Chương 1. co HH HH TH TH HH HH HH gu nh 008g 4 1. Đặc điểm thực vật học loài Gai ma vương .c-scSs< << scssxeexeesscee 4 2 TN ath Ae --—=ẶẶằ-ẽẽ=ễẽằằ5ẽẽ==.Sữ Newt VỀ A AeA sssssssssssssssscssnsscasssnsavssscnssanssasssssasesssanssosssssssoassossenssssessoosaais 11 1. Chiết xuất hợp chất từ thực VAt.
Công trình nghiên cứu trong và ngoài nước về quy trình nhân nhanh giống và các hợp chất sinh học .osocoo5ccnG2s2S2sS60n6056692s05666660ø 17 Chương 2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CUU. Thời gian và địa điểm nghiên cứu. Vật liệu nghiên cứu.-- sen ng ng ng ngang nen me 20 2.
Phương pháp nghiên CỨU. KET QUA VÀ THẢO LUẬN. Ảnh hưởng của 2.4 - D lên khả năng phat sinh seo từ lá chét của cây Gai Bìa Vero trong điền kiện Ìn VỈ (TÔ: sccosccnnoocoocoocooton Con Gi,Gh 0205002000002006006020006060666 29 3. Ảnh hưởng của 2,4 - D lên kha năng phát triển từ mô sẹo lá của cây Gai ma vương trong điều kiện iM VÏKYO.
Thành phần và hàm lượng hoạt chất sinh học của mô sẹo lá cây Gai ma VI TT ti 0á6204616611645364516454639864644653ã6554345665684535863546954635ã66863535663446353338ã498568356854695133868986 48 KETLUANVAKIENNGHISS=e====—=-.--ỶỶỶ= 51 TAD LIỆU THAM KHẨU ko ieaeaeeeeeaaaaeaaaeiiaraaraooorỷoreosere 52 PHHDE. {7a {ẽ{a {ẽằẽ sẽ {ẽ an“. nan 60 DANH MỤC BÁNG Băng 2. Thiết bị và dụng cụ sử dụng trong quá trình thực hiện để tài.
Thành phần hóa chất có trong môi trường MS (Murashige và Skoog, I9 2Ì Nhtaghiig tán c40t240012114114421148116401ã4555413148153881558583894485048533383838583538385343853365236888384831844 23 Bang 2. Bồ trí nghiệm thức tạo sẹo. Bồ trí nghiệm thức cấy chuyễn. Anh hưởng của 2.4 - D đến tỉ lệ và thời gian tạo seo của mau lá chét loài Gai ma vương sau 8 tuần nuôi cấy trong điều kiện i wirø.
Ảnh hưởng của 2,4 — D đến khối lượng va đặc điểm của mô sẹo lá chét loài Gai ma vương sau 8 tuần nuôi cấy trong điều kiện in wrø. Ảnh hưởng của 2,4 - D đến ti lệ màu sắc của mô seo lá chét loài Gai ma vương sau 8 tuần nuôi cấy trong điều kiện int wifrø. Ảnh hướng của 2,4 — D đến khối lượng và đặc điểm của mô sẹo lá chét loài cây Gai ma vương sau 4 tuần cấy chuyên trong điều kiện in vifro. Anh hưởng của 2,4 — D đến tỉ lệ màu sắc của mô sẹo lá chét loài cây Gai ma vương sau 4 tuần cấy chuyền trong điều kiện in vifro.-- 40 DANH MỤC HÌNH Hình 1.
Loài Gai ma vương (TribwÍts terrestris L. Cau trúc phân tử NAA. Cau trúc phân tử 2,4-D. VịiBíifBHiNDoinnseaianionninnniioiiiiattiiitiitttibiagiiiiaiaioianainasi 20 Hình 2.
Quả loài Gai ma vượng. Hat loài Gai ma Vương,. HH HH Hàn du 2I Hình 2. Lá chét'Gai ma Vương,.
Sơ đồ quá trình nghiên cứu. Ảnh hưởng của 2,4 —- Ð đến tỉ lệ tạo sẹo từ mẫu lá chét loài Gai ma vương sau 8 tuần nuôi cay trong điều kiện ứ wirø.---::55:cc5scccsscccscc- 31 Hình 3. Anh hưởng của 2,4 - D đến thời gian tạo sẹo từ mẫu lá chét loài Gai ma vương sau 8 tuần nuôi cấy trong điều kiện iit wiø.---cc-cccc-ec. Anh hưởng của 2,4 — D đến khối lượng sẹo từ mẫu lá chét loài Gai ma vương sau 8 tuần nuôi cay trong điều kiện int wi/?o.
Ảnh hưởng của 2,4 — D đến độ xốp sẹo từ mẫu lá chét loài Gai ma vương sau 8 tuần nuôi cấy trong điều kiện it wi/?0. Ảnh hưởng của 2,4 — D đến màu sắc sẹo từ mẫu lá chét loài Gai ma vương sau 8 tuần nuôi cay trong điều kiện in vitro.--¿--sc- se+ssccczcrcs2 36 Hình 3. Anh hưởng của 2,4 — D lên sự tạo mô seo từ lá Gai ma vương về mặt hình thái sau 8 tuân nuôi cấy trong điều kiện in vitro. Ảnh hưởng của 2.4 - D lên sự tạo mô sẹo từ lá Gai ma vương về mặt giải phẫu sau 8 tuần nuôi cấy trong điều kiện in VitrO.
55:25: 5ssv5scccsa 38 Hình 3. Ảnh hưởng của 2,4 — D đến độ xốp từ mẫu sẹo lá loài Gai ma vương sau 4 tuần cay chuyên trong điều kiện int wifr@. Ảnh hưởng của 2,4 — D đến khối lượng từ mẫu sẹo lá loài Gai ma vương sau 4 tuần cay chuyên trong điều kiện in wifrØ. Anh hưởng của 2,4 — D đến màu sắc từ mô sẹo lá loài Gai ma vương sau 4 tuần cấy chuyên trong điều kiện in vitrO.--- 2+-22se2cssccssccvzccrxece +4 Hình 3.
Anh hưởng của 2,4 — D lên sự tăng sinh của mô sẹo lá Gai ma vương về mặt hình thái sau 4 tuần cấy chuyên trong điều kiện in vitro. Anh hưởng của 2,4 - D lên sự tăng sinh của mô sẹo lá Gai ma vương về mặt giải phẫu sau 4 tuần cấy chuyên trong điều kiện in vitro. Kết quả định tinh saponin trong mẫu sẹo lá loài Gai ma vuong. Kết quả định tính nhóm phenolic trong mẫu sẹo lá loài Gai ma vương III DANH MỤC CHỮ VIET TAT KÍ HIỆU CHÚ GIẢI 2,4-D 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid BI Thiamin HCI B6 Pyridoxin HCI BA 6-benzylaminopurine KIN Kinetin NAA 1-Naphthaleneacetic acid MS Môi trường Murashige and Skoog MO DAU I.
LY DO CHON DE TÀI Từ lâu, thực vật đã được con người biết đến với những lợi ich như làm thực phẩm, vật liệu xây dựng, trang trí và đặc biệt nhất thực vật còn có công dụng làm dược liệu giúp cho con người chữa bệnh và hỗ trợ tăng sức khoẻ. Với nền Y học Cô truyền ngày cảng phát triển, con người ngày cảng tận dụng những nguồn nguyên liệu có nguồn gốc từ thực vật dé làm dược liệu. loài Gai ma vương (Tribulus terrestris L.) hay còn tên gọi khác là Quỷ kiến sau, Bach tật lê,. thuộc họ Gai chéng (Zygophyllaceae) là loài cây thân thảo hằng năm mọc bỏ lan, phân nhánh nhiêu.
Gai ma vương thường phân bó ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt đới của châu Á, châu Phi và vùng ôn đới với nhiệt độ 4m áp của châu Au, tuy nhiên với sự tác động của con người hiện nay, loài Gai ma vương đang đứng trước nguy cơ bị tuyệt chủng va được ghi nhận trong Sách do Việt Nam [1] và Danh lục đỏ thé giới ở hạng mục nguy cap (EN) [2]. Trong y học cô truyền, loài Gai ma vương là một trong những vị thuốc có tính ôn, vị đắng có tác dụng bình can, tán phong, thing thắp, hành huyết, ding trong chữa các bệnh dau nhức, mắt 46, phong ngứa, ngoài ra còn dùng làm thuốc bỏ thận, tri đau lưng, cai thiện tình trang sinh lý ở nam và điều hòa sinh lý ở nữ. Hơn thế nữa, các chiết xuất của Gai ma vương đang được sử dụng dé nghiên cứu và bước đầu chứng minh khả năng loại bỏ tận gốc, khả năng chống viêm, khả năng chống oxy hoá và chống ung thư, chống lại sự tăng sinh tế bào ung thư [3]. Nhờ vào các hợp chất sinh học và thành phần có trong Gai ma vương mà các công dụng của loài nảy ngày càng được các nhà khoa học và người dân chú ý.
Loài Gai ma vương còn được các nhà khoa học phát hiện ra một lượng lớn hợp chất saponin steroid bên trong và hợp chất này có công dụng kích thích sản xuất testosteron ở nam giới [4]. Những thành phần và hoạt tính sinh học có trong Gai ma vương được thấy là có liên quan chặt chẽ đến nguồn gốc của thực vật cụ thê là điều kiện sinh trưởng bao gồm điều kiện khí hậu, chất lượng đất và thời ki thu hoạch [5]. Trong các dé tài nghiên cứu vẻ hàm lượng hoạt chất sinh học trong loài Gai ma vương ở các vùng khác nhau đã chứng minh, thành phần và hàm lượng hoạt chất sinh học của Gai ma vương là khác nhau ở các vùng khác nhau, các điều kiện sinh trưởng khác nhau. Đôi với nền y học hiện đại, loài Gai ma vương được xem là nguôn cung cap flavonoid, saponin steroid và b2 alkaloid,.
đây là những hoạt chất sinh học khó tìm. Mặc dù có nhiều công dụng và chứa nhiều hợp chất khó tìm nhưng vẫn chưa có nhiều báo cáo về phương diện trồng loài Gai ma vương và các sản phẩm chiết xuất từ nó. Hiện nay, tại Việt Nam và một số nước trên thế giới vẫn chưa biết rõ về công dụng của Gai ma vương nên những khu vực phân bố của nó thường bị người dân cắt bỏ rất nhiều, dẫn đến tình trạng khan hiểm dần và khiến cho giá thành đắt đỏ. Bên cạnh đó, các hợp chất thứ cấp của Gai ma vương đều được ngành dược hiện đại chiết xuất từ cây ngoài tự nhiên và phương pháp này sẽ dẫn đến tình trạng tuyệt chủng của cây.
Vì vậy, nuôi cấy mô đã được sử dụng để vi nhân nhanh giống một cách nhanh chong và giảm thiêu tình trạng tuyệt chủng. Ngoài ra, nuôi cấy mô còn có thể sử dụng với mục đích thương mại hoặc có thẻ đưa trở lại môi trường hoang đã tuy thuộc vao nhu cầu va mục đích sử dụng. Cùng với khoa học công nghệ phát trién, ngành công nghệ sinh học đã va đang được khang định trong tương lai, trong đó, nuôi cấy in virro ngày càng được sử dụng nhiều dé nghiên cứu về các điều kiện môi trường ảnh hưởng đến việc sinh trưởng va ham lượng các chat trong thực vật. Trong điều kiện in virro, những yếu té tác động đến sự sinh trưởng cúa thực vật được điều khiến thích hợp cho sự sinh trưởng và phát triển tối đa của thực vật.
Auxin được xem là chất điều hoà sinh trưởng quan trọng trong việc hình thành mô seo ở thực vật [6]. Bên cạnh đó, nhiều nhà nghiên cứu cho ra các kết quả tích cực khi sử dung 2,4 - D trong môi trường nuôi cấy dé kích thích sự hình thành sẹo ở các loài thực vật khác nhau [7], [S]. Hơn nữa, 2,4-D còn được xem là hormone quan trọng nhất được sử dụng đề tăng sinh mô seo, tạo mô seo và duy trì mô sẹo {10]. Nhằm nghiên cứu về sự ảnh hưởng cúa các chất điều hoà sinh trưởng trong nuôi cấy in vitro lên sự tăng sinh và thành phân, hàm lượng hoạt chất sinh học trong Gai ma vương được tạo ra bởi sự tác động của các nòng độ chất điều hoa sinh trưởng khác nhau trong môi trường nuôi cấy.
Từ đó, xác định được các nông độ chất điều hoả sinh trưởng thích hợp trong nuôi cấy in vitro cho sự sinh trưởng và tăng sự tích luỹ về thành phan va hàm lượng các hoạt chat sinh học của Gai ma vương trong điều kiện nuôi cay in vitro, đề tài “Nghiên cứu sự ảnh hưởng của 2,4-D lên khả năng phát sinh sẹo và hàm lượng hoạt chất sinh học của lá cây Gai ma vương (Tribulus terrertris L.) trong điều kiện in vitro” được thực hiện. MỤC TIỂU NGHIÊN CỨU Xác định được sự ảnh hưởng của 2,4-Ð lên khả năng phát sinh sẹo của lá chét loài cây Gai ma vương (Tribulus terrestris L.) trong điều kiện in vitro. Xác định được sự ảnh hưởng của 2,4—D lên sự tăng sinh của mô sẹo lá Gai ma vương (Tribulus terrestris L.) trong điều kiện in vitro.