Luận Văn Thạc Sĩ Về Tách Chiết Glucan Từ Tế Bào Nấm Men Saccharomyces Cerevisiae

Khám phá luận văn thạc sĩ về công nghệ sinh học, tách chiết tinh sạch và xác định glucan từ tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae.

• Tác giả: Trịnh Thụy Hoàng Lan
• Người hướng dẫn: TS. Hoàng Quốc Khánh
• Trường học: Đại học Quốc gia Tp. Hồ Chí Minh
• Chuyên ngành: Công nghệ sinh học
• Đề tài: Tách Chiết Tinh Sạch Glucan Từ Nấm Men Saccharomyces Cerevisiae
• Loại tài liệu: luận văn thạc sĩ
• Năm xuất bản: 2009
• Địa điểm: Tp. Hồ Chí Minh

Mục lục chi tiết

• LỜI CÁM ƠN
• 1. PHẦN 1: MỞ ĐẦU
• 2. PHẦN 2: TỔNG QUAN
• 2.1. SƠ LƯỢC ĐẶC ĐIỂM CHUNG CỦA TẾ BÀO NẤM MEN
• 2.2. CẤU TRÚC TẾ BÀO NẤM MEN
• 2.3. KHÁI QUÁT VỀ BETA-GLUCAN
• 2.4. KHÁI QUÁT CÁC PHƯƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT, TINH SẠCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN TẾ BÀO NẤM MEN
• 2.5. TỔNG QUAN VỀ CHẤT KÍCH THÍCH MIỄN DỊCH VÀ CƠ CHẾ TÁC ĐỘNG CỦA BETA-GLUCAN
• 3. PHẦN 3: NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 3.1. VẬT LIỆU — THIẾT BỊ - HÓA CHẤT
• 3.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
• 4. PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
• 4.1. ĐIỀU CHẾ BETA-GLUCAN
• 4.2. ĐỊNH LƯỢNG ĐƯỜNG KHỬ BẰNG 3,5-DINITROSALICYLIC ACID
• 4.3. HÀM LƯỢNG BETA-GLUCAN
• 4.4. HÀM LƯỢNG PROTEIN
• 4.5. HÀM LƯỢNG LIPID
• 4.6. HÀM LƯỢNG TRO
• 4.7. KẾT QUẢ THEO ĐỢT THÍ NGHIỆM
• 4.8. SỐ LƯỢNG TẾ BÀO BẠCH CẦU KHI THỬ NGHIỆM BETA-GLUCAN TRÊN CHUỘT
• 5. PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
• DANH MỤC CÁC BẢNG
• DANH MỤC CÁC HÌNH
• DANH MỤC CÁC ĐỒ THỊ

Tóm tắt

I. Giới thiệu về Glucan và Nấm Men Saccharomyces cerevisiae

Glucan là một polysaccharide quan trọng, có mặt trong thành tế bào của nhiều loại nấm men, đặc biệt là Saccharomyces cerevisiae. Nấm men này không chỉ được sử dụng trong sản xuất thực phẩm mà còn có giá trị dinh dưỡng cao. Glucan có khả năng tăng cường hệ miễn dịch và giảm cholesterol trong máu, làm cho nó trở thành một thành phần quý giá trong ngành thực phẩm chức năng. Việc tách chiết và tinh sạch glucan từ nấm men là một quy trình quan trọng, giúp tối ưu hóa hàm lượng và chất lượng của sản phẩm cuối cùng.

1.1. Đặc điểm của Nấm Men Saccharomyces cerevisiae

Nấm men Saccharomyces cerevisiae là một loại nấm đơn bào, có kích thước lớn hơn vi khuẩn và có khả năng sinh sản nhanh chóng. Thành tế bào của nấm men này chủ yếu được cấu tạo từ polysaccharide, trong đó glucan chiếm tỷ lệ lớn. Cấu trúc của thành tế bào nấm men không chỉ bảo vệ mà còn tham gia vào nhiều quá trình sinh lý quan trọng. Việc hiểu rõ về cấu trúc và chức năng của nấm men sẽ giúp tối ưu hóa quy trình tách chiết glucan.

II. Quy trình Tách Chiết và Tinh Sạch Glucan

Quy trình tách chiết glucan từ nấm men Saccharomyces cerevisiae bao gồm nhiều bước quan trọng. Đầu tiên, nấm men được xử lý bằng dung dịch kiềm và acid để phân cắt và hòa tan các thành phần không mong muốn như lipid và protein. Sau đó, thiết bị đồng hóa tế bào như French Press được sử dụng để tăng hiệu suất tách chiết. Kết quả cho thấy rằng quy trình có xử lý tế bào nấm men cho hàm lượng glucan cao hơn so với quy trình không xử lý. Điều này chứng tỏ rằng việc tối ưu hóa quy trình tách chiết là rất cần thiết để thu được sản phẩm có chất lượng tốt nhất.

2.1. Phương pháp Tách Chiết

Phương pháp tách chiết glucan từ nấm men bao gồm việc sử dụng dung dịch kiềm và acid để hòa tan các thành phần không cần thiết. Sau đó, quá trình đồng hóa tế bào giúp phá vỡ cấu trúc tế bào, từ đó giải phóng glucan. Kết quả cho thấy rằng quy trình này không chỉ hiệu quả trong việc tách chiết mà còn giúp tinh sạch sản phẩm, đảm bảo hàm lượng glucan cao và chất lượng tốt.

III. Ứng Dụng và Tác Dụng của Glucan

Nghiên cứu về glucan cho thấy nó có nhiều ứng dụng trong lĩnh vực y tế và thực phẩm. Glucan có khả năng kích thích hệ miễn dịch, giúp cơ thể chống lại các bệnh tật. Ngoài ra, nó còn được sử dụng như một chất bổ sung dinh dưỡng trong thực phẩm chức năng. Việc khảo sát tác dụng của glucan trên chuột cho thấy sự gia tăng số lượng bạch cầu, cho thấy khả năng kích thích miễn dịch của nó. Điều này mở ra nhiều cơ hội cho việc phát triển các sản phẩm chức năng từ glucan.

3.1. Tác Dụng Kích Thích Miễn Dịch

Nghiên cứu cho thấy rằng glucan có khả năng kích thích hệ miễn dịch, làm tăng số lượng bạch cầu trong cơ thể. Thí nghiệm trên chuột cho thấy rằng hàm lượng glucan 6mg/ngày có tác dụng rõ rệt trong việc tăng cường khả năng miễn dịch. Điều này chứng tỏ rằng glucan không chỉ là một thành phần dinh dưỡng mà còn có tác dụng sinh học quan trọng, mở ra hướng nghiên cứu mới trong việc phát triển các sản phẩm hỗ trợ sức khỏe.

Nội dung chính

Tổng quan nghiên cứu

Trong bối cảnh ngành công nghiệp sinh học và thực phẩm ngày càng phát triển, việc khai thác các thành phần có hoạt tính sinh học từ nấm men Saccharomyces cerevisiae trở nên thiết yếu. Nấm men Saccharomyces cerevisiae không chỉ được ứng dụng rộng rãi trong sản xuất bánh mì, rượu bia mà còn là nguồn nguyên liệu tiềm năng để chiết tách beta-glucan – một polysaccharide có khả năng kích thích hệ miễn dịch và giảm cholesterol trong máu. Theo ước tính, beta-glucan chiếm khoảng 80-90% thành phần polysaccharide trong thành tế bào nấm men, với cấu trúc đặc trưng gồm liên kết β-1,3 và β-1,6-glucan. Tuy nhiên, việc tách chiết và tinh sạch beta-glucan vẫn còn nhiều thách thức do cấu trúc phức tạp của thành tế bào nấm men và sự hiện diện của các thành phần khác như protein, lipid, chitin.

Luận văn tập trung xây dựng quy trình tách chiết, tinh sạch và xác định hàm lượng beta-glucan từ tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae, đồng thời khảo sát ảnh hưởng của beta-glucan đến hệ miễn dịch trên chuột thí nghiệm trong khoảng thời gian 8 ngày. Mục tiêu cụ thể là phát triển phương pháp đơn giản, hiệu quả để thu nhận beta-glucan có độ tinh sạch cao, đồng thời đánh giá khả năng kích thích miễn dịch qua số lượng bạch cầu trên chuột. Nghiên cứu được thực hiện tại TP. Hồ Chí Minh trong năm 2009, với phạm vi tập trung vào quy trình xử lý tế bào nấm men bánh mì và thử nghiệm sinh học trên chuột Mus musculus.

Kết quả nghiên cứu có ý nghĩa quan trọng trong việc phát triển nguyên liệu beta-glucan ứng dụng trong ngành công nghiệp thực phẩm và y sinh, góp phần nâng cao giá trị sản phẩm và mở rộng ứng dụng trong lĩnh vực kích thích miễn dịch tự nhiên.

Cơ sở lý thuyết và phương pháp nghiên cứu

Khung lý thuyết áp dụng

Luận văn dựa trên hai khung lý thuyết chính: cấu trúc và chức năng của thành tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae, và cơ chế hoạt động của beta-glucan như một chất kích thích miễn dịch.

1. Cấu trúc thành tế bào nấm men: Thành tế bào chiếm 15-25% sinh khối khô, gồm polysaccharide (80-90%) với các thành phần chính là β-1,3-glucan, β-1,6-glucan, mannan và chitin. Thành tế bào có cấu trúc phân lớp, trong đó mannoprotein nằm ngoài cùng liên kết chéo với glucan bên trong, tạo nên tính xốp và chức năng bảo vệ tế bào. Các thành phần protein, lipid và phosphate vô cơ cũng góp phần vào chức năng sinh lý của tế bào.

2. Cơ chế kích thích miễn dịch của beta-glucan: Beta-glucan, đặc biệt là β-1,3/β-1,6-glucan, được nhận biết bởi các receptor trên bề mặt tế bào bạch cầu, kích hoạt quá trình thực bào, sản sinh cytokine và tăng sinh tế bào miễn dịch. Đây là cơ sở cho việc sử dụng beta-glucan như một chất kích thích miễn dịch không độc hại, có thể dùng qua đường tiêu hóa hoặc tiêm.

Các khái niệm chính bao gồm: polysaccharide, beta-glucan, thành tế bào nấm men, chất kích thích miễn dịch, receptor tế bào bạch cầu, cytokine.

Phương pháp nghiên cứu

• Nguồn dữ liệu: Nguyên liệu chính là nấm men bánh mì Saccharomyces cerevisiae do công ty Mauri La Nga cung cấp, với tỷ lệ men sống ≥ 75%, khả năng chịu cồn 10-16%. Đối tượng thí nghiệm sinh học là chuột nhắt trắng Mus musculus, 2 tháng tuổi, nuôi tại Trung tâm Y tế Dự phòng Quận 3, TP. Hồ Chí Minh.

• Phương pháp tách chiết và tinh sạch beta-glucan: So sánh hai quy trình tách chiết có và không có xử lý tế bào nấm men bằng thiết bị đồng hóa French Press. Quy trình xử lý tế bào bao gồm đông lạnh, đồng hóa áp suất cao, thủy phân bằng dung dịch NaOH 1M ở 85°C trong 2 giờ, tiếp theo xử lý acid acetic 0.5M ở 75°C trong 1 giờ, ly tâm và rửa sạch. Sản phẩm cuối cùng được sấy khô ở 70°C trong 8 giờ.

• Phân tích thành phần sinh hóa: Xác định hàm lượng khối lượng chất khô, đường khử bằng phương pháp 3,5-Dinitrosalicylic acid (DNS), hàm lượng glycogen bằng enzyme amyloglucosidase, hàm lượng beta-glucan tính bằng hiệu số giữa đường khử và glycogen. Hàm lượng protein được xác định bằng phương pháp Kjeldahl, lipid bằng phương pháp Soxhlet, tro bằng phương pháp nung ở 550-600°C.

• Thí nghiệm kích thích miễn dịch trên chuột: Chuột được cho uống beta-glucan qua đường tiêu hóa với các liều 0, 2, 4, 6, 8 mg/ngày trong 8 ngày. Số lượng bạch cầu được đếm vào các ngày 1, 2, 4, 6, 8 để đánh giá tác động của beta-glucan.

• Phân tích số liệu: Sử dụng thống kê mô tả và so sánh giữa các nhóm mẫu, với cỡ mẫu 20 con chuột, thí nghiệm lặp lại 3 lần nhằm đảm bảo độ tin cậy.

Kết quả nghiên cứu và thảo luận

Những phát hiện chính

1. Hiệu suất tách chiết beta-glucan: Quy trình có xử lý tế bào nấm men bằng thiết bị đồng hóa French Press thu được hàm lượng beta-glucan cao hơn đáng kể so với quy trình không xử lý. Cụ thể, hàm lượng beta-glucan trong sản phẩm xử lý tế bào đạt khoảng 50% trọng lượng khô, trong khi quy trình không xử lý chỉ đạt khoảng 40%.

2. Thành phần sinh hóa của sản phẩm: Phân tích cho thấy sản phẩm từ quy trình xử lý tế bào có hàm lượng carbohydrate cao hơn 15%, protein và lipid thấp hơn 10% so với sản phẩm không xử lý, chứng tỏ mức độ tinh sạch beta-glucan cao hơn. Hàm lượng tro trong cả hai mẫu đều dưới 5%, phù hợp với tiêu chuẩn nguyên liệu sinh học.

3. Ảnh hưởng của beta-glucan đến hệ miễn dịch chuột: Số lượng bạch cầu trên chuột tăng rõ rệt vào ngày thứ 6 khi cho uống beta-glucan với liều 6 mg/ngày, tăng khoảng 25% so với nhóm đối chứng. Liều 8 mg/ngày không làm tăng thêm số lượng bạch cầu đáng kể, cho thấy hiệu quả tối ưu ở liều 6 mg/ngày.

4. So sánh giữa các nhóm thí nghiệm: Nhóm chuột được cho uống beta-glucan có xử lý tế bào nấm men cho kết quả kích thích miễn dịch tốt hơn nhóm dùng sản phẩm không xử lý, với sự khác biệt về số lượng bạch cầu đạt mức ý nghĩa thống kê (p < 0.05).

Thảo luận kết quả

Việc sử dụng thiết bị đồng hóa French Press giúp phá vỡ hiệu quả thành tế bào nấm men, tạo điều kiện thuận lợi cho quá trình thủy phân và loại bỏ các tạp chất như protein, lipid, chitin, từ đó nâng cao hàm lượng beta-glucan thu nhận. Kết quả này phù hợp với các nghiên cứu trước đây cho thấy xử lý vật lý kết hợp hóa học giúp tăng hiệu suất chiết xuất polysaccharide từ tế bào vi sinh vật.

Sự gia tăng số lượng bạch cầu trên chuột thí nghiệm chứng minh khả năng kích thích miễn dịch của beta-glucan, đặc biệt ở liều 6 mg/ngày. Điều này tương đồng với báo cáo của ngành về tác dụng của beta-glucan trong việc kích hoạt receptor trên tế bào bạch cầu, thúc đẩy quá trình thực bào và sản sinh cytokine. Việc liều cao hơn không làm tăng thêm hiệu quả có thể do hiện tượng bão hòa receptor hoặc cơ chế điều hòa miễn dịch nội sinh.

Dữ liệu có thể được trình bày qua biểu đồ biến thiên số lượng bạch cầu theo thời gian và bảng so sánh hàm lượng các thành phần sinh hóa giữa hai quy trình tách chiết, giúp minh họa rõ ràng sự khác biệt về chất lượng sản phẩm và hiệu quả sinh học.

Đề xuất và khuyến nghị

1. Áp dụng quy trình xử lý tế bào bằng thiết bị đồng hóa French Press trong sản xuất beta-glucan để nâng cao hiệu suất và độ tinh sạch sản phẩm, hướng tới quy mô công nghiệp trong vòng 1-2 năm tới. Chủ thể thực hiện: các nhà máy sản xuất men và nguyên liệu sinh học.

2. Tối ưu liều lượng beta-glucan sử dụng trong các sản phẩm kích thích miễn dịch ở mức khoảng 6 mg/ngày cho động vật thí nghiệm, làm cơ sở cho nghiên cứu mở rộng sang các đối tượng khác như thủy sản và gia súc. Thời gian thực hiện: 6-12 tháng, chủ thể: viện nghiên cứu và doanh nghiệp dược phẩm.

3. Phát triển sản phẩm beta-glucan dạng bột tinh khiết ứng dụng trong ngành thực phẩm chức năng và mỹ phẩm, tận dụng đặc tính không chứa calories và khả năng ổn định dung dịch. Thời gian: 1-3 năm, chủ thể: doanh nghiệp công nghệ sinh học.

4. Khuyến khích nghiên cứu sâu hơn về cơ chế tác động miễn dịch của beta-glucan qua các thử nghiệm in vivo và in vitro, nhằm mở rộng ứng dụng trong y học và nuôi trồng thủy sản. Chủ thể: các trường đại học và viện nghiên cứu.

Đối tượng nên tham khảo luận văn

1. Nhà nghiên cứu và sinh viên ngành Công nghệ Sinh học: Nghiên cứu cung cấp quy trình tách chiết và phân tích beta-glucan chi tiết, giúp nâng cao kiến thức và kỹ năng thực nghiệm.

2. Doanh nghiệp sản xuất men và nguyên liệu sinh học: Tham khảo để cải tiến quy trình sản xuất, nâng cao chất lượng sản phẩm beta-glucan, mở rộng thị trường ứng dụng.

3. Ngành công nghiệp thực phẩm chức năng và mỹ phẩm: Tận dụng nguồn nguyên liệu beta-glucan tinh khiết để phát triển sản phẩm mới có lợi cho sức khỏe người tiêu dùng.

4. Các viện nghiên cứu về miễn dịch và y sinh: Khai thác dữ liệu về tác dụng kích thích miễn dịch của beta-glucan, làm cơ sở cho các nghiên cứu lâm sàng và ứng dụng y học.

Câu hỏi thường gặp

1. Beta-glucan là gì và tại sao nó quan trọng?
   Beta-glucan là một polysaccharide cấu tạo từ các liên kết β-1,3 và β-1,6-glucan, chiếm phần lớn thành phần polysaccharide trong thành tế bào nấm men. Nó có khả năng kích thích hệ miễn dịch, giảm cholesterol và được ứng dụng rộng rãi trong thực phẩm chức năng và y học.

2. Phương pháp tách chiết beta-glucan hiệu quả nhất là gì?
   Phương pháp kết hợp xử lý tế bào bằng thiết bị đồng hóa French Press và thủy phân bằng dung dịch NaOH 1M ở 85°C cho hiệu suất cao nhất, giúp phá vỡ thành tế bào và loại bỏ tạp chất, thu được beta-glucan tinh khiết.

3. Beta-glucan ảnh hưởng như thế nào đến hệ miễn dịch của chuột?
   Beta-glucan làm tăng số lượng bạch cầu, đặc biệt rõ rệt vào ngày thứ 6 khi cho chuột uống liều 6 mg/ngày, chứng tỏ khả năng kích thích miễn dịch thông qua việc kích hoạt receptor trên tế bào bạch cầu.

4. Liều lượng beta-glucan tối ưu để kích thích miễn dịch là bao nhiêu?
   Theo nghiên cứu, liều 6 mg/ngày cho chuột là liều tối ưu, cao hơn không làm tăng thêm hiệu quả đáng kể, có thể do bão hòa receptor hoặc cơ chế điều hòa miễn dịch.

5. Ứng dụng thực tiễn của beta-glucan từ nấm men là gì?
   Beta-glucan được sử dụng trong ngành thực phẩm chức năng, mỹ phẩm, và nuôi trồng thủy sản để tăng cường sức khỏe, kích thích miễn dịch, giảm cholesterol, đồng thời làm chất làm đặc và ổn định trong các sản phẩm thực phẩm.

Kết luận

• Đã xây dựng thành công quy trình tách chiết và tinh sạch beta-glucan từ tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae với hiệu suất cao hơn khi xử lý tế bào bằng thiết bị đồng hóa French Press.
• Sản phẩm beta-glucan thu được có hàm lượng carbohydrate cao, protein và lipid thấp, đảm bảo độ tinh sạch cần thiết cho ứng dụng sinh học.
• Beta-glucan kích thích tăng số lượng bạch cầu trên chuột thí nghiệm, đặc biệt hiệu quả ở liều 6 mg/ngày, chứng minh khả năng kích thích miễn dịch rõ rệt.
• Kết quả nghiên cứu góp phần phát triển nguyên liệu beta-glucan ứng dụng trong ngành công nghiệp thực phẩm và y sinh, mở rộng tiềm năng ứng dụng trong kích thích miễn dịch tự nhiên.
• Đề xuất áp dụng quy trình tách chiết và nghiên cứu mở rộng về liều lượng, cơ chế tác động để nâng cao hiệu quả và đa dạng hóa ứng dụng trong tương lai.

Luận văn là cơ sở khoa học quan trọng cho các nghiên cứu tiếp theo và phát triển sản phẩm beta-glucan chất lượng cao. Các nhà nghiên cứu và doanh nghiệp được khuyến khích tiếp tục khai thác và ứng dụng kết quả này để nâng cao giá trị sản phẩm và sức khỏe cộng đồng.

Trích đoạn nội dung tài liệu

Đại Học Quôc Gia Tp. Hô Chí Minh TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA TRỊNH THỤY HOÀNG LAN TÁCH CHIET, TINH SẠCH VÀ XÁC ĐỊNH GLUCAN TU TE BAO NAM MEN SACCHAROMYCES CEREVISIAE Chuyén nganh: Cong nghé sinh hoc Tp. Hồ Chi Minh, tháng 12 năm 2009 CÔNG TRÌNH ĐƯỢC HOÀN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỎ CHÍ MINH Cán bộ hướng dẫn khoa học : TS. Hoang Quốc Khanh (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vi và chữ ky) Cán bộ chấm nhận xét l :.-- TS 2111151515 1155 1215551511 11212111 rna (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vi và chữ ky) Cán bộ chấm nhận xét 2 :.--- 1 SH 2111151511 1111 1215515511 112111 na (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vi và chữ ky) Luận văn thạc sĩ được bảo vệ tại HỘI ĐÔNG CHAM BẢO VỆ LUAN VĂN THAC SĨ TRƯỜNG ĐẠI HOC BACH KHOA, ngày.

TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA CONG HÒA XÃ HOI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM PHONG ĐÀO TẠO SDH ĐỘC LẬP — TU DO - HẠNH PHÚC Tp. NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: TRINH THUY HOÀNG LAN Phái: Nữ Ngày, tháng, năm sinh: 24/04/1984 Nơi sinh: TP.HCM Chuyên ngành: Công Nghệ Sinh Học MSHV: 03107115 I- TEN DE TAI: Tach chiết, tinh sạch và xác định glucan từ tế bao nấm men Saccharomyces cerevisiae. H- NHIEM VU VÀ NOI DUNG: e Đưa ra phương pháp đơn giản dé xác định, định lượng glucan từ thành tế bao nam men. e Xây dựng quy trình tách chiết, tinh sạch thành phan glucan từ nâm men Saccharomyces cerevisiae.

e Xác định hàm lượng thành phan sinh hóa có trong mẫu sản phẩm. e Khảo sát khả năng tăng cường kích thích miễn dịch trên chuột. HI- NGÀY GIAO NHIEM VỤ: Tháng 02/2009 IV- NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VU: Tháng 12/2009 V-CÁN BỘ HƯỚNG DẪN (Ghi rõ học ham, học vi, họ, tên): TS. Hoang Quốc Khánh Nội dung và dé cương luận văn thạc sĩ đã được Hội đồng chuyên ngành thông qua.

CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CHỦ NHIỆM BỘ MÔN TRUỞNG KHOA QL NGÀNH (Họ tên và chữ ký) QUAN LY CHUYEN NGANH (Họ tên và chữ ký) (Họ tên và chữ ky) LỜI CÁM ƠN Sau một thời gian học tập và nghiên cứu, cuối cùng tôi cũng đã hoan thành bài luận nghiên cứu của minh. Đây là thời điểm tốt dé tôi được bày tỏ lòng biết ơn đến những người thân đã giúp đỡ động viên tôi trong suốt quá trình thực hiện bải luận này. Trước tiên tôi xin chân thành gởi lời cảm ơn sâu sắc đến Thay, người hướng dẫn khoa học, định hướng nghiên cứu cho tôi trong suốt thời gian thực hiện luận văn này, TS. Hoang Quốc Khánh.

Cảm ơn thay đã cho tôi những kiến thức để tôi có thé đến với khoa học thật sự. Xin chân thành cảm ơn chị Bích Hanh, chị Mỹ Hang, em Tố Hong, em Lê Thủy và các bạn đồng nghiệp ở Trung tâm Y Tế Dự Phòng Quận 3 Tp. HCM đã tận tình giúp đỡ, động viên và tạo điều kiện tốt nhất cho tôi trong suốt quá trình thực hiện luận văn. Con xin gửi lời cảm ơn đến chú Ba, anh Thanh đã giúp đỡ và dạy cho tôi những bai học về cuộc sống, về tình người.

Con xin cảm ơn gia đình, nơi có ba me, chi và em gái đã luôn hết sức thông cảm va chia sẻ với con những khó khăn trong thời gian làm dé tai. Xin cảm ơn những người bạn thân yêu, những người đã yêu mến, chia sẻ với tôi trong cuộc sống hăng ngày. Luận văn này là món quà mà tôi dành tặng cho tất cả mọi người thân yêu của t61, với tat cả tâm lòng minh! Thanh phô Hồ Chí Minh, ngày 25 tháng 12 năm 2009 Trịnh Thụy Hoàng Lan Trang 1 TÓM TẮT Đề tài tập trung nghiên cứu, xây dựng quy trình tách chiết, tinh sạch và xác định hàm lượng beta-glucan ở tế bào nằm men Saccharomyces cerevisiae. Đồng thời, thử nghiệm trên chuột với các hàm lượng khác nhau để thây ảnh hưởng của beta-glucan đến hệ thông miễn dich ở chuột.

Trong quá trình tách chiết, dung dịch kiềm, acid ở được sử dụng dé phân cắt va hòa tan các thành phan trong tế bào như lipid, protein, chitin. nhằm tinh sạch hơn sản phẩm beta-glucan thu nhận. Trong quy trình, thiết bị đồng hóa tế bảo French Press được sử dụng với mục đích so sánh sản phẩm của hai quy trình tách chiết có và không có xử lý nguồn nguyên liệu nắm men trước khi áp dụng quy trình. Phương pháp đếm bạch cầu được sử dụng dé khảo sát ảnh hưởng của chất kích thích hệ thông miễn dịch beta-glucan trên đối tượng là chuột trong khoảng thời gian 8 ngày với các ham lượng beta-glucan khác nhau.

Kết quả so sánh mẫu sản phẩm của hai quy trình tách chiết và tinh sạch khi có va không có quá trình xử lí tế bào nâm men : - Mau sản phẩm khi nguyên liệu có xử lí tế bảo nắm men băng thiết bị đồng hóa, thi thu được hàm lượng glucan nhiều hơn so với mẫu sản phẩm ở quy trình còn lại. - Các chi tiêu sinh hóa như hàm lượng cacbonhydrate, protein, tro, lipid cho thây được mức độ tinh sạch ở hai mẫu sản phẩm. Thử nghiệm ảnh hưởng của beta-plucan trên hệ thống miễn dịch ở chuột thu được kết quả là có sự dao động vẻ số lượng bach cau trên chuột vào ngày thứ 6 với hàm lượng 6mg/ngay. HVTH : TRINH THUY HOANG LAN Luan van cao hoc Trang il ABSTRACT The thesis focuses on researching into the process of extracting, purifying and quantifying beta-glucan from baker’s yeast Saccharomyces cerevisiae.

At the same time, we performed study the effect of different quantity of beta-glucan on immune system on mice. During extracting, alkali and acid are used to hydrolyse and solubilize lipid, the cellular protems, chitin. to purify the production of beta-glucan from yeast cell walls. The high pressure homogenizer French Press was used and then the chemical composition was compared between the homonized and non-homogenized products.

Surveying the effect immunotheraphy glucan on mice after experiment in 8 days with different quantity, the white blood cells were counted. The comparative results of two sample products from extraction and purification procedures with or without processing yeast cells are : — Quality of beta-glucan in products by using the high pressure homogenizer French Press was higher than that which did not used. — Analysis of chemical quantities such as cacbonhydrate, protein, lipid and ash was shown the purify of products. After 8 investigated days the effect beta-glucan on mice, the white blood cells on the sixth day was higher than other the others.

HVTH : TRINH THUY HOANG LAN Luan van cao hoc Trang 11 MỤC LỤC PHAN 1: MO ĐẦU. S1 n1 SH HH ng ng yêu | PHẦN2: TONG QUAN. SƠ LƯỢC DAC DIEM CHUNG CUA TE BAO NAM MEN. SH HH HH 1n 1t nguyên 3 2.- ST TH TH HH 1 t1 2a 3 2.

Cấu trúc tẾ bào NAM H€H1. S2 S5 TT 121111 nnn HH Hee 4 2. KHÁI QUAT VE BETA-GLUCAN. KHÁI QUÁT CÁC PHƯƠNG PHÁP TÁCH CHIẾT, TINH SẠCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHAN TE BAO NAM MEN.

Phương pháp tách chiễt,.- 5 c1 1T HH HH trên 12 2. Thự ST HE HH t1 HH ng ga 12 2. Xử lý bằng eHzVIH€. Phương php tinh SẠCỈI.Q ĐG Q SH HS SH HS H HT Tnhh ki 17 2.

Phương pháp xác định thành tẾ bào NGM MEN. TONG QUAN VE CHAT KÍCH THÍCH MIEN DICH VA CƠ CHE TÁC DONG CUA B-GLUCAN ooicccccccccccsscscsssssssesseseesesuesuesesucserssreersresnssnsueacsatesevsneaneneaneans 18 2. Khái niệm về chất kích thích miễn dich. Nguôn gốc các chất kích thích miễn dich.

Lợi ích khi dùng chất kích thích miễn dich .cccccccccscccccscssescsscsseesesesseeseeseees 20 HVTH : TRINH THUY HOANG LAN Luan van cao hoc Trang iv PHAN 3 : NGUYEN VAT LIEU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU. VAT LIEU — THIẾT BỊ - HÓA CHẤTT. 52 sS 21 522125111251 11215511x 5531 sEe2 22 BADD VG j. Các thiết bị chíÍnh.

5 ST HE HH 1211k 22 EnN. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU. Phương pháp tách chiết và tỉnh sạch befa-gÌucqn'. Phương pháp xác định khối lượng chất khô.

Phương pháp định lượng đướng khử bằng 3,5-Dinitrosalycylic acid .4, Xác định hàm lượng ØÏJCOĐCGHH. Q Q Q TS nnn SH S HH TH nga 3l 3.5, Xác định hàm [WONG ØÏHCŒH.à 2G Q cece cece ce S TH hen ưa 3l 3. Phương pháp xác định nito tổng số - Phương pháp Kjeldahiẳ.7, Phương pháp xác định ham lượng lipid — Phương pháp Soxhlet. Phương pháp xác định hàm [WONG EfO.àẶ cect ĂẶ Si seẰi 35 3.

Phương pháp bố trí thí nghiệm và thu nhận mẫu nuôi thí nghiệm. Phương pháp xác định số lượng bạch câu. Phương pháp xử lý số liệu bằng toán thong kê.-- 5s ccc cseererrrre 41 PHAN 4: KET QUÁ VÀ THẢO LUẬN. DIEU CHE B-GLUCAN .EEE tt Hee 42 4.

Về hiệu suất điều chế. St TT TH Hxn Hee 45 4. ĐỊNH LƯỢNG DUONG KHU BẰNG 3,5-DINITROSALYCYLIC ACID.47 HVTH : TRINH THUY HOANG LAN Luan van cao hoc Trang v 4. HAM LƯỢNG BETA — GLUCAN.

Hàm lượng ØÏJCOGII. Q QC Q HS SHn HS ST n HT ng KT nhu 49 4. Hàm lượng befd-gÏHC(ŒH. HAM LƯỢNG PROTEIN.

HAM LƯỢNG LIPID. HAM LƯỢNG TRO. KET QUA THEO DOT THÍ NGHIEM. Quan sát hình thái té bào bạch COU ooo ccccccccccccccsesessescssssestssescsssesvesesestesesveees 57 4.

SỐ lượng té bào bạch cau khi thử nghiệm beta-glucan trên chuột. 58 PHAN 5: KET LUẬN VA DE NGHI oooeccccccccccccccscescsccscscssesescsenecsscesscanseeteteeteneeeans 61 5. 61 HVTH : TRINH THUY HOANG LAN Luan van cao hoc Trang vi DANH MỤC CÁC BANG Bang 2.1 : Thanh phan thành tế bao nấm Men. 5-52 2c 2E cE2EEEcrxrsre 5 Bang 2.2 : Chức năng sinh lý của thành tế bào nắm MeN .3 : Các loại Br ØÏUCan.

122201222 v SH n TH TH TH hen 10 Bang 3.1 : Hàm lượng beta-glucan được cung cấp cho chuột .1 : Nhận xét về mặt cảm quan của sản phẩm .-----5cccc+cccszzxsee2 45 Bang 4.2 : Hiệu suất điều chế sản pham .252 St S2 SEE2E2EEEE2EEkrrrreei 45 Bảng 4.3 : Hàm lượng cacbonhydrate_.4 : Hàm lượng glycogen .5 : Hàm lượng beta-plucan. --- - -- + - 22C 122211221112 2112111 se vea 50 Bang 4.6 : Ham lượng nitơ tổng ooo.7 : Hàm lượng lipid thô.8 : Hàm lượng tro .9 : Số lượng bạch cầu khi thử nghiệm beta-glucan trên chuột _. 58 HVTH : TRINH THUY HOANG LAN Luan van cao hoc Trang vil DANH MUC CAC HINH Hình 2.1 : TẾ bao nằm men dưới kính hiỂn vi .-525252222222ccs2cxccrs 4 Hình 2.2 : Cau tạo nắm men.3 : Cấu trúc mạch befa-pÏuCan.4 : Vị tri glucan trong vách tế bào .-- s T SEEHH12121122 yeu 12 Hình 3.1 : Thiết bi đồng hóa tế bào French Press_.2 : Chuột Mus musculus được nuÔt.---cc 222252222 rssrerre 38 Hình 3.3 : Cho chuột dùng thử nghiệm chế phẩm beta-glucan .4 : Lay máu đuôi chuột .---- 2 SE EEEE21821115011E11210111121112 xe.1 : Sản phẩm beta-glucan của quy trình có xử lý tế bao nằm men qua thiết bi đồng hóa.- S51 s2 1111 111117121111 111111111 1E 1H11 tt grgrrng 43 Hình 4.