Luận văn thạc sĩ đánh giá mối liên quan giữa độ ngưng tập tiểu cầu với kiểu gen cyp2c192 cyp2c193 và một số yếu tố khác trên bệnh nhân đau thắt ngực không ổn định tại viện tim mạch việt nam

Luận văn thạc sĩ phân tích mối liên quan giữa gen CYP2C192, CYP2C193 và độ ngưng tập tiểu cầu ở bệnh nhân đau thắt ngực không ổn định.

Trường đại học

Đại học Quốc gia Hà Nội

Chuyên ngành

Dược học

Người đăng

Ẩn danh

Thể loại

Khóa luận tốt nghiệp đại học

2018

82
1
0

Phí lưu trữ

30 Point

Mục lục chi tiết

LỜI CẢM ƠN

DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT

DANH MỤC BẢNG

DANH MỤC BIỂU ĐỒ

DANH MỤC HÌNH

1. CHƯƠNG 1: ĐAU THẮT NGỰC KHÔNG ỔN ĐỊNH

1.1. Định nghĩa ĐTNKÔĐ là một dạng trong HCĐMVC, được định nghĩa bởi sự xuất hiện các triệu chứng lâm sàng của thiếu máu cơ tim (cơn đau thắt ngực mới xuất hiện hoặc biến đổi các dạng đau ngực, hoặc sự gia tăng cơn đau thắt ngực lúc nghỉ ngơi, hoặc những biến đổi đau thắt ngực tương đương), không có sự xuất hiện các dấu ấn sinh học do tổn thương cơ tim (troponin), điện tâm đồ có thể thay đổi

1.2. Cơ chế bệnh sinh của ĐTNKÔĐ

1.3. Tiêu chuẩn chẩn đoán đau thắt ngực không ổn định

1.4. Tổng quan về ngưng tập tiểu cầu

1.4.1. Sinh lý tiểu cầu

1.4.2. Quá trình ngưng tập tiểu cầu

1.4.2.1. Giai đoạn bám dính
1.4.2.2. Giai đoạn ngưng tập

2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1. Đối tượng nghiên cứu. Tiêu chuẩn lựa chọn. Tiêu chuẩn loại trừ

2.2. Thời gian và địa điểm nghiên cứu

2.3. Phương pháp nghiên cứu

2.4. Nguyên liệu và phương tiện nghiên cứu

2.5. Các bước nghiên cứu

2.6. Quy trình nghiên cứu

2.7. Thu thập, xử lý và bảo quản mẫu

2.8. Tách chiết và kiểm tra chất lượng DNA tổng số

2.9. Khuếch đại đoạn gen chứa các SNP CYP2C19*2, CYP2C19*3 bằng PCR và kiểm tra chất lượng sản phẩm

2.10. Tinh sạch sản phẩm PCR

2.11. Xác định kiểu gen của SNP CYP2C19*2, *3 sử dụng phương pháp cắt bằng enzyme giới hạn (RFLP) có đối chiếu với phương pháp giải trình tự

2.12. Xét nghiệm đo độ ngưng tập tiểu cầu

2.13. Xử lý và phân tích số liệu. Các loại sai số và cách khắc phục

2.13.1. Sai số mắc phải

2.13.2. Cách khắc phục sai số

2.14. Đạo đức nghiên cứu

3. KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN

3.1. Một số đặc điểm chung

3.2. Kết quả đo một số chỉ số cận lâm sàng

3.3. Kết quả đo độ NTTC

3.4. Kết quả phân tích kiểu gen CYP2C19*2 và CYP2C19*3

3.5. Mối quan hệ giữa độ NTTC với kiểu gen CYP2C19*2 và CYP2C19*3

3.6. Mối liên quan giữa độ NTTC và các yếu tố khác

3.6.1. Mối liên quan giữa độ NTTC và giới

3.6.2. Mối liên quan giữa độ NTTC và các yếu tố nguy cơ

TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tóm tắt

I. Tổng quan về gen CYP2C19 và ngưng tập tiểu cầu

Gen CYP2C19 đóng vai trò quan trọng trong quá trình chuyển hóa thuốc, đặc biệt là clopidogrel, một loại thuốc chống ngưng tập tiểu cầu. Đau thắt ngực không ổn định (ĐTNKÔĐ) là một tình trạng nghiêm trọng có thể dẫn đến nhồi máu cơ tim. Nghiên cứu này nhằm đánh giá mối liên quan giữa gen CYP2C19 và độ ngưng tập tiểu cầu ở bệnh nhân ĐTNKÔĐ.

1.1. Định nghĩa và vai trò của gen CYP2C19

Gen CYP2C19 mã hóa enzyme cytochrome P450, có vai trò quan trọng trong chuyển hóa nhiều loại thuốc, bao gồm clopidogrel. Đa hình di truyền của gen này có thể ảnh hưởng đến hiệu quả điều trị và nguy cơ biến chứng tim mạch.

1.2. Ngưng tập tiểu cầu và ảnh hưởng của gen CYP2C19

Ngưng tập tiểu cầu là quá trình tiểu cầu kết dính với nhau để hình thành cục máu đông. Sự khác biệt trong kiểu gen CYP2C19 có thể dẫn đến sự thay đổi trong khả năng ngưng tập tiểu cầu, ảnh hưởng đến hiệu quả của clopidogrel.

II. Vấn đề và thách thức trong điều trị ĐTNKÔĐ

ĐTNKÔĐ là một tình trạng cấp cứu y tế, có thể dẫn đến nhồi máu cơ tim. Việc điều trị hiệu quả là rất quan trọng để giảm thiểu nguy cơ tử vong. Tuy nhiên, sự kháng thuốc clopidogrel do đa hình gen CYP2C19 là một thách thức lớn.

2.1. Tình trạng kháng clopidogrel ở bệnh nhân ĐTNKÔĐ

Kháng clopidogrel xảy ra ở một tỷ lệ đáng kể bệnh nhân, từ 5-44%. Điều này có thể dẫn đến giảm hiệu quả điều trị và tăng nguy cơ biến chứng tim mạch.

2.2. Các yếu tố ảnh hưởng đến độ ngưng tập tiểu cầu

Ngoài gen CYP2C19, các yếu tố như tuổi tác, giới tính, và các bệnh lý đi kèm như tăng huyết áp và đái tháo đường cũng có thể ảnh hưởng đến độ ngưng tập tiểu cầu.

III. Phương pháp nghiên cứu mối liên quan giữa gen CYP2C19 và độ ngưng tập tiểu cầu

Nghiên cứu này sử dụng phương pháp phân tích gen và đo độ ngưng tập tiểu cầu để đánh giá mối liên quan giữa gen CYP2C19 và độ ngưng tập tiểu cầu ở bệnh nhân ĐTNKÔĐ.

3.1. Thiết kế nghiên cứu và đối tượng tham gia

Nghiên cứu được thực hiện trên bệnh nhân ĐTNKÔĐ tại Viện Tim mạch Việt Nam. Các tiêu chí lựa chọn và loại trừ bệnh nhân được xác định rõ ràng để đảm bảo tính chính xác của kết quả.

3.2. Phương pháp phân tích gen CYP2C19

Phân tích gen CYP2C19 được thực hiện bằng phương pháp PCR và RFLP để xác định kiểu gen CYP2C192 và CYP2C193. Kết quả sẽ được so sánh với độ ngưng tập tiểu cầu của bệnh nhân.

IV. Kết quả nghiên cứu và ứng dụng thực tiễn

Kết quả nghiên cứu cho thấy có mối liên quan giữa kiểu gen CYP2C19 và độ ngưng tập tiểu cầu ở bệnh nhân ĐTNKÔĐ. Điều này có thể giúp cải thiện chiến lược điều trị cho bệnh nhân.

4.1. Tần số kiểu gen CYP2C19 trong nhóm nghiên cứu

Tần số kiểu gen CYP2C192 và CYP2C193 được xác định trong nhóm bệnh nhân ĐTNKÔĐ. Kết quả cho thấy sự phân bố khác nhau giữa các nhóm dân cư.

4.2. Mối liên quan giữa kiểu gen và độ ngưng tập tiểu cầu

Nghiên cứu chỉ ra rằng bệnh nhân mang alen CYP2C19*2 có độ ngưng tập tiểu cầu cao hơn, dẫn đến nguy cơ biến chứng tim mạch tăng lên.

V. Kết luận và triển vọng tương lai của nghiên cứu

Nghiên cứu này cung cấp thông tin quan trọng về mối liên quan giữa gen CYP2C19 và độ ngưng tập tiểu cầu ở bệnh nhân ĐTNKÔĐ. Kết quả có thể giúp cải thiện điều trị và giảm thiểu biến chứng cho bệnh nhân.

5.1. Ý nghĩa của nghiên cứu đối với điều trị ĐTNKÔĐ

Kết quả nghiên cứu có thể giúp các bác sĩ lựa chọn phương pháp điều trị phù hợp hơn cho bệnh nhân, từ đó nâng cao hiệu quả điều trị.

5.2. Hướng nghiên cứu tiếp theo

Cần có thêm nhiều nghiên cứu để xác định rõ hơn về mối liên quan giữa gen CYP2C19 và các yếu tố khác ảnh hưởng đến độ ngưng tập tiểu cầu, từ đó phát triển các phương pháp điều trị cá nhân hóa.

22/07/2025
Luận văn thạc sĩ đánh giá mối liên quan giữa độ ngưng tập tiểu cầu với kiểu gen cyp2c192 cyp2c193 và một số yếu tố khác trên bệnh nhân đau thắt ngực không ổn định tại viện tim mạch việt nam

Trích đoạn nội dung tài liệu

CHƯƠNG 1. Đau thắt ngực không ổn định 1. Định nghĩa ĐTNKÔĐ là một dạng trong HCĐMVC, được định nghĩa bởi sự xuất hiện các triệu chứng lâm sàng của thiếu máu cơ tim (cơn đau thắt ngực mới xuất hiện hoặc biến đổi các dạng đau ngực, hoặc sự gia tăng cơn đau thắt ngực lúc nghỉ ngơi, hoặc những biến đổi đau thắt ngực tương đương), không có sự xuất hiện các dấu ấn sinh học do tổn thương cơ tim (troponin), điện tâm đồ có thể thay đổi [29]. Cơ chế bệnh sinh của ĐTNKÔĐ Xơ vữa động mạch (XVĐM) là quá trình tiến triển bởi sự hình thành các mảng xơ vữa ở lớp nội mô của động mạch vừa và lớn, diễn ra liên tục và dẫn đến thiếu máu cấp tính.

Các yếu tố nguy cơ như: cholesterol máu cao, THA, ĐTĐ, hút thuốc lá, đóng vai trò thiết yếu trong khởi phát XVĐM [43]. Chúng làm tổn thương đến tế bào nội mô của mạch máu và gây rối loạn chức năng nội mô bằng cách làm giảm hoạt tính sinh học của nitric oxyde, tăng sản xuất endothelin, làm tổn thương mạch máu, tăng biểu lộ phân tử kết dính (selectin, phân tử kết dính tế bào mạch, phân tử kết dính giữa các tế bào) và tăng cường quá trình đông máu [39]. Viêm đóng vai trò quan trọng trong sự tiến triển của mảng xơ vữa. Khi các tế bào nội mô bị tổn thương, các tế bào viêm đặc biệt là monocyte sẽ gắn với các phân tử dính nội mô, đi vào lớp dưới nội mô và biệt hóa thành đại thực bào.

Các đại thực bào ăn các phân tử LDL, chuyển thành tế bào bọt và hình thành lên dải chất béo. Để duy trì quá trình viêm, đại thực bào được hoạt hóa sẽ thu hút thêm các đại thực bào khác bằng cách tiết ra các chất trung gian. Thêm vào đó, đại thực bào cũng kích thích sự tăng sinh và hình thành tế bào cơ trơn ở lưới ngoại bào thông qua việc tiết ra các cytokin, góp phần hình thành các mô xơ bởi lưới ngoại bào [43]. Nguy cơ vỡ mảng xơ vữa phụ thuộc vào kiểu mảng xơ vữa hơn là kích thước.

Lõi vữa của mảng xơ vữa giàu lipid và không có collagen nâng đỡ. Nghiên cứu cho thấy kích thước của lõi vữa tỉ lệ thuận với khả năng vỡ mảng xơ vữa [40]. Thêm vào đó, viêm là một nhân tố quan trọng làm mảng xơ vữa dễ bị tổn thương, liên quan đến tăng hoạt động của đại thực bào và lympho T tại vị trí mảng. Sự tăng hoạt động này làm kích thước của lõi xơ vữa lớn lên và làm mỏng vỏ bao xơ của mảng do đại thực bào tạo ra metalloproteinase – enzym tiêu khung ngoại bào và tế bào lympho T cũng tiết ra các enzyme tiêu khung ngoại bào mạnh như tryptase, chymase [56].

Bên cạnh 3 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com đó, các phân tích bệnh học còn cho thấy, có sự thiếu các tế bào cơ trơn tại các mảng xơ vữa dễ tổn thương. Các chất trung gian trong quá trình viêm có thể làm cho các tế bào cơ trơn chết theo chương trình hoặc ức chế sự tổng hợp các chất collagen từ tế bào cơ trơn [56]. Tóm lại, các mảng xơ vữa có nguy cơ cao hay dễ bị tổn thương nếu chúng có các đặc điểm sau: lõi xơ vữa lớn, vỏ bao xơ mỏng, tập trung dày đặc đại thực bào và lympho T, lượng nhỏ tế bào cơ trơn, tăng biểu hiện tại chỗ của metalloproteinase sẽ làm thoái hóa collagen, tăng sinh mạch và xuất huyết tại mảng xơ vữa [40]. Cơ chế bệnh sinh của ĐTNKÔĐ (Nguồn: http://www.org/doi/full/10.1056/NEJM199901143400207) Khi mảng xơ vữa vỡ ra, lớp dưới nội mô lộ ra (giàu các yếu tố mô và tiền yếu tố đông máu) tiếp xúc với tiểu cầu, dẫn đến hoạt hóa các thụ thể trên bề mặt tiểu cầu, hoạt hóa quá trình ngưng kết tiểu cầu và kết quả là hình thành huyết khối.

Nếu mảng vỡ nhỏ và cục huyết khối không làm tắc hoàn toàn động mạch vành, chỉ làm giảm dòng máu tới vùng cơ tim do động mạch đó nuôi dưỡng, thì biểu hiện lâm sàng là cơn đau 4 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com thắt ngực không ổn định. Nội soi động mạch vành cho thấy 73,7% bệnh nhân ĐTNKÔĐ có huyết khối trong lòng động mạch vành [27,56]. Tiêu chuẩn chẩn đoán đau thắt ngực không ổn định Chẩn đoán ĐTNKÔĐ theo tiêu chuẩn của ACCF/AHA (2012) (American college of Cardiology Foundation/ American Heart Association) [53]: - Lâm sàng: cơn ĐTNKÔĐ có thể hiện diện dưới các dạng thức khác nhau: + Cơn đau thắt ngực xuất hiện dưới đây (4-8) tuần. + Cơn đau thắt ngực trầm trọng dần thêm (tần số hoặc cường độ hoặc thời gian các cơn đau, giảm đáp ứng với các dẫn xuất nitrat).

+ Cơn đau thắt ngực kéo dài lúc nghỉ ngơi (>15-20 phút) nhưng đáp ứng với các dẫn xuất nitrat (nếu không có thể đó là nhồi máu cơ tim không có sóng Q). - Điện tâm đồ lúc nghỉ có thể thay đổi. - Men CK-MB, troponin T, Ic không tăng. Tổng quan về ngưng tập tiểu cầu 1.

Sinh lý tiểu cầu Tiểu cầu là thành phần hữu hình nhỏ nhất của máu, hình đĩa, đường kính 3-4µm, không nhân, được sản xuất từ nguyên mẫu tiểu cầu ở tủy xương. Quan sát dưới kính hiển vi, tiểu cầu có cấu trúc siêu phức tạp, gồm hệ thống màng, hệ thống vi quản, hệ thống ống đặc, nhiều hạt và hệ thống các kênh mở. Màng tiểu cầu gồm 2 lớp lipid kép bao quanh tiểu cầu, có các glycoprotein (GP) tác dụng như các thụ thể (receptor) bề mặt và là nơi diễn ra các hoạt động đông máu của tiểu cầu [10]. Ngoài ra, màng tiểu cầu cũng có thể nhận và chuyển tín hiệu bề mặt thành tín hiệu hóa học bên trong [63].

Các glycoprotein màng tiểu cầu và chức năng của chúng [10] 5 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail. Quá trình ngưng tập tiểu cầu Ở trạng thái sinh lý bình thường, khi mạch máu nguyên vẹn, tiểu cầu bị bất hoạt, không bám dính được do hoạt động của nitric oxide, prostacyclin và do khả năng kìm hãm kích hoạt ADP của ADPase (adenosin diphotphatase) từ các tế bào nội mô. Tuy nhiên, khi mạch máu bị tổn thương, tiểu cầu sẽ nhanh chóng bám dính vào thành mạch, thay đổi hình dạng, bài tiết và ngưng tập thông qua một loạt phản ứng dẫn đến hình thành nút tiểu cầu tại mô tổn thương. Quá trình tạo tiểu cầu hoạt hóa có thể được chia thành các bước: bám dính, ngưng tập và phóng thích các chất [50].

➢ Giai đoạn bám dính Khi mạch máu bị tổn thương, các yếu tố kháng tiểu cầu nội sinh bị suy yếu, để lộ lớp dưới nội mô có bản chất là các protein dính như: collagen, yếu tố von Willebrand (vWF), fibronectin, lamilin…[50,63]. Khi tốc độ dòng máu cao, vWF đóng vai trò quan trọng trong bám dính tiểu cầu ban đầu thông qua liên kết với phức hợp GP Ib/IX/V. Tuy nhiên, khi tốc độ dòng máu thấp hoặc tĩnh thì bám dính tiểu cầu ban đầu chủ yếu thông qua liên kết của collagen với phức hợp GP Ia//IIa. Những tương tác này giúp tiểu cầu lưu thông chậm lại, từ đó giúp các cặp thụ thể - phối tử tương tác, ràng buộc hơn nữa dẫn đến sự bám dính tĩnh [50,52].

Đặc biệt, sự tương tác ban đầu giữa collagen và GP VI làm hoạt hóa các thụ thể GP IIb/IIIa và GP Ia/IIa. vWF và collagen hình thành liên kết mạnh với GP IIb/IIIa và GP Ia/IIa [50]. ➢ Giai đoạn ngưng tập Trong giai đoạn NTTC, tiểu cầu dính với nhau tạo thành từng đám (nút tiểu cầu). GP IIb/IIIa là một thụ thể có vai trò quan trọng trong giai đoạn này, có khoảng 4000 - 5000 phức hợp GP IIb/IIIa trên bề mặt của màng tiểu cầu bất hoạt.

Khi tiểu cầu hoạt hóa, các GP IIb/IIIa mới được hoạt hóa, chúng hoạt động như thụ thể gắn với fibrinogen, vWF, fibronectin, vitronectin. Tuy nhiên chúng gắn với fibrinogen là chủ yếu vì fibrinogen có nồng độ cao trong huyết tương và GP IIb/IIIa có ái lực với fibrinogen là mạnh nhất. Khi liên kết này xảy ra trên các tiểu cầu sẽ tạo nên một cầu nối làm cho các tiểu cầu ngưng tập lại với nhau và tiếp tục hoạt hóa. Hai giai đoạn ngưng tập và hoạt hóa tác động qua lại, tương hỗ lẫn nhau, diễn ra liên tục cho đến khi tạo thành nút tiểu cầu [10,50].

Một số chất có khả năng gây NTTC như: ADP, adrenalin, thromboxan A2, collagen, ristocetin…, trong đó ADP là chất gây NTTC quan trọng nhất vì chúng không phụ thuộc vào tác nhân khác và còn giúp cho phản ứng ngưng tập của các tác nhân khác diễn ra đầy đủ hơn. Hơn nữa, ADP còn có nguồn 6 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com gốc từ hồng cầu. Do đó, ở những thành mạch bị tổn thương, hồng cầu sẽ bài tiết ADP, làm tăng nhanh nồng độ ADP, giúp tăng NTTC, nhanh chóng tạo nút cầm máu ban đầu, làm ngừng chảy máu. ADP phát huy hiệu quả tối đa khi gắn kết với cả 3 thụ thể trên tiểu cầu: P2Y1, P2Y12, P2X1, trong đó P2Y1, P2Y12 là 2 thụ thể cần thiết cho hiện tượng NTTC xảy ra tối đa.

Chúng là một trong những trọng tâm của nghiên cứu về thuốc ức chế NTTC trong dự phòng và điều trị huyết khối [10]. ➢ Giai đoạn phóng thích các chất của tiểu cầu Sau khi bị ngưng tập bởi các chất gây ngưng tập, các tiểu cầu sẽ xảy ra một loạt các biến đổi như quá trình thay đổi hình dạng và phóng thích các yếu tố của tiểu cầu. Quá trình này rất phức tạp, tiểu cầu biến đổi cả về hình thái và sinh hóa [69]. Bám dính và ngưng tập tiểu cầu (Nguồn:https://openi.php?img=PMC4265014_40681_20 14_24_Fig1_HTML&req=4 ) 1.

Điều trị ức chế NTTC trong ĐTNKÔĐ Chống hình thành huyết khối thông qua ức chế hoạt hóa tiểu cầu là điều trị cốt lõi trong ĐTNKÔĐ, giúp làm giảm các biến cố tim mạch và giảm tỉ lệ tử vong cho người bệnh [53]. Theo cơ chế tác dụng, các thuốc chống NTTC được phân loại như sau [63]: - Thuốc ức chế Cyclooxygenase (aspirin). - Thuốc ức chế thụ thể ADP (clopidogrel [Plavix], prasugrel [Effient], ticlopidine [Ticlid]). - Thuốc ức chế phosphodiesterase (cilostazol [Pletal]).

7 LUAN VAN CHAT LUONG download : add luanvanchat@agmail.com - Thuốc ức chế thụ thể GPIIb/IIIa (abciximab [ReoPro], eptifibatide [Integrilin], tirofiban [Aggrastat]). - Thuốc ức chế tái hấp thu Adenosin (dipyridamole [Persantine]). Thuốc chống NTTC aspirin và clopidogrel 1. Cơ chế tác dụng của aspirin lên quá trình NTTC (Nguồn: http://tmedweb.edu/pharmwiki/doku.php/introduction_to_eicosanoids) Aspirin là thuốc chống tiểu cầu được nghiên cứu rộng rãi nhất và được sử dụng phổ biến trên lâm sàng.

Hơn 100 thử nghiệm ngẫu nhiên ở những bệnh nhân có nguy cơ cao đều cho thấy aspirin làm giảm tử vong do mạch máu xuống khoảng 15% và các biến cố tim mạch không gây tử vong xuống khoảng 30%.

Nội dung được bảo vệ bản quyền — Tải xuống đầy đủ