch, và tối ưu hóa quy trình tách chiết IgY và tinh chế IgY.

6.2. Mở Rộng Ứng Dụng Của IgY Trong Thú Y

Kháng thể IgY có tiềm năng ứng dụng rộng rãi trong thú y, không chỉ trong phòng và trị bệnh Newcastle mà còn trong phòng và trị các bệnh khác ở gia cầm Newcastle và các loài động vật khác. Cần tiếp tục nghiên cứu để khám phá các ứng dụng mới của IgY trong thú y.

6.3. Phát Triển Các Sản Phẩm IgY Tiện Dụng Và Hiệu Quả

Cần phát triển các sản phẩm IgY tiện dụng và hiệu quả hơn, như viên nang IgY, dung dịch IgY dễ uống, và thức ăn bổ sung IgY. Các sản phẩm này sẽ giúp người chăn nuôi dễ dàng sử dụng IgY để phòng và trị bệnh Newcastle cho gia cầm Newcastle.

Trích đoạn nội dung tài liệu

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KOULDKIENG VILAYVONG NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT KHÁNG THỂ IGY TINH KHIẾT DÙNG ĐỂ PHÒNG VÀ TRỊ BỆNH NEWCASTLE (ND) Ngành: Thú y Mã số: 8640101 Người hướng dẫn khoa học: PGS. Lê Văn Phan NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2019 c LỜI CẢM ĐOAN Tôi xin cảm đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi, các số liệu, kết quả nghiên cứu được trình bày trong luận văn là trung thực, khách quan và chưa từng được công bố trong bất kỳ công trình nào khác. Tôi xin cảm đoan rằng các thông tin trích dẫn trong luận văn đều đã được chỉ rõ nguồn gốc. Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn KouldKieng Vilayvong i c LỜI CẢM ƠN Qua thời gian học tập và rèn luyện tại Học viện Nông nghiệp Việt Nam, dưới sự giúp đỡ, dạy dỗ tận tình của các thầy, cô giảng viên Khoa Thú Y về kiến thức chuyên môn cũng như tư cách đạo đức của người Thạc sĩ thú y trong thời đại mới.

Tôi đã có thể trưởng thành hơn về cả mặt nhận thức và học thuật. Nhân dịp hoàn thành luận văn tốt nghiệp chuyên ngành Thạc sĩ thú y, cho phép tôi được bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc nhất tới các thầy, cô giảng viên. Xin được gửi lời cảm ơn sâu sắc nhất đến PGS. Lê Văn Phan giảng viên bộ môn Vi sinh vật-Truyền nhiễm, Phó trưởng Phòng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ sinh học Thú Y-Khoa Thú Y-Học viện Nông nghiệp Việt Nam, đã tạo điều kiện và tận tình giúp đỡ, trang bị kiến thức chuyên môn để tôi có đủ năng lực hoàn thành khóa luận.

Xin được cảm ơn tới toàn thể anh chị nhân viên Phòng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ sinh học Thú Y-Khoa Thú Y-Học viện Nông nghiệp Việt Nam đã tận tình hướng dẫn và tạo điều kiện cho tôi thực tập và làm việc tại Bệnh viện. Tôi xin được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc nhất đến gia đình, bạn bè, những người đã luôn động viên, sát cánh cùng tôi trong suốt quá trình học tập và hoàn thành luận văn tốt nghiệp này. Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận văn KouldKieng Vilayvong ii c MỤC LỤC Lời cảm đoan. ii Mục lục.

iii Danh mục chữ viết tắt. vi Danh mục bảng. vii Danh mục hình. viii Danh mục biểu đồ.

ix Trích yếu luận văn. Tính cấp thiết của đề tài. Mục tiêu nghiên cứu của đề tài. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn.

Ý nghĩa khoa học. Ý nghĩa thực tiễn. Tổng quan tài liệu. Lịch sử nghiên cứu bệnh Newcastle.

Giới thiệu chung về bệnh. Lịch sử bệnh và tình hình bệnh ở trên thế giới và ở Việt Nam. Một vài nét khái quát về virus newcastle. Hình thái và cấu trúc của virus Newcastle.

Đặc tính sinh học của virus Newcastle. Dịch tễ học. Phòng bệnh Newcastle. Đáp ứng miễn dịch chống virus newcastle.

Đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu. Đáp ứng miễn dịch đặc hiệu. Miễn dịch chống bệnh Newcastle. Kháng thể IGY.

Kháng thể IgY là gì?. Chuyển IgY vào lòng đỏ trứng. Cấu chúc kháng thể của IgY. Tách chiêt IgY từ lòng đỏ trứng gà.

31 Phần 3 Đối tượng - nội dung - phương phápnghiên cứu. Đối tượng, địa điểm và thời gian nghiên cứu. Nội dung nghiên cứu. Vật liệu nghiên cứu.

Phương pháp nghiên cứu. Phương pháp gây miễn dịch trên gà. Phương pháp lấy và bảo quản huyết thanh. Phương pháp xác định hiệu giá kháng thể và độ dài đáp ứng miễn dịch sau khi tiêm vaccine bằng phản ứng HI.

Phương pháp tách chiết kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà. Phương pháp xác định đặc tính của kháng thể IgY. Phương pháp đánh giá hiệu quả phòng và điều trị Newcastle. Phương pháp xử lý số liệu.

Kết quả và thảo luận. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh gà trước khi gây miễn dịch. Khảo sát hiệu giá kháng thể newcastle trong huyết thanh gà sau khi gây miễn dịch. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể trong huyết thanh của gà sau khi gây miễn dịch.

Khảo sát hiệu giá kháng thể newcastle trong lòng đỏ trứng gà được gây miễn dịch. Kết quả theo dõi tỷ lệ trứng của gà. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể trong lòng đỏ trứng của gà sau khi gây miễn dịch. So sánh hàm lượng kháng thể trong lòng đỏ trứng của lô gà được tiêm vaccine và lô gà được tiêm vaccine kết hợp với virus cường độc vô hoạt.

Mối tương quan giữa hiệu giá kháng thể của gà qua huyết thanh và qua lòng đỏ trứng gà. Kết quả tách chiết kháng thể IgY. Khảo sát đánh giá hiệu quả phòng và điều trị của sản phẩm kháng thể IgY. Thông tin trại thử nghiệm.

Kết quả phòng và trị bệnh Newcastle bằng chế phẩm kháng thể IgY. Kết luận và kiến nghị. 62 Tài liêu tham khảo. 68 v c DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt APMV Avian paramyxovirus ARN Acid ribonucleic CPE Cytophathic Effect F Funsion protein FAO Food Agriculture Organization HA Haemagglutination test HGKT Hiệu giá kháng thể HI Haemagglutination Inhibition test HN Haemagglutinin neuraminidase IgA Immunoglobulins A IgD Immunoglobulin d IgE Immunoglobulin e IgY Yolk Immunoglobulin IgG Immuno Globulin G IgM Immuno Globulin M IPCI Intracerebral pathogenicity index IVPI Intravenous pathogenicity index KDa Kilodalton L Large protein LD50 Lethal Dose 50 LĐT Lòng đỏ trứng M Matrix protein MDT Mean Death Time NK Nature kill NP Nuclecapsid protein OIE Office International Epizooties PBS Phosphate buffered saline µl Microlit µg Microgarm SDS Sodium Doecyl Sulfate TN Thí nghiệm vi c DANH MỤC BẢNG Bảng 2.

So sánh một số đặc tính của kháng thể (KT) sản xuất từ huyết thanh động vật (IgG) và kháng thể sản xuất từ trứng gia cầm (IgY) (Schade et al. Quy trình gây miễn dịch cho gà bằng vaccine sau khi bắt về. Trình tự tiến hành phản ứng HA. Trình tự phản ứng HA để chuẩn độ 4 HA.

Trình tự tiến hành phản ứng HI để đánh giá kháng thể chủ động của gà sau khi gây miễn dịch. Trình tự tiến hành phản ứng HI để đánh giá kháng thể thụ động chuyền qua lòng đỏ trứng. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể của gà hậu bị mới bắt về trước khi gây miễn dịch. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể trong huyết thanh của lô gà thí nghiệm I, thí nghiệm II và lô đối chứng.

Theo dõi tình hình đẻ của gà. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể trong lòng đỏ trứng của lô gà thí nghiệm I, thí nghiệm II và lô đối chứng. Kết quả kiểm tra hiệu giá kháng thể trong huyết thanh gà và trong lòng đỏ trứng (trên cùng 1 lô gà) ở lô TN I và lô TN II. Thông tin về chế phẩm kháng thể IgY dùng để phòng và trị bệnh Newcastle.

Kết quả phòng và trị bệnh Newcastle bằng chế phẩm kháng thể IgY. 61 vii c DANH MỤC HÌNH Hình 2. Cấu trúc của virus Newcastle. Phương thức lây lan chủ yếu của bệnh Newcastle.

Minh họa sự phân bố các loại kháng thể trong trứng gà. Cấu trúc kháng thể IgG và IgY. Quy trình công nghệ sản xuất chế phẩm kháng thể IgY tại Học viện Nông Nghiệp Viêt Nam (Thú Y). Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu HI.

Điện di kháng thể IgY trên gel SDS-PAGE sau tách chiết. Kết quả mổ khám gà mắc bệnh Newcastle. Kết quả mổ khám gà mắc bệnh Newcastle. 59 viii c DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 4.

Biến động hiệu giá kháng thể trong huyết thanh của gà lô thí nghiệm (TN I, TN II) và lô đối chứng. Hiệu giá kháng thể trong lòng đỏ trứng của gà lô thí nghiệm I, lô gà thí nghiệm II và lô đối chứng. Hiệu giá kháng thể trong lòng đỏ trứng của lô gà thí nghiệm I và lô gà thí nghiệm II sau khi gây miễn dịch. So sánh hiệu giá kháng thể trung bình trong huyết thanh và trong lòng đỏ trứng của gà lô TN I sau khi gây miễn dịch.

So sánh hiệu giá kháng thể trung bình trong huyết thanh và trong lòng đỏ trứng của gà lô TN II sau khi gây miễn dịch. 56 ix c TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Kouldkieng VILAYVONG Tên luận văn: Nghiên cứu sản xuất kháng thể IgY tinh khiết dùng để phòng và trị bệnh Newcastle (ND) Ngành: Thú Y Mã số: 8640101 Tên cơ sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam A. Mục đích nghiên cứu - Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch của gà trước và sau khi tiêm vaccine Newcaste. - Đánh giá mối tương quan hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh và trong lòng đỏ trứng gà.

- Nghiên cứu tách chiết kháng thể IgY đặc hiệu cho virus Newcastle từ lòng đỏ trứng gà và ứng dụng trong phòng và trị bệnh Newcastle. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu - Địa điểm nghiên cứu: Phòng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ sinh học Thú Y- Bệnh viện thú y-Ngô Xuân Quảng-Trâu Quỳ-Gia Lâm-Hà Nội. - Thời gian nghiên cứu: 10/2018-9/2019. Vật liệu nghiên cứu: - Vaccine Newcastle: Vaccine vô hoạt nhũ dầu COR4+IB+ND+EDS của công ty Intervet.

- Virus cường độc vô hoạt Newcastle phân lập từ thực địa (do Phòng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ sinh học Thú Y-Khoa học thú y cung cấp). - Kháng nguyên chuẩn Newcastle cho phản ứng HI (được cung cấp bởi Phòng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ sinh học Thú Y-Khoa Thú Y-Học viện Nông nghiệp Việt Nam). - Gà hậu bị (khỏe mạnh về lâm sàng) giống gà Isa Brown 16 tuần tuổi. - Trang thiết bị, hóa chất thí nghiệm dùng trong chẩn đoán, xét nghiệm Newcastle của Phòng thí nghiệm trọng điểm công nghệ sinh học Thú y-Khoa Thú Y- Học viện Nông nghiệp Việt Nam.

- Các nguyên vật liệu khác: chuồng nuôi, thức ăn nước uống cho gà. Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch của gà trước và sau khi tiêm vaccine Newcaste. x c - Đánh giá mối tương quan hiệu giá kháng thể Newcastle trong huyết thanh và trong lòng đỏ trứng gà. - Nghiên cứu tách chiết kháng thể IgY đặc hiệu cho virus Newcastle từ lòng đỏ trứng gà và ứng dụng trong phòng và trị bệnh Newcastle.

- Nghiên cứu ứng dụng kháng thể tinh khiết trong phòng và điều trị bệnh Newcastle trên gà tại trại gà có dịch Newcastle.